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Tecnologa Mdica

Microbiologa Clnica I

BACILOS GRAMNEGATIVOS
NO FERMENTADORES
(BGNNF)

Caractersticas de los BGNNF


Bacilos o cocobacilos gramnegativos que no fermentan
hidratos de carbono.
No forman espora.
Generalmente oxidasa (+)
Mviles e inmviles.

Se designa BGNNF a todos los bacilos


gramnegativos que muestran desarrollo
en TSI y que no fermentan azcares (K/K)

TSI (Triple Sugar Iron Agar)

K/K

K/A --

K/A-+

A/A+-

A/A++

Bacilos GRAM (-)


NO FERMENTADORES

Pseudomonas
Acinetobacter
Stenotrophomonas
Achromobacter
Alcaligenes
Elizabethkingia
Burkholderia
Shewanella
Myroides
Moraxella

Medio OF (Hugh y Leifson)

Este medio se diferencia de los medios


para fermentacin de hidratos de carbono
dado que la concentracin de:
- peptona est disminuda del

1% al 0,2%

-H. de carbono est aumentada del 0,5% a 1%


el agar est disminudo de
1,5 a 0,25 %

OF/glucosa

Fermentativo

Oxidativo

Inerte

Prueba de oxidasa

BGNNF

DIAGNOSTICO
de BGNNF

Aislamiento:

Agar sangre
Agar MacConkey
Morfologa :
Tincin de Gram
Identificacin presuntiva:
TSI
Batera de identificacin primaria:
- Oxidasa
- OF/glucosa
- Movilidad

Esquema de identificacin de BGNNF


Batera de identificacin secundaria:

Agar urea de Christensen


Lisina descarboxilasa
Agar de hidrlisis de esculina
Arginina dihidrolasa de Moeller
Ornitina descarboxilasa
Fenilalanina desaminasa
Hidrlisis de la gelatina
ONPG
Medio OF: fructosa, xilosa, manitol, lactosa, maltosa
Citrato de Simmons
NaCl 6.5%
Desarrollo a 42C

Tipo de flagelacin: Tincin de flagelos

Factores que predisponen a infecciones por


BGNNF

Neoplasias
Hospitalizacin prolongada
Instrumentacin y ciruga
Tratamientos prolongados con antibiticos,
corticoides, antineoplsicos, radiaciones.
Enfermedades crnicas o metablicas.
Quemaduras, heridas abiertas, lesiones exudativas.
Desnutricin

Edades extremas: prematuros y ancianos

Los BGNNF son importantes agentes casuales de

infecciones intrahospitalarias

Familia Pseudomonadaceae
Grupo I de rRNA
Grupo II de rRNA
Grupo III de rRNA
Grupo IV de rRNA
Grupo V de rRNA

-Bacilos Gram negativos


-Aerobios estrictos
-La mayora mviles
con uno o mas flagelos polares
-Oxidan los carbohidratos
-La mayoria son oxidasa positiva

Gnero Pseudomonas

Pseudomonas aeruginosa

Bacilo Gram(-) recto o ligeramente curvo.


Aerobio estricto, oxidasa (+)
OF/glucosa: oxida
Mvil, con un flagelo polar.
HABITAT:

Se asla de ambiente acuticos,

alcantarillas, piscinas, del suelo.

Ambiente hospitalario

Pseudomonas aeruginosa tiene tres formas de desplazarse en:


MEDIO LIQUIDO_: Swimming con nico flagelo polar.
SUPERFICIE SOLIDA: Twitching que depende fimbrias o pili tipo IV
Medio SEMI-SOLIDO: Swarming, las clulas se alargan y presentan
mltiples flagelos.

En el ambiente hospitalario
se puede aislar e:

- Soluciones terapeticas (colirios)

- Desinfectantes (amonio cuaternario, clorhexidina)


- Jabn con hexaclorofeno
- Cremas de mano
- Lociones
- Jarras con agua
Catteres
Plantas y flores
Termmetros
Nebulizadores
Humidificadores
Cepillos
Jeringas
Piletas
Desages
pisos

Factores de virulencia de Pseudomonas aeruginosa

Alginato
Fimbria (tipo IV)

Proteasas:
- Las A elastasa
-Las B elastasa
- proteasa alcalina
Hemolisinas:
- Fosfolipasa C
- Ramnolpido

Exotoxina A
Exotoxina S
Enterotoxina
Leucocidina
Piocianina

Siderforos
Pioquelina
Pioverdina

Rol del alginato


(polmero de acido manurnico y gulurnico)
Obstruye la opsonizacin y fagocitosis.
Neutraliza radicales de oxgeno liberados por PMNs.
Inhibe el complemento.

Limita la difusin de los antibiticos.

Quorum sensing en P.aeruginosa

Implica la activacin de genes especficos a altas densidades de clulas en


respuesta a las seales qumicas liberadas (autoinductor) por Pseudomonas
aeruginosa.

Es importante para que se exprese la virulencia.

Los factores de virulencia estn bajo en control de dos sistemas de quorum


sensing:

las

rhl

Sistema las:

las :

Las R
:(Factor transcripcional)
Autoinductor :
N-(3-oxododecanoyl)-L homoserina lactona
3 oxo-C12-HSL 8 (PAI-1)
Auntoinductor sintetasa: LasI

elastasa Las A
elastasa Las B
proteasa alcalina
exotoxina A

Sistema rhl:

Rhl R
:
Autoinductor :

Auntoinductor sintetasa: RhlI

(Factor transcripcional)
N-butyoyl-1 homoserina lactona
C4-HSL(PAI-2)

rhl:

ramnolpidos
piocianina

Sistemas de secrecin utilizados por


Pseudomonas aeruginosa
Sistema de secrecin tipo I

- proteasa alcalina
Sistema de secrecin tipo II

- elastasa

- lipasa

- exotoxina A

-fosfolipasas

- fosfatasa alcalina
Sistema de secrecin tipo III

- exotoxina S

- exotoxina T
- ramnolpidos

Etapas de la infeccin por P.aeruginosa


Se distinguen tres estados:
1.-Adherencia y colonizacin

-fimbria

-alginato (biofilm)
2.- Invasin local

-elastasas

-proteasa alcalina

-citotoxina (leucocidina)

-fosfolipasa C y ramnolpidos

- sideroforos (pioquelina, pioverdina)

-piocianina

3.-Enfermedad diseminada sistmica


los factores anteriores contribuyen a
la diseminacin de la infeccin agregndose
la accin de toxinas:

- Exotoxina A

- LPS (endotoxina)

Cuadros clnicos producidos porP.aeruginosa

-INFECCIONES RESPIRATORIAS: Neumona,


Pacientes con fibrosis qustica
- BACTERIEMIA
- INFECCIONES DEL S.N.C.: meningitis, abscesos cerebrales
INFECCION AL OIDO : otitis
INFECCION A OJOS : queratitis
INFECCION DEL TRACTO URINARIO
INFECCIONES A HUESOS: osteomielitis
INFECCIONES GASTROINTESTINALES: gastroenteritis
INFECCIONES DE HERIDAS QUIRURGICAS
INFECCIONES DE QUEMADURAS Y HERIDAS

Ectima gangrenoso por Pseudomonas aeruginosa

Ectima gangrenoso

Rev Chil Infect 2011; 28 (6): 592-596

Otitis externa

Heridas por quemadura

Endoftalmitis por Pseudomonas aeruginosa

Factores de virulecia:
Exotoxina A ,Proteasas alcalinas,
proteasa IV,
proteasa pequea (PASP)

Foliculitis por P.aeruginosa


La foliculitis por Pseudomonas se presenta con
lesiones foliculares, maculosas y papulopustulosas
localizadas en la zona lateral del tronco, muslos,
huecos axilares y rea suprapbica. Habitualmente,
comienza entre 8-48 h trasla exposicin a una
fuente contaminada. En ocasiones, se puede
acompaar de sntomas generales como fiebre,
malestar general, nuseas y vmitos, dolor ocular,
farngeo, de odos, mamas inflamadas y dolorosas,
y linfadenopatas. La aparicin de estos sntomas
no implica diseminacin de P.aeruginosa.

Sndrome de la ua verde causado por Pseudomonas aeruginosa

FIBROSIS QUISTICA
Enfermedad gentica, autosmica recesiva*, causada por una mutacin en el
brazo largo del cromosoma 7. Este gen contiene la informacin para la produccin
de una protena reguladora del intercambio de electrolitos a travs de las
membrana, llamada CFTR, y su anomala produce alteraciones en el transporte de
cloro y sodio en los rganos cubiertos por tejido epitelial.
Afecta diferentes rganos y sistemas, en especial el aparato
respiratorio, el pncreas, las glndulas sudorparas y el sistema reproductor
masculino.
Crnica y de evolucin progresiva.

* Un trastorno autosmico recesivo significa que deben


estar presentes dos copias de un gen anormal para
que se desarrolle la enfermedad.

Pseudomonas aeruginosa

Agar F (King B)

Agar P (King A)

Resistencia de P.aeruginosa
a los antibiticos

Alginato restringe la difusin de


antibiticos.

Disminuye la permeabilidad a
antibiticos.
Hidrlisis de antibiticos
(ej. betalactamasas)
Sistemas de bomba de eflujo

Estudio de susceptibilidad antibiticos a 85 cepas de Pseudomonas aeruginosa


aisladas de pacientes del Hospital de Talca.

Daniela Prez Leal.,Memoria para optar al grado de Licenciado en Tecnologa Mdica.2009

Pseudomonas oryzihabitans

Tambien denominada Flavimonas oryzihabitans


-Bacilo Gram negativo, aerobio no fermentador.
-Movil por un flagelo polar.
-Oxidasa negativa
-Catalasa positiva
-Oxida la glucosa

Crece bien en agar MacConkey y agar Cetrimida

(despues de 24 a 48 de incubacion las colonias se tornan arrugadas de color


amarillo).

No producen hemolisis en agar sangre de caballo al 5%.


Crece entre 18C a 42 C.

Agar Cetrimida

Grupo II rRNA

Incluye la familia Burkholderiacee que comprende los gneros:

Burkholderia
Lautropia
Pandoraea
Ralstonia
Cupriavidus

Las principales especies son:


Burkholderia mallei
Burkholderia pseudomallei
Complejo Burkholderia cepacia

Burkholderia mallei

OF glucosa= oxidativo
Oxidasa (+)
Inmvil.
Parsito obligado de animales.
Agente causal del Muermo.

Antimicrobianos de eleccin:
Cotrimoxazol asociado a:
- fluorquinolonas, ceftazidima .

Burkholderia pseudomallei

Oxidasa (+)
Mvil
OF/glucosa= oxidativo
Agente causal de Melioidosis

Complejo Burkholderia cepacia


Oxidasa : w (+)

OF/glucosa: oxidativo
Descarboxilasa de lisina: (+)

Grupo III rRNA


Los miembros de este grupo pertenecen a la familia
Comamonadaceae
Comprende los siguientes gneros:

Comamonas
Delftia
Acidovorax

Grupo IV
La familia Caulobacteraceae incluye
el gnero Brevudimonas

Grupo V rRNA
La familia Xanthomonadaceae
Comprende los gneros:

Stenotrophomonas.
Xanthomonas

Caractersticas de
Stenotrophomonas maltophilia

Bacilo mvil con flagelos polares


Oxidasa (-)
Dnasa (+)
Descarboxilasa de lisina (+)
Susceptible a : sulfametoxazol-trimetoprim
OF/glucosa: (-) o dbilmente (+) a las 24 hrs.

ANTIBITICOS DE ELECCIN:
Cotrimoxazol, Minociclina, Levofloxacino, Ciprofloxacino.

Shewanella putrefaciens
Oxidasa (+), mvil con flagelos polares

OF/glucosa = oxidativo
produce H2S en TSI y KIA

Grupo oxidasa negativo

Acinetobacter
(del griego akinetos: inmovil)

Gnero Acinetobacter
(del griego akinetos: inmovil)

Las especies de este gnero son:

Cocobacilos Gram negativos, aerobios estrictos,


inmviles, catalasa (+),oxidasa(-).

En 1986 Bouvet y Grimont hicieron una clasificacin que distingua


12 grupos diferentes (genomaespecies) sobre las base de
caractersticas de hibridacin DNA-DNA y nutricionales.

En 1989 Tjernberg y Ursing describieron


tres grupos DNA adicionales, numerados del 13 al 15.
Bouvet y Jeanjean describieron 5 grupos que numeraron del 13 al 17.

Actualmente el gnero contiene 33 genoespecies.


Slo 21 de ellas han sido denominadas y 12 recuperadas de

muestras clnicas.

Complejo Acinetobacter baumannii-calcoaceticus

Acinetobacter calcoaceticus genoespecie 1


Acinetobacter baumannii
genoespecie 2
Acinetobacter pitti
geneoespecie 3
Acinetobacter nosocomialis genoespecie 13

Especies de importancia clnica


que se aislan de brotes nosocomiales:

Acinetobacter baumannii
Acinetobacter gen.sp. 3
Acinetobacter gen.sp.13 TU

HABITAT
Hospitales y pacientes hospitalizados
(Aislamientos multiresistentes)

A.baumannii , gen. sp 3 ,gen.sp13 TU

Piel (humanos, animales), Animales


(Aislamientos sensibles) A.johnsonii, A.lwoffii

Suelo, medio ambiente y agua.


(Aislamientos sensibles) A.calcoaceticus, A. johnsonii

Infecciones por Acinetobacter

Neumona
Bacteriemia
Meningitis
Infeccin del Tracto Urinario (ITU)

Endocarditis aguda
Peritonitis
Conjuntivitis
Queratitis

Factores de riesgo

Hospitalizacin prolongada
Edad avanzada
Enfermedad de base: Enf. pulmonar crnica, Neoplasias, Diabetes.
Tratamiento con antibiticos de amplio espectro
Tratamiento con corticosteroides
Instrumentalizaciones: Ventilacin mecnica, Broncoscopio, Catter.
Ciruga mayor
Pacientes quemados

Acinetobacter
Colonizacin / infeccin

Piel

Tracto digestivo

Ciruga Catter

ITU

Endgena

Ventilacin mecnica
Broncoscopa

ITU
NEUMONIA

Faringe

SEPTICEMIA

Rev Chil Infect 2005; 22 (4): 298-320

Factores de virulencia

Polisacrido capsular
Adherencia( fimbrias y polisacrido capsular)
Enzimas
Produccin de Slime

Acinetobacter baumannii multiresistente


(AB-MR):
Solo preservan susceptibilidad a: carbapenmicos, amikacina ,
sulbactam y minociclina.

Acinetobacter baumannii pan-resistente


(AB-PR):
Son resistente a los carbapenmicos y son susceptible a
polimixinas como colistin.

Mecanismos de resistencia:
Enzimas inactivadoras de antibiticos

Amplia variedad de betalactamasas que le confiere resistencia a penicilinas, cefalosporinas,y


carbapenemes.

Limitacin del acceso a las dianas


bacterianas
Mutaciones que alteran las dianas o las
funciones celulares.

Esquemas de tratamiento

Estudio de susceptibilidad a antibiticos en 25 cepas de


Acinetobacter baumannii aisladas de pacientes del
hospital de Talca

Paula Bravo Nuez,

Memoria para optar al Grado de Licenciado en Tecnologa Mdica, 2010

Gnero Achromobacter
A.xylosoxidans
A.piechaudii
A.denitrificans

Oxidasa positiva
O F/ glucosa: oxida lentamente
Movil. Flagelacin pertrica

A.xylosoxidans es resistente a
cefalosporinas,aminoglicosidos
fluorquinolonas.

Gnero Alcaligenes
Bacilos gramnegativos, oxidasa positivo,
Mviles con flagelacin pertrica.
Se desarrollan en agar MacConkey
Alcaligenes faecalis OF/glucosa: inerte

NaCl 6.5% (+)


Urea: negativo
endoftalmitis

Alcaligenes faecalis

Gnero Elizabethkingia
(Chryseobacterium)
Bacilos gramnegativos inmviles
oxidasa positiva.
Indol (+)
Producen colonias pigmentadas amarillas
en agar sangre.
Se desarrollan poco o nada en agar MacConkey.

OF/glucosa: oxida
La especie ms importante es: E.meningoseptica
agente causal de meningitis neonatal, con alta mortalidad.
En adultos puede provocar neumona.

Weeksella virosa
Bacilo Gram negativo
Inmovil
No sacaroltico
Oxidasa (+)
Catalasa (+)
No crece en agar
MacConkey

Rev. chil. infectol. vol.28 no.5 Santiago oct. 2011

Myroides

Se conocen 2 especies: M.odoratus y M.odoratimimus

M.odoratus ( Flavobacterium odoratum)

Bacilo Gram , aerobio, Inmvil.


Colonia pigmentada de color amarllo. Olor frutal.
Oxidasa (+)
Dnasa (+)
Ureasa (+)

HABITAT: suelo y agua.

Patologa: celulitis, fascitis necrotizante,infeccin tracto urinario

infeccin de heridia quirrgica,ventricuitis, endocarditis.

Producen metalobetalactamasas de origen cromosomal


Capaces de hidrolizar: penicilinas, cefalosporinas,
carbapenem, aztreonam.
Presentan susceptibilidad a:
Ciprofloxacino y Sulfametoxazol Trimetoprim

Gnero Moraxella

Cocos o cocobacilos gramnegativos, oxidasa (+), inmviles, no tienen


accin sobre hidratos de carbono.
No se desarrollan en agar MacConkey.
Las especies ms importante son:

M.catarrhalis M.lacunata, M.osloensis ,M.nonliquefaciens.


M.lacunata produce : conjuntivitis, queratitis, sinusitis crnica,
endocarditis.
Para su cultivo requiere de medios especiales enriquecidos con suero
de conejo.

Sensible a penicilina G, .

ESQUEMA DE
IDENTIFICACION DE BACILOS
GRAM NEGATIVOS NO
FERMENTADORES

Muchas gracias
por su atencin