Anda di halaman 1dari 10

PEMBUATAN KURVA KALIBRASI

PEMBUATAN KURVA KALIBRASI


I.
-

TUJUAN PERCOBAAN

Dapat memahami tahap-tahap dalam pembuatan kurva kalibrasi


Dapat menggunakan kurva kalibrasi dalam analisa obat.

II.

LANDASAN TEORI
Dalam bidang kimia, khususnya dalam farmasi, pengukuran analitik memiliki peranan

yang sangat penting. Tujuan dari pengukuran analitik ini adalah untuk menentukan nilai
sebenarnya dari suatu parameter kuantitas kimia, contohnya seperti: konsentrasi, pH, temperatur,
titik didih, kecepatan reaksi dan lain-lain. Pengukuran analitik ini dapat menggunakan metode
konvensional maupun modern, baik secara kualitatif maupun kuantitatif.
Dalam percobaan secara umum, hasil yang diperoleh pasti tidak dapat terlepas dari
faktor kesalahan. Nilai parameter sebenarnya yang akan ditentukan dari suatu perhitungan
analitik tersebut adalah ukuran ideal. Nilai tersebut hanya dapat diperoleh jika semua penyebab
kesalahan pengukuran dihilangkan dan jumlah populasi tidak terbatas. Faktor penyebab
kesalahan ini dapat disebabkan oleh berbagai hal, antara lain adalah faktor bahan kimia,
peralatan, analis, kondisi pengukuran, dan lain-lain. Salah satu cara yang dapat digunakan untuk
mengurangi kesalahan dalam pengukuran analitik ini adalah dengan proses kalibrasi.
Kalibrasi yaitu kurva antara absorbansi dengan panjang gelombang.
Kurva ini dapat menentukan panjang gelombang maksimum, terlihat dari
bentuk kurvanya pada bagian atas. Akan tetapi, pengukuran kurva kalibrasi
ini didasarkan pada konsentrasi yang dihasilkan dari metode iodimetri dan
panjang gelombang maksimumnya, sehingga diperoleh kurva kalibrasi yang
linier. Tujuan kalibrasi adalah untuk mencapai ketertelusuran pengukuran. Hasil pengukuran
dapat dikaitkan atau ditelusur sampai ke standar yang lebih teliti atau tinggi (standar primer
nasional atau internasional) melalui rangkaian perbandingan yang tidak terputus, dalam artian

standar ukur itu akan lebih baik apabila berupa standar yang rantainya mendekati SI sehingga
tingkat ketidakpastian (error) makin kecil.

SPEKTROFOTOMETER
Spektrofotometri merupakan suatu metoda analisa yang didasarkan
pada pengukuran serapan sinar monokromatis oleh suatu lajur larutan
berwarna

pada

panjang

gelombamg

spesifik

dengan

menggunakan

monokromator prisma atau kisi difraksi dengan detektor fototube. Benda


bercahaya seperti matahari atau bohlam listrik memancarkan spektrum yang
lebar terdiri atas panjang gelombang. Panjang gelombang yang dikaitkan
dengan cahaya tampak itu mampu mempengaruhi selaput pelangi mata
manusia dan karenanya menimbulkan kesan subyektif akan ketampakan
(vision). Dalam analisis secara spektrofotometri terdapat tiga daerah
panjang gelombang elektromagnetik yang digunakan, yaitu daerah UV (200
380 nm), daerah visible (380 700 nm), daerah inframerah (700 3000
nm) (Khopkar 1990).
Menurut Cairns (2009), spektrofotometer adalah alat untuk mengukur
transmitan atau absorban suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang.
Tiap media akan menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu
tergantung pada senyawaan atau warna terbentuk. Secara garis besar
spektrofotometer terdiri dari 4 bagian penting yaitu :
a. Sumber Cahaya
Sebagai sumber cahaya pada spektrofotometer, haruslah memiliki
pancaran radiasi yang stabil dan intensitasnya tinggi. Sumber energi cahaya
yang biasa untuk daerah tampak, ultraviolet dekat, dan inframerah dekat
adalah sebuah lampu pijar dengan kawat rambut terbuat dari wolfram
(tungsten). Lampu ini mirip dengan bola lampu pijar biasa, daerah panjang
gelombang (l ) adalah 350 2200 nanometer (nm).
b. Monokromator

Monokromator adalah alat yang berfungsi untuk menguraikan cahaya


polikromatis menjadi beberapa komponen panjang gelombang tertent
(monokromatis) yang bebeda (terdispersi).
c.

Cuvet
Cuvet spektrofotometer adalah suatu alat yang digunakan sebagai
tempat contoh atau cuplikan yang akan dianalisis. Cuvet biasanya terbuat
dari kwars, plexigalass, kaca, plastic dengan bentuk tabung empat persegi
panjang 1 x 1 cm dan tinggi 5 cm. Pada pengukuran di daerah UV dipakai
cuvet kwarsa atau plexiglass, sedangkan cuvet dari kaca tidak dapat dipakai
sebab kaca mengabsorbsi sinar UV. Semua macam cuvet dapat dipakai
untuk pengukuran di daerah sinar tampak (visible).

d. Detektor
Peranan detektor penerima adalah memberikan respon terhadap cahaya
pada berbagai panjang gelombang. Detektor akan mengubah cahaya
menjadi sinyal listrik yang selanjutnya akan ditampilkan oleh penampil data
dalam bentuk jarum penunjuk atau angka digital.
Dengan mengukur transmitans larutan sampel, dimungkinkan untuk
menentukan konsentrasinya dengan menggunakan hukum Lambert-Beer.
Spektrofotometer akan mengukur intensitas cahaya melewati sampel (I), dan
membandingkan ke intensitas cahaya sebelum melewati sampel (Io). Rasio
disebut transmittance, dan biasanya dinyatakan dalam persentase (% T)
sehingga bisa dihitung besar absorban (A) dengan rumus A = -log %T
(Underwood 2002).
Prinsip kerja spektrofotometri berdasarkan hukum Lambert Beer.
Pada bagian kiri persamaan diketahui sebagai absorbansi larutan dan
dihitung dengan spektrometer. Persamaannya kadang ditulis dalam term
absorbansi.
Simbol epsilon adalah absorptivitas molar larutan. bila cahaya
monokromatik (Io) melalui suatu media (larutan), maka sebagian cahaya

tersebut

diserap

(Ia),

sebagian

dipantulkan

(Ir),

dan

sebagian

lagi

dipancarkan (It). Transmitans adalah perbandingan intensitas cahaya yang


ditransmisikan ketika melewati sampel (It) dengan intensitas cahaya mulamula sebelum melewati sampel (Io). Persyaratan hukum Lambert Beer,
antara lain: radiasi yang digunakan harus monokromatik, energi radiasi yang
diabsorpsi oleh sampel tidak menimbulkan reaksi kimia, sampel (larutan)
yang

mengabsorpsi

harus

homogen,

tidak

terjadi

fluoresensi

atau

phosporesensi, dan indeks refraksi tidak berpengaruh terhadap konsentrasi,


jadi

larutan

tidak

pekat

(harus

encer).

Spektrofotometer

UV-Vis

membandingkan cuplikan standar yaitu substrat gelas preparat. Hasil


pengukuran dari spektrofotometer UV-Vis menunjukkan kurva hubungan
transmitan dan panjang gelombang ( ) (Basset 1994).
Spektrofotometer terdiri dari beberapa jenis berdasar sumber cahaya
yang digunakan, yaitu: spektrofotometer Vis (Visible), spektrofotometer UV
(Ultra Violet), spektrofotometer UV-Vis, dan Spektrofotometri IR (Infa Red).
Pada spektrofotometri Vis, yang digunakan sebagai sumber sinar/energi
adalah

cahaya

tampak

elektromagnetik
gelombang

yang

sinar

(visible).

dapat

tampak

Cahaya

ditangkap

adalah

380

visible

oleh

termasuk

mata

750

nm.

spektrum

manusia.

Panjang

Berbeda

dengan

spektrofotometri visible, pada spektrofotometri UV berdasarkan interaksi


sample dengan sinar UV. Sinar UV memiliki panjang gelombang 190-380 nm.
Senyawa yang dapat menyerap sinar UV terkadang merupakan senyawa
yang tidak memiliki warna (bening dan transparan).
Spektrofotometri UV-Vis menggunakan dua buah sumber cahaya
berbeda, sumber cahaya UV dan sumber cahaya visible yaitu photodiode
yang dilengkapi dengan monokromator dan dapat digunakan baik untuk
sample

berwarna

juga

untuk

sample

tak

berwarna.

Sedangkan,

spektrofotmetri IR berdasar pada penyerapan panjang gelombang infra


merah

yang

mempunyai

panjang

gelombang

2.5-1000

m.

Pada

spektrofotometri IR digunakan untuk analisa kualitatif, misalnya untuk


mengidentifikasi gugus fungsi pada suatu senyawa.

Panjang gelombang cahaya UV atau cahaya tampak bergantung pada


mudahnya promosi elektron. Molekul-molekul yang memerlukan lebih
banyak energi untuk promosi elektron, akan menyerap pada panjang
gelombang yang lebih pendek. Molekul yang memerlukan energi yang lebih
sedikit akan menyerap cahaya dalam daerah tampak (yakni senyawa
berwarna) mempunyai elektron yang lebih mudah dipromosikan daripada
senyawa yang menyerap pada panjang gelombang UV yang lebih pendek.
Suatu spektrofotometer standar terdiri atas spektrofotometer untuk
menghasilkan cahaya dengan panjang gelombang terseleksi yaitu bersifat
monokromatik serta suatu fotometer yaitu suatu piranti untuk mengukur
intensitas berkas monokromatik, digabungkan bersama dinamakan sebagai
spektrofotometer.
Spektrofotometer dapat berupa sinar tunggal atau sinar ganda. Dalam
berkas satu instrumen (seperti Spectronic 20), semua cahaya melewati sel
sampel. I o harus diukur dengan membuang sampel. Ini adalah desain awal,
tetapi masih umum digunakan baik dalam pengajaran dan laboratorium
industri.
Dalam berkas ganda instrumen, cahaya dibagi menjadi dua berkas sebelum
mencapai sampel. Satu berkas digunakan sebagai acuan, yang lain melewati
sinar sampel. Beberapa instrumen double-beam memiliki dua detektor
(photodiodes), dan sampel dan berkas referensi diukur pada waktu yang
sama. Dalam instrumen lain, kedua balok melewati sebuah balok helikopter,
yang menghambat satu berkas pada suatu waktu. Detektor-ubah antara
mengukur sampel balok dan balok referensi.
Pada umumnya sampel yang digunakan dalam bentuk larutan yang
sudah diencerkan dengan jumlah konsentrasi tertentu. Larutan dengan
konsentrasi yang rendah akan lebih mudah diketahui transmitannya karena
kerapatan pada molekulnya kecil sehingga kemampuan menyerap radiasi
elektromagnetnya kecil dan banyak radiasi yang terbaca oleh detektor pada
alat spektrofotometer.

Setiap senyawa punya serapan maksimal pada panjang gelombang


tertentu. Panjang gelombang ini dinamakan panjang gelombang maksimum.
Pada panjang gelombang maksimum, hubungan antara absorbansi dan
konsentrasi senyawa bisa disetarakan.
III.

IV.
A.
1.
2.
3.

ALAT DAN BAHAN


ALAT :

BAHAN :

Beker glass
Spektrofotometer
Labu ukur
Pipet ukur
Batang pengaduk
Corong

Parasetamol 100 mg
NaOH 0,1 N
Aquadest

CARA KERJA

MEMBUAT LARUTAN NaOH 0,1 N


Menimbang NaOH sebanyak 4 gram
Mengukur aquadest sebanyak 1000 ml
Melarutkan NaOH sedikit demi sedikit dengan aquadest, lalu di add hingga 1000 ml dalam labu
ukur. Larutan ini yang akan digunakan untuk melarutkan parasetamol.
Penghitungan :
Normalitas = x
0,1 = x
g = 4 gram

B.

1.
2.

MEMBUAT LARUTAN PARASETAMOL berbagai ppm


1000 ppm
Menimbang parasetamol sebanyak 100 mg
Melarutkan parasetamol dalam 100 ml aquadest sedikit demi sedikit dalam gelas beker, lalu

dimasukkan dalam labu ukur 100 ml dan di add hingga 100 ml.
Penghitungan :
1 ppm
=
1000 ppm =
100 ppm
1. Dari larutan parasetamol 1000 ppm, dipipet sebanyak 10 ml.
2. Lalu dilarutkan dalam 100 ml aquadest dalam labu ukur 100 ml.
3. Mengocok labu ukur hingga larutannya tercampur sempurna.
Penghitungan :
x 1000 ppm = 100 ppm
Berarti, banyaknya larutan yang diambil dari larutan 1000ppm untuk membuat larutan 100 ppm
adalah 10 ml.

C. MENENTUKAN PANJANG GELOMBANG MAKSIMUM


1. Memasukkan larutan 100 ppm yang telah dibuat tadi ke dalam kuvet (bagian yang kasar dari
kuvet yang dipegang).
2. Membaca intensitas serapan yang terjadi pada spektrofotometer pada panjang gelombang 200400 nm.
3. Setelah diprint hasilnya, maka menetapkan berapa panjang gelombang maksimumnya.
D.
1.

MEMBUAT KURVA KALIBRASI


Membuat larutan parasetamol 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm dan 12 ppm.
4 ppm
Dari larutan parasetamol 100 ppm, diambil 4 ml.
Lalu dilarutkan dalam labu ukur dengan dan ditambah air hingga 100 ml.
Mengocok labu ukur hingga larutan tercampur sempurna.
Penghitungan :
x 100 ppm = 4 ppm
Berarti, banyaknya larutan yang diambil dari larutan 100ppm untuk membuat larutan 4 ppm
adalah 4 ml.
6 ppm
Dari larutan parasetamol 100 ppm, diambil 6 ml.
Lalu dilarutkan dalam labu ukur dengan dan ditambah air hingga 100 ml.
Mengocok labu ukur hingga larutan tercampur sempurna.
Penghitungan :
x 100 ppm = 6 ppm
Berarti, banyaknya larutan yang diambil dari larutan 100ppm untuk membuat larutan 6 ppm
adalah 6 ml.
8 ppm
Dari larutan parasetamol 100 ppm, diambil 8 ml.
Lalu dilarutkan dalam labu ukur dengan dan ditambah air hingga 100 ml.
Mengocok labu ukur hingga larutan tercampur sempurna.
Penghitungan :
x 100 ppm = 8 ppm
Berarti, banyaknya larutan yang diambil dari larutan 100ppm untuk membuat larutan 8 ppm
adalah 8 ml.
10 ppm
Dari larutan parasetamol 100 ppm, diambil 10 ml.
Lalu dilarutkan dalam labu ukur dengan dan ditambah air hingga 100 ml.
Mengocok labu ukur hingga larutan tercampur sempurna.
Penghitungan :
x 100 ppm = 10 ppm
Berarti, banyaknya larutan yang diambil dari larutan 100ppm untuk membuat larutan 10 ppm
adalah 10 ml.
12 ppm
Dari larutan parasetamol 100 ppm, diambil 12 ml.

Lalu dilarutkan dalam labu ukur dengan dan ditambah air hingga 100 ml.
Mengocok labu ukur hingga larutan tercampur sempurna.
Penghitungan :
x 100 ppm = 12 ppm
Berarti, banyaknya larutan yang diambil dari larutan 100ppm untuk membuat larutan 12 ppm

adalah 12 ml.
2. Membaca intensitas serapannya hingga dalam layar monitor terlihat kurva yang menunjukkan
perbanndingan antara ppm dengan nilai absorban.
V.

HASIL PENGAMATAN
Dari praktikum pertama yang kita lakukan, hasilnya adalah :

1. Panjang gelombang yang digunakan untuk membaca intensitas serapan adalah 256,5 dan nilai
absorbansinya adalah 1,517. Tapi hal ini tidak kita gunakan sebagai data, karena data yang kita
salah. Kemudian kita melakukan percobaan yang kedua, dan diperoleh absorban sebesar 0,698
pada konsentrasi 10 ppm. Lalu dimasukkan ke dalam rumus A = a x b x c, yaitu sebagai berikut
:
Nilai absorban yang baik adalah antara 0,2-0,8. Sehingga kita mencari konsentrasi berapakah
kita akan membuat larutan sehingga dapat diperoleh kurva kalibrasi yang baik.
Untuk nilai absorban 0,2 :
Untuk nilai absorban 0,8 :
Dari perhitungan tersebut, kita membuat larutan dengan konsentrasi 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10
ppm, dan 12 ppm untuk membuat kurva kalibrasi.
2.

Tetapi, dari hasil praktikum yang pertama (panjang gelombang 256,5 nm dan nilai absorban
1,517) kita harus mengulang karena sampel yang kita buat kotor (tercemar) sehingga kita
membuat larutan parasetamol lagi. Dan dari hasil pembuatan larutan parasetamol yang kedua,
kita memperoleh data berikut:

No
.
1
2
3
4
5

Abs (256,5)

Conc (ppm)

0,212
0,365
0,549
0,698
0,799

4
6
8
10
12
Tabel 2

VI.

PEMBAHASAN

Dalam praktikum ini kita melakukan pembuatan kurva kalibrasi parasetamol dengan
menggunakan pelarut NaOH 0,1 N. Alat yang kita gunakan adalah spektrofotometer UV-Vis.
Panjang gelombang dari parasetamol sendiri adalah sekitar 257, itulah mengapa kita menghitung
nilai absorban dari panjang gelombang yang dihasilkan oleh panjang gelombang 256,5 karena
panjang gelombang ini yang mendekati panjang gelombang dari parasetamol.
Nilai absorban yang kita peroleh pada percobaan pertama adalah 1,517. Tetapi nilai ini
salah sehingga kita harus mengulangi percobaan kedua dan hasilnya diperoleh nilai absorban
sebesar 0,698 pada konsentrasi 10 ppm. Dari nilai absorban tersebut, untuk membuat kurva
kalibrasi maka kita memasukkan nilai absorban tersebut ke dalam rumus dari Hukum Lambert
Beers :
Pada bagian kiri persamaan diketahui sebagai absorbansi larutan dan dihitung dengan
spektrometer. Persamaannya kadang ditulis dalam term absorbansi.
Simbol epsilon merupakan absorptivitas molar larutan.
Nilai absorban yang kita peroleh dimasukkan ke rumus di atas, dan dicari rentang dari
nilai absorban 0,2 sampai 0,8 (seperti pada perhitungan di hasil praktikum).
Dari perhitungan rumus tersebut, kita akan membuat larutan dengan konsentrasi 4 ppm, 6
ppm, 8 ppm, 10 ppm dan 12 ppm.
Kemudian kelima larutan tersebut kita ukur lagi nilai absorbansinya sehingga diperoleh
data seperti pada table 2 dan gambar kurva 2. Dari table tersebut dapat kita ketahui bahwa dari
hasil percobaan yang kedua cukup bagus karena rentang nilai absorban yang dihasilkan dari
konsentrasi 4 ppm sampai 12 ppm berada dalam rentang yang dianjurkan yaitu antara 0,2 0,8.
Dari kurva 2 tersebut kita ketahui bahwa kurva kalibrasi merupakan perbandingan antara
konsentrasi (ppm) dengan nilai absorban. Semakin besar konsentrasinya maka nilai ansorbannya
akan semakin besar pula. Dan dari kurva 2 tersebur kita dapatkan nilai r sebesar 0,9955. Tetapi
dalam melakukan percobaan nantinya, nilai r yang harus dipenuhi adalah 0,997.
VII.

KESIMPULAN

1. Panjang gelombang larutan parasetamol adalah 256,5


2. Nilai absorban yang kita peroleh dari konsentrasi 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm dan 12 ppm
adalah 0,212, 0,365, 0,549, 0,698, dan 0,799. Hal ini berarti masih dalam rentang nilai absorban
yang baik yaitu antara 0,2 0,8.
3. Kurva kalibrasi yang kita peroleh mempunyai nilai r sebesar 0,9955.

DAFTAR PUSTAKA
Basset J et al. 1994. Buku Ajar Vogel Kimia Analisis Kuantitatif Anorganik.
Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC
Day R dan Underwood A. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam.
Penerjemah : Sopyan Iis. Jakarta : Erlangga. Terjemahan dari : Quantitative
Analysis Sixth Edition.
Khopkar S. 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : Universitas Indonesia
(UI-Press)
Arti Penting Kalibrasi pada Proses Pengukuran Analitik: Aplikasi Pada
Penggunaan pH meter dan Spektrofotometer Uv-Vis oleh Iqmal Tahir
Laboratorium Kimia Dasar, Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Gadjah Mada
Sekip Utara, Yogyakarta.

Anda mungkin juga menyukai