GUATEMALA
Facultad de Odontologa
Bioqumica
Lic. Julio Turcios
Segundo A
CROMATOGRAFIA
INTEGRANTES:
JUAN PABLO LEN HERRERA
201213715
KARLA NOEMI AJA VELASQUEZ
201213729
DULCE GUADALUPE UMAA REYES
201213770
ALAN DAVID GIRON MATAS
R E Fecha
P O RT
E D de
E Reporte:
L A B 2OdeRmayo
AT O
de entrega
de R I O 2014
BIOQUIMICA
INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica que permite separar, aislar e identificar
los componentes de una mezcla de compuestos qumicos. La muestra es
distribuida entre dos fases, una estacionaria y otra mvil, de tal forma
que cada uno de los componentes de la mezcla es selectivamente
retenido por la fase estacionaria. La separacin se lleva a efecto en una
columna tubular rellena de un slido poroso finalmente dividido, el cual
puede actuar como fase estacionaria propiamente dicha o como soporte
de una fase estacionaria lquida. Tambin se puede efectuar utilizando
como fase estacionaria papel de filtro o un slido finalmente dividido
colocado en forma de capa fina sobre una placa de vidrio.
De la combinacin de los distintos tipos de fases estacionarias y mviles,
se pueden obtener varios tipos de Cromatografa. Estos tipos de
cromatografa se basan en los mismos principios fundamentales, y se
conocen respectivamente como cromatografa en columna, en papel y
de capa fina.
La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los
laboratorios para realizar unos anlisis cualitativos ya que pese a no ser
una tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La
fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel
filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas
de la solucin y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado
como fase mvil se hace ascender por polaridad. En la cromatografa en
columna, la fase mvil puede ser un lquido o un gas, y segn el caso se
denomina respectivamente Cromatografa lquida y Cromatografa de
gases, en este caso la cromatografa empleada fue la lquida.
La Fase mvil fluye a travs del relleno de la columna, arrastrando los
componentes de la mezcla, que son selectivamente retenidos por la fase
estacionaria. El flujo de la fase mvil se mantiene constante a travs de
todo el proceso y de esta manera se logra que cada componente de la
mezcla sea eluido de la columna como un compuesto puro, disuelto en
la fase mvil, a esta tcnica se le llama Cromatografa de elucin.
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Objetivos
Hiptesis
La cromatografa en papel revela los componentes ms afines tanto a
compuestos polares como apolares, quedando las ms polares cerca de
donde se puso la muestra y las no polares lejos de donde se puso la
muestra. Los colores en la cromatografa en columna, aparecern de
acuerdo al peso de cada color, los colores clidos tendrn una reaccin
ms pronta debido a su bajo peso y al volumen que stos tenan en la mezcla
del colorante.
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RESUMEN
La cromatografa es una tcnica de separacin de sustancias que se
basa en las diferentes velocidades con que son arrastradas cada una de
ellas a travs de un medio poroso por un disolvente en movimiento;
clasificndose en cromatografa de papel y columna, siendo esta una
tcnica que se utiliza para el mtodo analtico en el cual se puede
cualificar si estn presentes o no los colorantes y as mismo ver la
capacidad de separacin de cada uno. Mediante la cromatografa en
papel se realiz la preparacin de una fase mvil (mezcla de n-butanol,
cido actico y agua) y una fase estacionaria donde se realiz la siembra
de la muestra de distintos aminocidos con una diferencia de sus Rf.
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Resultados
CROMATOGRAFA EN PAPEL
Se observ que la cistena se alej 3.3 del punto de donde se sembr la
muestra y su matiz era ms suave. (Morado claro) .
cido glutmico, tuvo un desplazamiento 3.3 igual al de cistena pero
mayor, su tonalidad era ms oscura. (Morado)
La Glutamina tuvo un desplazamiento de 3.2 menor al de la cistena y al
cido glutmico, presentando su tonalidad ms oscura (morado intenso).
La muestra de orina,tuvo un desplazamiento de 3.8, este fue mayor al
hacer la comparacin con las dems muestras y su tonalidad ms clara.
(Lila)
Cromatografa en Columna
Los colores obtenidos en la primer columna fueron reaccionando
conforme el tiempo; siendo el primero el color rojo, minutos despus el
azul, luego el amarillo y, por ltimo el lila en menor cantidad.
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Discusin de
Resultados
CROMATOGRAFA EN PAPEL
Como se observ en los resultados de cromatografa, la cistena y el
cido glutmico se desplazaron la misma longitud 3.3 cm;la glutamina a
una distancia de 3.2cm;la muestra de orina 3.8cm, y una lnea de
eluyente de 4.4cm
Esto datos permiten realizar una comparacin de los aminocidos, y
obtener los siguientes resultados:
La cmara contena una solucin de n-butanol, cido actico y agua;
esta diversidad de compuestos que se encuentran en el eluyente
permite que las muestras se desplacen ms hacia el eluyente con el que
presentan mayor atraccin; el cido glutmico y la cistena presentan
ms afinidad a compuestos polares, por lo que stos tuvieron poco
desplazamiento ya que presentaban una mayor atraccin al compuesto
polar (agua) el cual se encontraba en la base de la cmara, y esto hacia
su desplazamiento ms lento, por esta razn presentaron un Rf: 0.75,
este Rf es mayor en comparacin con el otro aminocido (glutamina) y,
es menor en comparacin con la muestra de orina que presentaban Rf
ms alto.
La glutamina presentaba ms atraccin hacia el compuesto polar (agua)
que los aminocidos anteriores porque ste tiene mayor afinidad hacia
el compuesto polar y por lo tanto su movimiento es ms lento,
obteniendo un Rf: 0.7272, que nos indica que tiene una mayor retencin
hacia el agua, en comparacin con la muestra de orina que presenta
menos atraccin hacia compuestos polares y por lo tanto tienen un
desplazamiento mayor acercndose ms a la lnea final del eluyente.
El cido actico es voltil, yel n butanol es un gas, por lo que lo hace de
igual forma.
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Cromatografa en Columna
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o
Muestra
No.1
Al
finalizar
de
construir la fase
estacionaria de la
cromatografa
en
columna,
que
consta de una jeringa,
algodn
utilizado
como
tapn
y
bicarbonato
de
sodio humedecido con
hexano se pudo
apreciar que el hexano pasaba libremente a travs de la fase
estacionaria siendo inmiscible con los dems componentes ya que este
es un alcano apolar. Despus de agregar el colorante el cual era un
compuesto polar, los colores comenzaron a reaccionar al pasar cierto
tiempo. Siendo el primero en reaccionar el color rojo, seguido de azul,
amarillo y lila; esto fue debido a la concentracin y volumen alto de los
colores mezclados en el colorante utilizado.
El color acta por
gravitacin y extensin de una superficie cromtica. Los tonos fros
(azul, verde y violeta) parecen ms livianos y menos sustanciales; los
clidos (rojo, amarillo y anaranjado) parecen ms pesados y densos. (5)
El mecanismo de separacin de la cromatografa lquido- slido, o
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Muestra No. 2
Conclusiones
La cromatografa en columna, permite usar una gran cantidad de
la sustancias permitiendo la separacin de colores; y la
cromatografa en papel permite realizar separaciones mltiples, al
mismo tiempo, y someterlas al mismo procedimiento separativo.
El hexano es un compuesto
polar que al utilizarlo en la
cromatografa en columna, su funcin es eluir las sustancias no
polares, mientras que las polares quedan adheridas a la matriz de
la columna, es decir al bicarbonato;
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Recomendaciones
Todos los grupos deberan contar con sus propias soluciones y
reactivos, evitando as un desorden en el laboratorio.
Mantener los reactivos que son muy voltiles ms alejados del
laboratorio, porque algunos compaeros presentaron molestias.
Un laboratorio de cromatografa de gases ampliar ms el
conocimiento de las tcnicas de cromatografa.
Utilizar muestras de aminocidos para identificarlos con la tcnica
de
cromatografa
en
columna
para
poder
determinar
comparaciones con cromatografa en papel.
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Referencias
Miguel Angel Toledo. (2005). McGraw-Hill Biologa Celular y Molecular. pp 810-814
Thornton, R. (1998). Qumica orgnica. 5ta ed. Mxico. Editorial Pearson .pp 13351338
(5) Color. Teora del Color, Qu es el color? (En lnea). Consultado el 30 de abril
de 2014. Disponible en :
http://sapp.uv.mx/univirtual/cursos/AFEL/Intersemestral/IDG/docs/IDG10_1.pdf
(6) McNair, H; y Esquivel B. Cromatografa Lquida de Alta Presin.
Cromatografa Lquido-Slido. Washington, DC. pp. 7
(7) Parker, S. Diccionario McGraw-Hill de Qumica. Trad.McGraw-Hill.pp.21, 107.
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ANEXOS
v
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