1.

TINCION DE GIEMSA
La tincin de Giemsa es un mtodo habitual para el examen de frotis
sanguneos, cortes histolgicos y otro tipo de muestras biolgicas.
Utilidad
Este mtodo tiene utilidad sobre todo para poner de manifiesto las
rickettsias (plasmodium) localizadas dentro de las clulas huspedes. La
coloracin de Giemsa se emplea tambin para teir frotis de sangre en
el examen para protozoos.
Es quizs la mejor modificacin de este tipo de coloraciones para
descubrir parsitos en la sangre, como en el caso de malaria
(Plasmodium spp.) y tripanosomiasis (Trypanosoma cruzi). Es usado,
adems en los cortes de cartlago hialino debido a la gran carga de
glucosaminoglucanos cidos.
Fundamento
La tcnica de Giemsa est formada por varios colorantes: los tintes
neutros utilizados combinan el azul de metileno como tinte bsico y la
eosina como tinte cido, lo que da una amplia gama de colores. El azul
de metileno es un colorante metacromtico, de ah que muchas
estructuras se tian de prpura y no de azul. El pH de la solucin de
coloracin es crtico, entre 6.4 y 6.9 por lo que se debe ajustar
idealmente segn diversos fijadores. Los poli organismos adquieren una
coloracin diferencial y se ven dentro del citoplasma de la clula
husped.
Tcnica:

Fijar el frotis con alcohol metlico de 3-4 minutos. En caso de que la

preparacin del colorante ya posea metanol, este paso queda
obviado.
Sumergirlo verticalmente en una solucin de Giemsa preparada
extemporalmente a partir de 1 volumen de la solucin colorante ms
9 volmenes de solucin tampn (pBs, pH 6.8) o bien en agua
desionizada.
Esperar durante 10-20 minutos.
Lavar el frotis con abundante agua, directamente del chorro.
Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodn
humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante.
Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de
inmersin.

Resultados y observaciones:

Los ncleos celulares se tornan violeta intenso.

Es frecuente encontrar en el mtodo de Giemsa que la granulacin
eosinfila no presenta la tonalidad rojo-anaranjada caracterstica
sino que presenta una tonalidad pardo rojizo. Esta dificultad puede
prevenirse aadiendo una gota de fucsina fenicada por cada 10ml de
alcohol metlico utilizado.
Las granulaciones neutrfilos (lila) y los hemates (rojo plido) se
tien mal; sin embargo, esta coloracin permite diferenciar algunas
formas de meta mielocitos que pueden ser confundidos con los
monocitos, pues el protoplasma de los monocitos queda de color
azulado y el de los metamielocitos de color rosa.
El citoplasma de los linfocitos presenta una tonalidad azul definida y
sus ncleos violeta de intensidad variable.
Los grnulos basfilos y las plaquetas se tien de color azul, no
obstante stas ltimas presentan corpsculos violeta internos.

2. TINCION TRICROMICA DE MALLORY

Es utilizada para el estudio del tejido conectivo, glndulas, hongos, piel,
lengua, etc. Desarrollada por Frank B. Mallory est constituida por tres
colorantes: Fucsina cida., Orange G, Azul de anilina.
Fundamento
Fucsina cida. :Colorea de rojo a los ncleos.
Orange G : Colorante cido que se fija al tejido conectivo, citoplasma,
msculo, eritrocitos. Tie de color rojo a amarillo.
Azul de anilina: Colorante bsico que en presencia del cido
fosfotngstico tie la colgena de color azul.

Tecnica:

Desparafinar e hidratar en agua destilada.

Remover los cristales de cloruro de mercurio con Yodo por 5 min.

Aclarar con Tiosulfato de sodio 5 min.

Lavar en agua corriente bajo el chorro por 10 a 20 min.

Enjuagar en aguad destilada por 2 min.

Fuschina cida de 1-5 min.

Transferir directamente al Azul de Anilina Orange G por 30-60 min.

Deshidratar en alcoholes de 96% - 100% y aclarar en Xilol: 2

cambios de 2 minutos cada uno.

Cubrir con resina sinttica.

Resultados

Ncleos
:
Fibras colgenas :
Eritrocitos.
:
Clulas basfilas. :
Clulas cromfobas :

rojo.
azul.
amarillos.
azul.
amarillo.

3. TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN
La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial
rpida y econmica,
Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes: Franz Ziehl, un
bacterilogo, y Friedrich Neelsen, un patlogo.
Fundamento
Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos de
cadena larga que les confieren la propiedad de resistir la decoloracn
con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto
se denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como
Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se caracterizan por sus
propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar
con agua, provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo
que el colorante ya no puede salir de las bacterias.. Las bacterias que

resisten la decoloracin son de color rojo y las que no, se ven de color
azul ya que se utiliza azul de metileno como tincin de contraste
Utilidad
Usada para la identificacin de microorganismos patgenos, como M.
tuberculosis o el gnero Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros.
Resultados

BAAR: rojo.
Ncleos: azul semiamarillo.

4. Tincin de Wright
La tincin de Wright es un tipo de tincin usada en histologa para
facilitar la diferenciacin de los tipos de clulas de la sangre. La tincin
de Wright es una tincin de tipo Romanowsky. Dicha tincin esta
compuesta por azul de mtileno y eosina.
Fundamento
Las estructuras con carcter cido tales como los cidos nucleicos o las
protenas cidas son afines por compuestos bsicos como lo es el azul
de metileno contenido en la tincin. Por el contrario las estructuras de
carcter bsico tales como la hemoglobna y otras protenas bcicas son
afines a compuestos cidos tales como la eosina contenida en la tincin
por lo que a la vista estas estructuras tendrn un color rojo-rosado.
Utilidad
La tincin de Wright. Es de gran trascendencia clnca ya que gracias a
ella es capz de identificarse diversas estructuras en una clula as
como la morfologa y en su caso patologa celular no solo de las clulas
del sistema inmunolgico sino de todas aquellas que componen la
sangre ya sea en un paciente sano o con un estado patolgico.Se usa
principalmente para teir frotis de sangre y punciones medulares, para
ser examinadas al microscopio. En citogentica se usa para teir
cromosomas, para facilitar el diagnstico de sndromes y enfermedades.
Es una tcnica muy usada para el conteo de los glbulos blancos, una
tcnica rutinaria usada cuando hay sospecha de infecciones.
Se utiliza para el diagnstico de virus como: Herpes simple ,Varicela y
herpes zoster, Citomegalovirus, Sndrome Hemofagocitico por Virus de
Epstein-Barr
Tcnica:

Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tincin

con la sangre hacia arriba .
Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el
colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis
aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glbulos sanguneos.
El colorante deber cubrir completamente el portaobjetos, pero no
debe derramarse por los bordes. Deber agregarse una cantidad
adicional si ste se comienza a evaporar.
Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador
de Wright, para evitar la coloracin dbil. Esperar la formacin de
brillo metlico. Puede usarse de igual manera agua des-ionizada.
Dejar actuar de 10-15 minutos.
Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensin
presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista.
Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodn
humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante.
Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de
inmersin.
Resultados:
Los eritrocitos se observarn de color naranja o rosado.
El citoplasma de los monocitos presentarn una tonalidad azul
griscea con grnulo rojizos bastante finos y sus vacuolas
caractersticas. El citoplasma de los linfocitos presentar varias
tonalidades azules.
Los ncleos de los linfocitos y neutrfilos aparecern de color
prpura oscuro. Los ncleos de los monocitos de color prpura algo
ms claros (lila).
Los grnulos de los eosinfilos son de color rojo-anaranjado intenso.
Los grnulos de los basfilos prpura azulado muy oscuro. Los
grnulos de los neutrfilos se aprecian de color lila, bastante finos.
Las plaquetas toman coloracin violeta o prpura.