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Curso: Engenharia Qumica

Disciplina: Qumica Orgnica Experimental I


Profa. Dra. Renata Carolina Zanetti Lofrano
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EXPERIMENTO 4: CROMATOGRAFIA
1. INTRODUO
A cromatografia, provavelmente, a mais importante tcnica utilizada para separar os
componentes de uma mistura. Ela envolve a distribuio dos diferentes compostos ou ons na mistura
entre duas fases, uma das quais estacionria, e a outra, em movimento. A cromatografia funciona, em
grande parte, com base no mesmo princpio que a extrao com solvente. Na extrao, os componentes de
uma mistura so distribudos entre dois solventes, de acordo com as suas solubilidades relativas nos dois
solventes. O processo de separao na cromatografia depende das diferenas na fora com que os
componentes da mistura so adsorvidos na fase estacionria e quanto eles so solveis na fase mvel.
Essas diferenas dependem principalmente das polaridades relativas dos componentes na mistura. Existem
muitos tipos de tcnicas cromatogrficas, que variam de acordo com a natureza das duas fases envolvidas:
cromatografia slido-lquido (em colunas, em camada delgada e em papel), lquido-lquido (lquido de
alto desempenho) e gs-lquido (na fase de vapor).
Neste experimento ser estudada a tcnica de cromatografia em camada delgada que ser
ilustrada pelas cromatografias em papel e em giz.
Princpios da cromatografia em camada delgada.
A cromatografia em cada delgada (TLC, do ingls thin layer cromotography) uma tcnica muito
importante para a separao rpida e a anlise qualitativa de pequenas quantidades de material. Ela
perfeitamente adequada para a anlise de mistura e produtos de reao, em experimentos em macro e
microescala.
Assim, como a cromatografia em colunas, a TLC uma tcnica de partio slido-lquido.
Contudo, a fase mvel lquida no percola para baixo no adsorvente; ela sobe por uma fina camada de
adsorvente que reveste um suporte de apoio. O tipo de suporte mais comumente usado o plstico, mas
outros materiais tambm podem ser utilizados. Uma camada fina de adsorvente espalhada sobre uma
placa (suporte) que ento deixada secar. A placa revestida e seca chamada de placa de camada ou
lmina de camada delgada.
Na TLC, a amostra aplicada placa antes que o solvente possa subir pela camada de
adsorvente. A amostra contendo os solutos (materiais a serem separados) so chamados de eluatos,
geralmente aplicada na forma de uma pequena mancha perto da base da placa; essa tcnica normalmente
chamada de aplicao de mancha. Em seguida, a placa de camada delgada colocada na vertical em
um recipiente que contm uma camada rasa de solvente, chamado de eluente, sobe pela camada de
adsorvente na placa, por meio de ao capilar. medida que o solvente sobe pela placa ou elui, a amostra
particionada entre a fase lquida, mvel, e a fase slida, estacionria. Durante esse processo, voc est
desenvolvendo ou correndo, a placa de camada delgada, promovendo assim a separao dos vrios
componentes da mistura. Aps o desenvolvimento, a placa delgada removida do tanque de
desenvolvimento e deixada secar at a eliminao total do solvente. Se a mistura que foi originalmente
aplicada na placa tiver sido separada, haver uma srie vertical de manchas na placa e cada uma delas
corresponde a um componente ou composto separado da mistura original. Se esses componentes forem
coloridos, essas manchas sero claramente visveis depois do deslocamento. Contudo, frequentemente, as
"manchas" no so visveis por serem substncias incolores. Se no houver manchas aparentes, elas
podero se tornar visveis somente se for usado um mtodo de visualizao usando-se um agente
cromgeno ou revelador, que um agente fsico (como luz ultravioleta ou radioatividade) ou qumico

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(como vapores de iodo) que tornam visveis essas substncias. Os mtodos fsicos tm a vantagem de que
a substncia no sofre transformaes e pode-se recuper-la e estud-la melhor. Geralmente, manchas
podem ser vistas quando a placa de TLC for mantida sob luz ultravioleta (mtodo fsico) ou sob vapor de
iodo (mtodo qumico). Nesse ltimo caso, a placa colocada em uma camada contendo cristais de iodo e
deixada em repouso por um pequeno perodo. O iodo reage com vrios compostos adsorvidos na placa,
formando complexos coloridos que so visveis. Uma vez que o iodo reage com os compostos presentes
na placa, os componentes isolados da mistura no podem ser recuperados quando esse mtodo de
visualizao empregado. J o mtodo fsico tm a vantagem de que a substncia no sofre
transformaes e pode-se recuper-la posteriormente.
A TLC tem diversos usos importantes na qumica orgnica. Ela pode ter as seguintes aplicaes:
1. Demonstrar que dois compostos so idnticos;
2. Determinar o nmero de componentes de uma mistura;
3. Determinar o solvente apropriado para uma separao por cromatografia em coluna;
4. Monitorar uma separao cromatogrfica em coluna;
5. Verificar a efetividade de uma separao em uma coluna, por cristalizao ou extrao;
6. Monitorar o progresso de uma reao.
Solventes e adsorventes
Na tabela 1 abaixo esto relacionados alguns solventes cromatogrficos comuns, com sua
capacidade relativa de dissolver compostos polares. Algumas vezes, pode ser encontrado um nico
solvente que ir separar todos os componentes de uma mistura. Outras vezes, pode ser encontrada uma
mistura de solventes que atingir a separao. Em geral, compostos apolares percorrem mais rapidamente
a fase estacionria (eluem primeiro), e compostos polares percorrem mais lentamente (eluem depois).
Contudo a massa molecular tambm um fator determinante na ordem de eluio. Um composto apolar
de elevada massa molecular percorre mais lentamente que um composto de baixa massa molecular, e pode
at mesmo ser ultrapassado por alguns compostos polares.
Tabela 1. Relao dos principais solventes (eluentes) usados em cromatografia.
Polaridade crescente e a "capacidade do solvente"
Solvente
em relao aos grupos funcionais polares
ter de petrleo
Cicloexano
Tetracloreto de carbono
Tolueno
Clorofrmio
Cloreto de metileno
ter dimetlico
Acetato de etila
Acetona
Piridina
Etanol
Metanol
gua
cido actico

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Os solventes usados em cromatografia devem ser puros. Frequentemente, solventes comerciais


contm pequenas quantidades de resduos, que permanecem quando o solvente evaporado. Para trabalho
de rotina e para separaes relativamente fceis, que utilizam somente pequenas quantidades de solvente,
em geral o resduo acarreta poucos problemas. Para trabalhos em grande escala, o solvente a ser usado
deve ser redestilado antes de seu uso.
So enumerados vrios tipos de adsorventes (fases slidas) utilizados em cromatografia, tais
como: papel, celulose, amido, acares, alumina, sulfato de clcio, silicato de magnsio, cido silcico,
etc. A escolha do adsorvente geralmente depende dos tipos de compostos a serem separados. Celulose,
amido e acares so usados para materiais polifuncionais, de origem vegetal e animal (produtos naturais),
que so muito sensveis s interaes cido-base. O silicato de magnsio em geral utlizado para separar
acares acetilados, esteroides e leos essenciais. A alumina o adsorvente mais amplamente usado e
obtido nas formas cida, bsica ou neutra. Essa particularmente til na separao de materiais cidos,
como cidos carboxlicos e aminicidos. A sua forma bsica apresenta pH = 10 e til na separao de
aminas. J sua forma neutra pode ser utilizada para separar diversos materiais que no so nem cidos e
nem bsicos.
O valor do Fator de Reteno (Rf)
As condies para a cromatografia em camada delgada incluem:
1. Sistema de solventes;
2. Adsorvente;
3. Espessura da camada adsorvente;
4. Quantidade relativa de material aplicado.
A mistura de substncias atravessa a fase slida, finamente dividida, sendo que cada componente da
mistura percorre uma distncia especfica, por ser menos ou mais retido na superfcie do slido.
A escolha da fase mvel baseia-se, em geral, no fato de que as substncias em questo podem eluir-se
bem com os mesmos solventes ou misturas de solventes que as dissolvem bem.
Na eluio, a fase mvel (eluente) e os componentes da mistura (solutos) movem-se ao mesmo
tempo, assim, possvel se expressar a relao entre as distncias percorridas para cada um dos compostos
presentes na mistura original atravs da frmula:

Rf =

Distncia percorrida pelo soluto


Distncia percorrida pelo eluente

Este mtodo muito usado na cromatografia em papel, representada na Figura 1.

Figura 1. Ilustrao de uma placa de TLC usada para demonstrar o clculo do fator de reteno Rf.

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Cromatografia em papel
A cromatografia em papel geralmente relacionada com a cromatografia em camada delgada. As
tcnicas experimentais so de certo modo, similares s de TLC, mas os princpios esto mais estritamente
relacionados aos de uma extrao. A cromatografia em papel , na verdade, uma tcnica de
particionamento lquido-lqudo, e no uma tcnica slido-lquido. Para a cromatografia em papel, uma
mancha colocada prximo da parte inferior de um pedao de papel de filtro de alta qualidade
(geralmente se usa o tipo Whatman n0 1). Ento, o papel colocado em uma cmara de desenvolvimento.
O solvente sobe pelo papel pela ao capilar e move para cima os componentes da mancha da mistura com
taxas diferentes. Apesar de o papel consistir principalmente em celulose pura, a celulose em si no atua
como fase estacionria. Em vez disso, a celulose absorve gua da atmosfera, de uma atmosfera saturada
com vapor de gua, A celulose pode absorver at cerca de 22% de gua. essa gua adsorvida sobre a
celulose que atua como fase estacionria. Para garantir que a celulose se mantm saturada com gua,
muitos solventes de desenvolvimento utilizados na cromatografia em papel contm gua como
componente. medida que o solvente sobe pelo papel, os compostos so particionados entre a fase
estacionria, a gua, e a fase mvel, o solvente. Uma vez que a fase aquosa estacionria, os componentes
em uma mistura que so mais altamente solveis em gua, ou os que tm a maior capacidade de ligao de
hidrognio, so aqueles que ficam retidos e se movem mais lentamente. A cromatografia em papel se
aplica principalmente a compostos altamente polares ou compostos polifuncionais. O uso mais comum da
cromatografia em papel para acares, aminocidos e pigmentos naturais. Como o papel de filtro
fabricado de maneira consistente, pode-se geralmente confiar nos valores de Rf na cromatografia em
papel. Contudo, os valores de Rf costumam ser medidos a partir da extremidade superior (topo) da mancha
- no de seu centro, como habitual na TLC.

2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Cromatografia em giz
Em uma barra de giz escolar branco (sulfato de clcio CaSO4), so traadas com caneta hidrocor
listras, que circundem a barra, a cerca de 1,5 cm da base. Como eluente, em um becker, coloca-se gua
destilada, at 1 cm da base. Aps alguns minutos, o giz posto dentro do becker, com cuidado para que o
eluente no toque a listra pintada, e coberto com uma tampa de vidro (vidro de relgio). O giz deve ficar
na posio vertical. Esse mesmo experimento ser repetido usando-se ao invs de gua destilada etanol
comercial.
medida que o eluente adsorvido, pode ser observada a separao da cor inicial em outras
cores, dispostas em faixas circulares no decorrer da barra de giz. interessante realizar o experimento
com canetas de vrias cores. Por exemplo, um giz pintado com a cor verde, pode-se visualizar duas faixas,
amarela e azul. A cor preta fornece um resultado excelente, com a separao em diversas cores.
Cromatografia em papel
A Figura 2 abaixo ilustra a montagem experimental a ser realizada. importante que o trao feito
com a caneta no papel fique acima do nvel do solvente no becker. A subida do lquido no papel deve ser
observada at que seja atingida a altura de 34 do total e tal forma que o solvente atravesse o papel na
horizontal. Quando o lquido atingir essa altura, o papel dever ser retirado e exposto ao ar para secagem.
Sero estudados como eluentes a gua destilada e o etanol comercial. Os resultados dos grupos (aps

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secagem) podem ser expostos. Com base na observao de todos os cromatogramas obtidos pelos alunos,
podem ser propostas respostas para as perguntas: a) existe algum pigmento comum para as diferentes
cores; b) os pigmentos so iguais nas diferentes marcas; etc..
importante que sejam observados os seguintes aspectos:

Tintas de cores diferentes de canetas de mesmo tipo (esferogrficas ou hidrogrficas) e mesma


marca de caneta devem ser submetidas a cada um dos solventes (gua e lcool). Assim, a tinta de
uma caneta esferogrfica azul da marca X deve ser estudada com o lcool e com a gua.
Tintas de mesma cor do mesmo tipo de caneta, mas de marcas diferentes devem ser submetidas a
cada um dos solventes. Assim, uma caneta esferogrfica azul da marca X e uma azul da marca Y
devem ser comparadas utilizando lcool e gua.

Figura 2. Ilustrao da montagem do sistema de cromatografia em papel.

Sero fornecidas pelo professor outras misturas para serem estudadas usando-se ambas as tcnicas
descritas anteriormente.

3. GLOSSRIO
Dissolvente: substncia ou mistura de substncias que constituem a fase mvel na cromatografia. Em
geral, empregam-se lquidos com alta presso de vapor.
Rf (fator de reteno): relao ou quociente das distncias percorridas simultaneamente desde a origem
at o centro da mancha de uma substncia e at o mximo percorrido pelo dissolvente.
Origem: zona onde se aplica a amostra como crculo ou lnea na dissoluo da mescla que vai se separar.
Adsoro: Concentrao na superfcie de um slido das partculas de uma substncia em dissoluo.
Eluente: dissolvente polar usado em cromatografia para extrair as substncias separadas.

4. EXERCCIOS
1. Por que as tintas de esferogrficas e de hidrogrficas tm comportamentos diferentes conforme o
solvente empregado?
2. Por que diferentes cores so observadas em posies diferentes do papel?
3. O tipo de papel-filtro empregado deve influir nos resultados?
4. Por que a gua sobe mais lentamente do que o lcool no papel-filtro?
5. H dois corantes artificiais amarelos cujo uso permitido em gelatinas e ps para refrescos: amarelo
crepsculo e tartrazina. A cromatografia em papel poderia servir para saber se o corante amarelo usado em
gelatina um desses dois ou outro? Justifique.

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7. Calcule os valores de Rf para cada uma das substncias separadas para todas as misturas estudadas nos
dois mtodos empregados.
8. Calcule o valor de Rf de uma mancha que percorre 5,7 cm, com uma frente de solvente que percorre 13
cm.
9. Cada um dos solventes dados devem, efetivamente, separar uma das seguintes misturas por meio de
TLC. Faa a correspondncia entre o solvente apropriado e a mistura que voc espera separar bem como
esse solvente. Escolha seu solvente entre os que se seguem: hexano, cloreto de metileno ou acetona.
a. 2-feniletanol e acetofenona
b. Bromobenzeno e p-xileno
c. cido benzoico, cido 2,4-dinitrobenzico e cido 2,4,6-trinitrobenzico.

5. BIBLIOGRAFIA
1. CONSTANTINO, M., DA SILVA, G. V. e DONATE, P. M.; Fundamentos de Qumica Experimental.
So Paulo: Editora da Universidade de So Paulo, 2004.
2. BACCAN, N., DE ANDRADE, J. C., GODINHO, O. E. S., BARONE, J. S., Qumica Analtica
Quantitativa Elementar. 3aedio, So Paulo: Editora Edgard Blcher Ltda, 2001.
3. FURNISS, B. S. et all., Vogels Textbook of Practical Organic Chemistry. 5 edio, Editora Prentice
Hall, 1989.
4. SILVA, R. R.; BOCCHI, N.; ROCHA-FILHO, R. C., Introduo Qumica Experimental. So Paulo:
Editora McGraw-Hill, 1990.
5. GONALVEZ, D., et all, Qumica Orgnica Experimental. 1a edio, So Paulo: Editora McGraw-Hill,
1988.
6. McMURRY, J., Qumica Orgnica. 4a edio, Rio de Janeiro: Editora Livros Tcnicos e Cientficos,
1997.
7. AMBROGI, A. e LISBOA, J.C.F. Misturas e substncias reaes qumicas. So Paulo: Editora
Hamburg, 1983.
8. TONIN, L.F. Cromatografia. Revista de Ensino de Cincias. So Paulo, n. 14, set. 1985.
9. SOLOMONS, T. W. G., Qumica Orgnica. 7a edio, Rio de Janeiro: Editora Livros Tcnicos e
Cientficos, 2001.
10. MORRISON, R. & BOYD, R., Qumica Orgnica. 13a edio, Lisboa: Editora Fundao Caloustre
Gulbekian, 1996.
11. VOLHARDT, P. C. & NEIL, E., Qumica Orgnica. 4a edio, Porto Alegre: Editora Bookman, 2004.