Introduction :

Les salmonelles sont des entropathognes isoles de diffrents milieux

naturels : eaux douces et marines, sol denres alimentaires et milieux
hospitaliers.

Les

Salmonella

sont

des

parasites

de

l'homme,

des

mammifres (rongeurs), des oiseaux (volailles) et des animaux sang

froid (reptiles). Elles sont responsables, aprs pntration par voie orale,
de

nombreuses

infections

(salmonelloses),

notamment

des

fivres

typhode et paratyphodes (maladies dclaration obligatoire), des gastroentrites et des toxi-infections alimentaires collectives.

But de TP :
Isolement et identification des salmonelles par le suivre des plusieurs
tapes

principalement

sont :

pr

enrichissement,

isolement et identification.
Matriel et produit :
Bec bunsen

Suspension bactrienne

Pipette pasteur

Eau pptone tamponne

Propipette

Eau de javel
Bouillon slnite cystine

enrichissement,

Le plan de travail :
1. Le pr enrichissement :
Pour la recherche des Salmonella dans un aliment, cette tape est
ralise en Eau Peptone Tamponne (EPT) : cest un milieu liquide, non
slectif, qui permet la croissance des bactries sans exigences nutritives
particulires, ce qui est le cas des Salmonella.
a- But de cette tape :
Un pr-enrichissement permet :
-

Une revivification des micro-organismes prsents dans lchantillon et

ayant t stresss par des diffrents traitements.

une augmentation non spcifique du nombre de tous les microorganismes prsents dans la masse (volume) de produit analys.

b- Les tapes de pr enrichissement :

Au premier temps il faut tout dabord striliser le poste de travaille par
leau de javel.
A cot du bec bunsen prendre 50 ml de suspension bactrienne et le
mettre dans un flacon contient 250 ml deau pptone tamponne.
Refermer bien le flacon ensemenc et lincuber 37C pendant 20h
Mettre la pipette dans un bcher deau de javel et striliser la poste de
travaille pour la dernire fois.

c- Le protocole de travail :
Figure 01 : schma rcapitulatif de pr-enrichissement
2. Lenrichissement :
Cette tape est ralise en transfrant une aliquote du bouillon de prenrichissement dans un bouillon slectif : bouillon au slnite, bouillon de
Rappaport-Vassi-liadis, pour inhiber les gram+ et les coliformes.
a. But de cette tape :
- Lobjectif de ltape denrichissement slectif est de favoriser la
-

croissance des bactries du genre Salmonella

Un enrichissement slectif permet une augmentation significative et
spcifique du nombre de micro-organismes recherchs.

b. Les tapes denrichissement :

Dans la zone strile, prendre 10ml de culture pr-enrichissement
ensemence prcdemment et le mettre dans 100ml de bouillon
slnite cystine.
Incuber le flacon 37C pendant 18 24h
c. Le protocole de travail :

Figure 02 : schma rcapitulatif de lenrichissement