Manual de Procedimientos MediLab

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Fecha de elaboracin:
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Manual de Procedimientos
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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NDICE
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INTRODUCCIN
1. PRESENTACIN.........................................................................................1
2. INTRODUCCIN.........................................................................................2
3. OBJETIVO GENERAL................................................................................3
4. OBJETIVOS ESPECFICOS.......................................................................4
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5. NORMAS OFICIALES MEXICANAS..........................................................5
6. PROCEDIMIENTOS.....................................................................................28
BIOMETRA HEMTICA.............................................................................28
GRUPO SANGUNEO
.......................31
PLAQUETAS...............................................................................................34
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RETICULOCITOS........................................................................................35
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR.....................................37
CIDO RICO.............................................................................................40
ALT (GPT)....................................................................................................43
AMILASA.....................................................................................................45
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ASO LTEX.................................................................................................47
AST (GOT)...................................................................................................50
BILIRRUBINAS............................................................................................52
COLESTEROL-HDL....................................................................................55
COLESTEROL.............................................................................................58
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COOMBS DIRECTO....................................................................................60
COOMBS INDIRECTO................................................................................63
COPROPARASITOSCOPICO.....................................................................66
CREATININA...............................................................................................71
DEPURACIN DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS....................74
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ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA..........................................................78
EXMEN GENERAL DE ORINA.................................................................87
FACTOR REUMATOIDE..............................................................................97
FOSFATASA ALCALINA.............................................................................100
GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA........................................................102
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HIV
.........................................................................................................106
LIPASA.........................................................................................................109
PROTENA C REACTIVA............................................................................111
PROTENAS TOTALES Y ALBUMINA.......................................................114
PRUEBA DE EMBARAZO EN SANGRE....................................................116
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PRUEBAS CRUZADAS..............................................................................119
TIPO DE COAGULACIN...........................................................................122
TIEMPO DE PROTROMBINA (T.P.)............................................................124
TIEMPO DE PROTROMBINA.....................................................................126
TIEMPO DE SANGRADO...........................................................................129
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TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTP)................131
TRIGLICRIDOS.........................................................................................134
UREA .........................................................................................................136
VDRL .........................................................................................................138
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PRESENTACIN
Este documento se ha desarrollado con la finalidad de contar con un
instrumento que funcione como gua para la correcta ejecucin de todos los
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procedimientos tcnicos del Laboratorio, y de esta manera contribuir al orden y
estandarizacin del mismo.
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INTRODUCCIN
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Los laboratorios clnicos representan un apoyo primordial para el rea mdica,
ya que a travs de los anlisis realizados en ellos se pueden diagnosticar
diferentes patologas y establecer el tipo de tratamiento que se debe administrar
al paciente. Es por eso, que conscientes de la gran importancia y con la
finalidad de alcanzar un trabajo de calidad, es indispensable contar con un
manual que presente de manera formal y sistemtica los procedimientos del
Laboratorio.
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El siguiente manual se ha elaborado de forma sencilla y prctica para que su
contenido sea de fcil aplicacin por el personal que desarrolla estas
actividades diarias.
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Se espera que este manual sea una gua efectiva y til para lograr la
estandarizacin de los procedimientos y calidad de los resultados obtenidos en
el laboratorio.
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OBJETIVO GENERAL
Proporcionar al Laboratorio Novo, un instrumento que facilite el desarrollo
adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos tcnicos que
se realizan en Laboratorio Novo.
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OBJETIVOS ESPECFICOS
Brindar una herramienta que permita realizar los procedimientos tcnicos

de laboratorio uniformemente, de manera que se eviten desviaciones en
su desarrollo.
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Ordenar todos los procedimientos tcnicos del Laboratorio MediLab, en
un solo documento.
Contribuir a la aplicacin de las medidas de bioseguridad y controles de
calidad que deben cumplirse, cuando se desarrolle un procedimiento
tcnico.
Contar con un instrumento que sirva de gua para la evaluacin y
monitoreo de las actividades de laboratorio.
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NORMAS OFICIALES MEXICANAS
Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011, Para la organizacin y

funcionamiento de los laboratorios clnicos.
Norma Oficial Mexicana NOM-005-STPS-1998, Relativa a las

condiciones de seguridad e higiene en los centros de trabajo para el
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manejo, transporte y almacenamiento de sustancias qumicas peligrosas.
2.2 Norma Oficial Mexicana NOM-008-SCFI-2002, Sistema general de

unidades de medida.
2.3 Norma Oficial Mexicana NOM-010-SSA2-2010, Para la prevencin y

control de la infeccin por Virus de la Inmunodeficiencia Humana.
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2.4 Norma Oficial Mexicana NOM-012-STPS-1999, Condiciones de

seguridad e higiene en los centros de trabajo donde se produzcan, usen,
manejen, almacenen o transporten fuentes de radiaciones ionizantes.
2.5 Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,

Proteccin ambiental-Salud ambiental-Residuos peligrosos biolgicoinfecciosos-Clasificacin y especificaciones de manejo.
2.6 Norma Oficial Mexicana NOM-168-SSA1-1998, Del expediente

clnico.
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2.7 Norma Oficial Mexicana NOM-197-SSA1-2000, Que establece los

requisitos mnimos de infraestructura y equipamiento de hospitales y
consultorios de atencin mdica especializada.
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PROCEDIMIENTOS
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Biometra Hemtica
1.- Objetivo
La biometra hemtica es uno de los estudios que con ms frecuencia se
solicita en el laboratorio, asimismo, es el primer examen al que se enfrenta el
clnico en la valoracin diagnstica de un paciente. Aunque se considera como
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un solo examen de laboratorio, en realidad valora 3 lneas celulares, cada una
con funciones diferentes entre s pero que comparten u n origen comn en la
mdula sea: eritrocitos, leucocitos y plaquetas.
Los usos de la biometra hemtica son mltiples, pero lo ms frecuentes
son para el seguimiento de pacientes con quimioterapia o radioterapia, y el
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diagnstico de pacientes con sndrome anmico, sndrome febril o sndrome
purprico.
2.- Material, Reactivos e instrumental
Para toma de muestra:
Un tubo con anticoagulante EDTA para vacutainer color lila

Una aguja desechable vacutainer
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Para procesar la prueba:
Un mezclador
Equipo Wiener Lab Counter 19
Cubetas para contador
3.- Procedimiento
Se toma la muestra
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Se coloca la muestra en la mezcladora para evitar coagulacin

En el equipo Wiener Lab Counter 19 se capturan los siguientes datos del
paciente:
o Nombre
o Edad
o Sexo
Se toma la muestra de la mezcladora y se coloca en la aguja del equipo
Wiener Lab Counter 19
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o Se esperan resultados y se imprimen
4.- Valores de Referencia
4.1 Eritrocitos en hombre: 5,000,000 6,000,000 por mm cbico
Mujer: 4,000,000 5,500,000 por mm cbico
4.2 Hemoglobina en hombre: De 14 18.0 g%
Mujer: De 12 16 g%
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4.3 Hematocrito en hombre: De 34 46 %
Mujer: De 32 40 %
4.4 Leucocitos en hombres y mujeres: 5,000 10,000 por mm cbico
4.4.1 Linfocitos: 20 50%
4.4.2 Monocitos: 0 10%
4.4.3 Basfilos: 0 2%
4.4.4 Eosinfilos: 0 5%
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4.4.5 Neutrfilos: 35 70%
4.4.6 Segmentados: 90 100%
4.4.7 En banda: 0 10%
4.4.8 Metamielocitos: 0%
4.4.9 Mielocitos: 0%
4.4.10 Promielocitos: 0%
4.4.11 Mieloblastos: 0%
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4.5 Plaquetas: Van de 150,000 450,000 por mm cbico
4.6 Reticulocitos: 0.5 1.5%
5.- Bibliografa
Jaime Prez Jos Carlos, David Gmez Almaguer HEMATOLOGA. La sangre y
sus enfermedades. Edit. Mc Graw Hill. Mxico, D.F. 1 Edicin 2005 captulo 3
pginas 15 19.
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Grupo Sanguneo
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1.- Objetivo
Determinacin de los diferentes grupos sanguneos ya sea en placa o en
tubo.
2.- Fundamento
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En la membrana del eritrocito estn presentes diferentes antgenos que
determinan el grupo sanguneo de un individuo siguiendo las leyes de Mendel.
3.- Material y Reactivos
Solucin salina fisiolgica 0.9%

Sangre tomada en tubo con anticoagulante E.D.T.A.
Tubos de ensayo
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Antisueros: Anti A, Anti B, Anti AB, Anti D

Suero de Coombs
Albmina bovina al 22%
Centrfuga
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4. - Procedimiento
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Una vez obtenida la sangre preparar una suspensin de glbulos rojos a
5% con solucin salina

Se van a tomar 4 tubos a los que se les marcar de la siguiente manera:
A, B, AB Y D.
Aadir una gota de suspensin de glbulos rojos a cada tubo
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Aadir una gota de cada suero segn corresponda una gota de anti A,
una gota de suero de anti B, una de anti D y una gota de suero anti
AB al tubo AB.
Mezclar y meter todos los tubos a la centrfuga por uno o dos minutos
Observar si hay o no aglutinacin
Si hay aglutinacin en el tubo A, debe haber en el tubo AB, y no hay en
B, y si en D entonces la sangre es A(+)
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Si por el contrario hay aglutinacin en B y en AB, y tambin en D pero no
hay en A, el grupo sanguneo es B(+)

Si hay aglutinacin en A, en B, en AB, y en D se trata de un grupo
sanguneo AB(+)
Y si no hay aglutinacin ni en A, en B, ni en AB, pero si en D, entonces
estamos hablando del grupo O(+)
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4.1 Prueba Du
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Cuando nos da negativo el Rh, hacemos un prueba complementaria
llamada Du y consiste en la bsqueda de anticuerpos incompletos.
Para ello se agrega una gota de albmina bovina al 22% al tubo que resultara D
o Rh(-) y se mete a bao mara por espacio de 15 minutos una vez transcurrido
ese tiempo sacar el tubo del bao mara y se centrifuga observando si hay o no
aglutinacin en caso negativo lavar 4 veces con solucin salina y al final se
aade una gota de suero de Coombs y se centrifuga observando si hay o no
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aglutinacin y se reporta como Du(-) en el caso de que no haya aglutinacin,
pero si la hubiera entonces se reporta como Du(+).
5.- Bibliografa
Lynch M,J/S.S. Raphael/L:D:Mellor/P:D:Spare/MJH Inwood MTODOS DE
LABORATORIO, 2da Edicin. 1997 Mxico, D.F. Vol. 2 CAP 23 PAGS. 845
857.
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Plaquetas
1.- Objetivo
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Determinar la cuenta de plaquetas de una muestra mediante el frotis de
sangre.
2.- Introduccin
Las plaquetas son clulas especiales que no tienen ncleo y derivan de
los megacariocitos y no se dividen sintetizan DNA. Cuando hay la ruptura de un
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vaso sanguneo se activa el sistema de coagulacin por la presencia de
colgeno y adems se activa la adhesin plaquetaria.
3.- Procedimiento
Una vez teido por el mtodo de Wright entonces se va a contar las
plaquetas que haya en 10 campos y se va a multiplicar el resultado por 2000 y
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esto nos dar el resultado aproximado de plaquetas por mm cbico en el
paciente.
4.- Valores de referencia
Tanto en hombres como en mujeres el resultado esperado es de 150,000
a 450,000 plaquetas por mm cbico de sangre.
5.- Bibliografa
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LYNCHM.J./S.S.RAPAHEL/L.D.MELLOR/P.D.SPAREM/M.J.H.INWOOD
MTODOS DE LABORATORIO EDIT INTERAMERICANA, MXICO,D.F. 2da
EDICIN 1997 VOL 2 CAP 22 PG 818.
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Reticulocitos
1.- Objetivo
Determinar el porcentaje de Reticulocitos en un frotis de sangre
perifrica.
2.- Fundamento
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Los Reticulocitos son glbulos rojos jvenes que se caracterizan por la
presencia de una red, o malla formada por filamentos, restos de las fases
nucleadas, lo que indica su produccin reciente por la mdula sea. No se
observan en un estudio de rutina como la biometra, porque se necesita una
tincin especial con azul de cresilo o de metileno para que sean evidentes. La
cifra normal se expresa como porcentaje y se haya entre 0.5 y 1.5%. La
elevacin de la cifra de Reticulocitos indica un aumento de la produccin de
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eritrocitos por la mdula sea. La elevacin ms importante se produce en el
caso de las anemias hemolticas, porque la destruccin de los eritrocitos y la
hipoxia tisular por la anemia estimulan una serie de factores, como
eritropoyetina, interleucinas, etc., que obligan a la mdula sea a aumentar la
produccin.
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3.- Material y reactivos
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Sangre tomada previamente en tubo color lila con E.D.T.A. como
anticoagulante.
Colorante azul de metileno nuevo.
Tubo de ensayo de 5 ml de capacidad
Pipetas Pasteur
Tapn para tubo de ensayo
Bao Mara a 37C
Mezclador
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Microscopio
Portaobjetos
Aceite de inmersin
4.- Procedimiento
Se colocan 3 gotas de sangre en el tubo

Se aade tres gotas de colorante Azul de Metileno Nuevo
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Se tapa el tubo y se mezcla bien

Se incuba a 37C por 15 minutos
Se preparan frotis y se deja secar al aire
Contar al microscopio cuantos Reticulocitos hay en 1000 eritrocitos
5.- Resultados
El valor de referencia es de 0.5 1.5%
6.- Bibliografa
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Jaime Prez Jos Carlos, David Gmez Almaguer HEMATOLOGA La sangre y
sus enfermedades. Editorial Mc Graw Hill. Mxico D.F. 1 Edicin 2005 PG 12.
Velocidad de sedimentacin globular
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1.- Objetivo
Determinar la velocidad de sedimentacin en una muestra de sangre
anticoagulada.
2.- Fundamento
La velocidad de sedimentacin globular es una prueba empleada
universalmente como ndice de la presencia de enfermedades activas de
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muchas clases. La prueba depende del hecho de que la sangre a la que se ha
aadido un anticoagulante los glbulos rojos sedimenta hasta que forma una
columna compacta en la parte inferior del tubo o recipiente. La velocidad de
este proceso depende de varios factores, siendo los principales:
a. Formacin de Rouleaux
b. Concentracin de fibringeno es plasma
c. Concentracin de globulinas alfa y beta en el plasma
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3.- Material, Reactivos, Instrumental
Sangre anticoagulada en tubo de color lila con E.D.T.A.

Tubo de Wintrobe
Gradilla para tubos de Wintrobe
Pipetas Pasteur
Mezclador
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4.- Mtodo
Toma de muestra:
Se extraen 2 mililitros de sangre que se colocan en un tubo

de ensayo con E.D.T.A. como anticoagulante (tubo de color
lila)
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Mezclar suavemente invirtiendo el tubo varias veces.

El paciente deber estar en ayunas, tranquilo con el fin de
obtener mejores resultados.

Si se toma durante el transcurso del da, debern tenerse
en cuenta las variaciones fisiolgicas tales como la
actividad muscular, estados emocionales y variaciones del
clima que tienden a aumentar el valor real de la V.S.G.
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Tcnica para determinar la V.S.G.
a. Mediante una pipeta de Pasteur, llenar un tubo de Wintrobe
hasta la marca cero con sangre anticoagulada, evitando la
formacin de burbujas.
b. Colocar el tubo en la gradilla de sedimentacin en una
posicin exactamente vertical
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c. Al final de la hora, se lee la V.S.G. mediante la longitud de
la columna del plasma sobre las clulas en los nmeros de
la izquierda.
A veces se acostumbra hacer las lecturas cada 5 minutos durante una hora
para sacar curvas graficando tiempo contra sedimentacin en milmetros.
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Hombres
Mujeres
Nios
Lmites
0-7 mm/Hr
0-15 mm/Hr
1-15 mm/Hr
Promedio
4 mm/Hr
10 mm/Hr
5-10 mm/Hr
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6.- Bibliografa
Lynch M,J/S.S. Raphael/L:D:Mellor/P:D:Spare/MJH Inwood MTODOS DE
LABORATORIO, 2da Edicin. 1997 Mxico, D.F. Vol. 1 cap. 12 pg. 738-740.
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cido rico
1.- Objetivo
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Determinar el cido en sangre de un paciente.
2.- Fundamento
El cido rico es en los mamferos el metablico final del catabolismo de
las bases pricas y su elevacin est asociada a la gota, es decir, los
reumatismos hiperuricmicos. En los pacientes con tal difusin, aparecen
cristales de cido rico en las articulaciones y en los tendones lo que originan
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las manifestaciones reumticas caractersticas. Niveles altos de cido rico
estn tambin asociados a patologa renal por retencin de productos
nitrogenados asocindose en estos casos a valores tambin altos de urea y de
creatinina.
El cido rico es oxidado por la uricasa a alantona y perxido de
hidrgeno y en presencia de POD y 4-AF y DCPS forma un compuesto rosceo.
uricasa
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cido rico + 2H2O + O2Alantona + CO2+ 2H2O2
POD
2H2O2+ 4-AF + DCPS
quinona + 4H2O
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3.- Material, reactivos e instrumental
Sangre tomada al paciente en tubo color rojo

Tubos de ensayo
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Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Bao Mara
Termmetro
Cronmetro
Gradilla
Reactivo para cido rico Serapack Bayer
Centrfuga
Estndar de cido rico
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Sueros control
4.- Procedimiento
Centrifugar la muestra de sangre ya coagulada

Separar el suero en un tubo limpio y seco
Poner el RA 50 en cido rico
En un tubo poner 20 ul de muestra en otro tubo 20 ul de estndar
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En otro tubo se ponen 20 ul de suero control

Aadir a cada tubo 1 ml de reactivo
Poner un blanco de reactivo
Incubar todos los tubos a 37C por 5 minutos
Sacar los tubos
Leer el RA 50
Dejar que el aparato imprima el resultado
Reportar el resultado en el informe correspondiente
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Mujeres: 2.5 5.7 mg/dl
Hombres: 3.5 6.0 mg/dl
6.- Bibliografa
Manual de tcnica de reactivos Spinreact. Mxico 2002
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ALT (GPT)
1.- Objetivo
Determinar la ALT en un paciente determinado.
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2.- Fundamento
La determinacin cintica de la alanina aminotransferasa (ALT) se basa
en las recomendaciones de la IFCC;
L-alanina + alfa-cetoglutarato
Piruvato + NADH + H+
ALT= Alanina Aminotransferasa
LDH= Lactato Deshidrogenasa
ALT
LDH
Piruvato + L-glutamato
L-Lactato + NAD+
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Sangre del paciente en tubo rojo

Centrfuga
Gradilla
Tubos de ensayo
Termmetro
Cronmetro
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Bao Mara
Analizador RA 50
Sueros control
Pipetas Automticas
Puntas para pipetas
Reactivo para ALT
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4.- Procedimiento
Centrifugar la sangre
Seleccionar la funcin ALT en el RA 50
Medir 1 ml de solucin de trabajo y ponerlo en un tubo
Aadir 100 ul del suero
Verter la mezcla en una cubeta
Leer en el RA 50
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Reportar el resultado en el formato correspondiente

A 37C el intervalo es de 0 49 U/L
6.- Bibliografa
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Manual de tcnicas de Serapak Bayer, Mxico
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Amilasa
1.- Objetivo
Determinar la amilasa en el suero de un paciente.
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2.- Fundamento
Durante aos los niveles de alfa-amilasa en suero y plasma nos han
evidenciado la necesidad de la determinacin para el diagnstico de
pancreatitis aguda.
Este mtodo de determinacin de alfa-amilasa utiliza un substrato
cromognico, 2-cloro-4-nitrofenol ligado a la maltotriosa.
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CNPG3
a amilasa
CNP + CNPG2 + G3 + G
Como se indica, la a amilasa hidroliza el substrato 2-cloro-4-nitrofenola-D-maltrotiosido, (CNPG3) dando lugar a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP), 2-cloro-4nitrofenol-a-D-maltrotiosido, (CNPG2), maltotriosa G3 y glucosa G.
La
cantidad
de
CNP
formado
puede
ser
detectado
espectrofotomtricamente a 450 nm dando un medida directa de la actividad de
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la a-amilasa de la muestra. La reaccin no est inhibida por factores
endgenos.

Centrfuga
Tubos de ensayo
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Analizador RA 50
Termmetro
Gradilla
Suero control
Pipetas
Puntas para pipetas
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4.- Procedimiento
Reactivo
Suero o Plasma
Orina Muestra
1.0 ml
20 ul
10 ul
Meter la muestra al analizador RA 50

Esperar a que arroje el resultado
Reportar el resultado en el formato correspondiente
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90
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Suero, Plasma
Orina
<90 U/L
<450 U/L
6.- Bibliografa
Manual de tcnicas Spinreact, Mxico.
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Aso Ltex
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1.- Objetivo
Determinar las antiestreptilosinas de un paciente que se tenga sospecha
de que haya tenido contacto con Streptococo beta hemoltico.
2.- Fundamento
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El mtodo se fundamenta en una reaccin de aglutinacin de una
suspensin de partculas de ltex poliestireno sensibilizadas con estreptolisina
O estabilizada. La aglutinacin es visible en una concentracin de ASO en
suero = > a 200 UI/ml.
3.- Material, Reactivos e instrumental
Suero de la persona a la que se va a hacer el examen
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Tubos de ensayo
Reactivo de ltex ASO
Sueros control
Placa de reaccin
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4.- Procedimiento
Mtodo cualitativo
Atemperar el reactivo y los controles a temperatura ambiente
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Homogenizar el reactivo 1 ASO ltex, con agitacin suave

Comprobar la funcionalidad del reactivo, mediante los controles (+) y (-)
Dosificar una gota de suero muestra y analizar en un crculo del porta sin
diluir
Aadir, al lado del anterior una gota de reactivo 1 ASO ltex
Mezclar las 2 gotas y extenderlas por todo el crculo
Colocar el porta en el agitador rotatorio
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(de 80 100 rpm) y observar la presencia o ausencia de aglutinacin
exactamente al cabo de 2 minutos

El exceso del tiempo de reaccin podr dar lugar a falsos positivos
Interpretacin. La presencia de aglutinacin ndica un nivel de ASO igual
o superior a 200 UI/ml

La ausencia de aglutinacin indica el nivel de ASO < a 200 UI/ml en la
muestra
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Mtodo semicuantitativo
Siguiendo la metdica cualitativa, se proceder con diluciones del suero

muestra con solucin salina (cloruro de sodio 0.9%)
Disoluciones
1/2
1/4
1/8
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Suero muestra
100 ul
..
..
Solucin salina
100 ul
100 ul
100 ul
100 ul
Dosificar en porta
50 ul
50 ul
Concentracin si es la ltima dilucin que da aglutinacin
100 ul
50 ul
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200 x n dilucin
UI/ml
200 x 2
400

Adultos: Hasta 200 UI/ml = 200 unidades Todd
6.- Bibliografa
200 x 4
800
200 x 8
1600
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Manual de Tcnicas de Spinreact Mxico
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103
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AST (GOT)
1.- Objetivo
Determinar el AST en un paciente determinado.
2.- Fundamento
La determinacin cintica de la aspartato aminotransferasa se basa en:
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L aspartato + alfa-cetoglutarato
Oxaloacetato + NADH + H
AST
NDH
L-malato + NAD+
AST: Aspartato nimo transferasa

MDH: Malato deshidrogenasa
Oxaloacetato + L-glutamato
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Tubos de ensayo
Bao mara
Termmetro
Cronmetro
Centrfuga
Reactivo de AST
Controles
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
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4.- Procedimiento
Preparar la solucin de trabajo

Centrifugar la muestra de sangre
Separar el suero
Medir un ml de solucin de trabajo pulsar la tecla AST del RA 50
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Medir 100 ul de suero y ponerlos en el ml de solucin de trabajo

Oprimir Analyze
Esperar a que el aparato d el resultado
Reportar en hojas correspondientes
5.- Valores se referencia

A 37C valor normal es de 0-46 U/L
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6.- Bibliografa
Manual de procesos de reactivos SERAPAK, BAYER, Mxico.
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Bilirrubinas
1.- Objetivo
Determinacin de la bilirrubina directa y total.
2.- Fundamento
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La bilirrubina se origina por degradacin del grupo hem de la
hemoglobina, que a su vez aparece en el plasma como consecuencia de la
destruccin de los glbulos rojos en el sistema retculo endotelial. La
hemoglobina una vez liberada en el interior del eritrocito, se combina con las
haptoglobinas, protenas plasmticas especficas para su transporte. En una
primera etapa y tras su liberacin de la haptoglobina, se forma, por accin de
una oxigenasa, en un grupo formilo, con lo que se rompe el anillo tetrapirrlico
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del hem, formndose el compuesto denominado biliverdina, que en una etapa
posterior y por accin de una reductasa se transforma en bilirrubina.
Casi todas las tcnicas de cuantificacin de la bilirrubina se basan en la
reaccin de Malloy Evelyn, que valora colorimtricamente por la formacin de
azobilirrubina, de color rojo cereza, cuando a la bilirrubina se la hace reaccionar
en determinadas condiciones con el cido sulfanlico diazotado.
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La bilirrubina conjugada, muy polar, reaccionar en medio acuoso con el
reactivo de diazotacin, por lo que se llam directa, pues al poner en contacto el
suero y el reactivo apareca directamente el color. Sin embargo, la bilirrubina
libre, poco polar, no da directamente la reaccin y es preciso aadir un tercer
reactivo que inicialmente fue el metanol para que produzca la reaccin de
diazotacin con la consiguiente aparicin de color; por este motivo se le llam
bilirrubina indirecta.
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3.- Material, reactivos e instrumental.
Sangre del paciente en un tubo rojo

Centrfuga
Gradilla
Tubos de ensayo
Pipetas automticas
Bao mara
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Termmetro
Cronmetro
Reactivo para bilirrubina directa serapack bayer
Reactivo para la bilirrubina total serapack bayer
Sueros de control
Analizador RA 50
Cubetas para analizador
4.- Procedimiento
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Reactivo 1
Bilirrubina
Bilirrubina
Bilirrubina
Bilirrubina
Directa (Pb)
1.5 ml
Directa (Bco)
1.5 ml
Total (Pb)
1.5 ml
Total (Bco)
1.5 ml
Reactivo 2
Muestra
50 ul
100 ul
100 ul
50 ul
100 ul
Ul
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Bilirrubina Total: Hasta 1.0 mg/dl

Bilirrubina Directa: Hasta 0.30 mg/dl
6.- Bibliografa
Manual de tcnicas Serapack Bayer.
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Colesterol HDL
1.- Objetivo
Determinar la cantidad de colesterol hdl contenido en la sangre.
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2.- Fundamentos
Mediante un reactivo precipitante de protenas, se logran precipitar las
lipoprotenas de baja densidad y las de muy baja densidad (LDL y VLDL)
quedndose sobrenadante las lipoprotenas de alta densidad, donde se
determina el colesterol ligado a las mismas.
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3.- Material, Reactivos e instrumentos

Tubos de ensayo
Gradilla
Bao mara
Termmetro
Cronmetro
Pipetas automticas
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Puntas para pipetas

Analizador RA 50
Reactivo para el colesterol
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4.- Procedimiento
Centrifugar la muestra
En otro tubo poner 500 ul de reactivo precipitante
Mezclar
Dejar reposar 10 min a temperatura ambiente
Centrifugar 20 min a 4000 rpm o 2 min 12000 rpm
Determinar el colesterol del sobrenadante
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Pipetear en tubos de ensayo

Para la macrodeterminacin se utilizan 2 tubos una blanco y el otro de
muestra
En el blanco poner 2.0 ml de R.B (colesterol)
En el tubo de muestra poner 40 ul de sobrenadante y 2.0 ml de R.B
(colesterol)
Para la semimicrodeterminacin se utilizan 2 tubos uno blanco y el otro
muestra
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En el tubo blanco poner 1.0 ml R.B (colesterol)

En el tubo de muestra poner 20 ul de sobrenadante y 1.0 ml de R.B
(colesterol)
Mezclar e incubar 5 min a 37C o 10 min a temperatura ambiente
Leer a 505 nm o 546 nm frente al blanco de reactivos
Reportar el resultado final
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5.- Valores
HDL - Colesterol
Hombres
Riesgo menor
>55 mg/dl
Riesgo normal
35 55 mg/dl
<35 mg/dl
Mujeres
>65 mg/dl
45 65 mg/dl
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Riesgo elevado
6.- Bibliografa
Manual de tcnicas de Spinreact, Mxico 2003.
<45 mg/dl
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Colesterol
1.- Objetivo
Determinar el colesterol en la sangre de un paciente.
2.- Fundamento
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El colesterol es una sustancia hidrfoba, insoluble en medio acuoso y por
tanto insoluble en el plasma sanguneo. La circulacin sistemtica del colesterol
es posible gracias a la formacin de complejos solubles por su unin a
protenas, las lipoprotenas sercas, y entre ellos la de tipo b low desinty
lipoproteins (LDL) son las que representan el mayor porcentaje, con
aproximadamente un 60 70% del total. El hgado es el rgano principal donde
se produce la incorporacin del colesterol y otros lpidos a las lipoprotenas. As
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mismo, en el hgado, se esterifca, con cidos grasos, la mayor parte del
colesterol (60-75% del total).
El colesterol esterasa hidroliza los steres de colesterol presentes en la
muestra dando colesterol libre y cidos grasos, una posterior oxidacin
enzimtica mediante el colesterol oxidasa se forma H 2O2 y colesterona. El H2O2
se valora por la reaccin de Trinder, mediante un cromgeno, fenol y 4Aminoantipirina, en presencia de Peroxidasa, formando una quinonimina cuya
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coloracin, encarnada, es proporcional a la concentracin de colesterol
presente de la muestra.
steres colesterol + H2O
CHE
Colesterol + O2
4-colesterona + H2O2
CHOD
H2O2 + AF + Fenol
POD
colesterol + cidos grasos
Quinonimina + H2O
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Sangre del paciente

Tubos vacutainer rojo
Aguja vacutainer
Reactivo para el colesterol
4.- Procedimiento
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Centrifugar la sangre de 3 a 5 min

Separar el suero y se toma de 100 a 200 ul
Se captura al paciente en el equipo Metro lab 2300 plus
Se coloca la muestra para que el equipo haga si diagnstico
Se registra el estudio
Se esperan resultados y se imprime
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150 260 mg/dl
6.- Bibliografa
Manual de tcnicas de Spinreact, Mxico 2003.
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Coombs Directo
1.- Objetivo
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Llevar a cabo la prueba de Coombs directo en la sangre del recin
nacido.
2.- Fundamento
Al investigar los grupos sanguneos del sistema Rh, Race demostr la
existencia de dos tipos de anticuerpos a los primeros los denomin normales o
completos, ya que aglutinaban directamente los eritrocitos suspendidos en
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solucin salina, y a los segundos, incompletos debido a que no aglutinaban los
eritrocitos en forma directa. Sin embargo, si se incubaban las clulas con los
anticuerpos incompletos, estas no podan aglutinarse despus por los
anticuerpos completos, por lo que a los anticuerpos incompletos se les
denomin tambin anticuerpos bloqueadores. La prueba de Coombs directa
sirve para detectar anticuerpos sobre el eritrocito, y la indirecta para identificar
los anticuerpos libres en el suero.
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Sangre del beb al que se le har la prueba de Coombs Directo

Tubos de ensayo
Pipetas automticas
Puntas para pipeta
Gradilla
Bao mara a 37C
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Suero de Coombs
Cronmetro
Termmetro
Solucin salina al 0.9%
Centrfuga
4.- Procedimiento
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Primero se va a lavar los eritrocitos de la sangre del beb cuatro veces
con solucin salina.

Preparar una suspensin de glbulos rojos al 5%
Colocar en una gradilla12 tubos de ensayo
Al primer tubo que ser el control de la prueba aadir 100 ul de suero de
Coombs
Del tubo 2 al 12 se le vana a poner a cada tubo 100 ul de solucin salina
0.9%
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Al tubo 2 se le agrega 100 ul de suero de Coombs

Se toma 100 ul de la dilucin del tubo 2 y se pasan al tubo 3, y as
sucesivamente hasta llegar al tubo 12 que se le tiran 100 ul.

Se aade a cada tubo desde el 1 al 12 100 ul de la suspensin de
glbulos rojos
Se centrifugan los tubos y se ven si hay o no aglutinacin
En caso negativo se les agrega 1 gota de albmina bovina y se meten en
los tubos a bao mara por 15 min a 37C
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Se sacan y se centrifugan los tubos observando si hay o no aglutinacin

En caso positivo anotar hasta que tubo hay aglutinacin
En caso negativo se reporta como Coombs directo negativo
5.- Valore de referencia

Ausencia de anticuerpos incompletos, Coombs directo negativo (-)
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6.- Bibliografa
Jaime Prez Jos Carlos, David Gmez Almaguer. HEMATOLOGA La sangre y
sus enfermedades Edit. Mc. Graw Hill Mxico D.F. 2005 1era edic. cap. 1 pg. 7
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Coombs Indirecto
1.- Objetivo
Llevar a cabo la prueba de Coombs indirecto en el suero de la madre que
es Rh (-).
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2.- Fundamento
Se sensibilizan los glbulos rojos in vitro, por ejemplo, en el tubo de
ensayo, exponindolos en un suero que contengan anticuerpos incompletos si
se trabaja con un suero cuyo contenido de anticuerpos se conoce, puede
establecerse el contenido de antgeno (fenotipo) en los glbulos. Inversamente
si se realiza la prueba con glbulos de fenotipo conocido, puede saberse si un
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suero problema contiene los anticuerpos correspondientes. Son ejemplos de
esta segunda aplicacin, la prueba cruzada (q.v) y tambin las pruebas
prenatales.
Suero de la madre
11 tubos de ensayo 13 x 100
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Solucin salina 0.90%

Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Gradilla
Suspensin de glbulos rojos O (+)
Centrifuga
Suero de Coombs
Albmina bovina al 22%
Bao mara 37C
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Termmetro
Cronmetro
4.- Tcnica
Colocar 11 tubos en la gradilla

Numerar del 1 al 11
Al primer tubo que es el control aadir 100 ul de suero de la madre
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Del tubo 2 al 11 colocar 100 ul de solucin salina a cada tubo

Agregar 100 ul del suero de la madre al tubo 2
Mezclar, tomar 100 ul de la mezcla y pasarlos al tubo 3, y as
sucesivamente hasta llegar al tubo 11 que se le van a quitar 100 ul de la
dilucin y se tiran
Preparar una suspensin de glbulos rojos o (+) al 5%
Aadir 100 ul de dicha suspensin de glbulos rojos a todos los tubos del
1 al 11
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Centrifugar y observar si hay o no aglutinacin

Si la hay hasta que dilucin. En caso negativo, aadir una gota de
albmina bovina al 22% a cada uno de los tubos

Meter a bao mara todos los tubos a 37C por 15 min
En caso positivo reportar hasta cual tubo hubo aglutinacin
En caso negativo lavar los tubos cuatro veces con solucin salina
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Aadir una gota de suero de Coombs a cada uno y volver a centrifugar
observando si hay o no aglutinacin.

Reportar resultados si hubo hasta qu tubo y si no, se reporta como
Coombs indirecto negativo (-)
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No hay anticuerpos incompletos en suero de la madre o Coombs Indirecto
Negativo (-)
6.- Bibliografa
Lynch M.J / S.S. Raphael/L.D. Spare/M.J.H. Inwood MTODOS DE
LABORATORIO. Edit. Interamericana Vol. 2 cap. 23 pg. 850
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Coproparasitoscopico
1.- Objetivo
El examen Coproparasitoscopico sirve para investigar la presencia de
parsitos ya sea gusanos (helmintos) o protozoarios en heces.
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2.- Fundamento
Parsitos ms comunes:
Protozoarios.o Clase Rhizopoda (amibas) Especies:

Entamobea hitolytica
Entamobea coli
Endolimax nana
Iodamoeba btchlii
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163
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Dientamoeba fragilis
Hartmannella castellani
o Clase Mastigophora (flagelados) Especies:
Giardia lamblia
Chilomastix mesnili
Embadomonas intestinalis
Enteromonas hominis
Trichomonas hominis
Trichomonas vaginalis
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164
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Leishmania
Tripanosoma
o Clase Haemosporidia Especies:
Pasmodium
o Clase Ciliata Especies:
Balatidium coli
o Clase incierta Especies:
Toxoplasma gondii
Nemocistis carinii
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165
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Platelmintos (gusanos planos)

o Clase Trematoda Especies:
Schistosoma (duela o dstoma de la sangre)
Fasciola (duela o dstoma del hgado)
Clonorchis sinensis
o Clase Cestoda (tenias) Especies:
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166
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Taenia solium
Taenia saginata
Enchinococcus granulosus
Enchinococcus multilocularis
Hymenolepis nana
Diphyllobothrium latum
Nematelmintos (gusanos redondos)
o Clase Aphasmidia Especies:
Trichinella spiralis
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167
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Trichuris trichura
o Clase Plasmidia Especies:
Ancylostoma duodenale
Nector americanus
Irichostrongylus sp
Enterobius vermicularis
scaris lumbricoides
Toxocara canis y cati
Angiostrongylus cantonensis
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168
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Strongyloides stercoralis
Tambin pertenecen a esta clase Wucheria, Loa loa y Onchocerca.
Arthropodos
o Clase Arachnidia (insectos) Especies:
Latrodectus mactans (araa)
Loxoceles (araas)
Ixodes (garrapatas)
Demodex follicolorum (caros)
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Sarcoptes scabiei (caros)

Pediculus humanus (piojo)
Pulex irritans (pulgas)
Cimex lectularius (chinches)
Explicacin de la prueba. Muchas infecciones parasitarias son silenciosas o

producen slo sntomas leves. La mitad de todas las infecciones parasitarias
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humanas puede diagnosticarse a travs de examen de las heces ya que
habitan en las vas gastrointestinales. Muy pocos protozoarios que afectan al
ser humano causan problemas clnicos, pero casi todas las infecciones por
gusanos producen estados patolgicos. Los organismos que con mayor
frecuencia causa estados diarreicos relacionados con parsitos en EUA son
Giardia Lamblia y Entamobea histolytica. Giardia lamblia es quiz la que se
presente ms a menudo de las dos. La amibiasis causada por Entamobea
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histolytica, es una enfermedad ms grave. Ambos microorganismos son
resistentes a la acidez gstrica y sus quites o trofozoitos pueden encontrarse en
varias reas de las vas gastrointestinales (por ejemplo, los quistes de Giardia
se encuentran en muestras de heces). El principal sntoma de ambos
padecimientos es diarrea o evacuaciones voluminosas ftidas.
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Muestra de heces en un frasco limpio

Centrifuga
Tubos de ensayo
Gradilla
Agua destilada
Embudo
Gasas
Solucin de formaldehido al 10%
ter etlico
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Pipeta graduada
Yodo lugol
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4.- Procedimiento
Disolver la muestra o una parte de ella con agua destilada

Filtrar con el embudo poniendo gasas en la parte superior
El filtrado se centrifuga 1 min a 1000 r.p.m.
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LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
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Se tira el sobrenadante y se repite el caso anterior tres veces ms con
agua destilada
Despus del cuarto lavado se tira el sobrenadante y se aaden 5.0 ml de
formaldehido al 10% y 1.0 ml de ter etlico

Se tapa el tubo y se mezcla con cuidado por inversin
Se centrifuga 1 min a 1000 r.p.m.
Se tira el sobrenadante y se aade una gota de yodo lugol
Se mezcla bien y se observa el microscopio con lente 40x (seco fuerte)
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Reportar resultados
5.- Resultados
Valorar la presencia de quistes o trofozoitos en heces observando varios

campos y reportar como escasos, algunos o abundantes segn sea el
caso y a que especie pertenecen.
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Lo mismo aplica cuando se trata de huevecillos de gusanos.
6.- Bibliografa
Morrison Treseler Kathleen LABORATORIO CLNICO Y PRUEBAS DE
DIAGNSTICO. Edit. Manual moderno Mxico 1999 Cap. 9 pg. 330-334.
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Creatinina
1.- Objetivo
Determinar la Creatinina en el suero de un paciente.
2.- Fundamento
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La reaccin qumica aplicable para fotometra es la descrita por Jaff
basada en el color anaranjado que se produce al reaccionar la Creatinina con el
picrato alcalino. Hay varias sustancias en el suero y la orina que actan como
cromgenos inespecficos, por lo que es un problema para el clculo del
aclaramiento. Por este motivo tiene una gran importancia la adecuacin de
todas las variables de la reaccin, muy especialmente el pH, con el fin de
obtener la mxima sensibilidad para la Creatinina y la mnima interferencia de
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cromgeno. Adaptando la reaccin a una medida cintica, se logra una gran
especificidad debido a que la Creatinina reacciona con el picrato alcalino con
ms rapidez que los cromgenos (metil guanidina, picramato) por lo que la
medida del incremento de color en un breve periodo de tiempo inicial de la
reaccin valorar principalmente Creatinina, con poca influencia de los
cromgenos inespecficos, por esto es recomendable hacer posible la
determinacin cintica.
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Sangre tomada en un tubo de color rojo

Tubos de ensayo
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Reactivo para Creatinina Serapack Bayer
Analizador RA 50
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Bao mara
Termmetro
Cronmetro
Estndar de Creatinina
Sueros control
4.- Procedimiento
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Preparar el reactivo mezclando un volumen los reactivos 1 y 2

Centrifugar la muestra una vez coagulada la sangre
Poner 1 ml de reactivo en un tubo limpio y seco
Poner el RA 50 en la prueba Creat
Aadir 100 ul de estndar al tubo con el reactivo del trabajo
Verterlo en una cubeta
Poner la cubeta en el RA 50
Oprimir la tecla calbrate
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Hacer lo mismo con los sueros problema y controles. Slo se orpime
Analyze entre prueba y prueba

Dejar que el aparato registre y d los resultados.
Reportar en el formato correspondiente.

De 0.60-1.3 mg/dl
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6.- Bibliografa
Manual de tcnicas de reactivos Spinreact Mxico D.F.
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Depuracin de Creatinina en orina de 24 horas
1.- Objetivo
La depuracin de Creatinina es un mtodo til para seguir los procesos
una enfermedad renal evolutiva.
2.- Fundamento
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El grupo de pruebas que en general se designan como pruebas de
depuracin renal son un medio extremadamente til, eficaz y sensible de medir
la capacidad de eliminacin del rin pues miden la cantidad de una sustancia
eliminada en la orina en comparacin con la concentracin de la misma
sustancia
en
el
plasma.
Por
ello
las
pruebas
de
depuracin
son
considerablemente ms sensibles y ms tiles, desde el punto de vista clnico,

que las pruebas que miden la retencin de compuestos nitrogenados no
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protenicos en suero o en plasma, los cuales pueden no estar en cantidades
anormales hasta que no se han producido disminucin importante en la funcin
renal (por debajo del 50% del valor normal).
La cantidad de sustancia bajo investigacin depurada por el rin se
expresa en general como el volumen de plasmas que contienen la cantidad de
sustancia eliminada en la orina, o sea, depuracin es el volumen de plasma en
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ml que puede ser limpiado (depurado) de una sustancia dada, por los riones,
en un minuto. Esto puede expresarse matemticamente como sigue:
Ml de plasma depurado por minuto = O/P x V en donde O=Concentracin de la
sustancia en orina, P=Concentracin de la sustancia en plasma y V=Volumen
de orina por minuto expresado en ml.
Volumen total en ml/tiempo en minutos.
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La concentracin de la sustancia de orina y en plasma puede expresarse
en cualquier unidad que sea cmoda, pero por costumbre se usa mg/dl.
O y P han de expresarse en las mismas unidades. Con igualdad de todos
los dems factores, la velocidad de depuracin es aproximadamente
proporcional al tamao del rin y al rea de la superficie corporal del individuo.
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Por ello, el clculo de la depuracin de una sustancia dada. Han de entraar
correccin por las desviaciones de la superficie medida del adulto.
Esto se consigue agregando el factor 1.73/S, en dnde 1.73 es la
superficie media del cuerpo aceptada en general en metros cuadrados, y S es
la superficie del cuerpo del paciente en estudio.
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La frmula para calcular la depuracin renal se puede ampliar por ello
como sigue:
Ml depurados por minuto=O/P x V x 1.73/S. EL rea de la superficie corporal
puede determinarse a partir de uno de los nomogramas disponibles o mediante
la siguiente formula: S=167.2 x (peso en kg)1/2 (altura en cm)1/2
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Muestra tomada en tubo rojo

Orina de 24 hrs en un recipiente grande y limpio siguiendo el protocolo:
o Un da antes de hacer la prueba tirar la orina a las 8:00 am y
empezar a recolectar toda la orina hasta las 8:00 am del siguiente
da y presentarse en el laboratorio en ayuno.

Centrfuga
Bscula con medidor de estatura
Reactivo para Creatinina serapack de bayer
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Analizador RA 50
Agua destilada
Tubos de ensayo
Cubetas para RA 50
4.- Procedimiento
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Pesar y medir al paciente en ayunas para determinar la superficie
corporal
Centrifugar la nuestra de sangre
Medir y anotar el volumen de orina de 24 horas
Preparar una dilucin con la orina 1.25 con agua destilada
Procesar la Creatinina en suero
Procesar la Creatinina con la orina diluida
Anotar resultados y hacer clculos
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5.- Resultados y valores de referencia
O/P x V x 1.73/S
Volumen: Se divide el volumen de orina de 24 horas/1440 minutos para
saber cuanta orina se excreta por minuto.

Valores de referencia: Hombre de 85-125 ml/min
Mujer de 75-115 ml/min
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6.- Bibliografa
Lynch M.J S.S. Raphael, L.D. Mellor, P.D. Spare, M.J.H. Inwood MTODOS DE
LABORATORIO. 2da Edicin Edit. Interamericana Vol. 1 cap. 6 pg. 122-124
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Espermatobioscopia Directa
1.- Objetivo
Proporcionar un panorama general de los principales procedimientos
utilizados en el Laboratorio.
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2.- Fundamento
El anlisis de semen es la piedra angular en la valoracin androlgica de
los pacientes que presentan problemas de infertilidad, valora la integridad del
eje hipotlamo-hipfisis-testculos que ayuda al diagnstico, tratamiento y
manejo se los pacientes que presentan disfunciones prostticas, disfunciones
eyaculatorias,
varicocele,
cncer
vasectomizados y recanalizados.
testicular,
as
como
de
pacientes
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El anlisis de semen manual es un procedimiento fcil, rpido y nada
costoso
pero por si solo no se asegura que los espermatozoides sean
potencialmente frtiles.
Muestra de semen recolectada en un frasco limpio
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Citrato de sodio al 3.8%

Pipeta Pasteur o graduada
Tiras para pH
Portaobjetos
Cubreobjetos
Microscopio
Eosina Y al 0.5%
Cmara de Neubawer
Pipeta para glbulos blancos
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Boquilla para pipeta de blancos
4.- Instrucciones de recoleccin de la muestra de semen
La muestra se recolectar en un frasco de vidrio o de plstico limpio y de

boca ancha, de preferencia proporcionado por el laboratorio.
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El paciente debe abstenerse de tener relaciones sexuales por dos a siete
das antes de realizar el estudio.

La muestra se obtendr por masturbacin, el coitus interruptus est
prohibido as como el uso de condones, lubricantes, cremas o geles.

En caso de que el paciente tenga problemas para recolectar la muestra
por masturbacin podr ayudarle su pareja solamente participando en la
estimulacin sin que haya contacto directo.
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La muestra se recolectar en el laboratorio, de no ser posible se

recolectar en su domicilio, siempre y cuando no transcurra ms de una
hora del momento en que la tome a que se entregue al laboratorio,
indicndole que la debe llevar dentro de su saco para protegerla de
cambios bruscos de temperatura.
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Es conveniente que si en la valoracin inicial la muestra presenta una

alteracin se solicite una nueva muestra, despus de 7 das de haber
proporcionado la primaria muestra o antes de los 30 das.

Si el paciente refiere perdida de la muestra durante la recoleccin es
conveniente no analizarla y solicitar nueva muestra.
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4.1 Protocolo de la prueba
Valoracin macroscpica del semen

o Licuefaccin: Se valora rotando el frasco en donde se recolecto la
muestra. El lquido seminal debe fluir homogneamente y
libremente sin rastro alguno de coagulo dentro de los 60 min
posteriores a su obtencin, lo cual indicar que la muestra es
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normal. Las muestras normales o anormales pueden presentar
grnulos gelatinosos de los cuales se desconoce hasta la fecha su
importancia clnica y su repercusin sobre el estudio.
Lmite de referencia: La muestra debe licuar dentro de los 30 60
minutos a temperatura ambiente luego de ser recolectada.
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Calificacin:
1=
Normal
(Si
la
muestra
cumple
con
las
especificaciones anteriores)
2= Anormal
o Volumen: Se determina virtiendo el semen en un tubo cnico
graduado
bien
con
una
pipeta
graduada
de
vidrio.
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Lmite de referencia: Normal: mayor a 2.0 ml. Anormal: menor a
2.0 ml.
La disminucin del volumen del lquido seminal por debajo del
lmite de referencia se denomina hipospermia.
o Aspecto: Se valora por observacin visual
Lmite de referencia: Las muestras normales presentan un
apariencia homognea GRIS OPALESCENTE.
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Calificacin:
1=
Normal
Si
la
muestra
cumple
con
las
especificaciones anteriores.
2= Anormal.
o Consistencia o viscosidad. Se valora con la ayuda de una pipeta
Pasteur o graduada.
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Lmite de referencia: La muestra es normal si gotea libremente y si
forma un filamento de ms de 2 cm, entonces la muestra presenta
la viscosidad alterada y es anormal.
Calificacin: 1= Normal (si la muestra gotea libremente)
2= Anormal (si la muestra forma un filamento de 2 cm o ms)
o pH: Se valora con tiras de pH en un rango de 5 a 14.
Lmite de referencia: pH de 7.2 8.0
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Valoracin microscpica del semen

o Motilidad. Se valora colocando en el extremo de un portaobjetos
10 ul de la muestra de semen previamente homogenizada, se
coloca un cubreobjetos y se observa a l microscopio en 40 X.
El campo del microscopio se divide en 4 cuadrantes y se elige uno
en el cual se va a clasificar el tipo de movimiento que presente
cada
uno
de
los
espermatozoides
hasta
llegar
100
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espermatozoides, clasificndolos tal y como se vayan observando
en:
A.
B.
C.
D.
Si su movilidad en progresiva rpida.

Si su movilidad en progresiva lenta.
Si se mueven in sintu
Si se encuentran inmviles.
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Es necesario realizar la observacin de 4 a 6 campos en el centro
de la preparacin para verificar que la distribucin fue homognea
y evitar una fuente de error.
Es conveniente repetir el recuento de la motilidad contando otros
100 espermatozoides y si los resultados no difieren en ms de un
10% se pueden promediar; de ser mayor el porcentaje es
preferible montar otra preparacin.
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Lmite de referencia: 50% o ms con progresin antergrada
(A+B) o 25 % o ms progresin lineal rpida (A). A los 60 min
despus de haber sido recolectada la muestra.
Si el paciente presenta disminucin de la motilidad se denomina
Astenozoospermia la cual debe clasificarse en:
Astenozoospermia leve: Se observa del 40 al 50 % de motilidad
progresiva.
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Moderada: Se observa del 20 al 40 % de
motilidad progresiva.
Severa: Se observa menos del 20 % de
motilidad progresiva.
o Valoracin de otros elementos celulares: Leucocitos, bacterias,
eritrocitos, clulas germinales, clulas epiteliales y detritus
celulares.
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En la misma preparacin donde se observa la motilidad se pueden
valorar
todos
los
elementos
celulares
anteriormente
mencionados de los cuales los eritrocitos y los leucocitos se

reportan por campo y los dems elementos por cruces al igual que
en un general de orina.
Aglutinacin. En esta misma preparacin se puede valorar
tambin la presencia de aglutinacin la cual puede ser
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inespecfica (los espermatozoides se aglutinan con cualquier otra
cosa que no sea espermatozoide: leucocitos, clulas germinales,
etc).
especifica (aglutinacin de un espermatozoide con otro
espermatozoide puede ser cabeza con cabeza, flagelo con flagelo,
pieza media con flagelo, cabeza o combinaciones de estos).
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Lmites de referencia: Leucocitos: menos de 1,000,000 x ml (0-1
leucocito por campo)
Eritrocitos: no deben encontrarse
Bacterias: no deben encontrarse
Clulas germinales: mximo 2+.
Clulas epiteliales: mximo 1+.
Detritus celulares: mximo 1+.
Aglutinacin especfica: negativa (-).
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o Viabilidad: se emplea una tensin supravital con eosina Y en
preparados frescos o con eosina-nigrosina en preparados secos.
Su principio se basa en que las clulas muertas cuyas membranas
de la cabeza estn daadas permiten el paso del colorante
tindolas.
La viabilidad se valora colocando en el otro extremo del
portaobjetos 10 mcl de la muestra de semen ms 10 mcl de
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eosina al 0.5% en solucin salina, se mezclan y se coloca un
cubreobjetos para observar al microscopio en 40X.
Al igual que la motilidad se deben observar de 4 a 6 cuadrantes
contando 100 espermatozoides diferenciando los que estn
teidos (muertos) de los que no estn teidos (vivos)
Calificacin: Se reporta el % de espermatozoides vivos (no
teidos)
Lmite de referencia: mayor o igual a 75%
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Es importante verificar que el porcentaje de la viabilidad reportado
debe ser mayor o igual al de la suma de la motilidad en A ms
B ms C.
o Concentracin: se determina con la cmara de Neubawer. Se
llena la cmara con una dilucin 1.20 de semen con citrato de
sodio al 3.8% utilizando una pipeta para glbulos blancos. Se
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cuentan 2 cuadrantes de la cmara de los que se utilizan para
determinar glbulos blancos y el resultado se divide entre 10.
Lmite de referencia: 20 millones de espermatozoides por ml o
ms.
Si el paciente presenta disminucin de la concentracin se
denomina Oligozoospermia y se clasifica en:
Oligozoospermia leve: 11-19 millones de espermatozoides/ml
Moderada: 5-10 millones de espermatozoides/ml
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Severa:
menos
de
millones
de
espermatozoides /ml.
o Morfologa: se valora realizando un frotis como en hematologa y
se tie por Papanicolaou, tincin que permite diferenciar cada una
de las partes del espermatozoide, se observa al microscopio a
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100X y se valoran 100 espermatozoides, examinando la forma de
la cabeza, acrosoma, parte media y flagelo.
Con la tincin del Papanicolaou el acrosoma se tie azul claro y
de azul oscuro la regin posacrosomal, la pieza media se tie rojo
plido, el flagelo de azul y la gota citoplsmica de verde. Los
leucocitos por presentar puentes de cromatina bien definidos que
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permiten diferenciarlos de las clulas germinales las cuales
presentan los ncleos separados y redondos.
Los espermatozoides normales de acuerdo a los criterios estrictos
de Kruger deben poseer una cabeza oval sin bordes irregulares, el
acrosoma debe estar bien definido y debe cubrir del 40-70% de la
cabeza, no debe haber defectos en el cuello, pieza media ni cola,
y la gota citoplsmica no debe ser mayor de 1/3 de la cabeza del
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espermatozoide.
Todas
las
formas
dudosas
deben
se
consideradas como anormales. Si los espermatozoides presentan

ms de una alteracin, se le da prioridad a la alteracin de la
cabeza, pero si prevalece otra alteracin, tambin es importante
reportarla aunque la cabeza sea normal o anormal.
Existen otras tinciones como la Giemsa que permiten diferenciar
bien los leucocitos, pero no distinguen muy bien las partes del
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espermatozoide; otra tincin es la de Shorr que es muy simple de
usar y es suficiente para evaluar la forma rutinaria la morfologa;
otra tincin es la de Bryan-leishman que permite identificar bien a
los espermatozoides y es til para diferenciar clulas germinales
inmaduras de leucocitos.
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Lmites de referencia: criterios estrictos de Kruger: 14% ms de
formas normales. Si el paciente presenta disminucin de las
formas normales se denomina Teratozoospermia.
5.- Bibliografa
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237
I.
Manual de Laboratorio de la OMS para el examen del semen humano y

de la interaccin entre el semen y el moco cervical 3 edic. buenos aires
II.
edit. Panamericana 1992.

S. Guid Oei y col. Combination of direct swim-up techniques and
discontinues percol gradient centrifugation for sperm preparation of
Oligoasthenozoospermic samples. Arch Androloga 1996. 103-108
LABORATORIO NOVO
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238
III.
SU Chem y cols When is the pois coital test normal? A critical appraisal.
Human Reproduction. 1995, 10:(7): 1711-1714.
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Examen General de Orina
1.- Objetivo
Realizar un examen general de orina para determinar el metabolismo de
carbohidratos, funcin heptica y renal, balance cido base e infecciones del
tracto urinario.
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2.- Fundamento
Las tiras reactivas que actualmente se utilizan son Multistix 10 SG de
Ames- Bayer. La tiras reactivas de Ames- Bayer para urianlisis son bases
plsticas en las que hay adheridas diversas reas reactivas para determinar la
glucosa, bilirrubina, cetonas (cido acetoactico), gravedad especfica, sangre,
pH, protenas, urobilingeno, nitrito y leucocitos en la orina. Las pruebas que se
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pueden realizar, dependen del tipo de tira que se este empleando. Los
resultados obtenidos con las tiras reactivas de Ames-Bayer proporcionan
informacin referente al metabolismo de carbohidratos, funcin heptica y renal,
balance cido base e infecciones del tracto urinario.
-Glucosa tiempo de lectura 30 seg.
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Esta prueba se basa en una doble reaccin esencial de enzimas. Una
enzima la glucosa oxidada, cataliza la formacin de cido glucnico y perxido
de hidrgeno a partir de la oxidacin de la glucosa. Una segunda enzima la
peroxidasa, cataliza la reaccin del perxido de hidrgeno con un cromgeno
de yoduro de potasio, el cual es oxidado produciendo colores que van del verde
al caf. La prueba es especfica para la glucosa. No se conoce otra sustancia
que secretada en la orina d un resultado positivo. El rea reactiva no reacciona
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con lactosa, galactosa, fructuosa, o metabolitos reductores de medicamentos
(por ejemplo salicilatos y cido nalidxico). Esta prueba puede ser utilizada para
determinar si la sustancia reductora encontrada en orina es glucosa.
-Bilirrubina tiempo de lectura 30 seg.
Esta prueba se basa en el acoplamiento de la bilirrubina con la
dicloroanilina diazotizado en un medio fuertemente cido. El color es crema
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para resultados negativos y vara dentro de distintos tonos claros de color caf
para resultados positivos. Normalmente no se detecta bilirrubina en la orina,
an por los mtodos ms sensibles. Cualquier cantidad de bilirrubina se
considera anormal y se requiere de una evaluacin ms a fondo. Los colores
atpicos (diferentes a los cuadros de color negativo y positivo de la carta de
colores) pueden indicar que hay pigmentos biliares anormales derivados de la
bilirrubina que pueden enmascarar la reaccin, por lo que es conveniente
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realizar pruebas adicionales por ejemplo con las tabletas reactivas Ictotest que
son ms sensibles. El sulfato de indoxilo (indican) puede producir un color
amarillo-naranja a rojo que puede interferir en la interpretacin de la lectura
negativa.
-Cetona tiempo de lectura 40 seg.
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Esta prueba se basa en la reaccin del cido acetoactico con el
nitroprusiato de sodio. Las tiras Ames-Bayer no reaccionan con acetona o cido
beta-hidroxibutrico. Algunas orinas con gravedad especfica alta o pH bajo
pueden dar resultados positivos incluyendo trazas. Las lecturas negativas
producen un color caf claro y las positivas colores que van desde rosa hasta
purpura. Las muestras de orina normal, generalmente dan resultados negativos
para cetonas. Niveles detectables de cuerpos cetnicos pueden aparecer en
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caso de dieta, estados de tensin (estrs), embarazo o ejercicio intenso
frecuente. En acetoacidosis o ayuno prolongado, junto con otras alteraciones
del metabolismo lipdico o de carbohidratos pueden encontrarse altas
concentraciones de cetona en orina antes de que se manifiesten en suero.
-Gravedad especifica tiempo de lectura 45 seg.
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Esta prueba se basa en el cambio aparente de pka de ciertos
polielectrolitos pre tratados en relacin con la concentracin inica. En
presencia de un indicador los colores varan desde un verde-azul obscuro en
orinas con concentracin baja pasando por tonalidades verdes, hasta un verdeamarillo en orina con alta concentracin inica. Esta prueba permite la
determinacin de la gravedad especfica de la orina entre 1,000 y 1,030. En
general existe una correlacin que no rebasa las 0.005 unidades de los valores
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obtenidos con el mtodo del ndice de refraccin. En orinas con un pH igual o
mayor a 6.5 se puede mejorar la exactitud aadiendo 0.005 al valor obtenido. Si
la lectura es instrumental el ajuste es automtico. Sustancias no inicas
presentes en la orina tales como la glucosa o el medio del contraste radiolgico
no afectan esta prueba. La gravedad especifica de orinas recolectadas al azar
puede variar de 1,001 a 1,035 en orinas recolectadas por 24 horas de adultos
sanos y con una ingesta normal de agua se encuentran valores de 1,016 a
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1,022. Debido a los diferentes constituyentes agregados a los controles
comerciales diferentes a Check stix o a la manera en que estos son
procesados, los valores obtenidos de gravedad especfica pueden no siempre
corresponder con los valores dados con los insertos de tales productos.
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-Sangre tiempo de lectura 60 seg.
Esta prueba se basa en la similitud entre la actividad de la peroxidasa y
la actividad de le hemoglobina, las cuales catalizan la reaccin del dihidroperxido de di-isopropilbenceno y la 3.3,5.5-tetrametilbencidina. El color
resultante vara del amarillo naranja hasta verde oscuro o azul, en orinas con
altos niveles de sangre. El color verde homogneo indica la presencia de
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hemoglobina o mioglobina libre ya que la prueba es igualmente sensible a estas
2 sustancias. El desarrollo de puntos verdes indica la presencia de eritrocitos
intactos, la escala visual permite detectar trazas o cantidades moderadas de
eritrocitos no hemolizados. Las reacciones que van de trazas hasta alto pueden
observarse con moteado proporcionalmente numeroso. Una concentracin de
hemoglobina de 0.015-0.062 mg/dl equivale aprox. A 15-20 eritrocitos intactos
por microlitro. Debido al sistema ptico de los instrumentos, los valores
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eritrocitos intactos pueden ser menores que el valor apreciado visualmente. El
significado de encontrar trazas puede variar de paciente a paciente y se
necesita del juicio clnico para evaluar cada caso en particular. El desarrollo de
puntos verdes (no lisados) o color verde homogneo (hemoglobina/mioglobina)
en el rea reactiva dentro de los primeros 60 seg. Indica la necesidad de
realizar una valuacin ms a fondo. A menudo se encuentra sangre, aunque no
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siempre, en orinas de mujeres que estn menstruando. Esta prueba es de gran
sensibilidad a la hemoglobina y se completa con el examen microscpico.
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-pH tiempo de lectura 60 seg.
Esta prueba se basa en un principio de doble indicador que produce una
amplia gama de colores, cubriendo los lmites del pH urinario por completo. Los
colores desarrollados van del naranja al amarillo y del verde al azul. El rea de
prueba del pH mide valores de 5.0-8.5 en forma visual y de 5.0-9.0 en forma
instrumental. Las lecturas del pH no se alteran por las variaciones de
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amortiguadores urinarios. De no seguir el procedimiento correcto para eliminar
exceso de orina en la tira, se puede producir un fenmeno conocido como
corrimiento, en el cual el amortiguador cido del rea reactiva para protena
contamina el rea de pH dando un resultado falsamente disminuido. Los valores
normales y anormales de pH urinario van de 5.0-9.0 cada 100 mg de reactivo
de impregnacin contiene: 0.2 mg de rojo de metilo, 2.8 mg de azul de
bromotimol, 97.0 mg de ingredientes no reactivos.
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-Protenas tiempo de lectura 60 seg.
Esta prueba se basa en el principio de error proteico de los indicadores
de los indicadores. A un pH constante el desarrollo de cualquier color verde es
debido a la presencia de protenas. El rango de colores va de amarillo para
negativo pasando por verde-amarillo y verde a verde-azul para resultados
positivos. Normalmente se excreta una cantidad mnima de protena por el
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rin, pero no se detecta por mtodos convencionales. Un color comprobable a
cualquier bloque de color mayor al de trazas, indica proteinuria significativa.
Para orinas con alta gravedad especfica, la tira podr indicar trazas aun
cuando sea normal la concentracin de protenas presentes. Se necesita el
juicio clnico para evaluar el significado de los resultados de trazas. Se pueden
obtener resultados falsos positivos con muestras de orina alcalina o altamente
amortiguada as como con residuos de compuestos cuaternarios de amonio
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(por ejemplo algunos antispticos y detergentes) o con limpiadores de la piel
que contengan clorhexidina. El rea reactiva es ms sensible a la albmina que
a las globulinas, hemoglobina, protena de Bence Jones y mucoprotena. Por lo
tanto un resultado negativo no descarta la presencia de estas otras protenas.
-Urobilingeno tiempo de lectura 60 seg.
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Esta prueba se basa en una modificacin de la reaccin de Ehrlich, en la
cual el pdietilaminobenzaldehido en combinacin con un intensificador de color
reacciona urobilingeno en medio fuertemente cido. Los colores producidos
varan de una tonalidad rosa plido hasta rosa intenso. Esta rea reactiva
detecta urobilingeno en concentracin estn bajas como 0.2 mg/dl que
aproximadamente equivalen a 2.0 unidades Ehrlich. La ausencia de
urobilingeno no puede ser determinada con esta prueba.
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Los lmites normales obtenidos con esta prueba varan de 0.2 a 1.0 mg/dl
(1.0 mg/dl es aproximadamente 1.0 UIE). Un resultado de 2.0 mg/dl representa
la transicin entre un estado normal y un patolgico, debiendo someter al
paciente y/o la muestra a exmenes posteriores.
Esta rea reactiva puede reaccionar con sustancias que se sabe
interfieren con el reactivo de Ehrlich, tales como el cido p-aminosalicilico y las
sulfonamidas. En presencia del cido p-aminobenzoico es posible tener
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reacciones de color atpico. Es posible obtener resultados falsos negativos
cuando hay presencia de formalina. La temperatura ptima para realizar la
prueba es de 22-26 C porque la reactividad de esta rea aumenta con la
temperatura.
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-Nitritos tiempo de lectura 60 seg.
Esta prueba depende de la conversin de nitratos (obtenidos de la dieta)
a nitritos, por la accin de bacterias gram(-) en la orina. A pH cido del rea
reactiva, los nitritos de la orina reaccionan con cido p-arsanlico para formar un
compuesto de diazonio. Este compuesto a su vez reacciona con el 1,2,3,4tetrahidrobenceno (h) quinolin-3-ol para producir un color rosa. La prueba es
especfica para nitritos por lo que no reacciona con ninguna otra sustancia
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normalmente excretada en la orina. Los puntos o bordes de color rosa no deben
interpretarse como resultados positivos, nicamente cualquier grado de color
rosa uniforme que se desarrolle deber interpretarse como un resultado positivo
que sugiere la presencia de 10 a la quinta, o ms microorganismos sobre ml. La
intensidad del color no es proporcional a la cantidad de bacterias presentes. La
comparacin del rea reactiva contra un fondo blanco puede ayudar en la
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deteccin de niveles bajos del in nitrito, que de otra manera pueden pasar
desapercibidos.
-Leucocitos tiempo de lectura 2 min.
Cualquier cambio de color despus de los 2 minutos carece del valor
diagnstico. Los leucocitos granulocitos contienen esterasas que catalizan la
hidrlisis del derivado ster cido aminopirrol, liberando 3-hidroxi-5 fenil pirrol.
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Este compuesto de pirrol reacciona con una sal de diazonio. El color de la
reaccin negativa es crema y violeta para las reacciones positivas. La
sensibilidad de la prueba ha sido verificada por diversos estudios clnicos,
generalmente las muestras de orina normal darn resultados negativos. Los
resultados positivos (bajo o ms) son significativos. Los resultados individuales
de trazas vistos espordicamente pueden ser de importancia clnica dudosa, no
as cuando estos resultados se repiten en forma constante, lo cual indica la
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necesidad de realizar exmenes adicionales al paciente y/o a su orina, de
acuerdo a los patrones mdicos para la deteccin de piuria. Adems se pueden
encontrar resultados en forma ocasional en muestras de mujeres debido a la
contaminacin del espcimen por descarga vaginal o debido a causas externas
al tracto urinario.
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Muestra de orina
Centrifuga
Tiras para orina Multistix 10 SG Ames-Bayer
Cronmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
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4.- Procedimiento
Se llena un tubo de ensayo 13x100

Se lleva a cabo las caractersticas fsicas que incluyen:
o Color. El color va de amarillo mbar a amarillo claro, rojo o hasta
marrn.
o Olor del color siempre se reporta sui generis que quiere decir
caracterstico.
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o Aspecto. Se valora al observar desde arriba al fondo del tubo. Si
se ve perfectamente es transparente si se ve ms o menos
ligeramente turbio y si no se observa el fondo entonces es turbio.

Se lleva a cabo las caractersticas qumicas con la tira
Se mete la tira y se deja exactamente 30 seg
Se saca y se le quita el exceso de orina
Se leen los cuadros de acuerdo al tiempo indicado
Se reporta los resultados
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Se centrifuga la orina
Se tira el sobrenadante
Se observa el sedimento al microscopio y se anota los resultados
pH de 5-7
Color: amarillo claro a mbar
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Olor: sui generis

Aspecto: transparente o ligeramente turbio
Densidad 1.005-1.030
Nitritos(-)
Leucocitos(-)
Glucosa(-)
Bilirrubina(-)
Urobilingeno(-)
Protenas(-)
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Sangre(-)
Examen microscpico del sedimento
Leucocitos: 4-5 por campo
Eritrocitos: 2-3 por campo
Clulas algunas epiteliales
Cristales: no hay
Cilindros escasos tipo hialino
Piocitos: no hay
Monilias: no hay
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Flora bacteriana: escasa tipo bacilar
6.- Bibliografa
Inserto de tiras por orina Multistix 10 SG de Ames-Bayer, Mxico DF 2001
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Factor Reumatoide
1.- Objetivo
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Determinar el factor reumatoide en una persona que se sospeche
padezca de artritis reumatoide u otra enfermedad similar: fiebre reumtica,
lupus eritermatoso, etc.
2.- Fundamento
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Es una prueba rpida en placa que aglutina inmunoglobulinas anormales
en suero conocidas como factor reumatoide. En presencia de partculas de
ltex sensibilizadas con gama globulina humana.
Suero del paciente

Tubos de ensayo
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Gradilla
Placa
Suero control
Reactivo ltex globulina
Amortiguador
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
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4.- Procedimiento
Mtodo cualitativo
Colocar el tubo en una gradilla
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Depositar 1 ml del frasco No. 4 (Regulador glicina-salina pH
8.2)
Aadir 0.05 ml de suero problema
Despus de haber agregado el suero problema la disolucin
obtenida es 1.20 y est lista para su uso.

En un anillo de la placa depositar 0.05 ml del suero diluido
En otro anillo depositar una gota del frasco 2 (control +)
En un tercer anillo depositar una gota del frasco 3 (control -)
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Aadir a cada uno de los tres anillos una gota del frasco 1
(latex-globulina), previamente resuspendido.

Mezclar manualmente la placa de reaccin mediante 2 min
Realizar la lectura del resultado en este momento
Interpretacin: resultado positivo (+): presencia de agregados
macroscpicos
Resultado negativo (-): ausencia de agregados macroscpicos
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Mtodo semicuantitativo
Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba
cualitativa
Colocar en una gradilla 8 tubos y numerarlos
Depositar al tubo 1 1ml del frasco 4
Depositar del tubo 2 al 8 0.05ml del frasco 4. Diluido.
Aadir al tubo 1 0.05ml de suero problema y mezclar
Pasar 0.50ml del tubo 1 al tubo y mezclar
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Continuar con la operacin hasta el tubo 8

Descartar 0.5ml sobrantes
Depositar 0.05ml de cada una de las diluciones en anillos
diferentes de la placa
Aadir una gota del frasco 1 a cada una de las diluciones
Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos
Interpretacin
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El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin que presente

aglutinacin.
Ejemplo:
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 Resultado Dil. 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:64
0 1:1280 1:2560
Pos 1:320
+ + - - - - - - Pos 1:40 + + + - - - - - Pos 1:80 + + + + + - - -
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Normalmente no hay factor reumatoide en sangre.
6.- Bibliografa: Mtodos analticos de Lincoln, Mxico
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Fosfatasa Alcalina
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1.- Objetivo
Determinar la fosfatasa alcalina de la muestra de suero de un paciente.
2.- Fundamento
La fosfatasa alcalina hidroliza los steres del cido fosfrico en medio
alcalino, produciendo fosfato inorgnico y el correspondiente resto orgnico con
el que se haba esterificado.
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p-nitrofenilfosfato
ALP
p-nitrofenol + fosfato

Centrifuga
Bao Mara
Termmetro
Cronmetro
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291
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Tubos de ensayo
Gradillas
Reactivo para fosfatasa alcalina
Analizador RA 50
Cubetas para RA 50
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Sueros control
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4.- Procedimiento
Separar el suero
Seleccionar ALP en la RA 50
Poner un tubo 1.0 ml de solucin de trabajo
Aadir 20 ul de suero o control
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Verter la mezcla en una cubeta y leer el resultado poniendo ALP en el
RA 50
Dejar que el aparato de su resultado
Reportar el formato correspondiente

SUERO
25C
30C
37C
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Nios (U/L)
Adultos (U/L)
110-720
60-170
6.- Bibliografa
Manual de Tcnicas Serapak Bayer. Mxico
145-950
80-220
180-1,200
100-290
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Gamma Glutamil Transferasa
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1.- Objetivo
Determinar el GGT es el suero de un paciente.
2.- Fundamento
La determinacin cintica de la gamma glutamil transferasa (GGT)
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GLUPA-C + Glicilglicina
amino
GGT
L-gamma-glutamil-gliciglicina + cido 5
2 nitrobenzoico.
GLUPA C: L-gamma-glutamil-3-carboxi-P-nitroanilida
3.- Materia, reactivos e instrumental

Centrifuga
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Gradilla
Tubos de ensayo
Pipetas
Puntas para pipeta
Reactivo para determinar GGT, Serapak Bayer
Cubetas para RA-50
Analizador RA-50
Bao Mara
Cronmetro
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299
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Termmetro
Sueros control
4.- Procedimiento
Separar el suero en un tubo
Preparar la solucin de trabajo
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300
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Tomar un ml de dicha solucin y ponerlo en un tubo

Aadir 100 ul de suero problema o de control segn corresponda
Oprimir la tecla analyze
Dejar que el aparato de su resultado
Reportar en el formato correspondiente
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301
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Mujeres (U/L)
Hombres (U/L)
25C
4-18
6-28
30C
5-25
8-38
6.- Bibliografa
Manual de tcnicas de laboratorio de Serapak Bayer Mxico.
Glucosa God Pap Trinder Spinreact
37C
7-32
11-50
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1.- Objetivo
Determinar la glucosa en ayunas de un paciente determinado.
2.- Fundamento
La glucosa (a y b D-glucopiranosa) es un sustrato hidrosoluble que
constituye el principal alimento energtico de las clulas. Es absorbida, casi
siempre bajo la forma de polisacrido, (almidn, glucgeno), o de disacridos
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(sacarosa, lactosa maltosa). Estas sustancias son degradadas parcialmente por
la accin de la amilasa salival y posteriormente por una hidrlisis cida en el
estmago. Los oligcidos liberados son escindidos por las amilasas
pancreticas y los disacridos intestinales en monosacricos, de los cuales el
principal es la glucosa. La absorcin de la glucosa a nivel de tubo digestivo es
un mecanismo de transporte activo que, una vez entrando en circulacin, se
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reparte entre los diferentes compartimientos: circulatorio (sanguneo, linftico),
intestinal y tisular.
A nivel del hgado y de los msculos, la forma primaria de
almacenamiento de la glucosa es el glucgeno (polmero de almacenaje). La
glucosa circulante es captada por las clulas de los diferentes rganos y les
sirve de sustrato energtico principal (gluclisis) en caso de necesidad
energtica
anormal
(esfuerzo),
hay
una
movilizacin
del
glucgeno
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(glucogenlisis) y/o una biosntesis de glucosa (neoglucogenlisis). El
mantenimiento de la glucemia dentro de los valores normales asegura una
aportacin energtica permanente a las clulas.
Glucosa + O2+ H2O
2H2O2+ Fenol + 4 AF
H2O2+ Gluconato
Quinona + 4H2O
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Sangre en tubo color rojo

Centrifuga
Tubos de ensayo
Pipetas automticas
Puntas para pipeta
Analizador MetroLab 2300
Bao mara
Reactivo preparado de glucosa
Standart de glucosa
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Sueros control
Termmetro
Cronmetro
4.- Procedimiento
Centrifugar la muestra una vez coagulada la sangre

Separar el suero en un tuvo previamente etiquetado
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Tomar 200 ul de suero en una cubeta

Programar el equipo MetroLab 2300
o Capturar al paciente
o Capturar el estudio
o Colocar reactivo
o Colocar muestra de suero
Esperar resultados
Corroborar resultados e imprimir
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309
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De 70-105 mg%
6.- Bibliografa
Manual de procesos de Spinreact. Lab. center Mxico 2002
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310
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HIV
1.- Objetivo
Determinar el virus de HIV en la sangre del paciente.
2.- Fundamento
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311
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El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es un retrovirus
identificado en 1983 como el agente etiolgico del sndrome de la
inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El virus VIH consiste en una molcula
genmica de ARN asociada con una transcriptasa inversa protegida por una
cpside y una envoltura. Se han diferenciado dos tipos: VIH-1 y VIH-2.
Las vas principales de transmisin de VIH son el contacto sexual,
contaminacin por sangre o sus productos, y transmisin de la madre al recin
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nacido. El VIH afecta principalmente a los linfocitos CD4. El descenso
progresivo del nivel CD4 durante el desarrollo de la enfermedad facilita las
enfermedades oportunistas con consecuencias fatales. Actualmente el anlisis
de suero para detectar anticuerpos al VIH es el mtodo ms comn para
tamizar infecciones.
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Suero de la sangre del paciente en tubo rojo

Dispositivos de muestras
Reactivo elevado
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Gradilla
Centrfuga
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4.- Procedimiento
Aplicar 10 ul de la muestra al puerto de muestras del dispositivo de
muestras
Aplicar 2 gotas de reactivo de lavado (que facilite el flujo de la muestra
dentro del dispositivo y sobre la tira del anlisis)

Los anticuerpos especficos a las protenas VIH-1 y VIH-2 reaccionaran
con las partculas conjugadas del oro coloidal
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Los complejos de anticuerpos de protena VIH-oro coloidal se desplazan

por cromatografa a lo largo de la membrana nitrocelulosa hacia las
regiones de prueba y control del dispositivo de pruebas

Se indica una reaccin positiva (+) mediante la presencia de 2 bandas de
color: una banda rosa/roja en la zona de pruebas (marca con una T) y
una segunda banda roja en la regin de control del dispositivo (con una
marca C)
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Una regin negativa que indica la ausencia de los anticuerpos humanos

contra el VIH resulta en una nica banda roja visible en la regin de
control del dispositivo. La aparicin de la banda de control indica que se
ha realizado la prueba correctamente.
Dispositivo de Pruebas
Prueba de Muestras
control
Lnea de pruebas
Lnea de
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6.- Bibliografa
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Manual de tcnicas PBS Orgenics, USA 2004
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Lipasa
1.- Objetivo
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Determinar la cantidad de lipasa que contiene la sangre del paciente
2.- Fundamento
La lipasa pancretica en presencia de colipasa, desoxicolato e iones
calcio, hidroliza el sustrato 1-2-0-dilauryl-rac-glycero-3-glutrico cido-(6metilresorufina)-ster, segn la secuencia de reacciones siguientes.
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1-2-0-dilauryl-rac-glycero-3-glutrico
cido-(6-metilresorufina)-ster
1-2Lipasa
0-dilauryl-rac-glycero + glutrico cido-(6-metilresorufina)-ster (no estable)
OH
cido glutrico + metilresorufina
OH
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3.- Material, reactivo e instrumental

Tubos de ensayo
Analizador Metrolab 2300
Cubetas para el analizador
Pipetas
Puntas para pipetas
Suero control
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325
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Agua destilada
Gradilla
Termmetro
Cronmetro
Bao mara
4.- Procedimiento
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326
LABORATORIO NOVO
Pgina:
327
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Agua Destilada
Blanco
10 ul
Standard
--
Muestra
--
Standard
--
10 ul
--
Muestra
--
--
10 ul
R.1
1.0 ul
1.0 ul
1.0 ul
R.2
100 ul
100 ul
100 ul
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Meter la muestra al analizador y esperar a que arroje los resultados

Reportar el resultado final en el formato correspondiente
5.- Bibliografa
Manual de tcnicas Spinreact, Mxico
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329
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Protena C Reactiva
1.- Objetivo
Determinar la Protena C Reactiva en la sangre de un paciente
2.- Fundamento
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330
LABORATORIO NOVO
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331
Protena C Reactiva es una prueba rpida en un placa que aglutina una
protena que se encuentra en suero de pacientes con diversas enfermedades
inflamatorias conocida como Protena C Reactiva, en presencia de partculas
ltex sensibilizadas con Anti-Protena C Reactiva.
3.- Material, reactivo e instrumental
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Centrfuga
Tubos de ensayo
Gradilla
Suero control
Placa de reaccin
Suero problema
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332
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333
4.- Procedimiento
Mtodo Cualitativo
Colocar en una gradilla 1 tubo (13 x 100mm)

Depositar 0.95 ml del frasco No. 4 (regulador glicina-salina pH 8.2)
diluido
LABORATORIO NOVO
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Aadir 0.05 ml del suero problema

Despus de haber agregado el suero problema, la dilucin obtenida es
de 1:20 y est lista para su uso

En un anillo de la placa depositar 0.05 del suero diluido
En otro anillo depositar una gota del frasco No. 2 (suero control positivo)
En un tercer anillo depositar una gota del frasco No. 3 (suero control
negativo)
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Aadir a cada uno de los 3 anillos una gota del frasco No. 1 (ltex anti-
protena C-reactiva) previamente suspendido

Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos
Realiza la lectura del resultado en este momento
Interpretacin: resultado positivo (+) presencia de agregados
macroscpicos (aglutinacin comparable al control positivo). Resultado
negativo (-) ausencia de agregados macroscpicos, sin aglutinacin,
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comparable al control negativo. La no aglutinacin o una ligera aparicin
de granulosidad que no exceda a la observada el control negativo indica
un resultado (-).
Mtodo Semicuantitativo
Seleccionar los suero positivos obtenidos en la prueba cualitativa
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Colocar en una gradilla 5 tubos y numerarlos

Depositar al tubo No.1 0.95 ml del frasco No. 4
Depositar al tubo No. 2 y al No. 5 0.05 ml del frasco No. 4
Aadir al tubo No. 1 0.05 ml del suero problema dilucin 1:20. Mezcle
Pasar 0.5 ml del tubo No. 1 al tubo No. 2 y mezcle
Continuar esta operacin hasta el tubo No. 5
Depositar 0.05 ml de cada una de la diluciones en anillos diferentes de la
placa
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Aadir una gota del frasco No. 1 a cada una de las diluciones
Mezclar manualmente la placa de reaccin por 2 minutos
El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin que presente
agregados macroscpicos (aglutinacin)
5.- Valor de Referencia
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Normalmente no hay protena C-reactiva en el suero.
6.- Bibliografa
Mtodo analtico de Licon, Mxico.
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Protenas totales y albumina
1.- Objetivo
Determinar el valor de protenas totales y de albumina en un suero
determinado.
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2.- Fundamento
Protenas Totales. Los grupos CO-NH- unidos entre s dan una reaccin
con formacin de color violeta con las sales cpricas en medio alcalino,
siendo la ms representativa y simple la que da con el biuret-NH2-CONH-CO-NH2. Es en la actualidad el mtodo colorimtrico exacto y simple
para la determinacin de protenas totales.
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Albumina. Prueba colorimtrica en la que la albmina se combina con el

verde de bromocresol a determinado pH producindose un cambio del
indicador, de amarillo verdoso a verde azulado.
3.- Material, Reactivos e instrumental.
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Centrfuga
Gradilla
Tubos de ensayo
Pipetas
Puntas para pipetas
Reactivo para albmina
Reactivo para protenas totales
Bao mara
Cronmetro
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Termmetro
4.- Procedimiento
Reactivo
Agua Destilada
Blanco
1 ml
10 ul
Estndar
1 ml
-
Problema
1 ml
-
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Estndar
Muestra
10 ul
-
10 ul
El mismo proceso se lleva a cabo para protenas totales y para albmina,

solo que las protenas totales se dejan 10 minutos en incubacin y la albumina
solo 5 minutos.
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Una vez transcurrido este tiempo leer las absorbancias en el aparato RA
50.
Protenas Totales.
Nios: 5.4-8.7 g % Adultos: 6.7-8.7 g %
Albmina: 3.5-5.0 g %
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6.- Bibliografa
Mtodos Analticos de Serapak Bayer Mxico.
Prueba de embarazo en sangre
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1.- Objetivo
Determinar cualitativamente la hormona gonadotropina corinica humana
(hCG) en orina o suero.
2.- Fundamento
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Biopreg hCG prueba en tira es un ensayo colorimtrico de base slida
para la deteccin cualitativa de niveles elevados de hCG en orina o suero, para
el diagnstico temprano de embarazo.
Al principio se basa en un ensayo inmunomtrico de sndwich que utiliza
una combinacin nica de anticuerpos monoclonales y policlonales para
identificar selectivamente hCG con un alto grado de sensibilidad. Biopreg hCG
prueba en tira contiene una prueba plstica con un cojn de absorcin de
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muestra y una zona de membrana. La frmula contiene anticuerpo monoclonal
anti hCG de ratn con oro coloidal.
La membrana de nitrocelulosa es impregnada con IgG chivo-anti ratn en
la zona de control y anticuerpo chivo anti hCG en la zona de test (prueba).
Durante la prueba, la orina o el suero son absorbidos por el cojn en la zona
dnde se coloca la muestra en la prueba por fenmeno de accin capilar y la
hormona hCG en la muestra de la orina se combina con el oro coloidal,
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movindose cromatogrficamente a lo largo de la membrana. El anticuerpo
chivo-anti hCG pre impregnando en la zona del test atrapa el complejo
resultante. La aparicin de una lnea prpura en la zona del test resultante de la
recreacin muestra un resultado positivo (+), el cual indica la presencia de hCG
y sugiere un embarazo. La ausencia de esta lnea muestra un resultado
negativo o la no presencia de hCG en la muestra de orina o suero. La aparicin
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de una lnea en la zona de control demuestra un comportamiento apropiado y la
validez del reactivo.
Muestra de sangre en tubo tapn rojo u orina

Centrfuga
Prueba en tira
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Gradilla
Cronmetro
4.- Procedimiento
Tomar la muestra del paciente en tubo rojo

Centrifugar 5 minutos
Tomar el suero de la sangre del paciente
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Colocar la tira en el suero

Esperar a tener los resultados
Informar al paciente de los resultados.
5.- Interpretacin de resultados
Resultado Positivo: Adicionalmente a la lnea rosada rojiza en la zona de

control aparecer otra lnea en la zona de test. El tiempo ptimo para la
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observacin es de 2.5 a 3 min. Sin embargo, un resultado positivo puede
transcurrir a partir de 15 segundos de transcurrida la prueba.

Resultado Negativo: Solamente una lnea rosada rojiza aparecer en la
zona de control y nada en la zona de test. Una observacin hasta de 7
minutos es necesaria para excluir la posibilidad de positividad.

Resultado invlido: Despus de 7 minutos no aparecen lneas en la zona
de test ni en la zona de control o nicamente una lnea en la zona de
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test. Esta prueba deber excluirse. Lo anterior puede deberse a que se
llevaron a cabo pasos de manera inapropiada en el procedimiento de la
prueba o simplemente el deterioro de los reactivos. En dicho caso la
muestra deber ser evaluada con otra nueva tira.
6. - Bibliografa
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Amstrong G, Erlich P. H, Birken S, Schlatterer. J.P Siris, E Hembree C. I.
Canfield R.E. J. Clin Endocrinol Metab 59, 867-674 (1984)

Ascheim S. Zondek B. Klin Wochenschr 6.1332 (1927)
Batzer F.R. Fertility and Sterility 34, 1-13 (1980)
Chard T. Human Reproduction 7, 701-710 (1992)
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PruebasCruzadas
1.- Objetivo
Llevar a cabo las pruebas cruzadas de compatibilidad entre una sangre
para transfundir y el receptor que va a recibir dicha sangre o algn componente
de sta.
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2.- Fundamento
Se cuenta con pruebas cruzadas de compatibilidad para las clulas
sanguneas: hemates, leucocitos y plaquetas. La primera es la ms importante
porque previene la aplicacin de la sangre destinada a sufrir hemlisis, con
peligro de la vida del paciente. Los dos ltimos se utilizan para obtener mejor
sobrevida de los leucocitos y de las plaquetas, transfundidas a pacientes con
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anticuerpos anormales. Solo se llevarn a cabo las pruebas de compatibilidad
bsica.
Se sabe que el paciente que haya recibido varias transfusiones es
susceptible que desarrolle anticuerpos inmunes, no aglutinantes, contra
cualquier antgeno sanguneo distinto a los que tienen sus propios hemates.
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Sangre del paciente receptor

Sangre del donador
Tubos de ensayo
Solucin salina 0.90%
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Gradilla
Bao mara
Termmetro
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Cronmetro
Suero de Coombs
Albumina bovina al 22%
4.- Procedimiento
Se van a preparar primero 2 suspensiones de glbulos rojos una con la

sangre del donador y otra con la sangre del receptor
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Se van a separar tambin los sueros tanto del donador como del receptor
Prueba menor. En un tubo se va a colocar 2 gotas del suero del donador
y una gota de suspensin de glbulos rojos del receptor.

Prueba mayor. En otro tubo se va a colocar 2 gotas del suero del
receptor y una gota de suspensin de glbulos rojos del donador.

Ambos tubos de va a centrifugar
Se observa si hay o no aglutinacin. Si la hay no se puede transfundir
En caso negativo aadir una gota de albmina bovina a cada tubo
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Meter los tubos a bao mara a 37C por 15 min

Sacar y centrifugar
Observar si hay o no aglutinacin. Si la hay no se puede transfundir
Si no hay aglutinacin lavar los tubos 4 veces con solucin salina
Despus del ltimo lavado escurrir bien los tubos
Anadir una gota de suero de Coombs
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En caso de que no haya aglutinacin se podr transfundir la unidad de lo

contrario no se debe transfundir.
5.- Valores de esperados

Si hay aglutinacin no se debe transfundir en caso contrario si se puede
transfundir, pero de cualquier manera se recomienda vigilar el estado del
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paciente durante la transfusin y en caso de una reaccin suspender la
transfusin.
6.- Bibliografa
Lynch M:J:/S:S: Raphael / L.D. Mellor/ P.D Spare / M.J.H.Inwood Mtodos de
Laboratorio. Edit. Interamericana. Vol. 2 cap. 25 pg. 903
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Tipo de Coagulacin
1.- Objetivo
Determinar mediante la tcnica de Lee White el tiempo de coagulacin.
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2.- Fundamento
Se denomina tiempo de coagulacin al tiempo que transcurre para la
transformacin de una protena llamada fibringeno en otra denominada fibrina
que tiende a polimerizar formando fibras largas que van a impedir que la sangre
salga de los vasos sanguneos.
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Esta determinacin es una prueba gruesa del
mecanismo de
coagulacin que mide desde la activacin del factor XII a la formacin de fibrina;
como el factor XII se activa por el contacto con el vidrio se mide va intrnseca y
comn pero no se mide el factor VII ni el factor tisular. Se miden los factores
XII, XI, IX, VIII, X, V y II.
3.- Material y mtodos
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Jeringas
Agujas estriles
Algodn
Alcohol
Cronmetro
Aplicadores de madera
Tubos de ensaye de 7 ml
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4.- Mtodo de Lee White
Se extrae sangre venosa con un jeringa utilizando una aguja gruesa (no
18 19). La puncin venosa debe ser perfecta, pues la contaminacin
con linfa modifica los resultados. Se pone en marcha el cronmetro en
cuanto la sangre penetra en la jeringa, pues en este momento se inicia la
coagulacin sangunea.
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Se retira la aguja y se pone 1 ml de sangre en 4 tubos de ensaye,
limpios, colocados en una gradilla en bao mara a 37C

3 minutos despus y reduciendo al mnimo el tiempo que los tubos se
encuentren fuera del agua, se les inclina uno por uno cada 30 seg. Se
evita la agitacin que podr prolongar el tiempo de coagulacin. Este
corresponde al momento que resulta posible invertir los tubos sin que se
derrame su contenido. Se anota separadamente el tiempo de
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coagulacin de cada tubo y la cifra definitiva es el promedio de los 4
resultados.

De 4 a 10 minutos
6.- Bibliografa
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Laboratorio. Edit. Interamericana. Vol. 2 cap. 22 pg. 826-827
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Tiempo de Protrombina (T.P.)
1.- Objetivo
Determinar el tiempo de protrombina utilizando plasma sanguneo.
2.- Fundamento
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El T.P. es una de las pruebas de rutina usadas en el estudio de los
problemas de coagulacin. Mide los siguientes factores de coagulacin:
Protrombina, Fibringeno, Factor V, Factor VII y Factor X. Se utiliza para vigilar
a los pacientes tratados con anticoagulantes orales. (cumarnicos).
Sangre tomada en tubo azul (contiene anticoagulante citrato de sodio)
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Analizador RA 50 de Bayer
Centrifuga
Tubos de ensaye
Cubetas para RA 50
Plasmas control
Pipetas automticas
Puntas para pipetas automticas
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4.- Procedimiento
Una vez tomada la sangre se mezcla bien el tubo, se vierte el contenido

en un tubo de ensayo de 7 ml y se mete a centrifugar por 5 minutos
exactamente
Transcurrido el tiempo se separa el plasma en tubo limpio y seco
Se mete el tubo con el plasma a bao mara a 37C durante 3 minutos
Se coloca tambin el reactivo para T.P. a bao mara
Se enciende el RA 50
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Se elige la prueba T.P. en ingles P.T.

Se toma 200 ul de plasma y se ponen en una cubeta
Transcurridos 3 minutos que el aparato mide automticamente aadir
100 ul del plasma previamente puesto a 37C

El aparato dar el resultado e imprimir el mismo
Hacer la prueba por duplicado
Hacer clculos y reportar el resultado
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Actualmente estamos considerando de base 10.4 seg = 100% de actividad.
INR se calcula conociendo el ISI del reactivo y el cociente de dividir el T.P. del
paciente sobre el T.P. normal
6.- Bibliografa
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385
sus enfermedades. Edit. Mc Graw Hill, Mxico D.F. 1 edicin 2005
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Tiempo de Protrombina
1.- Objetivo
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Determinar el tiempo de protrombina en una muestra anticoagulada con
citrato de sodio.
2.- Fundamento
El T.P. es una de las pruebas de rutina usadas en el estudio de los
problemas de coagulacin. Mide los siguientes factores de coagulacin:
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Protrombina, Fibringeno, Factor V, Factor VII y Factor X. Se utiliza para vigilar
a los pacientes tratados con anticoagulantes orales. (cumarnicos).
3.- Material reactivos e instrumental
Tubo azul con citrato de sodio

Tubos de ensayo
Mezclador
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Bao mara
Analizador RA 50
Cubetas para RA 50
Centrifuga
Aplicadores de plstico
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Tromboplastina
Plasma control
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390
4.- Procedimiento
Una vez obtenida la sangre se va a mezclar el tubo azul y se vierte el
contenido en un tubo de 13 x 100

Se centrifuga durante 5 minutos
Se separa el plasma con un aplicador a otro tubo seco y limpio y se mete
a bao mara
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391
Se enciende el RA 50
Presionar la tecla PT
Se miden 200 ul de tromboplastina
Una vez transcurridos los 2 minutos de incubacin aadir 100 ul del
plasma
Dejar que el aparato se detenga y reporte el resultado
Hacer la prueba por duplicado
Sacar el promedio de tiempo de protrombina
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Calcular el IRN mediante el ISI del reactivo y el cociente resultante del
T.P. del paciente sobre el T.P. normal

Reportar resultados
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393
El tiempo normal segn el plasma control es de 10.4 seg y equivale a 100% de
actividad.
6.- Calculo de IRN
IRN=(TP PACIENTE/TP NORMAL). ELEVADO AL ISI
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7.- Bibliografa
sus enfermedades. Edit. Mc Graw Hill, Mxico D.F. 1 edicin 2005 cap. 44 pg.
247
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Tiempo de Sangrado
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1.- Objetivo
Determinar el tiempo de sangrado en un paciente
2.- Fundamento
El tiempo de sangrado o de sangra es ms bien una prueba de
hemostasia no de coagulacin pues se alarga con:
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399
Problemas vasculares
Pocas plaquetas o deficiencia en su funcionamiento
As podemos encontrar valores normales de T.S. an en defectos de

coagulacin.
Cuando sale un tiempo de sangrado alargado, lo ms probable es que
haya trombocitopenia por lo cual debe hacerse una cuenta de plaquetas, si el
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400
nmero de plaquetas es normal puede deberse a defectos de estas en su
funcin y hay que hacer la prueba de agregacin y adhesin plaquetarias.
3.- Material y equipo empleado
Lancetas
Papel filtro
Cronmetro
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Alcohol o ter
4.- Mtodo de IVY

Se pone alrededor del brazo el manguito del baumanmetro con el cual
se ejerce una presin de 40 mm de Hg misma que se mantendr constante
durante toda la prueba. Se desinfecta con alcohol la cara antero superior del
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antebrazo y con una lanceta de resortes se efectan rpidamente 3 punciones
de 3 mm de profundidad. Se pone en marcha el cronmetro.
Con intervalos de 30 seg; se seca cuidadosamente cada gota de sangre
con su correspondiente papel filtro. El punto final est dado por el cese de flujo
de la sangre. Se toma la media de los 3 tiempos.
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De 2 a 7 minutos
6.- Interpretacin
Un tiempo de sangrado normal indica una retraccin normal de los
capilares y la existencia de un nmero suficiente de plaquetas con actividad
normal. La metamorfosis normal depende de un buen mecanismo extrnseco de
produccin de tromboplastina; por lo tanto el sangrado se alarga en la
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insuficiencia del Factor VII (acelerador plasmtico de la conversin de
protrombina). Puede presentarse tambin en los individuos de salud normal
pero de edad avanzada, debido a la atrofia y el escaso tono de piel, a la vez
que a la contractibilidad insuficiente y fragilidad aumentada de los capilares.
7.- Bibliografa
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Laboratorio. Edit. Interamericana. Vol. 2 cap. 22 pg. 827-828
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Tiempo de tromboplastina parcial activada (TTP)
1.- Objetivo
Determinar el tiempo de tromboplastina parcial activada en un paciente
2.- Fundamento
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El TTP se indica para detectar deficiencias en la va intrnseca de la
coagulacin y vigilar la anticoagulacin con heparina. Es una prueba rutinaria.
Se
prctica
con
un
tiempo
de
protrombina.
Entre
ambos
detectan
aproximadamente el 95% de los defectos de coagulacin.

Sangre anticoagulada en tubo color azul (contiene citrato de sodio)
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Mezclador
Centrifuga
Analizador RA 50 Bayer
Bao mara
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Tromboplastina activada
Cloruro de calcio 0.02 M
Tubos de ensayo
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Cubetas para RA 50
4.- Procedimiento
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409
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410
Una vez obtenida la muestra de sangre en el tubo azul vaciarla a un tubo
de 13 x 100
Meter a centrifugar durante 5 minutos exactamente
Separar el plasma y vaciarlo a un tubo limpio y seco
Poner el tubo en bao mara durante 3 minutos
Poner la tromboplastina parcial activada, el cloruro de calcio, en bao
mara a 37C
Encender el RA 50 y cuando pida la prueba pulsar la tecla PTT
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411
Tomar 100 ul de plasma y ponerlos en el fondo de una cubeta

Aadir 100 ul de la tromboplastina parcial activada debidamente
homogenizada
Pulsar la tecla analyze
Esperar el tiempo de incubacin y aadir 100 ul de cloruro de calcio
El aparato reportar el resultado en el papel
Realiza la prueba por duplicado
Calcular el TTP promedio
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Reportar el resultado en hojas correspondientes

Actualmente para el TTP estamos utilizando mediante controles de un intervalo
de 25-43 segundos.
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413
6.- Bibliografa
sus enfermedades. Edit. Mc Graw Hill, Mxico D.F. 1 edicin 2005 cap. 44 pg.
247
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Triglicridos
1.- Objetivo
Determinar la cantidad de triglicridos que se encuentran en la sangre.
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2.- Fundamento
Los triglicridos son hidrolizados enzimticamente a glicerol, el cual,
mediante GK y GPO, libera el perxido de H que se valora mediante la reaccin
de Trinder, de acuerdo a las siguientes reacciones:
Triglicridos + H2O
Glicerol + ATP
GK
LPL
Glicerol + c. Grasos
Glicerol-3-Fosfato + ADP
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Glicerol 3-P + O2
GPO
H2O2 + 4-AF + p-Clorofenol
Dihidroxiacetona-P + H2O2
POD
Quinona + H2O
La cantidad de Quinona formada es proporcional a la concentracin de

triglicridos.
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Reactivo para triglicridos

Bao mara
Termmetro
Cronmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Analizador RA 50
4.- Procedimiento
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421
Centrifugar la muestra
Preparar 3 tubos, blanco, estndar y muestra
Agregar 2.0 ml de reactivo a los 3 tubos
Al tubo estndar agregar 20 ul de estndar
Al tubo de muestra agregar 20 ul de muestra
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C o 10 minutos a temperatura
ambiente
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Medir la densidad ptica a 505 nm (490-550) frente al blanco de
reactivos
El color es estable en 30 minutos
Reportar el resultado final

Hombres: 60-165 mg/dL
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Mujeres: 40-140 mg/dL
6.- Bibliografa
Manual de tcnicas de Spinreact, Mxico 2003
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Urea
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425
1.- Objetivo
Determinar la urea en una muestra determinada
2.- Fundamento
En presencia de ureasa, la urea se hidroliza en amonio y dixido de
carbono. El amonio producido en esta reaccin se combina con a-cetoglutarato
y NADH en presencia de glutamato de hidrogenasa dando como resultado
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glutamato y NAD. El consumo NADH, que se mide por la disminucin de su
absorcin en la regin ultravioleta, es proporcional a la cantidad de urea de la
muestra.

Centrifuga
LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
Tubos de ensaye
Gradillas
Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Analizador RA 50
Reactivo para urea
Sueros controles
Bao mara
Termmetro
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LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
Cronmetro
4.- Procedimientos
Centrifugar la sangre del paciente

Separa el suero en un tubo previamente rotulado
Preparar el reactivo en el momento de la prueba
Mezclar una parte de reactivo no. 2 y 4 partes de reactivo no. 1
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LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
Tomar 1 ml de dicha solucin

Encender el RA 50
Teclear el botn urea
Agregar 10 ul de estndar a 1 ml de solucin de trabajo y mezclar
Verter el contenido a una cubeta
Colocar la cubeta en el compartimiento del RA 50
Oprimir la tecla Calibrate
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LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
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430
Una vez listo hacer lo mismo para el problema y los controladores pero
se va a oprimir la tecla analyze entre prueba y prueba.

Dejar que el aparato de sus resultados
Reportar en el formato correspondiente

De 15-50 mg/dl
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6.- Bibliografa
Manual de procesos Serapak Bayer Mxico 2001
VDRL
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431
LABORATORIO NOVO
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432
1.- Objetivo
Determinacin de VDRL en una persona con sospechas de sfilis u otra
enfermedad venrea.
2.- Fundamento
LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
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433
Es una reaccin inmunolgica de aglutinacin entre la cardiolipina
absorbida a partculas de carbn y los anticuerpos reagnicos presentes en el
suero o plasma del paciente.
Suero de la sangre del paciente en tubo rojo

Sueros control
LABORATORIO NOVO
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Pipetas automticas
Puntas para pipetas
Gradilla
Centrfuga
Tarjeta
4.- Procedimiento
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LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
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Perforar el inserto del frasco y colocar la aguja

Mezclar perfectamente el frasco del antgeno por agitacin ligera antes
de cada determinacin
Colocar en un crculo de la tarjeta una gota del suero del paciente,
extendiendo la gota en el rea de reaccin, con la parte posterior del
tubo gotero de polietileno. Repetir la operacin con el suero control (-) y
suero control (+)
LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
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Con el frasco gotero en posicin vertical y con la aguja hacia abajo
agregue una gota de antgeno a la gota colocada en el paso anterior.

No se deben mezclar las 2 gotas
Mantener la tarjeta en rotacin por 8 minutos a 100 rpm
Al trmino de la rotacin interpretar los resultados en un periodo de 1
minuto
Interpretacin de resultados
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Febrero de 2015
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Resultado positivo (+): Aparicin de partculas de carbn aglutinado.

Resultado negativo: (-): Presencia de una suspensin homognea de
color gris. En ocasiones aparece un botn central o bien algunas
partculas de carbn migran al borde del crculo, permaneciendo la
suspensin homognea.
LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
6.- Bibliografa
Inserto de RPR para VDRL.
Pgina:
438
LABORATORIO NOVO
Febrero de 2015
Pgina:
439

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LABORATORIO NOVO

Brindar una herramienta que permita realizar los procedimientos tcnicos

Ordenar todos los procedimientos tcnicos del Laboratorio MediLab, en

Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011, Para la organizacin y

Norma Oficial Mexicana NOM-005-STPS-1998, Relativa a las

2.2 Norma Oficial Mexicana NOM-008-SCFI-2002, Sistema general de

2.3 Norma Oficial Mexicana NOM-010-SSA2-2010, Para la prevencin y

2.4 Norma Oficial Mexicana NOM-012-STPS-1999, Condiciones de

2.5 Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,

2.6 Norma Oficial Mexicana NOM-168-SSA1-1998, Del expediente

2.7 Norma Oficial Mexicana NOM-197-SSA1-2000, Que establece los

Un tubo con anticoagulante EDTA para vacutainer color lila

Se coloca la muestra en la mezcladora para evitar coagulacin

Solucin salina fisiolgica 0.9%

Antisueros: Anti A, Anti B, Anti AB, Anti D

Una vez obtenida la sangre preparar una suspensin de glbulos rojos a

5% con solucin salina

Si por el contrario hay aglutinacin en B y en AB, y tambin en D pero no

hay en A, el grupo sanguneo es B(+)

3.- Material y reactivos

Sangre tomada previamente en tubo color lila con E.D.T.A. como

Se colocan 3 gotas de sangre en el tubo

Se tapa el tubo y se mezcla bien

Velocidad de sedimentacin globular

Sangre anticoagulada en tubo de color lila con E.D.T.A.

Se extraen 2 mililitros de sangre que se colocan en un tubo

Mezclar suavemente invirtiendo el tubo varias veces.

obtener mejores resultados.

5.- Valores de referencia

3.- Material, reactivos e instrumental

Sangre tomada al paciente en tubo color rojo

Centrifugar la muestra de sangre ya coagulada

En otro tubo se ponen 20 ul de suero control

Sangre del paciente en tubo rojo

Reportar el resultado en el formato correspondiente

5.- Valores de referencia

espectrofotomtricamente a 450 nm dando un medida directa de la actividad de

Sangre del paciente en tubo rojo

Meter la muestra al analizador RA 50

Suero de la persona a la que se va a hacer el examen

Atemperar el reactivo y los controles a temperatura ambiente

Homogenizar el reactivo 1 ASO ltex, con agitacin suave

(de 80 100 rpm) y observar la presencia o ausencia de aglutinacin

exactamente al cabo de 2 minutos

o superior a 200 UI/ml

Siguiendo la metdica cualitativa, se proceder con diluciones del suero

Concentracin si es la ltima dilucin que da aglutinacin

5.- Valores de referencia

AST: Aspartato nimo transferasa

Sangre del paciente en tubo rojo

Preparar la solucin de trabajo

Medir 100 ul de suero y ponerlos en el ml de solucin de trabajo

5.- Valores se referencia

Sangre del paciente en un tubo rojo

5.- Valores de referencia

Bilirrubina Total: Hasta 1.0 mg/dl

Sangre del paciente en tubo rojo

Puntas para pipetas

Pipetear en tubos de ensayo

En el tubo blanco poner 1.0 ml R.B (colesterol)

colesterol + cidos grasos

Sangre del paciente

Centrifugar la sangre de 3 a 5 min

5.- Valores de referencia