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MTODOS DE ANLISES FSICO-QUMICAS DE

ROTINA DE GUAS RESIDURIAS TRATADAS


BIOLOGICAMENTE

EUGENIO FORESTI
MARCELO ZAIAT
ELIZABETH

DE

MATTOS MORAES

MARIA ANGELA TALLARICO ADORNO


ANA PAULA S. PAIM
JOS ALBERTO DOMINGUES RODRIGUES
SUZANA MARIA RATUSZNEI
CATARINA SIMONE

DO

CANTO

LEONARDO HENRIQUE SOARES DAMASCENO


WALTER BORZANI (REVISOR)

Este texto, resultante do Projeto Temtico FAPESP Desenvolvimento, Anlise,


Aprimoramento e Otimizao de Reatores Anaerbios para Tratamento de guas
Residurias (Processo n 2001/05.489-0), tem como objetivo apresentar algumas
metodologias para quantificar as principais variveis de processos biolgicos (aerbio e
anaerbio) de tratamento de efluentes lquidos, especificando os principais conceitos
fundamentais nos quais esto baseadas.

(Verso 2.2)

Mtodos de Anlises Fsico-Qumicas de Rotina de guas Residurias Tratadas Biologicamente

2005

SHS/EESC/USP DEQ/UFSCar DQA/EEM/IMT

Mtodos de Anlises Fsico-Qumicas de Rotina de guas Residurias Tratadas Biologicamente

CONTEDO
1.

Slidos............................................................................................................ 1
1.1.

Conceitos Fundamentais.........................................................................1

1.2.

Metodologia............................................................................................ 2

1.2.1.
1.3.

Material................................................................................................... 2
Determinao de slidos totais (ST).......................................................3

1.3.1.

Determinao de slidos totais fixos e volteis (STF e STV)....................3

1.3.2.

Determinao de slidos totais em suspenso (SST)..............................4

1.4.

Determinao de slidos suspensos fixos e volteis (SSF e SSV)..........4

1.5.

Determinao de slidos dissolvidos totais, fixos e volteis (SDT, SDF e

SDV)

2.

Matria Orgnica............................................................................................ 5
2.1.

Demanda Qumica de Oxignio Mtodo Espectrofotomtrico..............5

2.1.1.

Conceitos Fundamentais.........................................................................5

2.1.2.

Metodologia para concentraes de DQO entre 50 mg/L e 800 mg/L.....6

2.1.2.1.
Material........................................................................................ 6
2.1.2.2.
Solues......................................................................................7
2.1.2.3.
Levantamento da curva de calibrao.........................................8
2.1.2.4.
Determinao da concentrao de DQOFrao Total...........................9
2.1.2.5.
Determinao da concentrao de DQOFrao Dissolvida....................10
2.1.2.6.
Determinao da concentrao de DQOFraes Coloidal e Dissolvida.........10
2.1.2.7.
Determinao da concentrao de DQOFrao Particulada...................10
2.1.3. Metodologia para concentraes de DQO entre 10 mg/L e 100 mg/L. . .10
2.2.

Protenas Mtodo Espectrofotomtrico...............................................10

2.2.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................10

2.2.2.

Material.................................................................................................10

2.2.3.

Determinao da concentrao de protenas........................................11

2.2.4.

Preparo da soluo de hidrxido de sdio, 20%....................................11

2.2.5.

Preparo da soluo de sulfato de cobre, 25%........................................11

2.3.

Carboidratos Mtodo Colorimtrico....................................................11

2.3.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................11

2.3.2.

Material.................................................................................................12

2.4.

2.3.2.1.
Determinao da concentrao de carboidratos........................12
Lipdios Mtodo Espectrofotomtrio...................................................12

2.4.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................12

2.4.2.

Material.................................................................................................13

2.4.2.1.
Determinao de altas concentraes (1000 a 14000 mg/L) de
lipdios
13
2.4.2.2.
Amostra dentro da faixa de sensibilidade..................................13
2.4.2.3.
Amostras com concentraes abaixo da faixa de sensibilidade. 13
Alcalinidade e cidos Volteis Totais.............................................................15

3.
3.1.

Mtodo Titulomtrico/Potenciomtrico.................................................15

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ii

3.1.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................15

3.1.2.

Material.................................................................................................15

3.1.3.

Padronizao das solues....................................................................16

3.1.3.1.
Soluo de NaOH 0,005 M.........................................................16
3.1.3.2.
Soluo de H2SO4 0,05 M...........................................................17
3.1.4. Determinao de alcalinidade Mtodo Potenciomtrico.....................18
3.1.5.

Determinao de cidos volteis totais.................................................19

3.1.6.

Clculo dos cidos volteis:..................................................................19

3.2.

Alcalinidade e cidos Volteis Totais Mtodo Condutimtrico............21

3.2.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................21

3.2.2.

Material.................................................................................................24

3.2.3.

Determinao da alcalinidade real........................................................24

3.2.4.

Determinao da alcalinidade total.......................................................27

3.2.5.

Determinao da concentrao de cidos volteis...............................27

3.2.6.

Preparo e padronizao das solues de hidrxido de sdio e de cido

sulfrico............................................................................................................. 27
4.

Alcalinidade a bicarbonato de reserva..........................................................28


4.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................28

4.2.

Material................................................................................................ 28

4.3.

Preparo de soluo padro de cido actico (5 g/L).............................28

4.4.

Determinao da concentrao da alcalinidade a bicarbonato de reserva


28

5.

Determinao de cidos Volteis Mtodo Cromatogrfico.........................29


5.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................29

5.2.

Material................................................................................................ 34

5.3.

Preparo da soluo me de calibrao..............................................35

5.4.

Preparo da soluo do padro interno (cido crotnico).......................39

5.5.

Como ligar o cromatgrafo...................................................................39

5.6.

Preparo da amostra para injeo no cromatgrafo...............................40

5.7.

Levantamento da curva de calibrao..................................................41

5.8.

Determinao das concentraes dos cidos.......................................42

5.9.

Como desligar o cromatgrafo.............................................................42

6.

Determinao de Metano e Dixido de Carbono (composio do biogs)

Mtodo Cromatogrfico........................................................................................... 44
6.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................44

6.2.

Material................................................................................................ 44

6.3.

Como ligar o cromatgrafo...................................................................45

6.4.

Levantamento da curva de calibrao..................................................46

6.5.

Determinao da concentrao de metano e gs carbnico................48

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6.6.
7.

iii

Como desligar o cromatgrafo.............................................................49


Metano (produo de biogs) Mtodo de Deslocamento de Volume..........51

7.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................51

7.2.

Material................................................................................................ 51

7.3.

Determinao da produo em reatores em batelada..........................51

7.4.

Determinao da produo em reatores contnuos..............................54

8.

Nitrognio..................................................................................................... 56
8.1.

Conceitos fundamentais.......................................................................56

8.2.

Nitrognio Amoniacal...........................................................................56

8.3.

Nitrognio Orgnico..............................................................................57

8.3.1.

Mtodo Titulomtrico............................................................................58

8.4.

Material................................................................................................ 60

8.5.

Padronizao da soluo de cido sulfrico Soluo de H2SO4 0,01 N. 61

8.6.

Preparo do indicador para anlise de nitrognio amoniacal e total

Kjeldahl (indicador misto).....................................................................................62


8.7.

Preparo do tampo acetato (pH 4,6).....................................................62

8.8.

Preparo da soluo de cido brico (2%)..............................................62

8.9.

Preparo da soluo de NaOH (32%)......................................................62

8.10.

Determinao de nitrognio total Kjeldhal............................................62

8.11.

Determinao de nitrognio amoniacal................................................64

8.12.

Determinao de nitrognio orgnico...................................................64

8.13.

Operao do equipamento de anlise do nitrognio total Kjeldahl.......65

9.

Nitrito / Nitrato Mtodo Espectrofotomtrico..............................................69


9.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................69

9.2.

Material................................................................................................ 72

9.3.

Determinao de nitrito........................................................................73

9.3.1.

Preparo da soluo de sulfanilamida.....................................................73

9.3.2.

Preparo da soluo de bicloridrato de n-(1-naftil)-etilenodiamina.........73

9.3.3.

Levantamento da curva de calibrao..................................................73

9.3.4.

Determinao da concentrao de nitrito.............................................74

9.4.

Determinao de nitrato.......................................................................74

9.4.1.

Preparo da suspenso de hidrxido de alumnio...................................74

9.4.2.

Preparo da soluo de hidrxido de sdio (2 M)....................................74

9.4.3.

Levantamento da curva de calibrao..................................................75

9.4.4.

Determinao da concentrao de nitrato............................................75

10.

Fsforo Total e Inorgnico Mtodo da reduo com cido ascrbico..........77

10.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................77

10.2.

Fsforo inorgnico................................................................................77

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10.2.1.

iv

Material.............................................................................................77

10.3.

Preparo do reagente misto...................................................................77

10.4.

Preparao da soluo de molibdato de amnio..................................78

10.5.

Preparao da soluo de tartarato de potssio e antimnio...............78

10.6.

Preparao da soluo de cido sulfrico 5 N.......................................78

10.7.

Preparao da soluo de cido ascrbico...........................................78

10.8.

Construo da curva padro de fsforo inorgnico...............................78

10.9.

Preparao de soluo padro de fosfato monobsico de potssio......79

10.10.

Determinao da concentrao de fsforo inorgnico..........................79

10.11.

Fsforo total......................................................................................... 79

10.11.1.

Material.............................................................................................79

10.12.

Preparo da soluo saturada de persulfato de potssio........................80

10.13.

Preparo do reagente misto...................................................................80

10.14.

Preparo da soluo de molibdato de amnio........................................80

10.15.

Metodologia para preparo da soluo de tartarato de potssio e

antimnio............................................................................................................. 80
10.16.

Metodologia para preparo da soluo de cido sulfrico 5 N................80

10.17.

Metodologia para preparo da soluo de cido ascrbico.....................81

10.18.

Determinao da concentrao de fsforo total...................................81

10.19.

Metodologia para construo da curva padro de fsforo total............81

10.19.1.

Metodologia para preparo da soluo padro de fosfato monobsico

de potssio........................................................................................................ 81
11.

Sulfato Mtodo Turbidimtrico...................................................................83

11.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................83

11.2.

Material................................................................................................ 83

11.3.

Metodologia preparo da Soluo Tampo A..........................................83

11.4.

Metodologia preparo da Soluo Tampo B..........................................84

11.5.

Determinao da concentrao de sulfato (APHA, 1999).....................84

11.6.

Levantamento da curva de calibrao..................................................85

11.7.

Preparo da soluo padro de sulfato (1 mL = 100 gSO42-).................85

12.

Sulfeto Mtodo Iodomtrico.......................................................................86

12.1.

Conceitos Fundamentais.......................................................................86

12.2.

Material................................................................................................ 86

12.2.1.

Preparo da Soluo de cido sulfrico 3 M........................................86

12.2.2.

Preparo da Soluo Padro de iodo 0,025 N......................................86

12.2.3.

Preparo da Soluo Padro de tiossulfato de sdio 0,025 N..............86

12.2.4.

Preparo da Soluo Padro de iodato de potssio 0,0042 M..............86

12.2.5.

Preparo da Soluo de amido............................................................86

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12.3.

Padronizao da soluo de tiossulfato de sdio..................................87

12.3.1.
13.

Determinao da concentrao de sulfeto........................................87

Referncias Bibliogrficas.............................................................................88

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1. SLIDOS
1.1.

Conceitos Fundamentais

Concentraes de slidos dissolvidos e suspensos, orgnicos e inorgnicos so


ferramentas muito usadas para caracterizar guas residurias.
Essas determinaes, baseadas em anlise gravimtrica, utilizam massas de resduos
secos e calcinados presentes em amostras brutas e filtradas.
A massa seca das clulas microbianas normalmente expressa em termos de slidos
em suspenso (SS), uma vez que a biomassa constituda de slidos que se encontram
suspensos no reator (no caso de crescimento disperso). No entanto, slidos em suspenso
representam os materiais particulados maiores que 1,2m de dimetro, orgnicos e
inorgnicos presentes nas amostras. Assim, a biomassa tambm freqentemente expressa
em termos de slidos volteis em suspenso (SSV). Estes representam, principalmente, a
frao orgnica dos slidos, eliminada atravs da combusto (oxidao) como gs carbnico
e gua, enquanto algumas substncias inorgnicas passam por modificaes.
No entanto, nem toda frao orgnica da biomassa ativa. Assim, os slidos volteis
em suspenso podem ser ainda divididos em fraes ativa e inativa. A frao ativa a que
tem real participao na estabilizao do substrato, porm, a dificuldade da sua medio a
principal limitao utilizao desse parmetro no projeto e controle operacional de
estaes de tratamento. Existem processos indiretos, baseados em quantificaes de DNA,
ATP, protenas e outros, mas nenhum se compara simplicidade da determinao direta dos
slidos volteis em suspenso.
Alm da considerao da atividade da biomassa, os slidos volteis podem ser
interpretados tambm com relao biodegradabilidade, podendo apresentar fraes
biodegradvel e no biodegradvel (Sperling, 1996 a,b).
Como em todas as anlises, as amostras devem ser representativas e, em certos
casos, materiais estranhos devem ser evitados durante a amostragem. Pores de leo ou
graxa devem ser dispersas antes da transferncia das alquotas a serem analisadas.
O limite recomendado para a massa do resduo seco de 200mg, para evitar a
formao de camada superficial isolante, que dificulta a sua secagem (APHA, 1995).
Substncias muito higroscpicas podem mascarar resultados.
APHA (1995) apresenta valores de preciso na determinao de slidos totais e
suspensos:
(a) determinao de slidos totais a 103oC: 6mg/L de desvio padro;
(b) determinao de slidos suspensos a 103oC:
5,2mg/L de desvio padro em amostras de 15mg/L, ou seja, 33% de
coeficiente de variao;
24mg/L de desvio padro em amostras de 242mg/L, ou seja, 10% de
coeficiente de variao;
13mg/L de desvio padro em amostras de 1707mg/L, ou seja, 0,76% de
coeficiente de variao;
(c) determinao de slidos volteis totais a 550oC: no disponvel;
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(d) determinao de slidos volteis suspensos a 550 oC: 11mg/L de desvio padro
em amostras de 170mg/L, ou seja, 6,5% de coeficiente de variao.
Damasceno (2004) observou a influncia de elevadas concentraes de bicarbonato
de sdio nos resultados de anlises de slidos totais e slidos volteis, mostrada na Tabela
1.
Tabela 1. Concentraes de slidos em amostras de soro de queijo (A) e amostras de soro de
queijo com bicarbonato de sdio (B).
Parmetro
s
(mg/L)
DQO
ST
SVT
SST
SSV

Soro (B)
(1,0g DQO/L e 1,0g
NaHCO3/L)
1004
1698
1096
56
42
Damasceno (2004).

Soro (A)
(1g DQO/L)
995
946
898
68
52
Fonte:

Como pode ser observado, as concentraes de slidos totais e slidos volteis totais
foram fortemente influenciadas, enquanto os valores de SST e SSV no sofreram variaes
significativas considerando-se o erro do mtodo empregado.
1.2.

Metodologia

1.2.1. Material
Balana analtica (preciso 0,0001 g)
Bomba de vcuo
Dessecador contendo slica anidra
Estufa, a 103C - 105C
Forno tipo mufla, a 550C
Cpsulas de porcelana (modelos 05-50 ou n 2 e 05-85 ou n 4)
Funil tipo Bchner para membrana com dimetro de 47mm, Kitassato de 250mL e
alonga de borracha para filtrao, ou conjunto de filtrao a vcuo da Millipore
(Nalgene) para membrana com dimetro de 47mm
Pinas para cpsula de porcelana (comprimentos de 20cm para uso na Estufa, de
50cm para uso na mufla), de 15cm para transferir a membrana filtrante.
Luvas para forno
Proveta de 50mL
Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidro, com tamanho nominal de abertura de
0,45m (0,3-0,5m) e dimetro de 47mm. Quando calcinada a 550C, a micro-fibra
de vidro mantm sua integridade estrutural. Os modelos indicados, conforme os
fabricantes so:
Whatman grade 934AH
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Gelman type A/E


Millipore type AP40
Schleicher & Schll (S&S) GF-52/C
1.3.

Determinao de slidos totais (ST)

Este procedimento limitado a uma quantidade de slidos secos prxima de 200mg


para impedir a formao de uma camada que dificulta a secagem do resduo, comum em
massas maiores.
Inicialmente, preparar a cpsula de porcelana que servir de suporte para a amostra:
(a) calcinar a cpsula de porcelana em mufla a 550C at massa constante (neste
caso, cerca de 15 minutos) e resfriar em dessecador. Determinar a massa M 1, em
miligramas, em balana analtica;
(b) transferir um volume da amostra (V1, em mililitros), de tal forma que a
quantidade de resduo no supere 200mg, para cpsula de massa conhecida
(M1). Secar a amostra em estufa a 103C - 105C, at massa constante (neste
caso, 24 horas) e determinar a massa do conjunto aps resfriamento em
dessecador (M2, em miligramas);
(c) calcular ST pela Equao 1:

mgde slidostotais/L

(M2 M1 ) x1000
V1 (mL)

Equao 1.
1.3.1. Determinao de slidos totais fixos e volteis (STF e STV)
(a) Aps a determinao da concentrao de slidos totais, calcinar a cpsula com a
amostra em forno tipo mufla a 550C por tempo suficiente para atingir massa
constante (neste caso, 15 minutos para uma nica amostra e, no mximo, 2
horas, quando forem vrias amostras). Determinar a massa do conjunto, aps
resfriamento em dessecador (M3, em mg) em balana analtica;
(b) calcular STF pela Equao 2 e STV pela Equao 3:

mgde slidostotaisfixos/L

(M3 M1 ) x1000
V1 (mL)

Equao 2.

mgde slidostotaisvolteis/
L
Equao 3.

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(M2 M3 ) x1000
V1 (mL)

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1.3.2. Determinao de slidos totais em suspenso (SST)


Este procedimento limitado a uma quantidade de slidos secos de 200mg devido
possibilidade de formao de uma camada que dificulta a secagem.
(a) Inserir a membrana no sistema de filtrao e lav-la utilizando trs pores de
20mL de gua destilada (totalde 60mL), que devem ser desprezadas;
(b) transferir a membrana para a cpsula de porcelana, calcinar em forno tipo mufla,
a 550C, por 15 minutos e resfriar at temperatura de segurana (150C);
(c) transferir o conjunto para dessecador e deixar resfriar at temperatura
ambiente;
(d) determinar a massa do conjunto M4 em mg, em balana analtica;
(e) utilizando uma pina metlica, inserir a membrana calcinada no sistema de
filtrao;
(f) filtrar volume conhecido (V2) de amostra, utilizando o sistema de filtrao a
vcuo;
(g) transferir a membrana contendo o resduo para a cpsula de porcelana;
(h) secar o conjunto em estufa a 103C-105C, at atingir massa constante (neste
caso, 24 horas) e, aps resfriamento em dessecador, determinar a massa do
conjunto (M5, em mg);
(i)

calcular STS pela Equao 4:

mgde slidostotaissuspensos/
L

(M5 M4 ) x1000
V2 (mL)

Equao 4.
1.4.

Determinao de slidos suspensos fixos e volteis (SSF e SSV)

(a) Aps a determinao da concentrao de slidos suspensos totais, calcinar o


conjunto em um forno tipo mufla, a 550C, por tempo suficiente para atingir
massa constante e, aps resfriamento em dessecador, determinar a massa, (M 6,
em mg);
(b) calcular SSF pela Equao 5 e SSV pela Equao 5:

mgde slidossuspensosfixos/L

(M6 M4 )x1000
V2(mL)

Equao

5.

mgde slidossuspensosvolteis
/L

(M5 M6 )x1000
V2 (mL)
6.

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Equao

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1.5.

Determinao de slidos dissolvidos totais, fixos e volteis (SDT, SDF

e SDV)
Os valores das concentraes de slidos dissolvidos podem ser obtidos pelas
diferenas entre as massas de slidos totais e de slidos suspensos, considerando-se as
respectivas fraes (totais, fixos e volteis).

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2. MATRIA ORGNICA
2.1.

Demanda Qumica de Oxignio Mtodo Espectrofotomtrico

2.1.1. Conceitos Fundamentais


A matria orgnica de guas residurias pode apresentar-se em soluo, em sua
maioria, rapidamente biodegradvel, e em suspenso, de biodegradao mais lenta.
A Demanda Qumica de Oxignio ( DQO), varivel ligada presena de espcies
reduzidas em substncias de uma amostra, representa a quantidade de oxignio necessria
para oxidar totalmente essas substncias, como nos exemplos abaixo :
CH3CH2OH 3O2

2CO2 3H2O

H 2 S 2O2 SO3 H 2 O
No primeiro exemplo, pode-se verificar que a queima de 46g de etanol consome 96g
de O2, ou tambm, que uma soluo de 46mg/L de etanol apresenta DQO de 96mg/L.
A maioria das substncias oxidveis, orgnicas e inorgnicas, presentes em guas
residurias pode ser quantificada rapidamente pela reao com bicromato, em meio cido, a
quente, como mostrado a seguir:

CH3CH2 OH 2 K 2Cr2O7 8 H2SO4

Ag ,Hg 2 CO2 11H2 O 2 Cr2 SO4 3 2 K 2SO4

Equao 7.

3S2 4K 2 Cr2 O7 16H2 SO4

3SO4

Ag , Hg

4Cr2 (SO4 ) 3 16H2 O 4K 2SO4

Equao 8.
A Eq. 9 representa a reao de oxidao do cido ftlico, pelo on bicromato, em meio
de excesso de cido sulfrico, que ocorre durante o processo de digesto da substncia
usada como padro primrio para anlise de DQO, ftalato cido de potssio.

Ag , 8CO 2 5Cr2 ( SO 4 ) 3 23H 2 O 5 K 2 SO 4

C 8 H 6 O 4 5 K 2 Cr2 O 7 exc 20 H 2 SO 4

Equao 9.
A partir de equao de reta de calibrao preparada com solues de diferentes
concentraes de ftalato cido de potssio, a DQO quantificada atravs da quantidade
produzida de ons Cr3+, de colorao azul.
So adotadas as seguintes formas de representao do substrato, ou seja, da matria
carboncea (Sperling, 1996 a, b):
(a) matria orgnica afluente: representa a DQO total (solvel e em suspenso) que
entra no reator. Essa considerao feita, pois processos de tratamento com
decantao primria dos afluentes removem apenas cerca de 2/3 dos slidos em
suspenso. Os slidos em suspenso que chegam no reator so adsorvidos pela

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biomassa, hidrolisados e convertidos em slidos solveis. Dessa forma, tanto o


material

solvel

quanto

particulado,

afluentes

ao

reator,

devem

ser

computados como substrato afluente a ser removido;


(b) DQO efluente: representa os compostos orgnicos solveis efluentes do reator e
algumas substncias inorgnicas que podem interferir (tambm so oxidados por
bicromato). Essa considerao feita pela necessidade de remoo dos slidos
em suspenso (slidos biolgicos) dos efluentes em processos que utilizam
decantao secundria. Portanto, no h sentido considerar a DQO total efluente
do reator, pois pode ser maior que a DQO afluente, devido elevada
concentrao de matria orgnica em suspenso, representada pela populao
microbiana. A qualidade do efluente final do sistema de tratamento depende da
DQO solvel, indicativo do desempenho do reator e da DQO em suspenso,
indicativo do desempenho da unidade de decantao final.
Segundo APHA (1995), compostos orgnicos volteis podem ter menor contato com o
agente oxidante da fase lquida. Sulfato de mercrio deve ser usado para evitar que ons Cl -,
Br- e I- precipitem o on Ag+, usado como catalisador. Este mtodo apresentou os seguintes
valores de preciso em 48 anlises com ftalato cido de potssio:
17mg O2/L de desvio padro em amostras de 193mg O 2/L, ou seja, 8,7% de
coeficiente de variao, na ausncia Cl-;
20mg O2/L de desvio padro em amostras de 212mg O 2/L, ou seja, 9,6% de
coeficiente de variao, na presena de 100 mg Cl-/L.

Observaes: 1) Existem algumas substncias orgnicas que no so oxidadas


por dicromato nestas condies, como, por exemplo, piridina e compostos
semelhantes, bem como o corante Lugamil Orange, com a seguinte estrutura,
usado no tingimento de couros:

OH
N

2) O on inorgnico NH4+, no qual o nitrognio est no maior estado de reduo permitido a


esse tomo, no oxidado pelo on dicromato em meio cido. Por esse motivo, comum a
citao de que o on NH4+ no tem DQO. Outros agentes oxidantes, dentre eles o persulfato,
transformam NH4+ em NO3-.
2.1.2. Metodologia para concentraes de DQO entre 50mg/L e 800mg/L
2.1.2.1.

Material

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Balana analtica (preciso 0,0001g)


Bomba de vcuo
Capela com exausto
Digestor de DQO
Dispensadores de 5,0mL
Espectrofotmetro
Estufas a 103C e 120C
Pipetador automtico de 5,00mL
Funil tipo Bchner para membrana com dimetro de 47mm, frasco de Kitassato de
250mL e alongas de borracha para filtrao, ou conjunto de filtrao a vcuo da
Millipore (Nalgene) para membrana com dimetro de 47mm
Membrana de microfibra de vidro, com tamanho nominal de poros de 1.2m e
dimetro de 47mm
Bales Volumtricos de 10,0, 500 e 1000mL
Copos de Becher de 500 e 1000mL
Pipetas automticas de 200 e 1000L
Tubos de DQO
Sulfato de Prata Ag2SO4 P. A. ou grau tcnico
cido Sulfrico H2SO4 concentrado 96-97% P. A.
Sulfato de Mercrio HgSO4 P. A.
Bicromato de Potssio K2Cr2O7 P. A. - seco a 103C.
Ftalato cido de Potssio (KPH) C 6H4(COOH)COOK (M.M. 202,22g/Mol) P. A. - seco a
103C.
2.1.2.2.

Solues

2.1.2.2.1.

Soluo de sulfato de prata em cido sulfrico concentrado

Ateno: Trabalhar em capela e usar luvas


(a) Transferir 10,12g de Ag2SO4, triturado com basto de vidro, para 1000mL de
H2SO4 concentrado (96% - 97%, densidade = 1,84kg/L), no frasco mbar original
do cido. Fechar hermeticamente o frasco. Deixar em repouso por 48 horas, no
escuro, para que ocorra a dissoluo. Homogeneizar antes de usar.
(b) Para a soluo poder ser usada imediatamente aps sua preparao, transferir
10,12g de Ag2SO4 para copo de bquer de 100mL. MUITO CUIDADO: triturar o
sulfato de prata com basto de vidro e adicionar, cerca de 70mL de cido
sulfrico concentrado, agitar com basto e transferir apenas a soluo para
frasco de vidro escuro. Repetir adies de cido sulfrico at que todo sal esteja
dissolvido. Transferir o restante do cido sulfrico para o frasco de estocagem,
fechar hermeticamente e homogeneizar. Usar imediatamente.

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2.1.2.2.2.

Soluo de digesto - Soluo aquosa de K 2Cr2O7 e HgSO4,

acidificada com H2SO4.

Ateno: Trabalhar em capela e usar luvas


(a) Secar cerca de 25g de K2Cr2O7 a 103C, em estufa, durante 24h. Resfriar em
dessecador;
(b) em frasco de Erlenmeyer de 1000mL contendo cerca de 400mL de gua
destilada, imerso em um banho de gelo, adicionar com cuidado e aos poucos,
334mL de cido sulfrico concentrado. Adicionar 66,6g de HgSO 4 e agitar, com
basto de vidro, para dissolver;
(c) transferir quantitativamente, usando gua destilada, 20,432g de K 2Cr2O7 para
balo volumtrico de 2000mL. Agitar para dissolver. Ento, adicionar a soluo
cida resfriada de sulfato de mercrio. Quando a soluo estiver completamente
resfriada, completar o volume com gua destilada.

Ateno: A utilizao de nova soluo de digesto exige a preparao de


nova reta de calibrao.
2.1.2.3.

Levantamento da curva de calibrao

A DQO de 1000mg de Hidrogenoftalato de potssio (KHP), padro primrio, de


1,176mg O2.
(a) Secar aproximadamente 500mg de KHP, em placa de Petri semi-aberta, em
estufa a 120C, at massa constante (24 h) e resfriar em dessecador;
(b) dissolver cerca de 0,425g de KHP em gua destilada (anotar a massa para
clculo da DQO real), transferir quantitativamente para balo volumtrico de
500mL e completar o volume com gua destilada (soluo me);
(c) preparar os padres e brancos para levantamento da curva de calibrao,
conforme procedimento para determinao da concentrao de DQO (item 3.9),
para concentraes de 50 a 800mgDQO/L, conforme a Tabela 2.
Tabela 2. Relao das concentraes e alquotas da soluo me para a curva de calibrao.
Concentra
es
aproximadas
(mg DQO/L)
50

Alquota da soluo me (L) para


diluio em balo volumtrico de
10,0mL

80

80

100

100

200

200

400

400

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50

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600

600

800

800

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2.1.2.4.

11

Determinao da concentrao de DQOFrao Total

Para amostras brutas, coletar volumes mnimos de 6mL.


(a) Em tubos de borossilicato com tampas rosqueveis, com o auxlio de pipeta
automtica ou de vidro, adicionar 2,50mL de amostra concentrada ou diluda (a
diluio da amostra se faz necessria quando a DQO esperada for maior que
800mg/L), ou 2,50mL de gua destilada (para o branco), ou das solues de
padro preparadas para a curva de calibrao de acordo com o item 3.4;
(b) Segurando o tubo prximo rosca, adicionar, com o auxlio de dispensadores,
1,50mL da soluo de bicromato de potssio e, vagarosamente, 3,50mL da
soluo de sulfato de prata em cido sulfrico;
(c) fechar hermeticamente o tubo e agitar, por inverso, segurandoo, agora, pela
tampa.
(d) A anlise poder ser interrompida nesta etapa, desde que as amostras fiquem
estocadas no escuro.
(e) Colocar os tubos no digestor previamente aquecido temperatura de 150C, e
mantendo-a durante 120 minutos.
(f) Ligar o espectrofotmetro hora antes da leitura e fixar o comprimento de onda
em 620nm.
(g) Aps resfriamento, limpar os tubos com papel absorvente, se necessrio,
umedecido com lcool e, em seguida, com papel seco;
(h) zerar o equipamento com soluo do teste em branco. Ler as absorbncias de
padres e amostras;
(i)

para obteno da reta de calibrao, plotar as absorbncias das solues do


padro no eixo Y contra os valores de DQO em mg/L das solues de KHP no eixo
X, e determinar a equao da reta obtida.

Ateno: Quando for utilizada a soluo comercial para determinao de DQO,


bem como a curva instalada no equipamento da Hack, o volume de amostra dever
ser de 2,00mL.
Ateno: Amostras centrifugadas (ou filtradas) podem ter seus volumes reduzidos
para 1,00mL, sem nenhum prejuzo para os resultados da anlise. Neste caso, os
volumes dos reagentes sero proporcionais aos recomendados pelo Standard
Methods, ou seja: 0,60mL de soluo de bicromato de potssio e 1,40mL de soluo
de sulfato de prata em cido sulfrico. Esta reduo de volumes contribui para
diminuies de gastos e de resduos txicos gerados .

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Ateno: Amostras brutas de 2,50mL podem ser centrifugadas, e o

resduo,

suspenso em duas alquotas de 1250 L de gua destilada, para determinao de


DQO particulada.
Ateno: DQO total pode ser obtida pela soma da DQO particulada e DQO
centrifugada.
2.1.2.5.

Determinao da concentrao de DQOFrao Dissolvida

Volumes mnimos de 6mL de amostras filtradas em membrana com poros de 0,45m.


2.1.2.6.

Determinao da concentrao de DQOFraes Coloidal e

Dissolvida

Volumes mnimos de 6mL de amostras filtradas em membrana com poros de 1,2m.


2.1.2.7.

Determinao da concentrao de DQOFrao Particulada

A frao particulada de DQO calculada pela diferena entre os valores de DQO


total e DQO das fraes coloidal e dissolvida.
2.1.3. Metodologia para concentraes de DQO at 50mg/L
(Moraes et al, 2003)
1. Introduo
Este mtodo usado para determinar concentraes de DQO na faixa de 2,0 a
50mg/L.O princpio do mtodo idntico ao usado para determinar concentraes maiores.
2. Aparelhagem e reagentes: semelhantes ao mtodo de DQO normal,
exceto:
-

cubeta de vidro, com passo tico de 10,0 cm

tubos de digesto de 20 mL

gua destilada recentemente e no estocada em frasco de plstico

3. Preparo das solues: idntico ao mtodo de DQO normal


4. Preparo

da

curva

analtica

de

DQO

de

amostras

com

baixa

concentrao (2,0 a 50 mg/L), para leitura em espectrofotmetro


4.1. Soluo estoque do padro de hidrogenoftalato de potssio(DQO
terica de 10000mg/L)
-Em copo de Becher, pesar cerca de 425 mg de hidrogenoftalato de potssio,
previamente seco a 110C por, no mnimo, 3 horas. Anotar a massa para ser
usada nos clculos das concentraes reais. Transferir para balo volumtrico
de 50,0mL, completando o volume com guas de lavagem.
4.2. Soluo intermediria
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Diluir 1,00mL da soluo estoque para 10,0mL com gua destilada.


4.3. Preparo das solues diludas de hidrogenoftalato de potssio (KHP)
Transferir a alquota correspondentes DQO desejada, sempre em rplica,
conforme Tabela 3, para balo volumtrico de 50,0 mL,.

Tabela 3 Volumes de soluo de KHP usados na preparao da curva


analtica DQO
Concentraes aproximadas

Volumes da soluo

(mg/L)
0,0 (branco)

intermediria (L)
0,0

2,0

100

5,0

250

10,0

500

20,0

1000

40,0

2000

50,0

2500

4.4. Procedimento para traar a curva analtica


- transferir 10,0mL de gua destilada (branco) e de cada soluo padro, para os
tubos de DQO de 20mL, adicionando-se, em seguida, 1,0mL da soluo de digesto
(bicromato de potssio e sulfato de mercrio) e 3,0mL de soluo de AgSO 4 em
H2SO4. Fechar hermeticamente o tubo e agitar por inverso.
- transferir para digestor pr-aquecido a 150C e manter esta temperatura durante
2h.
- deixar esfriar em local escuro
- efetuar a leitura da absorbncia correspondente, em espectrofotmetro, a 620nm,
usando cubeta de 10,0cm. Anotar os valores das leituras
- com a mdia das absorbncias, traar a curva analtica de absorbncia x DQO
(mg/L) em um processador grfico para obteno da equao da reta e avaliao de
representatividade e confiabilidade do mtodo.
5. Procedimento geral de adio da amostra e das solues
- adicionar 10,0mL da amostra pura
- preparar o branco com 10,0mL de gua recentemente destilada

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- adicionar 1,0mL de soluo de digesto (bicromato de potssio e sulfato de


mercrio) e 3,0mL
da soluo de sulfato de prata em cido sulfrico ao tubo de DQO
- fechar perfeitamente os tubos com a tampa apropriada e agitar o contedo por
inverso do frasco
- transferir para aquecimento a 150C durante 2h
- caso a amostra no possa ser digerida imediatamente, guard-la sob a proteo da
luz.
Os demais procedimentos so semelhantes aos descritos para os padres.
2.2.

Protenas Mtodo Espectrofotomtrico

2.2.1. Conceitos Fundamentais


O mtodo utilizado para a determinao da concentrao das protenas o do microbiureto modificado, baseado na metodologia descrita por STICKLAND (1951). Consiste na
adio de hidrxido de sdio e sulfato de cobre soluo de protenas. O excesso de
hidrxido de cobre removido por centrifugao. Mede-se, ento, a absorbncia da soluo
de cor violeta, na regio do UV, a 310nm, em espectrofotmetro. A intensidade da cor
desenvolvida proporcional quantidade de protenas presente na amostra.
A concentrao de protenas presente nas amostras determinada com o auxlio de
uma reta de calibrao previamente construda, usando-se, por exemplo, soluo de casena
ou de albumina como padro.
A determinao de protenas deve ser realizada em trplica, sendo a absorbncia
mdia considerada para clculo das concentraes de protenas.
2.2.2. Material
Tubos de borossilicato com tampas rosqueveis
Centrfuga
Espectrofotmetro, 310nm
Cubeta de quartzo com passo tico de 1,00 cm
Agitador Vrtex em velocidade mnima
Pipeta automtica de 1000 e 5,00mL ou pipetas volumtricas de 1,00 e 5,00mL
Tubos de centrfuga
Soluo de hidrxido de sdio NaOH P. A. 20%
Soluo de sulfato de cobre penta-hidratado CuSO4.5H2O P. A. 25%
Soluo de polmero Drewfloc 1g/L.
2.2.3. Determinao da concentrao de protenas
(Blundi & Gadelha, 2001)
Inicialmente, construir a curva padro a partir de concentraes conhecidas
substncia a ser analisada e das absorbncias correspondentes. Todos os procedimentos

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descritos so aplicados tanto para a construo da curva padro, quanto para a anlise de
amostras.
Ligar o espectrofotmetro 30 minutos antes da leitura e selecionar o comprimento de
onda de 310nm.
(a) Adicionar 4,0mL de amostra, padro ou de gua destilada ( branco), ao tubo de
vidro;
(b) adicionar 30L de soluo 20% de hidrxido de sdio e 60L de soluo 25% de
CuSO4 e agitar lentamente a mistura (em Vrtex, na velocidade mnima),
promovendo a floculao;
(c) adicionar 30L de soluo de polmero e 62L de soluo 25% de CuSO 4 e agitar
lentamente a mistura, promovendo, novamente, a floculao;
(d) adicionar 700L de soluo 20% de hidrxido de sdio e agitar lentamente a
mistura, promovendo a floculao;
(e) centrifugar a suspenso a 7000rpm, por 10 minutos;
(f) com cubeta de quartzo, zerar o equipamento com o teste em branco e efetuar a
leitura de absorbncia de padres e amostras.
2.2.4. Preparo da soluo de hidrxido de sdio, 20%
Dissolver 20,0g de hidrxido de sdio P. A. em gua destilada, com cuidado e usando
luvas, resfriar, transferir quantitativamente para balo volumtrico de 100,0mL e completar
o volume.
2.2.5. Preparo da soluo de sulfato de cobre, 25%
Dissolver 25,0g de CuSO4.5H2O em gua destilada, transferir quantitativamente para
balo volumtrico de 100,0mL e completar o volume.
2.3.

Carboidratos Mtodo Colorimtrico

2.3.1. Conceitos Fundamentais


Descrito por DUBOIS et al. (1956), o mtodo utilizado para a determinao de
carboidratos, em concentraes de at 200mg/L, consiste na reao com fenol e cido
sulfrico concentrado, para produo de substncia de colorao alaranjada, com pico de
absorbncia a 488nm.
A concentrao de carboidratos da amostra determinada atravs de uma reta de
calibrao previamente construda, por exemplo, com soluo de lactose.
Este mtodo rpido e simples, com resultados bastante reprodutveis, sendo a
substncia colorida estvel por horas. A determinao dos carboidratos deve ser realizada
em trplica, sendo a absorbncia mdia considerada para clculo da concentrao.
2.3.2. Material
Banho de gua
Espectrofotmetro

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Pipeta automtica de 1000 L e 5,00 mL ou pipeta volumtrica de 1,00mL e 5,00mL


Tubos de ensaio/Tubos Hach para DQO
cido sulfrico concentrado H2SO4 P. A.
Soluo de fenol a 5% (massa/volume)
2.3.2.1.

Determinao da concentrao de carboidratos


(Blundi & Gadelha, 2001)

Construir a curva padro do carboidrato de interesse com diferentes concentraes


da substncia em gua destilada, (glicose, lactose ou sacarose, por exemplo). Amostras,
padres e branco devem ser tratados pelo procedimento descrito a seguir:
(a) transferir 500L de amostra filtrada ou solues de padro a tubo de ensaio com
tampa rosquevel;
(b) adicionar 500L de soluo de fenol a 5% e agitar;
(c) adicionar 2,5mL de cido sulfrico concentrado, rapidamente, com jato
direcionado para a superfcie do lquido, de modo a obter uma boa mistura.
Tampar o tubo, agitar e deixar em repouso por 10 minutos;
(d) imergir os tubos de ensaio em banho de gua, entre 25C e 30C, por 15
minutos;
(e) ler a absorbncia em 488nm, em espectrofotmetro.

Observao: Para preparar o teste em branco, substituir a soluo padro por


gua destilada.
Herbert D., Philipps, OS, Strang, R.E 1971. Carbohydrat analysis. Methods Enzymol. SB 265277
2.4.

Lipdios Mtodo Espectrofotomtrico

2.4.1. Conceitos Fundamentais


O mtodo utilizado para a determinao de altas concentraes de lipdios (at
15,0g/L) o da sulfo-fosfo-vanilina, descrito por POSTMA & STROES (1968), e consiste na
reao com cido sulfrico concentrado, cido fosfrico concentrado e vanilina, produzindo
substncia de colorao rosada, com pico de absorbncia em 537nm.
Para a realizao desse ensaio, necessrio verificar se a amostra apresenta-se
dentro da faixa de sensibilidade do mtodo original (concentrao de lipdeos maior que
1000mg/L ). Para amostras com baixas concentraes pode ser utilizado o resduo da
extrao de leos e graxas (mtodo de extrao Sohxlet) ou a adaptao de Moraes e
Miqueleto (LPB SHS EESC USP 2004), em extrato com ter etlico, em meio cido.
A concentrao de lipdios presentes nas amostras determinada com o auxlio de
uma reta de calibrao previamente construda, por exemplo, com leo vegetal ou gordura
animal.
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2.4.2. Material
Banho de gua
Espectrofotmetro
Pipetas automticas de 1000L e 5,00mL ou Pipetas volumtricas de 1,00 e 5,00mL
Tubos de ensaio com tampas rosqueveis
Soluo de lipdeo em etanol concentraes adequadas s das amostras
Soluo concentrada de cido fosfrico H3PO4 P. A.
Soluo concentrada de cido sulfrico H2SO4 P. A.
Vanilina 0,6%: dissolver 0,6g de vanilina em gua destilada e completar o volume at
100,0mL
NaCl P. A.
2.4.2.1.

Determinao de altas concentraes (1000 a 14000mg/L) de

lipdios
(Blundi & Gadelha, 2001)
Preparar padres com o lipdio a ser usado, na regio de concentraes de interesse,
diluindo a soluo etanlica de lipdio (leo de soja, por exemplo) em meio alcalino
semelhante ao da amostra. Observar se houve dissoluo completa do leo (soluo
homognea), com ausncia de duas fases.

Tratar amostras, padres e branco com o

procedimento descrito no item 6.2.1.


2.4.2.2.

Amostra dentro da faixa de sensibilidade (1000 a 14000mg/L)

(a) transferir 100L de solues de padro, de gua destilada ou do meio usado


(branco) e de amostras para tubos de ensaio com tampas .
(b) adicionar 2,0 mL de H2SO4 concentrado, fechar o tubo e agitar;
(c) aquecer por 10 minutos em banho de gua em ebulio;
(d) resfriar e transferir alquota de 100 L, para tubo contendo 2,0 mL de H3PO4
concentrado;
(e) adicionar 0,5 mL de soluo 0,6% de vanilina e agitar;
(f) aquecer as amostras em banho de gua, a 37C, por 15 minutos;
(g) resfriar e, aps 10 minutos, ler a absorbncia de 537 nm, em espectrofotmetro.
2.4.2.3.

Amostras com baixas concentraes

Se a concentrao de lipdios na amostra estiver abaixo da sensibilidade do mtodo


proposto, pr-concentraes de amostras e padres sero necessrias.
2.4.2.3.1.

Pr-concentrao

Em tubo de ensaio com tampa ou frasco de antibitico, adicionar um volume


adequado de amostra ou padres (mnimo de 10,0mL);

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Para cada 10,0mL de amostra ou padres, adicionar:


(a) aproximadamente 2g de NaCl;
(b) 100L de soluo de cido sulfrico 1:1, homogeneizar e resfriar a amostra em
freezer por 20 minutos;
(c) 2,0mL de ter etlico resfriado em freezer, fechar hermeticamente e agitar por 2
minutos (Vrtex, em velocidade mxima);
(d) congelar a amostra em freezer;
(e) transferir a camada etrea (lquida, superior) para copo de Becher de 10 mL;
(f) evaporar em capela, at a secura, temperatura ambiente.
2.4.2.3.2.

Reao para desenvolvimento de colorao

(a) adicionar 2,0mL de cido sulfrico concentrado e fechar com filme plstico;
(b) aquecer por 10 minutos em banho de gua em ebulio;
(c) transferir alquota de 200L para tubo de vidro contendo 2,0mL de H 3PO4
concentrado;
(d) adicionar 0,5mL de soluo de vanilina 0,6% e agitar;
(e) deixar as amostras em banho de gua, a 37C, por 15 minutos;
(f) ler a absorbncia de 537nm, em espectrofotmetro, aps 10 minutos.

Observao: Para o teste em branco, utilizar volumes de gua destilada idnticos


aos das amostras e realizar os procedimentos a partir do item 2.4.2.3..1.
2.4.2.3.3.

Utilizando resduos da anlise de leos e graxas

(a) para a reta de calibrao, preparar os padres para a curva de calibrao, no


meio utilizado, e

extrair leos e graxas seguindo os mesmos procedimentos

utilizados para as amostras, segundo o Standard Methods;


(b) lavar o resduo da extrao de leos e graxas por Sohxlet com 3 pores de
2,0mL de ter etlico;
(c) transferir as solues etreas para um copo de bquer de 10mL e evaporar, em
baixa temperatura, at secura;
(d) adicionar 2,0mL de cido sulfrico concentrado e fechar com filme plstico;
(e) aquecer por 10 minutos em banho de gua em ebulio;
(f) transferir alquota de 200L para tubo contendo 2,0mL de H3PO4 concentrado;
(g) adicionar 0,5mL de soluo de vanilina 0,6% e agitar;
(h) deixar as amostras em banho de gua, a 37C, por 15 minutos;
(i)

ler a absorbncia a 537nm, em espectrofotmetro, aps 10 minutos.

Observao: Para o teste em branco, utilizar o meio e realizar os procedimentos a


partir do item (a).

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3. ALCALINIDADE
3.1.

19

CIDOS VOLTEIS TOTAIS

Mtodo Titulomtrico/Potenciomtrico

3.1.1. Conceitos Fundamentais


A alcalinidade uma varivel importante no tratamento de efluentes quando h
evidncias de que a reduo do pH pode afetar o metabolismo dos microrganismos
responsveis pela depurao anaerbia (Sperling, 1996 a,b).
Basicamente, a digesto anaerbia de efluentes orgnicos consiste no equilbrio
entre as etapas denominadas acidognese e metanognese. O pH de guas residurias, sob
tratamento anaerbio, deve ser mantido em valores levemente acima de 7,0 para impedir a
inibio do metabolismo de microrganismos metanognicos, pelo desequilbrio entre as
duas etapas. Entretanto, como as bactrias acidognicas desenvolvem-se mais rapidamente
que as metanognicas, aumentos na concentrao ou na vazo do afluente podem elevar as
concentraes de cidos volteis produzidos. Por esse motivo, o reator deve apresentar a
caracterstica de absorver possveis perturbaes, caracterizada pela capacidade de
tamponamento que, quanto maior, mais estvel e seguro ser o sistema (Anderson & Yang,
1992). Afluentes ricos em nitrognio orgnico geralmente produzem efluentes com
alcalinidade elevada.
A alcalinidade de uma soluo a medida da sua capacidade de neutralizar cidos,
resistindo s mudanas de pH ou tamponando o sistema. Os principais ons responsveis
pela alcalinidade em meios aquosos sob tratamento anaerbio so: HCO 3-, CO32- e OH-, cujas
concentraes so funes do pH. Geralmente, o valor da alcalinidade expresso em mg
CaCO3/L (usado para padronizar cidos).
Segundo APHA (1995), substncias como sabes, leos, slidos suspensos ou
precipitados podem causar interferncias na medida do pH por depositarem-se no eletrodo e
processos como filtrao, diluio, concentrao ou qualquer outra alterao na amostra
so totalmente desaconselhados. No so registrados valores de preciso devido grande
variao nas caractersticas das amostras, considerados apenas dados para amostras
sintticas:

1 mg CaCO3/L de desvio padro em amostras de 10-500mg CaCO 3/L em

amostras cuja alcalinidade devida a carbonatos e bicarbonatos;

5 mgCaCO3/L de desvio padro, e mdia 9 mg CaCO 3/L abaixo do valor real

em amostras de 120 mgCaCO3/L cuja alcalinidade devida a bicarbonato;

8 e 5mg CaCO3/L de desvio padro em amostras de 80 e 65mg CaCO3/L,

respectivamente, em amostras cuja alcalinidade devida a carbonato de sdio;

40mg CaCO3/L de desvio padro em amostras de 1000mg CaCO 3/L em

amostras cuja alcalinidade devida a carbonatos e bicarbonatos, em vrias razes


de concentraes.
3.1.2. Material
Agitador magntico e barra magntica de 6x20mm ou 7x25 mm

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Aquecedor
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Buretas digitais de 10,0mL ou buretas de vidro de 10,00 e 25,0mL
Centrfuga
Dessecador com slica anidra
Estufa a 120C
Medidor de pH (preciso 0,01)
Pipetador automtico de 10,0mL ou pipeta volumtrica de 10,0mL
Balo volumtrico de 100,0mL
Copo de bquer de 10mL
cido Sulfrico H2SO4 concentrado 96%-97% P. A.
Hidrxido de Sdio NaOH P. A. (em lentilhas)
Ftalato cido de Potssio (KPH) C6H4(COOH)COOK (M.M. 202,22 g/Mol) P. A.
Tetraborato de sdio - Na2 B4 O7. 10H2O (brax)
Etanol P. A.
Fenolftalena [C6H4COO.C(C6H4OH)2] P. A.
3.1.3. Preparo e Padronizao das solues
3.1.3.1.

Soluo de NaOH 0,005 M

Soluo de NaOH 0,005M = 0,005N (Normalidade = K Molaridade)


Massa molecular = 40,0 g/mol
K = 1 (nmero de hidroxilas)
Portanto,
C = 0,005 mol/L 40 g/mol = 0,200 g/L
Para preparar 1 litro de soluo NaOH 0,005M, dissolver cerca de 0,2 g de NaOH (P.
A.) em gua destilada e completar o volume para 1000mL. Mais corretamente, prepara-se
uma soluo mais concentrada e dilui-se para a concentrao desejada. A soluo de NaOH
instvel: a reao com CO2 atmosfrico exige padronizao semanal.
A padronizao da soluo de NaOH deve ser feita utilizando o padro primrio
Ftalato cido de Potssio KPH (P. A.), atravs da reao:

C6H4 (COOH)COOK NaOH


Massas moleculares:

204,22 g

C6H4 COONa COOK H2 O

40,0g

O KPH deve ser previamente seco em estufa, a 120 oC, por 24 horas e resfriado em
dessecador. A padronizao deve ser feita em triplicata. Massas de KPH prximas de
0,01022g devem ser determinadas em balana analtica, anotando-se o valor exato de cada
uma e dissolvidas em cerca de 25mL de gua destilada, em frascos de Erlenmeyer.
Adicionar 2 gotas de soluo de fenolftalena.Trabalhar sobre um fundo branco. Ento, com

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21

uma bureta, adicionar a soluo de NaOH at uma leve colorao rosada persistente;
anotar cada volume.
A molaridade da soluo de NaOH calculada pela Equao (7.6):

massaKPH
(g) x1000
volumeNaOH
(mL) .x204,22

MNaOH

Equao 10.
A

soluo

do

indicador

Fenolftalena

preparada

dissolvendo-se

80mg

de

fenolftalena P. A. [C6H4COO.C(C6H4OH)2] em 60mL de Etanol P. A., diluindo-se com gua


destilada at 100mL em balo volumtrico.
3.1.3.2.

Soluo de H2SO4 0,05 M

Soluo de H2SO4 = 0,05 M


Massa molecular

H2SO4

= 98 g/mol

K = 2 hidrognios ionizveis
(densidade) = 1,84 kg/L =m soluo(g)/v da soluo (mL)
Porcentagem de H2SO4 na soluo concentrada = 97,5% (m de H 2SO4/100g de
soluo)
Portanto,
C = 0,05 mol/L 98 g/mol = 4,9 g/L, equivalentes a 2,73mL de soluo concentrada.
Logo, para preparar 1 litro de soluo H2SO4 0,05M deve-se adicionar, com cuidado,
em capela e sob resfriamento, 2,75mL de soluo concentrada de H 2SO4 P. A. em gua
destilada e, aps resfriamento, completar o volume para 1000mL com gua destilada.
A padronizao da soluo de H2SO4 deve ser feita utilizando-se o padro primrio
tetraborato de sdio decahidratado (brax), Na2B4O7.10H2O, atravs da reao:
Na2B 4 O7 .10H2 O H2 SO4
Massas moleculares:

381,42g

4H3BO3 Na2 SO4 5H2 O

98,08g

A padronizao deve ser feita em triplicata, com massas conhecidas do padro em


torno de 0,1900g, dissolvidas em cerca de 50mL de gua destilada. Duas gotas de soluo
de azul de bromotimol devem ser usadas como indicador de ponto final.

MH SO
2

massa
(g)Na2B4O7 .10H2O . 1000
volumeH2SO4 (mL) 381,42
Equao 11.

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22

Observao: Quando o indicador utilizado for soluo de fenolftalena tem-se uma


soluo transparente para regio cida e rosa na regio alcalina.
Observao: As dissolues de NaOH e H2SO4 em gua so muito exotrmicas;
por isso necessrio ter muito cuidado com o aquecimento do recipiente. Deve-se
adicionar o cido gua e no o oposto, sempre trabalhando em capela, sob
resfriamento (banho de gua e gelo).

3.1.4. Determinao de alcalinidade Mtodo Potenciomtrico


(Ripley et al., 1986)
(a)

Calibrar o pHmetro com solues de padres de pH 7,00 e pH 4,00,


temperatura ambiente;

(b)

centrifugar a amostra por 3 minutos a 1500 rpm. Esta centrifugao pode ser
eliminada quando a amostra no apresentar teor considervel de slidos em
suspenso;

(c)

transferir 50,0mL

da amostra bruta ou centrifugada para copo de bquer de

100mL e medir o pH;


(d)

titular a amostra, sob agitao magntica, atravs da adio de soluo


padronizada de H2SO4 ~0,01N, at pH 5,75. Anotar o volume V 1; essa
alcalinidade denominada parcial, podendo ser aproximada alcalinidade a
bicarbonato, uma vez que compreende 80% de bicarbonato e 20% de sais de
cidos orgnicos volteis;

(e)

continuar a adio de soluo de H2SO4 at pH 4,3. Essa alcalinidade


denominada intermediria, podendo ser aproximada quela devida a sais de
cidos volteis. Anotar o volume V2; reservar esta amostra para determinao da
concentrao de cidos orgnicos;

(f)

ento, a alcalinidade total, V3 = V1 + V2;

(g)

calcular as alcalinidades parcial, intermediria, total e a alcalinidade a


bicarbonato pelas respectivas equaes (12), (13), (14) e (15):

Alcalinidade parcial (mg/L, como CaCO3):

A parcial

V1 xNH SO x50.000
2

VAmostra
Equao 12.

Alcalinidade intermediria (mg/L, como CaCO3):

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A int ermediria

23

V2 xNH SO x50.000
2

VAmostra
Equao 13.

Alcalinidade total (mg/L, como CaCO3):

A total

V3 xNH SO x50.000
2

VAmostra
Equao 14.

Alcalinidade a bicarbonato (mg/L, como CaCO3) (Chernicharo, 1997):

Abicarbonato Atotal 0,71x ( cidosOrg ni cos)


Equao 15.

Observao: O valor 50.000 o equivalente-grama do CaCO 3 em mg/L, cujo mol


de 100,0g.
3.1.5. Determinao de cidos volteis totais
(Dilallo & Albertson, 1961)
A alcalinidade utilizvel devida, principalmente, alcalinidade a bicarbonato,
geralmente na forma de bicarbonato de amnio. nions de cidos inorgnicos fracos como
fosfatos, sulfetos, tambm contribuem com alcalinidade.
Entretanto, os sais de sdio de cidos orgnicos gerados na degradao da matria
orgnica, sero tambm titulados como alcalinidade.
Utiliza-se a amostra titulada para determinao da alcalinidade total.
(a) reduzir o pH da amostra de 4,30 para 3,30 com H 2SO4 0,005M e ferver a amostra,
por 3 minutos, para remover o dixido de carbono da soluo;
(b) esfriar a amostra em banho de gua at a temperatura ambiente;
(c) adicionar amostra, soluo padronizada de NaOH ~0,005 M at pH 4,00 e
desprezar esse volume;
(d) titular a amostra (pH=4,00) com soluo padronizada de NaOH~0,005 M at pH
7,00 e anotar esse volume (V). Essa adio permitir, principalmente, a
neutralizao de cidos orgnicos. Esse procedimento permite calcular a
concentrao aproximada de cidos;
(e) calcular a concentrao de cidos, pela Equao (16):

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A cidosvolteis(mg/ L, comoHAc
)

24

VxNNaOHx60.000
...
VAmostra

Equao 16.

Observao: O valor 60000 o equivalente-grama do HAc (cido actico), em mg.


3.1.6. Clculo dos cidos volteis:
Caso 1: alcalinidade a cidos volteis (como HAc) > 216 mg/L
cidosVol
teis A cidosvolteisx1,5

Caso 2: alcalinidade a cidos volteis (como HAc) < 216 mg/L


cidosVol
teis A cidosvolteisx1,0

O fator de converso para determinar os cidos volteis presentes a partir da


alcalinidade depende da quantidade de cidos que titulada entre pH 4,0 e 7,0. O pH de
equilbrio de cidos orgnicos menor que 4,0, mas varivel com a concentrao de cidos.
Alm disso, o pH final de titulao de cidos fracos com base forte sempre maior que 7,00.
Logo, experimentalmente, Dilallo & Albertson (1961) observaram a relao 1,5 para a
alcalinidade superior a 216 mg/L e relao 1,0 para valores inferiores. A existncia de dois
fatores se deve influncia mais significativa da alcalinidade denominada bsica para
valores menores de alcalinidade total.

Observao: As concentraes do cido e da base envolvidos nesta metodologia


devem ser modificados para se adequarem ao tipo de efluente, de modo a se
consumir volumes adequados de cido e de base, evitando-se titulaes muito
prolongadas com solues muito diludas ou volumes muito pequenos de reagentes
mais concentrados, que comprometero os resultados.

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3.2.

25

Alcalinidade e cidos Volteis Totais Mtodo Condutimtrico

3.2.1. Conceitos Fundamentais


As determinaes de alcalinidades total e parcial realizadas atravs de mtodos
potenciomtricos ou adaptaes propostas por Dilallo & Orris (1961), Kapp (1984), Ripley &
Converse (1986), Jenkins et al. (1991), Anderson & Yang (1992) e Frayne & Campos (1995),
quantificam tambm parte dos cidos volteis, uma vez que a substncia utilizada na
titulao (cido forte) reage tanto com ons bicarbonato, quanto com nions dos cidos
orgnicos gerados durante a degradao anaerbia. Resultados determinados atravs de
mtodos titulomtricos com cido forte e cromatogrfico so relativamente diferentes.
O fato do cido carbnico ser diprotonado e o bicarbonato de sdio, um sal formado
pela neutralizao de apenas um de seus prtons, confere a natureza anftera ao on
bicarbonato, explorada pela metodologia condutimtrica. importante ressaltar ainda que
todos os cidos orgnicos usados para monitorar os processos anaerbios so cidos
monoprticos, no geradores de sais anfteros, cujos nions no reagem com ons OH -.
Sendo assim, a quantificao da concentrao de ons bicarbonato em soluo poder
ocorrer pela adio controlada de soluo de concentrao conhecida de base forte.
A condutividade k uma medida da habilidade de uma soluo aquosa em conduzir
corrente eltrica, relacionada com a presena de ons, suas concentraes, valncias e
mobilidades, bem como com a temperatura da soluo. Os valores de Condutncia
Equivalente (0), em MHO.cm2/equivalente, em gua a 25C, de alguns ons envolvidos na
determinao da alcalinidade real de amostras de reatores anaerbios, so os seguintes:
HCO3- (44,5); CO32- (72); H2PO4- (33); HPO42- (57); OH- (198,6).
A adio de soluo de NaOH em amostras, transformando ons HCO 3- em CO32- e
H2PO4- e HPO42- em PO43-, entre outros, e, posteriormente, em excesso, responsvel pela
variao da condutividade da soluo, tornando possvel a quantificao.
A quantificao de alcalinidade total, por meio da titulao com soluo padronizada
de

H2SO4, sinalizada

por medidas

de

condutividade

eltrica da

soluo,

permite

determinaes mais exatas de pontos finais, independentes de pH pr-estabelecidos, que


no devem ser coincidentes, para diferentes amostras, e que dificilmente so realmente
atingidos no final da titulao.
O mtodo baseia-se, ento, no acompanhamento da condutividade eltrica de duas
amostras durante a adio de soluo padronizada de hidrxido de sdio (alcalinidade
parcial ou a bicarbonato) ou de cido sulfrico ( alcalinidade total).
O mtodo proposto pode fornecer valores muito mais prximos de alcalinidade real
de reatores anaerbios do que os mtodos que utilizam titulaes com cidos fortes.
Atravs desta metodologia, tambm titula-se outras espcies geradores de alcalinidade,
como ons HPO42-, H2PO4-, silicatos, HS-,S2-, presentes em guas residurias. Alm destes, o
on amnio, quando presente, tambm ser titulado, antes mesmo do on bicarbonato,
gerando uma reta com inclinao especfica, que pode ser usada para quantifica-lo.
Uma reao que poderia interferir, quando uma base forte usada como titulante,
seria a reao com CO2 (g) presente na amostra. Porm, CO 2 (g) pode ser eliminado, no por
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26

aquecimento, pois a concentrao do on HCO 3- tambm seria afetada, mas em banho ultrasnico que, aplicado amostra, expulsa os gases nela dissolvidos.
ons NH4+, se presentes, interferem positivamente no resultado, gerando uma reta
especfica para a reao:

NH4 OH NH3 H2 O
que

precede

formao

de

carbonato,

permitindo,

em

uma

mesma

titulao,

as

determinaes de N-amoniacal e de alcalinidade devida a bicarbonato.


A Figura 2 ilustra o comportamento da condutividade corrigida de amostra durante a
adio da soluo de hidrxido de sdio, observado durante a titulao de amostra em
ausncia de ons amnio. Observa-se claramente que a curva da condutividade eltrica
apresenta duas inclinaes distintas, representadas, ento, separadamente atravs de duas
retas independentes.

Figura 1. Variao da condutividade corrigida da amostra contendo bicarbonato, durante


adio de soluo de NaOH.
A Reta 1 representa a variao da condutividade eltrica da amostra, obtida,
principalmente, pela reao entre os ons HCO3- e OH-, representada pela seguinte reao:

Na HCO3 Na OH 2Na CO23 H2 O

Equao

17.
A Reta 2 representa a variao da condutividade eltrica da soluo da amostra, em
presena de excesso crescente dos ons Na+ e OH-.
Igualando-se as duas equaes das retas, determina-se o ponto onde ocorre a
mudana de inclinao, ou seja, onde as duas retas se encontram, representando o volume

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27

da soluo de hidrxido de sdio necessrio para reagir com todo o bicarbonato presente no
meio.
Assim, a partir do volume e da concentrao molar da soluo de hidrxido de sdio
e volume de amostra, determina-se a alcalinidade real a partir da seguinte equao:

mgHCO3 61.000x

NNaOHxMNaOH
Vamostra

Equao 18.
Na qual:
VNaOH = Volume gasto para atingir o ponto final de titulao.
MNaOH = Concentrao molar da soluo.
Vamostra = Volume inicial da amostra (mL).
Para a determinao da alcalinidade total, realiza-se procedimentos idnticos aos
anteriores, utilizando-se, entretanto, soluo padronizada de cido sulfrico. Durante a
adio da soluo de cido sulfrico, a condutividade corrigida da amostra pode apresentar
o comportamento mostrado na Figura 1.5.

Figura 2. Variao da condutividade corrigida da amostra durante adio de soluo de


H2SO4.
Os dois trechos iniciais na reta de calibrao esto relacionados s reaes do cido
sulfrico com: bicarbonato de sdio (Reta 1) e acetato de sdio (Reta 2), de acordo com as
seguintes reaes:

2 Na 2 HCO3 H HSO4 2 Na 2CO2 H 2 O SO42


2 Na 2CH 3 COO H HSO4 2 Na 2CH 3 COO SO42

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Equao 19.
Equao 20.

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28

Assim, o volume de soluo de cido sulfrico que reagiu com todo bicarbonato e
acetato presentes representado pelo encontro das Retas 2 e 3, esta ltima, gerada pelo
excesso de H2SO4

adicionado na amostra. Deve-se salientar que, em ausncia de

bicarbonato ou de acetato , a curva de condutividade pode apresentar comportamento


semelhante ao da Figura 3. Nessa condio, o volume de cido sulfrico determinado pelo
encontro das Retas 1 e 2, como citado anteriormente.
A concentrao da alcalinidade total, expressa em mg/L de HCO 3-1, calculada a
partir da seguinte equao:

mg/L alcalinidade total, ( HCO3 ) 122.000 x

V H 2 SO 4 xM H 2 SO 4
Vamostra

Equao 21.
Na qual:
VH2SO4 = Volume gasto para atingir o ponto final de titulao.
MH2SO4 = Concentrao molar da soluo.
Vamostra = Volume inicial da amostra (mL).
A diferena entre a alcalinidade a bicarbonato e a alcalinidade total fornece a
alcalinidade devida aos nions de cidos volteis.
Para convert-la em mg/L de acetato, o valor em mg/L de bicarbonato deve ser
multiplicado pela razo 59/61.
3.2.2. Material
Aparelho de ultra-som
Agitador magntico
Balana analtica (preciso 0,0001 g)
Buretas digitais de 50,0 mL ou buretas de 10,0 e 50,0 mL
Centrfuga
Condutivmetro
Dessecador com slica anidra
Estufa a 120C
Medidor de pH (preciso 0,01)
Pipeta volumtrica de 25,0 mL
Balo volumtrico de 100,0 mL
Barra magntica de 6x20 ou 7x25 mm
Copo de Bquer de 150 mL
cido Sulfrico H2SO4 concentrado 96-97% P. A.
Hidrxido de Sdio NaOH P. A. (em lentilhas)
Ftalato cido de Potssio (KPH) C6H4(COOH)COOK (M.M. 202,22 g/Mol) P. A.
Etanol P. A.

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29

Fenolftalena [C6H4COO.C(C6H4OH)2] P. A.
3.2.3. Determinao da alcalinidade real
(Moraes et al., 2001)
A amostra (25,0 mL), contida em copo de bquer, deve ser submetida ao ultra-som
durante 10 minutos. Aps este perodo, titula-se com soluo padronizada de NaOH (0,02
M), acompanhando-se a variao da condutividade eltrica. A titulao deve ser processada
at garantirem-se vrias adies em excesso de soluo de hidrxido de sdio. As diluies
da amostra, provocadas pela adio da soluo titulante, exigem que sejam feitas correes
dos valores de condutividadade, a partir da seguinte equao:

Condutivid
adecorrigida Condutivid
ademedida
x

Vamostra Vtitulante
Vamostra

Equao 22
Na qual:
Vamostra = Volume inicial da amostra (mL).
Vtitulante = Volume adicionado de titulante (mL).
A partir dos valores determinados experimentalmente (por exemplo, Tabela 3),
elabora-se um grfico (Figura 4), lanando-se os volumes adicionados de soluo de no,
contra os valores corrigidos da condutividade eltrica da amostra.
Tabela 3. Volumes adicionados de NaOH e valores de condutividades medida e corrigida
durante titulao de 25,0 mL de amostra de efluente de reator anaerbio com soluo de
0,020 M de NaOH.
Volume de NaOH
(mL)
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
3,50
4,00
4,50
5,00
5,25
5,50
5,75
6,00
6,25
6,50
6,75
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Condutividade
medida
(mS/cm)
0,400
0,436
0,480
0,520
0,558
0,598
0,636
0,676
0,715
0,756
0,797
0,819
0,842
0,865
0,888
0,913
0,936
0,962

Condutividade
corrigida
(mS/cm)
0,400
0,445
0,499
0,551
0,603
0,658
0,712
0,771
0,829
0,892
0,956
0,991
1,027
1,064
1,101
1,141
1,179
1,222

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7,75
8,50
9,50
10,00

1,059
1,133
1,227
1,274

30

1,387
1,518
1,693
1,784

Figura 3. Variao da condutividade corrigida da amostra durante adio de soluo de


NaOH.
Verifica-se, a partir da Figura 4, que duas retas compem o grfico. Sendo assim,
elaboram-se dois grficos, considerando-se as duas direes obtidas (Figura 5 (a) e (b)).

(a)

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(b)

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31

Figura 4. Retas obtidas de acordo com as diferentes inclinaes observadas na variao da


condutividade corrigida da amostra durante a adio de soluo de NaOH.
Igualando-se as duas equaes (y1 = 0,114x + 0,3826 e y2 = 0,1697x + 0,0802),
encontramos o ponto de interseco, valor que indica o volume da soluo padronizada de
NaOH usado para atingir o ponto final de titulao. Assim, para o exemplo, o volume de
NaOH foi de 5,43 mL.
A alcalinidade da soluo pode ser determinada a partir da seguinte equao:

V xM
mgHCO-3 /L 61.000x NaOH NAOH
Vamostra
Equao 23
Na qual:
VNaOH = Volume gasto para atingir o ponto final de titulao.
MNaOH = Concentrao molar da soluo.
Vamostra = Volume inicial da amostra (mL).
Assim,

5,43x0,02
mgHCO-3 /L 61.000x
265mgHCO3 / L
25
Para transformar-se a alcalinidade a bicarbonato em alcalinidade a CaCO 3, deve-se
dividir o valor obtido por 1,22.
3.2.4. Determinao da alcalinidade total
(Moraes et al., 2001)
A determinao da alcalinidade total realizada com os mesmos procedimentos
realizados no Item 13.2, utilizando-se soluo de cido sulfrico. A partir da determinao
do volume de cido sulfrico gasto para atingir o ponto final de titulao, calcula-se a
alcalinidade total a partir da seguinte equao:

V
xM
mg/L (HCO-3 ) 122.000x H2SO4 H2SO4
Vamostra
Equao 24
Na qual:
VH2SO4 = Volume gasto para atingir o ponto final de titulao (mL).
MH2SO4 = Concentrao molar da soluo (M).
Vamostra = Volume inicial da amostra (mL).

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32

3.2.5. Determinao da concentrao de cidos volteis


(Moraes et al., 2001)
A partir da alcalinidade real e alcalinidade total, a concentrao de cidos volteis,
expressa como cido actico, determinada a partir da seguinte equao:

V
xM
mg/L (HCO-3 ) 122.000x H2SO4 H2SO4
Vamostra
Equao 25

mg/L cido actico = 60000

VH2SO4 MH2SO4 VNaOH MNaOH


Vamostra

???????/

(8.4)

3.2.6. Preparo e padronizao das solues de hidrxido de sdio e de cido


sulfrico
As solues utilizadas devem ser preparadas como descrito anteriormente nos itens
3.1.3.

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4. ALCALINIDADE
4.1.

33

A BICARBONATO DE RESERVA

Conceitos Funamentais

Alcalinidade de reserva definida por Speece (1996) como sendo a concentrao de


bicarbonato disponvel para suportar a degradao anaerbia da matria orgnica restante
no processo. O operador deve estar interessado na alcalinidade de reserva antes que o pH
do sistema alcance valores menores que 6,5. Assim, o conceito de alcalinidade de reserva
representa o aumento na concentrao de cidos volteis que pode ser tolerado pelo
sistema antes que a queda do valor do pH ocasione a interrupo do processo, pela
acidificao do meio. A alcalinidade de reserva indica somente a alcalinidade a bicarbonato,
j que a alcalinidade produzida por sais de cidos orgnicos no promove a neutralizao
dos cidos volteis gerados.
O mtodo proposto por Speece (1996) para determinar a concentrao de
bicarbonato de reserva consiste na titulao de 50,0 mL da amostra com soluo
padronizada de cido actico (5,0g/L) at o valor mnimo de pH de 6,5. Cada adio de 1,0
mL de cido actico corresponde ao aumento de 100 mg/L de cidos volteis que pode ser
tolerado pelo sistema antes, que o pH atinja valor indesejado.
4.2.

Material

Agitador magntico
Buretas digitais de 50 mL ou Buretas de 10 e 25 mL
Medidor de pH (preciso 0,01)
Barra magntica de 6x20 ou 7x25 mm
Bquer de 100 mL
cido actico C2H3OOH P. A.
4.3.

Preparo de soluo padro de cido actico (5 g/L)

(a) Transferir 4,96 mL de cido actico (99,5%; d=106g/mL; C=1,007g de cido


actico/mL) para balo volumtrico contendo certa quantidade de gua
destilada;
(b) completar o volume para 1000 mL com gua destilada.
4.4.

Determinao da concentrao da alcalinidade a bicarbonato de

reserva
(a) Transferir 50 mL de amostra para Becker de 100 mL;
(b) titular com soluo padro de cido actico (5 g/L) at atingir pH de 6,5 a 6,2;
(c) determinar a concentrao de bicarbonato na amotra a partir da seguinte
reao:

HCO3 CH3 COOH H2 CO3 CH3 COONa

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considerando que 61,0g de bicarbonato reagem com 60,0g de cido actico.

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5. DETERMINAO

DE

35

CIDOS VOLTEIS MTODO CROMATOGRFICO


REFERNCIA?

5.1.

Conceitos Fundamentais

A cromatografia pode ser conceituada como um mtodo fsico-qumico de separao,


atravs do qual os constituintes da amostra a serem separados so distribudos entre duas
fases: uma estacionria, de grande rea superficial e outra mvel, um fluido inerte que
percola atravs da primeira (Lanas, 1993). A cromatografia baseia-se na partio dos
constituintes da amostra entre a fase mvel (FM), lquida ou gasosa, e a fase estacionria
(FE), lquida ou slida.
Em termos gerais, a cromatografia pode ser planar (em camada delgada, geralmente
em uma placa de vidro ou de alumnio), ou em coluna. De acordo com a fase mvel usada, a
cromatografia pode ser classificada como lquida: quando a fase mvel um lquido,
gasosa: quando a fase mvel um gs ou cromatografia com fluido supercrtico quando se
usa um fluido em estado supercrtico como fase mvel (Lanas, 1993). Utiliza-se tambm a
denominao cromatografia preparativa, quando o objetivo a purificao de uma
quantidade de amostra a ser analisada ( possvel coletar as fraes da amostra separadas
em seus componentes individuais), ou cromatografia analtica, quando o objetivo
determinar e quantificar as substncias presentes.
De modo geral, o processo cromatogrfico realizado introduzindo-se a amostra no
topo da coluna cromatogrfica atravs do injetor, onde a fase mvel flui continuamente,
com vazo ou presso constante. Com o passar da fase mvel, as substncias migram
dentro da coluna, de acordo com interaes fsico-qumicas com a fase mvel e a fase
estacionria, o que promove a separao dos componentes da amostra. Na sada da coluna,
ocorre a deteco de cada substncia isolada. A escolha do detector depende da substncia
em questo e das caractersticas de sua molcula.

O detector transmite para um

registrador um sinal grfico, no qual cada pico corresponde a uma substncia e a sua rea
correspondente proporcional sua concentrao ou sua massa. Esse sinal emitido por
um integrador ou uma estao de trabalho. O grfico obtido chamado cromatograma. A
Figura 6 mostra um diagrama de blocos de um cromatgrafo genrico (Ciola, 1985).

Gs
pressurizad

Injetor

Forno com Coluna Cromatogrfica

Detector

Registrador

o ou lquido

Figura 4. Diagrama de blocos de um cromatgrafo genrico.


A introduo da amostra deve ser da forma mais rpida possvel, evitando qualquer
perda, no excedendo a capacidade da coluna nem a faixa de linearidade do detector. No
caso de cromatografia gasosa, a temperatura do injetor deve ser definida de tal forma a
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evitar qualquer condensao de amostras gasosas e garantir a completa volatilizao de


amostras lquidas.
As colunas para cromatografia lquida tm comprimentos que variam de 8 a 30cm de
comprimento, por 4mm, em mdia, de dimetro interno com 3 ou 5m de tamanho de
partcula e existem tambm as colunas capilares, com dimetros muito pequenos, mas so
pouco usadas.
As colunas de cromatografia gasosa podem ser empacotadas ou capilares. As
colunas empacotadas so, geralmente, de ao inox ou vidro e possuem dimetro interno de
1/8 , com 2 e 4 m, em mdia, de comprimento. As colunas capilares so de slica fundida e
podem ter dimetros internos de 0,25; 0,30 e 0,53 mm (estas ltimas so chamadas de
colunas megabore), com comprimentos que podem variar de 25, 30, 50, 60 e 100 m,
sendo mais comuns os de 25 e 30 m.
Os modos de injeo em colunas capilares so: com diviso da amostra (split), sem
diviso da amostra (splitless), on-column (amostra injetada diretamente na coluna),
direta e com temperatura programada.
As fases estacionrias empregadas na cromatografia podem ser classificadas de
acordo com os seguintes tipos:
(a) materiais adsorventes sintticos de grande rea superficial, com granulometria
apropriada;
(b) substncias orgnicas ligadas quimicamente superfcie de slica-gel de grande
rea superficial;
(c) polmeros porosos obtidos de monmeros bi e polifuncionais;
(d) lquidos de baixssima presso de vapor temperatura de trabalho.
Quando a fase estacionria for slida, a cromatografia envolver fenmenos de
adsoro no mecanismo de separao, enquanto o fenmeno ser sempre de partio ao
ser empregada uma fase estacionria lquida.
A composio da fase mvel lquida tem enorme influncia na separao dos
compostos, porm, a da fase gasosa, pouco interfere, pois usa-se gases inertes como
nitrognio, hidrognio, argnio ou hlio como gs de arraste.
Pode-se dizer que a separao cromatogrfica ocorre devido a uma seqncia de
estgios de adsorso ou partio dos constituintes da amostra entre duas fases imiscveis
(mvel e estacionria); em alguns casos a separao ocorre devido aos diferentes pontos de
ebulio dos componentes presentes na amostra.
A coluna cromatogrfica deve ser eficiente e seletiva, ou seja, deve existir diferenas
entre os coeficientes de partio ou adsorso das substncias de interesse. As colunas so
classificadas em:
(a) empacotadas: um filme da fase estacionria lquida depositado sobre um
material inerte de granulometria, porosidade, rea superficial e natureza de
superfcie convenientes. Este material empacotado, atravs de tcnicas
especiais, em tubos de comprimento e dimetro otimizados para a anlise da
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amostra de interesse (material: ao inoxidvel, vidro , slica ou teflon; dimetro


interno: 2 a 4 mm; comprimento: 1 a 4 m; vazo da fase mvel: 25 a 60 mL/min;
temperaturas de operao: 25-350oC, dependendo da fase estacionria);
(b) capilares: so fabricadas depositando-se um filme finssimo de espessura 0,1 a 5
m da fase estacionria nas paredes de um tubo capilar (material: vidro ou slica
fundida; dimetro interno: 0,1 a 0,50 mm; comprimento: 10, 17, 25, 30, 50, 60 e
100 m; vazo da fase mvel: 0,5 a 4 mL/min; temperatura de operao: 25350oC). As eficincias das colunas capilares so de diversas ordens superiores s
das colunas empacotadas.
JANJA Geralmente as colunas cromatogrficas so operadas isotermicamente ou por
programao linear de temperatura. A ordem de eluio na coluna cromatogrfica ser da
ordem do ponto de ebulio das substncias analisadas, o qual influenciado por trs foras
de interao ou de coeso que determinam os valores da volatilidade relativa dos solutos,
dos coeficientes de partio e, portanto, as separaes na coluna cromatogrfica, quais
sejam, de orientao (interaes dipolo-dipolo), de induo e de disperso, alm do efeito
das pontes de hidrognio. Esta ordem de eluio tambm pode depender das diferenas de
polaridade das substncias presentes na amostra, devido interao dos componentes da
amostra com a fase estacionria e/ou fase mvel (quando se trabalha com cromatografia
lquida) do sistema cromatogrfico usado. O condicionamento da coluna, em cromatografia
gasosa, realizado operando-a por um determinado tempo a uma temperatura em torno de
50oC abaixo da temperatura mxima admitida pela sua fase estacionria (quando ela
usada pela primeira vez) ou em torno de 20 oC acima da temperatura mxima de trabalho),
quando ela j est em uso.
O detector de um cromatgrafo a gs um dispositivo que transforma em sinal
eltrico conveniente a variao da composio do gs de arraste com um componente da
amostra, ao sair da coluna cromatogrfica. O sinal eltrico transformado no sinal grfico
que tem o formato de um pico, por um registrador ou um computador, e a rea
correspondente a cada um dos picos integrada, pois est diretamente relacionada com a
quantidade da substncia, sendo usada para fins de quantificao. Como caracterstica de
resposta, o detector deve apresentar sensibilidade amostra a ser analisada, seletividade
aos componentes de interesse e uma satisfatria faixa dinmica, ou seja, a faixa de
concentrao na qual o detector pode fornecer valores lineares acurados. Outra
caracterstica importante refere-se linearidade da resposta do detector em funo da
quantidade injetada, conhecendo-se as quantidades mnima e mxima que podem ser
injetadas. Os principais tipos de detectores so:
(a) detector de condutividade trmica (TCD): baseia-se na propriedade de os corpos
quentes perderem calor com velocidades que dependem da condutividade
trmica e da composio dos gases envolventes. Nos detectores atuais
empregam-se como corpos quentes (sensores) dois conjuntos de filamentos de
Pt, W, Ni e W-Pt, aquecidos por corrente eltrica estabilizada, formando um
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circuito eltrico denominado ponte de Wheatstone, atravs dos quais fluem duas
correntes de gs de arraste. Quando a amostra injetada, o gs de arraste,
conduzindo os compostos separados, passa sobre um dos conjuntos de
filamentos, e no outro, o gs de arraste puro, proveniente da coluna de
referncia. Logo, com o gs de arraste puro fluindo atravs de um dos conjuntos
do detector, a perda trmica constante, como tambm a temperatura do
filamento; quando a composio do gs de arraste contendo os componentes da
amostra alterada, causa uma correspondente mudana na resistncia e altera
o equilbrio da ponte de Wheatstone dos termistores;
(b) detector de ionizao de chama (FID): baseia-se na propriedade de ser a
condutividade eltrica de um gs diretamente proporcional sua concentrao
de partculas carregadas. No caso da ionizao de chama, o gs de arraste
proveniente da coluna queimado numa chama, em presena de ar e H 2; a
chama produzida submetida a um campo eltrico. Durante a combusto de
compostos orgnicos contendo hidrognio formam-se radicais livres que sero
ionizados pelo campo eltrico, aumentando a corrente que passa entre os
eletrodos;
(c) detector de captura de eltrons (ECD): do tipo ionizao, cuja fonte um
emissor de eltrons, havendo alterao da corrente quando da mudana do gs
de arraste puro em relao a uma substncia que funcione como aceptor de
eltrons;
(d) detector de fotomtrico de chama;
(e) detector termoinico;
(f) detector de fotoionizao;
(g) detector por absoro no infravermelho.
Os detectores podem ser classificados em:
(a) integrais: fornecem uma resposta proporcional massa total dos componentes
na zona eluda;
(b) diferenciais: fornecem uma resposta proporcional concentrao (detector de
condutividade trmica) ou velocidade de fluxo da massa do componente eludo
(detector de ionizao de chama).
Os detectores so classificados quanto sua capacidade de deteco em:
(a) universais:

respondem

quase

todo

tipo

de

substncia

(detector

de

condutividade trmica);
(b) seletivos: respondem a certas classes de substncias (detector de ionizao de
chama apenas detecta substncias orgnicas que formam ons estveis na
presena da chama);

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(c) especficos: por exemplo, detector de captura de eltrons, que usado para
substncias que

contenham tomos bastante eletronegativos em suas

molculas (pesticidas clorados, por exemplo).


As fases mveis so, por definio, fluidos e, de acordo com a sua natureza fsica,
classificam o tipo de cromatografia: (a) em fase gasosa quando este for um gs e (b) em
fase lquida quando este for um lquido. Na cromatografia gasosa capilar, alm da fase
mvel padro utiliza-se o gs auxiliar (make-up), geralmente o mesmo da fase mvel
(tambm inerte), o qual injetado diretamente na sada da coluna e cujos objetivos so
carrear o material eludo da coluna para o detector (em colunas capilares o fluxo dentro da
coluna bastante baixo), otimizando a sua sensibilidade e, tambm, proporcionar a limpeza
no detector. Com relao ao TCD, as condutividades trmicas dos gases de arraste, relativas
ao He, so: N2 = 0,17, He = 1,00 e H 2 = 1,28. Logo, quando se usa TCD, o melhor gs de
arraste H2. O gs de arraste deve ser de pureza acentuada (99,999%) e inerte e, mesmo
assim, recomenda-se que seja filtrado por peneira molecular ou filtro de hidrocarboneto
(carvo ativo) para aumentar as vidas teis da coluna e detector, principalmente com
relao umidade (H2O) e ao oxignio, dependendo da coluna. A regenerao desses filtros
deve ser realizada periodicamente.
Os vrios itens de um cromatgrafo a gs podem ser comentados da seguinte forma:
(a) fluxo do gs de arraste: hidrognio, nitrognio, argnio e hlio so os gases mais
empregados como fase mvel em cromatografia gasosa. So fornecidos
pressurizados em torpedos de ao (120-200 atm ou 2000 psi), sendo necessria
a reduo da presso a valores convenientes (1-5 atm ou 20-40 psi). Na
operao cromatogrfica, dispositivos de controle de fluxo adaptam-no ao
intervalo entre 0,5-80 mL/min, dependendo da coluna a ser utilizada;
(b) sistema de introduo da amostra: as amostras lquidas e gasosas podem ser
introduzidas atravs do uso de microseringas ou seringas e vlvulas de
amostragem.O injetor possui um divisor de amostra (utilizvel ou no - split ou
splitless), a partir do qual parte da amostra encaminhada para a coluna e
parte para a atmosfera . A diviso adequada quando colunas capilares so
usadas e/ou quando as solues a serem analisadas possuem alta concentrao
dos analitos em questo;
(c) sistema de deteco e aquisio de dados: os detectores usados em
cromatografia so projetados para detectar as substncias carregadas pelo gs
de arraste. O sinal proveniente do material detectado , com o auxlio de
amplificadores, transformado em um sinal grfico chamado cromatograma. As
reas dos picos so determinadas com o auxlio de integrador ou computador.
Os principais parmetros cromatogrficos so: coeficiente de adsorso ou partio,
tempo de reteno, resoluo da coluna, seletividade e eficincia.

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A anlise quantitativa por cromatografia , tomados os necessrios cuidados, uma


das tcnicas mais precisas e exatas da qumica analtica, que permite quantificar as
substncias das seguintes maneiras:
(a) Anlise por padronizao interna: As calibraes com padro interno so
construdas

preparando-se

solues

com

diferentes

concentraes

das

substncias a serem quantificadas, s quais se adiciona volume idntico de


soluo de padro interno, sempre com a mesma concentrao. O padro interno
uma substncia com estrutura qumica parecida com a da substncia a ser
analisada; no deve se decompor durante a anlise; no deve interferir na
anlise e deve ter um tempo de reteno prximo ao das substncias a serem
analisadas (pode-se usar mais de um padro interno). Para quantificar, ao invs
de se comparar reas dos padres com reas das substncas a serem
analisadas, comparam-se Fatores de Resposta (FR), calculados pela razo entre
a rea do pico da substncia a ser quantificada e a rea do pico do padro
interno, em uma mesma injeo. Para cada substncia, a reta de calibrao
feita plotando-s FR no eixo y e as concentraes no eixo x (sem passar pela
origem, pois quando no se detecta a substncia no significa que ela no est
presente e sim, que o mtodo utilizado no a detecta). Quando no se detecta
uma substncia, entende-se que sua concentrao menor que a do ponto mais
diludo da reta de calibrao construda ou pode-se calcular o limite de deteco
a partir da seguinte equao: LOD pasta pblica
(b) Anlise por padronizao externa: A tcnica envolve os seguintes passos:
preparo de solues para calibrao contendo concentraes crescentes da
substncia a ser

quantificada (o padro deve ser de alta pureza ou de

composio conhecida).
injetar no cromatgrafo volumes exatamente iguais aos dos padres de
concentraes diferentes, podendo-se utilizar vlvulas de amostragem;
determinar as reas dos picos de interesse;
fazer um

grfico relacionando

as reas

dos picos

(eixo

y) com as

concentraes (ou massa) das solues de padres injetadas (eixo x).


Recomendam-se operaes na faixa linear;
injetar exatamente o mesmo volume da amostra de interesse;
determinar a rea dos picos de interesse;
para o trecho linear, pode-se determinar o fator que fornece a rea por
unidade de concentrao ou massa. Recomenda-se a utilizao de, no mnimo,
cinco concentraes diferentes.
5.2.

Material

Balana analtica (preciso 0,0001 g)


Balo volumtrico de 10,0 mL
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41

Cromatgrafo gasoso com a seguinte configurao:


Coluna capilar INNOWAX (HP, Part Number 19091N-133) ou DB-WAX (Agilent
Technologies, J&W, Part Number 122-7032) ou similar, com 30 m de
comprimento, 0,25 mm de dimetro interno e 0,25 m de espessura de filme.
Injetor capilar.
Detector de ionizao de chama (FID).
Estao de trabalho (computador + software + impressora) ou integrador.
Sistema

de

gases

especiais

(torpedos,

tubulao

de

cobre,

vlvulas

reguladoras) para uso em cromatografia (N 2, H2 e Ar Sinttico todos os gases ultra


puros).
Pipetadores automticos de 1000L, 5,00 mL e 10,0 mL.
Seringa para anlise de lquido por cromatografia em fase gasosa de 10,0 L.
As condies operacionais do cromatgrafo so as seguintes:
(a) Injetor:

Temperatura do injetor: 250oC

Modo: split

Gs de arraste: H2

Razo split: 20:1

(b) Coluna:

Gs de arraste: H2 ou N2

Vazo do gs de arraste na coluna de 30m x 0,25mm (CNTP): 2,0 mL/min

Condio de fluxo: constante

(c) Forno:

Temperatura: 100oC (3 min), subindo a 5C/min, at 180C (5 min)

Post-run: 210oC, 5 minutos.

(d) Detector:

Gases de queima: H2 e Ar Sinttico

Vazo de H2: 30,0 mL/min

Vazo de Ar Sinttico: 300,0 mL/min

Temperatura: 300oC

Gs de make-up: N2

Vazo do gs de make-up : 33 mL/min

(e) Amostra:

5.3.

Volume de amostra injetado: 1,0 L


Preparo da soluo estoque de calibrao

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42

Preparar uma soluo estoque (100 mL, por exemplo, em balo volumtrico) na
concentrao em torno de 3,00g/L para todos os compostos. Para isso, mede-se as
quantidades dos cidos volteis com pipeta graduada ou pesando-se, em um balo
volumtrico previamente tarado, anota-se o valor exato e calcula-se a concentrao exata
de cada cido adicionado (Tabela 4).

Tabela 4. Caractersticas e quantidades dos cidos volteis para anlise cromatogrfica.


Composto

Frmula

cido Actico
cido Propinico
cido Iso-Butrico
cido Butrico
cido Iso-Valrico (ou IsoPentanico)
cido Valrico (ou Pentanico)
cido Caprico (ou Hexanico)
cido Crotnico

C2H3OOH
C3H5OOH
C4H7OOH
C4H7OOH

Massa
Molecular
(g/mol)
60,05
74,08
88,11
88,11

Concentra
Quantidade
o nominal nominal (p/ 100
(g/L)
mL)
3,0
0,3000
3,0
0,3000
3,0
0,3000
3,0
0,3000

C5H9OOH

102,13

3,0

0,3000

C5H9OOH
C6H11OOH
C4H5OOH

102,13
116,16
86,09

3,0
3,0
3,0

0,3000
0,3000
0,3000

Quanto ao cido Butrico (HBut, massa molecular de 88,11 g/mol), quando se dispe
do Butirato de Sdio (NaBut, massa molecular de 110,09 g/mol), deve-se considerar a
seguinte reao de equilbrio para o clculo da quantidade nominal a ser adicionada em
100 mL, a qual de 0,3748.
NaBut H2 O HBut NaOH

Equao
26

110,09 g

88,11 g

0,3748 g

0,3000 g

A soluo de calibrao deve ser composta pelos seguintes compostos (se houver
disponibilidade de outros padres, cujos tempos de reteno no sejam iguais aos destes
cidos o que se determina ao injet-los puros nas mesmas condies cromatogrficas
usadas - e que se deseja analisar, deve-se coloc-los na mesma soluo de calibrao),
sendo o valor entre parnteses o tempo de reteno de cada um, havendo uma tolerncia
de 5% definida no software para a variao deste tempo:
Composto
cido actico
cido propinico
cido iso-butrico
cido butrico
cido iso-valrico
cido valrico
cido crotnico (padro
interno)
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Tempo de Reteno
(min)
4,2
5,6
6,1
7,2
8,0
9,4
10,1

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cido caprico

43

11,5

Para se preparar a soluo, deve-se colocar 2 ou 3 prolas de NaOH no balo


volumtrico em que se encontram os cidos, completar o volume do mesmo e aferir o seu
menisco com gua ultrapurificada, aps completa dissoluo das prolas de NaOH, uma vez
que a maioria destes cidos no solvel em gua e, tambm, para o deslocamento do
equilbrio do cido orgnico fraco (esquematizado a seguir) para a forma de sal, a qual no
voltil, ou seja, no ocorre a perda do composto por volatilizao. Esta a soluo estoque,
a partir da qual se faz as diluies com as diferentes concentraes necessrias para a
curva de calibrao. A soluo estoque dever ser guardada em vrios frascos diferentes, os
quais devem ser lacrados e congelados. As solues com diferentes concentraes devem
ser preparadas, usando o prprio afluente do reator, sem a adio dos cidos ou o meio de
cultivo usado para alimentar o reator a partir do qual as amostras para analisar os cidos
so originadas, a fim de que a soluo de padres seja o mais parecida possvel com a
amostra.

HAc H Ac

Equao
27

Obs.:

(1)

A adio de cido (H+) desloca o equilbrio para a forma de cido (ou voltil ou no

ionizada);
(2)

A adio de base (OH ) desloca o equilbrio para a forma de sal (ou no voltil ou

ionizada).
O uso do padro interno permite que se faa a correo de algum desvio que ocorra
na anlise, pois este adicionado amostra, ou seja, a amostra analisada no contm (e
no deve conter) este cido. Alm disso, o procedimento de calibrao com padro interno
elimina a desvantagem do procedimento com padro externo pela adio de uma
quantidade conhecida de um componente que serve como fator de normalizao. O
composto usado como padro interno deve ser similar aos compostos analisados em ambos
os

aspectos,

propriedades

qumicas

tempo

de

reteno,

mas

deve

ser

cromatograficamente distingvel. Algumas vantagens dessa tcnica so: variao do


tamanho da amostra no crucial, as flutuaes do equipamento so compensadas pelo
padro

interno,

os

efeitos

da

preparao

da

amostra

so

minimizados

se

comportamento qumico do padro interno e dos compostos analisados so similares. Como


desvantagem, tem-se que o padro interno deve ser adicionado de forma precisa em todas
as amostras.
O intervalo de valores da curva de calibrao deve ser determinado a partir dos
valores esperados da amostra a ser analisada, podendo-se sugerir o seguinte intervalo
mostrado na Tabela 5 Vale ressaltar que as amostras devem ser analisadas em duplicata.

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44

Tabela 5. Relao das concentraes e alquotas da soluo-me para a curva de calibrao.


Concentrao
(mg/L)
3,0
6,0
9,0
12,0
15,0
18,0
21,0
24,0
36,0
60,0
90,0
180,0

Alquota da soluo me (L)


para balo volumtrico de 100
mL
100
200
300
400
500
600
700
800
1200
2000
3000
6000

Ainda com relao curva de calibrao, o valor mnimo da curva deve ser
determinado pelo valor mnimo no qual o detector sensvel ao composto, ou seja, introduzse uma quantidade mnima a partir do qual o detector no consegue medir com exatido.
Outra forma de determinar o Limite de Deteco atravs de uma planilha de clculos, que
envolve as concentraes tericas dos padres utilizados nas curvas de calibrao, os
respectivos fatores de resposta, as concentraes obtidas, a partir dos fatores de resposta,
pela equao da reta de calibrao (concentraes tericas) e os coeficientes angular e
linear da equao da reta de calibrao (MILLER & MILLER, 1984), de acordo com a equao
28, abaixo.
LD = (3.SEb + b) ,
Equao 28
m
Onde: SEb = erro padro do intercepto,
b = coeficiente angular da equao da reta de calibrao,
c = coeficiente linear da equao da reta de calibrao.

5.4.

Preparo da soluo do padro interno (cido crotnico)

Para preparar 100 mL de soluo 700 mg/L de cido Crotnico em balo volumtrico,
pesa-se 70 mg de cido crotnico e se utiliza uma soluo aquosa alcalina (com o intuito de
deslocar o equilbrio da forma de cido para a forma de sal) pela adio de 2 a 3 prolas
de NaOH e completando-se o volume com gua ultrapurificada, aps completa dissoluo
das prolas de NaOH.
A concentrao do padro interno (cido Crotnico) na amostra calculada da
seguinte forma:

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C1 V1 C2 V2

45

Equao
28

na qual:
V1 = volume da soluo de cido Crotnico a ser adicionada na amostra (= 0,100 mL);
V2 = volume final da amostra (2,000 mL) aps a adio da soluo de cido Sulfrico (0,100
mL) e do da soluo de cido Crotnico (0,100 mL) (= 2,200 mL);
C1 = concentrao da soluo de cido Crotnico a ser adicionada na amostra (= 700 mg/L).
Essa concentrao nominal deve ser calculada de forma exata pela massa de cido
Crotnico efetivamente medida na balana analtica, se esta for diferente de 70 mg;
C2 = concentrao final da soluo de cido Crotnico na amostra (valor nominal = 31,8
mg/L);
5.5.

Como ligar o cromatgrafo

(a) Liga-se a alimentao dos gases (H 2, N2 e Ar Sinttico) externa e interna ao


laboratrio;
(b) liga-se o cromatgrafo, aguardando os testes internos. Em seguida, ativa-se a
estao de trabalho, fixando-se todos os parmetros de operao previamente
definidos na calibrao;
(c) fazer o condicionamento da coluna, ajustando-se a temperatura do forno para
210C entre 15 a 30 min, ou at o sinal do detector estabilizar, re-ajustando- em
seguida para 100C;
5.6.

Preparo da amostra para injeo no cromatgrafo

Caso a amostra tenha de ser congelada para que a anlise ocorra posteriormente (o
que geralmente ocorre na prtica) deve-se realizar o seguinte procedimento de preservao
da amostra: adicionar 1 gota de NaOH ou KOH 1 M (aproximadamente) a, aproximadamente,
5 mL de amostra (geralmente as amostras so congeladas em frascos de vidro do tipo
penicilina, com tampa de butila, tomando sempre o cuidado para que eles no fiquem
cheios, a fim de evitar a quebra do frasco com o congelamento). Esse procedimento para
garantir que o equilbrio qumico seja deslocado da forma de cido (ou no ionizada) para a
forma de sal (ou ionizada), de forma que no haja perdas. Caso a amostra a ser analisada
esteja congelada, retirar o frasco com a amostra do congelador e aguardar at que ela
descongele (pode-se coloc-lo num banho de gua fria) e atinja a temperatura ambiente.
(a) Medir 2 mL da amostra a ser analisada;
(b) colocar

essa

alquota

num

tubo

de

DQO

(padro

HACK)

contendo

aproximadamente 1 g (esse valor no precisa ser exato) de NaCl com o intuito de


ocorrer o efeito salting-out (aumenta a fora inica da gua, diminuindo a
afinidade dos cidos orgnicos pela gua e aumetando a sua concentrao na
fase etrea);
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46

(c) adicionar 100 L de H2SO4 1 M, para garantir que o equilbrio qumico seja
deslocado da forma de sal (ou ionizada) para a forma de cido (ou no ionizada);
(d) adicionar 100 L de uma soluo 700 mg/L de cido crotnico. Esse volume pode
ser medido em pipetador automtico de 1 mL, por se tratar de uma soluo
diluda;
(e) adicionar 600 L de ter para que haja a extrao dos cidos volteis. Este ter
deve ser medido em pipeta graduada de 1 mL (variando-se o volume de 0,8 a
0,2 para evitar o erro final da escala). Alm disso, este ter deve ser mantido em
freezer, devido sua alta volatilidade;
(f) fecha-se o tubo, agitando-o em um agitador de tubos por aproximadamente 1
min e, em seguida, faz-se a centrifugao por aproximadamente 1 min. Ao final,
retorna-se o tubo ao freezer, mantendo-o por aproximadamente 15 min ates da
anlise. Caso seja verificada a presena de impurezas na fase contendo o ter,
repete-se o procedimento anterior. Este resfriamento realizado no intuito de
facilitar a retirada da amostra de 1 L para anlise, pois o ter altamente
voltil;
(g) com a amostra resfriada, retira-se uma amostra de 1 L para anlise pelo uso de
microsseringa para cromatografia gasosa. Ressalta-se que o erro de medio da
amostra gelada tambm realizado na curva de calibrao.

Observao: Procedimento para injetar amostra lquida em cromatgrafo: (1)


lavar a seringa com a amostra por 5 vezes procurando retirar as bolhas; (2)
colocar uma papel absorvente dobrado na agulha; (3) colocar um septo na ponta
da agulha e retirar todas as bolhas; (4) retirar o septo; (5) medir 1 L; (6) retirar
o papel limpando a agulha; (7) subir o mbolo at 3 L para evitar a presena de
lquido na agulha (denominada de tcnica de injeo de agulha vazia).
Vale lembrar que se deve utilizar sempre pipeta de vidro quando o composto for
solvente voltil (como ter, por exemplo). Alm disso, interessante mencionar o modo de
preparo das solues citadas anteriormente:
(a) NaOH 1 M (massa molecular de 40 g/mol): dissolver 40,0 g de lentilha de NaOH
em 1000 mL de gua em balo volumtrico;
(b) H2SO4 1 M (massa molecular de 98 g/mol, densidade de 1840 g/mL e fator de
diluio de 97,5%): dissolver 54,7 mL de H2SO4 NaOH em 1000 mL de gua em
balo volumtrico.
5.7.

Levantamento da curva de calibrao

(a) Realiza-se o procedimento de partida do cromatgrafo;

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47

(b) faz-se a preparao das amostras obtidas pela diluio da soluo me de


calibrao conforme descrito anteriormente, injetando-se a amostra contida na
seringa;
(c) a curva de calibrao pode ser obtida por ajuste manual (e utilizao de uma
planilha de clculo) ou pelo uso do software da estao de trabalho do
cromatgrafo;
(d) na primeira forma, a curva de calibrao obtida pela medida das reas dos
cidos analisados no cromatograma, inclusive do padro interno, calculando-se o
fator de resposta (FRi) correlacionando-se com a concentrao conhecidas das
amostras, inclusive do padro interno. Assim, a determinao da concentrao
dos compostos analisados feita pelo fator de resposta (FR i) obtido pela rea dos
compostos do cromatograma.

FRi

reado cido(i)
reado padrointerno

Equao 30
Composto (Ci)
Cb
C 1b
C 2b
C 3b
...

C
C 1a
C 2a
C 3a
...
Obs.:

(1)

Cjj, sendo i o cido e

...
...
...
...
...

Fator de Resposta (FRi)


FR
FRb
...
a
FR1
FR1b
...
FR2a
FR2b
...
FR3a
FR3b
...
...
...
...
a

j a amostra (concentrao do ponto da curva de

calibrao);
(2)

FRjj, idem.

Ci

FRi
Na segunda forma, a curva de calibrao obtida utilizando-se do modo de
calibrao interno ao software da estao de trabalho do cromatgrafo. O procedimento
descrito a seguir:
(a) No modo Method and Run Control acionar RunControl Sampe Info e definir
a pasta onde os arquivos dos cromatogramas de calibrao sero salvos
(ressalta-se que esta pasta pode ou no existir, ou seja, cria-se atravs do
Exploring Windows ou atravs do prprio software da estao de trabalho do
cromatgrafo);

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48

(b) no modo Data Analysis acionar Calibration New Calibration Table para
inserir uma nova tabela de calibrao aps a injeo da primeira amostra,
preenchendo alguns dados da tabela (componente e quantidade);
(c) maiores detalhes sobre a curva de calibrao para padro interno so
encontrados na pg. 163-166 do manual do Cromatgrafo (ISTD calculation).
Na tabela de calibrao do software fazer ref = no para todos os compostos e
ref = yes para o padro interno cido Crotnico. Inserir tambm a
concentrao final da soluo de cido Crotnico na amostra (valor nominal =
31,8 mg/L), utilizando-se o valor exato;
(d) fazer a prxima injeo acionando no modo Data Analysis Calibration Add
Level inserindo a quantidade molar da amostra. Repetir este procedimento para
as demais injees;
(e) a quantidade molar exata injetada de cada componente calculada pela
Tabela 5;
(f) no final salvar o mtodo acionando no modo Data Analysis File Save as
Method (arquivo TCDFID2.m).
Realiza-se o procedimento de parada do cromatgrafo.
5.8.

Determinao das concentraes dos cidos

Observao: a limpeza da seringa cromatogrfica deve ser feita por 10 vezes com
metanol P. A.
(a) Realiza-se o procedimento de partida do cromatgrafo;
(b) faz-se o preparo das amostras a serem analisadas;
(c) pelo cromatograma tem-se o tempo de reteno e a rea dos componentes
detectados;
(d) estima-se a composio molar da amostra pelo procedimento de calibrao
realizado, ou seja, utilizando-se a rea do componente (identificado pelo tempo
de reteno) e a correlao linear ajustada (primeira forma) ou diretamente pela
curva de calibrao interna do software (segunda forma);
(e) realiza-se o procedimento de parada do cromatgrafo.
5.9.

Como desligar o cromatgrafo

(a) Este procedimento realizado pelo software da estao de trabalho no modo


Method and Run Control acionar Instrument Edit Parameters, onde existe o
ajuste dos parmetros de operao;
(b) inicialmente desliga-se a chama e o aquecedor do detector juntamente com o
fluxo dos gases;

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49

(c) em seguida desligam-se todos os aquecedores (injetor e forno) juntamente,


quando for o caso, com o fluxo dos gases;
(d) aguardar o valor da temperatura do detector ficar abaixo de 100 oC, fechar
primeiro as vlvulas dos gases para, ento, desligar o cromatgrafo, evitando o
acmulo desses gases no interior do cromatgrafo.

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6. DETERMINAO

DE

METANO

DIXIDO

DE

CARBONO (COMPOSIO

DO BIOGS)

50

MTODO

CROMATOGRFICO
6.1.

Conceitos Fundamentais

6.2.

Material

Cromatgrafo HP6890 com a seguinte configurao:


Coluna empacotada padro PORAPACK Q 80/100 Mesh (HP Part Number
19001A-Q00) de 6 ft (2m) de comprimento e 0,125 (1/8) de dimetro
externo (tubo de ao inox)
Injetor empacotado com controle eletrnico de presso (ECP)
Detector de condutividade trmica (TCD) com controle eletrnico de presso
(ECP)
Estao de trabalho HP (computador + software + impressora)
Vlvula de 6 vias para amostragem on-line (anlise) de gases
Sistema de gases especiais (torpedos, tubulao de cobre, vlvulas reguladoras) para
uso em cromatografia (N2, H2 padro analtico White Martins FID 4.6; e mistura
CH4/CO2 50%/50% padro calibrao White Martins)
Seringa para anlise de gases por cromatografia em fase gasosa de 1,0 mL e 100 L
(podendo ser de agulha removvel e possuindo o sistema gastight)
As condies operacionais do cromatgrafo so as seguintes:
(a) Injetor:

Temperatura do injetor: 250oC

Total flow: 52,5 mL/min (definido no detector).

Gs de arraste: H2

(b) Coluna:

Gs de arraste: H2 ou N2

Vazo do gs de arraste (CNTP): 50,0 mL/min

Condio de fluxo: constante

V Injetor: front

Detector: front

Presso de sada: ambiente

(c) Forno (oven):

Temperatura: 50,0oC constante

Hold: 2,0 min

(d) Detector (detector-front):

Gases de arraste: H2

Vazo de do gs de arraste (CNTP): 50,0 mL/min

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Temperatura: 200,0oC

Gs de make-up: N2

Vazo do gs de make-up (CNTP): 2,5 mL/min

Filamento: habilitado

Polaridade negativa: no habilitado

51

(e) Amostra:

Volume de amostra: 1,0 mL

(f) Vlvula de amostragem (quando utilizada) (valves/aux):

Temperatura: 100,0 oC

Volume de injeo: 1,0 mL

Tempo de carga: 0,5 min

Tempo de injeo: 0,5 min

Injector: front

6.3.

Como ligar o cromatgrafo

(a) Liga-se a alimentao dos gases (H2 e N2) externa e interna ao laboratrio;
(b) liga-se o cromatgrafo aguardando os testes internos. Em seguida, ativa-se a
estao de trabalho, sendo carregado o arquivo do mtodo de anlise
denominado

TCDFID1.m,

fixando-se

todos

os

parmetros

de

operao

previamente definidos na calibrao;


(c) fazer o condicionamento da coluna ajustando-se a temperatura do forno para
150,0C de 15 a 30 min, re-ajustando-se em seguida para 50,0C;
(d) manter o equipamento ligado para estabilizao por no mnimo 30 min,
utilizando-se os parmetros de operao. Aguardar a habilitao da estao de
trabalho para o incio da contagem deste tempo;
(e) definir a sada de dados para o detector FID pelo ajuste de Instrument/Selection
Injection Source/Front/Manual ou Valve ?
6.4.

Levantamento da curva de calibrao

(a) Realiza-se o procedimento de partida do cromatgrafo;


(b) injeta-se a amostra da mistura padro calibrao em duplicata nos seguintes
volumes: 0,020; 0,040; 0,060; 0,080 e 0,100 mL de metano com a seringa de
0,100 mL, e nos volumes 0,20; 0,40; 0,60; 0,80 e 1,00 mL com a seringa de 1,00
mL. Atravs dos cromatogramas obtidos, determina-se os tempos de reteno
(metano 0,27 min e dixido de carbono 0,55 min) e as reas dos picos do
metano para cada amostra injetada;
(c) a curva de calibrao pode ser obtida por ajuste manual (e utilizao de uma
planilha de clculo) ou pelo uso do software da estao de trabalho do
cromatgrafo;

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52

(d) na primeira forma, a curva de calibrao obtida pela medida das reas no
cromatograma e, utilizando-se de uma planilha de clculo em EXCEL, calcula-se
as mdias dos tempos de reteno e das reas de integrao para cada diferente
volume de amostra injetado. Logo, faz-se uma correlao linear (com coeficiente
linear nulo, ou seja, forando passar pela origem) entre a rea mdia obtida e a
quantidade molar injetada de cada componente (ver planilha do arquivo
Calibrao - Biogs - 1.xls Quadro 2), calculada pela lei dos gases ideais
(possuindo-se os valores da temperatura e da presso local). O volume de
amostra dividido por dois, pois a mistura 50% em volume de cada
componente (ver planilha do arquivo Calibrao - Biogs - 2.xls Quadro 3).
Esta quantidade molar dividida por 1 mL para converso para concentrao
(mMol/L), pois o volume de amostra injetado de 1 mL,

n(mol)

Vamostra(L)
2
0,082T(K)

Pabs(atm)

Equao 31

Quadro 1. Planilha do arquivo Calibrao - Biogs - 1.xls.


Planilha para determinao das concentraes da curva de calibrao de biogs
Mtodo cromatogrfico em fase gasosa
CH4
Tempo de
Volume (mL)
Reteno
0,25
0,286
0,25
0,292
0,25
0,285
Mdia
Desv. Padro
0,5
0,5
0,5
Mdia
Desv. Padro
0,75
0,75
0,75
Mdia
Desv. Padro
1
1
1
Mdia
Desv. Padro

rea
11950,3
12001,3
11424,1

0,288
0,004

11791,9
319,5

0,270
0,268
0,269

22908,2
22347,4
22990,9

0,269
0,001

22748,8
22347,4

0,260
0,264
0,263

34310,4
33532,3
33998,1

0,262
0,002

33946,9
22347,4

0,252
0,258
0,250

43584,2
43625,6
44280,1

0,253
0,004

43830,0
390,4

CO2
Tempo de
Volume (mL)
Reteno
0,25
0,585
0,25
0,592
0,25
0,585
Mdia
Desv. Padro
0,5
0,5
0,5
Mdia
Desv. Padro
0,75
0,75
0,75
Mdia
Desv. Padro
1
1
1
Mdia
Desv. Padro

rea
17213,3
17028,6
16450,9

Data = 27/10/1999
Presso = 700 mm Hg
Temperatura =
23 C

Tempos de reteno
CH4
CO2
0,288
0,587

0,587
0,004

16897,6
397,7

0,269
0,262

0,557
0,543

0,558
0,557
0,557

32941,9
32208,2
33166,2

0,253
0,268
0,015

0,528
0,554
0,025

0,557
0,001

32772,1
501,1

Vol. (mL)

u.a. CH4

0,540
0,545
0,544

49454,9
48278,8
48975,2

0,000
0,125
0,250

0,0
11791,9
22748,8

Mol CH4

massa CH4

u.a. CO2

Mol CO2

massa CO2

0,00000000
0,00000474
0,00000948

0,00000
0,00008
0,00015

0,0
16897,6
32772,1

0,00000000
0,00000474
0,00000948

0,00000
0,00021
0,00042

0,543
0,003

48903,0
591,4

0,375
0,500

33946,9
43830,1

0,00001422
0,00001896

0,00023
0,00030

48903,0
62732,8

0,00001422
0,00001896

0,00063
0,00083

0,527
0,533
0,525

62156,6
62533,7
63508,0

0,528
0,004

62732,8
697,3

Mdias
Desvios Padro

Obs.: considera-se metade do volume injetado, pois composio do gs de calibrao 50% em volume

0,000020

Mol

0,000016
0,000012
0,000008
0,000004
0,000000
0

10000

20000

30000 40000 50000


u.a. cromatograma

CH4
Linear (CH4)
Obs.: quantidade em mols para 1 mL de amostra injetada
-7
C(Mol CH4/L) = 4,25098.10 *area(u.a.)

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y = 4,25098E-10x
R2 = 9,98831E-01

CO2
Linear (CO2)
y = 2,96114E-10x
R2 = 9,98508E-01

60000

70000

Mtodos de Anlises Fsico-Qumicas de Rotina de guas Residurias Tratadas Biologicamente

53

Na segunda forma, a curva de calibrao obtida utilizando-se do modo de


calibrao interno ao software da estao de trabalho do cromatgrafo. O procedimento
descrito a seguir:
(a) No modo Method and Run Control acionar RunControl Sampe Info e definir
a pasta onde os arquivos dos cromatogramas de calibrao sero salvos
(ressalta-se que esta pasta j deve existir, ou seja, cria-se atravs do Exploring
Windows ou atravs do prprio software da estao de trabalho do
cromatgrafo);
(b) no modo Data Analysis acionar Calibration New Calibration Table para
inserir uma nova tabela de calibrao aps a injeo da primeira amostra,
preenchendo alguns dados da tabela (componente e quantidade);
(c) fazer a prxima injeo acionando no modo Data Analysis Calibration Add
Level inserindo a quantidade molar da amostra. Repetir este procedimento para
as demais injees;
(d) a quantidade molar injetada de cada componente (ver planilha do arquivo
Calibrao - Biogs - 2.xls Quadro 11.2) calculada pela lei dos gases ideais
(possuindo-se os valores da temperatura e da presso local). O volume de
amostra dividido por dois pois a mistura 50% em volume de cada
componente). Esta quantidade molar dividida por 1 mL para converso para
concentrao (mMol/L), pois o volume de amostra injetado ser de 1 mL;
(e) no final salvar o mtodo acionando no modo Data Analysis File Save as
Method (arquivo TCDFID1.m).
Realiza-se o procedimento de parada do cromatgrafo.

Quadro 2.Planilha do arquivo Calibrao - Biogs - 2.xls.

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54

Planilha para determinao das concentraes da curva de calibrao de biogs


Mtodo cromatogrfico em fase gasosa
Data =

16/05/2000

Vol. (mL)

Mol CH4

massa CH4

Mol CO2

massa CO2

Presso =
Temperatura =

703 mm Hg
27 C

0,010
0,020
0,030
0,040
0,050
0,100
0,200
0,300
0,400
0,500

3,758E-07
7,517E-07
1,127E-06
1,503E-06
1,879E-06
3,758E-06
7,517E-06
1,127E-05
1,503E-05
1,879E-05

0,00001
0,00001
0,00002
0,00002
0,00003
0,00006
0,00012
0,00018
0,00024
0,00030

3,758E-07
7,517E-07
1,127E-06
1,503E-06
1,879E-06
3,758E-06
7,517E-06
1,127E-05
1,503E-05
1,879E-05

0,00002
0,00003
0,00005
0,00007
0,00008
0,00017
0,00033
0,00050
0,00066
0,00083

Obs.: considera-se metade do volume injetado, pois composio do gs de calibrao 50% em volume.
Curva de calibrao a ser inserida no cromatgrafo:

Vol. (mL)

mMol(CH4)/L

mg(CH4)/L

mMol(CO2)/L

mg(CO2)/L

0,010
0,020
0,030
0,040
0,050
0,100
0,200
0,300
0,400
0,500

3,758E-01
7,517E-01
1,127E+00
1,503E+00
1,879E+00
3,758E+00
7,517E+00
1,127E+01
1,503E+01
1,879E+01

6,01325
12,02651
18,03976
24,05301
30,06627
60,13254
120,26507
180,39761
240,53014
300,66268

3,758E-01
7,517E-01
1,127E+00
1,503E+00
1,879E+00
3,758E+00
7,517E+00
1,127E+01
1,503E+01
1,879E+01

16,53645
33,07289
49,60934
66,14579
82,68224
165,36447
330,72894
496,09342
661,45789
826,82236

Obs.: unidade de calibrao mMol/L, com volume de amostra injetado de 1 mL.

6.5.

Determinao da concentrao de metano e gs carbnico

(a) Liga-se o cromatgrafo, para pr-aquecimento e estabilizao da linha de base;


(b) injeta-se 1000uL da amostra de gs ;
(c) no cromatograma, os diferentes tempos de reteno esto relacionados com as
reas dos componentes detectados;
(d) estima-se a composio molar da amostra atravs do procedimento de
calibrao realizado, ou seja, utilizando-se a rea do componente (identificado
pelo tempo de reteno) e a correlao linear ajustada ou diretamente pela
curva de calibrao interna do software;
(e) resfria-se e desliga-se o cromatgrafo.
6.6.

Como desligar o cromatgrafo

(a) Este procedimento realizado atravs do software da estao de trabalho no


modo Method and Run Control acionar Instrument Edit Parameters, onde
existe o ajuste dos parmetros de operao;
(b) inicialmente desliga-se o filamento e o aquecedor do detector mantendo-se o
fluxo dos gases;
(c) em seguida desligam-se todos os aquecedores (vlvula de injeo de amostra
quando utilizada, injetor e forno) juntamente, quando for o caso, com o fluxo dos
gases;

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(d) aguardar o valor da temperatura do detector ficar abaixo de 100

55

C, fechar

primeiro as vlvulas do gases para, ento, desligar o cromatgrafo, evitando o


acmulo desses gases no interior do cromatgrafo.

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7. METANO (PRODUO

DE BIOGS)

MTODO

7.1.

Conceitos Fundamentais

7.2.

Material

DE

DESLOCAMENTO

DE

56

VOLUME

Frascos de Erlenmeyer
Frasco de Mariotte
Pipeta graduada
Proveta
Mangueiras
Hidrxido de sdio NaOH
7.3.

Determinao da produo em reatores em batelada

A produo de gs medida com o auxlio de um gasmetro composto por um frasco


de Erlenmeyer e uma pipeta graduada de 25,0 ml, apresentado na Figura 7.

2
Entrada
de gs

Figura 5. Esquema do gasmetro


utilizado para medir a produo de CH4 no reator
1
(1 frasco de Erlenmeyer, 2 pipeta graduada).

A sada de gs do reator conectada a uma mangueira, e esta, ao frasco de


Erlenmeyer contendo soluo de NaOH (50 g/L e pH = 12). Outra mangueira, mergulhada na
soluo de NaOH, liga o frasco de Erlenmeyer pipeta. Desta forma, o volume dos gases
produzido no reator entra no frasco de Erlenmeyer e desloca a coluna de soluo de NaOH
na pipeta permitindo a quantificao de metano, enquanto CO 2 e H2S so absorvidos pela
soluo de NaOH. Antes de iniciar a medida da produo de gs, imediatamente aps a
etapa de carga do reator, deve-se circular nitrognio no head-space do reator com a
finalidade de eliminar qualquer possvel resduo de biogs da batelada anterior, evitando
assim qualquer interferncia na medida.
A medida de biogs em reator ASBR consiste do seguinte procedimento de: (a) fluxo
de N2 no head-space do reator por 3 min; (b) coneco do gasmetro (fechar outras
mangueiras do reator), sendo que a tampa do reator e a entrada do eixo de agitao no
podem apresentar

vazamentos; (c) para evitar pressurizao do reator, medir o

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57

deslocamento de volume do gasmetro em intervalos de tempo que no excedam a altura


de 10 cm; (d) retirar amostra do head-space do reator para anlise da composio do
biogs; (e) fazer a purga do sistema pela abertura da vlvula especifica, at equalizar as
alturas de NaOH do gasmetro; (f) marcar os tempos inicial e final da amostra para a
correo do volume produzido do biogs.Por se tratar de sistemas em batelada, a
determinao da produo em reatores do tipo ASBR se d a partir do seu acompanhamento
atravs de um perfil temporal, que corresponde ao tempo de ciclo ao qual o sistema est
submetido. Para ilustrar o uso desse mtodo, os Quadros 4 e 5, correspondentes s planilhas
Perfil e Final Ciclo, do arquivo Produo Biogs.xls, mostram o acompanhamento da
produo e da concentrao de metano durante um perfil e da concentrao de metano e
dixido de carbono (considerando o biogs composto somente por estes dois gases) durante
um determinado perodo de tempo, respectivamente.

Quadro 3. Planilha Perfil do arquivo Produo Biogs.xls .


Planilha para determinao do perfil da concentrao de biogs
Mtodo cromatogrfico em fase gasosa - Reator ASBR
Temperatura
o
( C)

t Leitura
(min)

V Leitura
(mL)

V CNTP
(mL)

dV/dt
(mL/min)

t Amostra
(min)

V Corrigido
(mL)

Tempo
(h)

V Acumulado
(mL)

CH4
(mMol/L)

CO2
(mMol/L)

CH4 (%)

CO2 (%)

695

24,0
24,0
24,0
24,0
24,0
24,0
24,0
24,0
24,0
24,0
24,0

0
28
28
28
28
29
28
30
28
30
29

20,0
13,5
10,3
9,6
9,6
9,5
10,6
10,5
11,9
12,5
15,3

0,0
5,5
8,2
8,7
8,7
8,8
7,9
8,0
6,8
6,3
4,0

0,000
0,195
0,291
0,312
0,312
0,304
0,282
0,266
0,243
0,210
0,136

0
31
31
32
31
32
31
33
31
33
32

0,0
6,0
9,0
10,0
9,7
9,7
8,7
8,8
7,5
6,9
4,4

0
0,52
1,03
1,57
2,08
2,62
3,13
3,68
4,20
4,75
5,28

0
6,0
15,1
25,1
34,7
44,5
53,2
62,0
69,6
76,5
80,8

0,00
0,18
0,58
1,07
1,64
2,19
2,78
3,33
3,75
4,10
4,36

0,00
0,38
0,80
1,11
1,36
1,51
1,66
1,82
1,93
1,98
2,03

0,0%
32,2%
42,1%
49,1%
54,7%
59,3%
62,6%
64,6%
66,0%
67,5%
68,2%

0,0%
67,8%
57,9%
50,9%
45,3%
40,7%
37,4%
35,4%
34,0%
32,5%
31,8%

80
60
40
20
0
0

1,0

5
Metano
Dixido de Carbono

Frao Molar

100

Concentrao (mMol/L)

Volume (mL CH 4 CNTP)

Presso
(mmHg)

3
2
1
0

Tempo (h)

SHS/EESC/USP DEQ/UFSCar DQA/EEM/IMT

Metano
Dixido de Carbono

0,8
0,6
0,4
0,2
0,0

4
Tempo (h)

4
Tempo (h)

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58

Quadro 4. Planilha Final Ciclo do arquivo Produo Biogs.xls .


Planilha para determinao da concentrao de biogs
Mtodo cromatogrfico em fase gasosa - Reator ASBR
Data
28/11/2000
29/11/2000
30/11/1900
01/12/2000
05/12/2000
07/12/2000

Tempo (dia)
7
8
9
10
14
16

Conc. CH4 (mMol/L)


4,57
4,49
4,20
4,44
4,45
4,24

Mdia

4,60
4,41
4,19
4,33
4,51
4,18

4,59
4,45
4,20
4,39
4,48
4,21

Mdia =
Desvio Padro =

Conc. CO2 (mMol/L)


2,02
2,18
2,12
2,05
2,29
2,05

4,38
0,15

2,02
2,13
2,11
1,99
2,32
2,02

Mdia =
Desvio Padro =

Mdia
2,02
2,16
2,12
2,02
2,31
2,04
2,11
0,11

Mdia

0,693
0,673
0,665
0,684
0,660
0,674

0,694
0,674
0,665
0,685
0,660
0,674

0,307
0,327
0,335
0,316
0,340
0,326

0,675
0,013

Mdia = 0,325
Desvio Padro = 0,013

0,695
0,674
0,665
0,685
0,660
0,674

Mdia =
Desvio Padro =

Frao Molar C02 Mdia


0,305
0,326
0,335
0,315
0,340
0,326

0,306
0,326
0,335
0,315
0,340
0,326

1,0

8
Metano
Dixido de Carbono

Metano
Dixido de Carbono

0,8

Frao Molar

Concentrao (mMol/L)

Frao Molar CH4

4
2

0,6
0,4
0,2
0,0

0
0

12

18

12

18

Tempo (dia)

Tempo (dia)

Durante um perfil temporal, inicialmente determina-se a presso atmosfrica local


(inserida na coluna Presso) (Quadro 12.1). Aps o tempo de purga do sistema (trs minutos
de N2), inicia-se a determinao da produo de metano no sistema, insere-se os valores de
temperatura (coluna Temperatura), intervalo de tempo (coluna tLeitura) e volume deslocado
(coluna VLeitura). A correo para as CNTP feita na coluna V CNTP, atravs da seguinte
equao:

Pa Va
P
VCNTP
CNTP
Ta 273
TCNTP
Equao 32
na qual:
Pa = presso atmosfrica qual o reator submetido (mmHg)
Va = volume de metano nas condies do ensaio (mL)
Ta = temperatura qual o reator submetido (C)
PCNTP = presso atmosfrica nas CNTP (730 mmHg)
VCNTP = volume de metano nas CNTP (mL)
TCNTP = temperatura nas CNTP (0C)

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59

A variao do volume no intervalo de tempo (coluna dV/dt) determinada pela razo


VCNTP/tLeitura. Como a coleta de gs para anlise cromatogrfica feita posteriormente
leitura do volume deslocado, insere-se o tempo de coleta de amostra na coluna tAmostra.
Considerando que a razo dV/dt no variou nesse pequeno intervalo de tempo, realiza-se
nova correo no volume produzido, considerando o tempo de amostragem (V Corrigido = dV/dt
tAmostra). Nas colunas Tempo e VAcumulado so determinados o tempo e o volume de metano
acumulados no perfil. Esses valores so representados nos grficos apresentados com a
tabela. Nas colunas CH4 e CO2 so inseridos os valores de concentraes de metano e de
dixido de carbono obtidos nas anlises cromatogrficas. Considerando o biogs composto
apenas desses gases, as duas ltimas colunas representam as variaes das suas fraes
molares durante o perfil.
No Quadro 12.2 so mostradas, como exemplo, as concentraes e fraes molares
de CH4 e CO2 observadas durante o monitoramento do sistema. Esses valores correspondem
aos obtidos no ltimo ponto do perfil, ou seja, no final da batelada, e ilustram a variao
desses parmetros no decorrer do tempo.
7.4.

Determinao da produo em reatores contnuos

A produo de gs medida com o auxlio de um gasmetro, composto por frasco de


Erlenmeyer contendo soluo de NaOH (50g/L e pH = 12), frasco de Mariotte (frasco de
Erlenmeyer adaptado) contendo gua, e proveta , apresentado na Figura 8.

Figura 6. Esquema do gasmetro utilizado para medir a produo de CH4 no reator contnuo
(1 frasco de Erlenmeyer, 2 frasco Mariotte, 3 proveta).
A sada de gs do reator, perfeitamente hermtico, conectada ao frasco de
Erlenmeyer para absoro de CO2 do biogs. Aps borbulhar na soluo de NaOH, o metano
ocasiona aumento da presso no headspace do frasco de Mariotte, cuja abertura elimina
gua, coletada pela proveta. Pelo princpio do frasco de Mariotte, o volume deslocado de

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60

lquido corresponde ao volume de gs introduzido, ou seja, o volume de gua medida na


proveta igual ao volume de CH4 produzido no reator.
Em seguida, realiza-se a converso da produo de metano para as CNTP, a partir da
seguinte equao (12.1)
Para se medir a produo de biogs total e no somente de metano, elimina-se o frasco
de

Erlenmeyer contendo soluo de NaOH, e conecta-se a sada de gs do reator,

perfeitamente hermtico, diretamente ao frasco de Mariotte.

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8.

61

NITROGNIO
8.1.

Conceitos fundamentais

As formas de nitrognio de maior interesse nas guas potveis e residurias so, em


ordem decrescente do estado de oxidao, nitrato (NO 3-), nitrito (NO2-), amnia (NH3 e NH4+)
e nitrognio orgnico (N-org). Essas formas de nitrognio, juntamente com o nitrognio
molecular (N2), so componentes do ciclo do nitrognio, no qual determinadas bactrias
participam ativamente.
A Figura 9 apresenta, de modo simplificado, o ciclo do nitrognio que ocorre em
ambientes

aquticos,

com

reaes

de

amonificao,

nitrificao,

assimilao

desnitrificao durante a transformao biolgica do nitrognio da forma orgnica (N-org)


at a forma molecular mais simples (N2).

N-Org
Assimilao
Desassimila

Amonificao

o
N-Amon

Nitritao

NO2-

Via nitrito

Nitratao

NO3-

Fixao

N2

Desnitrificao

Figura 7. Ciclo do nitrognio.

8.2.

Nitrognio Amoniacal

A amnia representa parte da matria nitrogenada inorgnica geralmente presente


em guas superficiais e residurias. Nas estaes de tratamento, por exemplo, a amnia
encontra-se presente no esgoto afluente, pois j no sistema de coleta e interceptao, as
reaes de hidrlise e amonificao tm incio (desaminao de compostos contendo
nitrognio orgnico e pela hidrlise da uria). A amnia utilizada por bactrias
heterotrficas e autotrficas.
Sua concentrao , geralmente, baixa em guas subterrneas pela sua adsoro
nas partculas de solo e argilas, de onde no facilmente lixiviada. Em algumas instalaes
de tratamento, amnia reage com cloro para formar mono e dicloroaminas. Entretanto,
virtualmente, nenhum cloro residual livre obtido at que toda amnia tenha sido oxidada.
As concentraes de amnia variam de menos de 10 gNH4+/L, em algumas guas
superficiais naturais e guas subterrneas, a mais de 30 mgNH 4+/L, em algumas guas
residurias. Em guas residurias industriais que utilizam amnia como matria-prima a
concentrao de amnia pode estar acima de 15g/L (por exemplo, em indstrias de leos
sulfonados, de tintas, etc).
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62

Embora bactrias nitrificantes (do gnero, h muitas outras bactrias) como


Nitrosomonas e Nitrobacter sejam estritamente aerbias, pelo menos quando crescendo
quimiolitotrficamente, em presena de nitrito ou nitrato, sob condies anxicas,
determinados microrganismos podem oxidar amnia. As reaes dependentes de nitrito ou
de nitrato so as seguintes:

NH4 NO2 N2 2H2 O

G' 357KJ

5NH4 3NO3 4N2 9H2 O 2H

G' 1483
KJ

Esses processos, conhecidos como Anamox (oxidao anxica de amnia) liberam


grandes quantidades de energia (Madigan, 1996).
Os dois principais fatores que influenciam na seleo de um mtodo para a
quantificao da amnia so: sua concentrao na amostra e a presena de interferentes na
anlise. Em geral, a determinao espectrofotomtrica direta de baixas concentraes de
amnia est restrita a: guas potvel, superficial e subterrnea limpas e efluentes de boa
qualidade de gua residuria nitrificada. Quando interferncias esto presentes ou maior
preciso necessria, uma destilao preliminar requerida.
8.3.

Nitrognio Orgnico

A matria orgnica nitrogenada pode ser dividida em:


(a) Inerte: pode encontrar-se dissolvida (quantidade desprezvel) ou na forma de
partculas (associada matria orgnica no biodegradvel, sendo envolvida
pela biomassa e removida com o lodo excedente);
(b) Biodegradvel: pode ser subdividida em dois componentes:

Rapidamente biodegradvel: encontra-se na forma solvel e convertida pelas


bactrias heterotrficas em amnia, atravs do processo de amonificao;

Lentamente biodegradvel: encontra-se na forma particulada e solubilizada


atravs de hidrlise, juntamente com a matria carboncea.
O nitrognio orgnico inclui tanto os materiais naturais, como protenas, peptdeos,
cidos nuclicos e uria, como numerosos materiais orgnicos sintticos. Concentraes
tpicas de nitrognio orgnico variam de 100 g/L, em alguns lagos oligotrficos, a 20 mg/L
em guas naturais. O nitrognio um componente de grande importncia em termos da
gerao e do prprio controle da poluio das guas, pois:
(a) utilizado no crescimento dos microrganismos responsveis pelo tratamento do
esgoto;
(b) utilizado no crescimento de algas;
(c) em altas concentraes, pode provocar o fenmeno de eutrofizao (crescimento
excessivo de plantas aquticas) de lagos e represas;
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(d) sob processos de nitrificao, isto , oxidao de amnia a nitrito e a nitrato,


demanda oxignio dissolvido no corpo dgua receptor, podendo provocar a
morte de toda a vida aqutica aerbia presente;
(e) na forma de amnia livre (NH3), txico aos peixes;
(f) na

forma

de

nitrato

(NO3-),

est

associado

doenas

como

metahemoglobinemia.
Os sistemas de tratamento tradicionais so divididos em quatro etapas: preliminar,
primria, secundria e terciria ou ps-tratamento. Nas duas primeiras etapas so
removidos apenas o material grosseiro e parte da matria orgnica. Na etapa secundria,
parte dos nutrientes presentes no esgoto, como os compostos nitrogenados, estabilizada.
Porm, a reduo das concentraes de compostos de nitrognio a nveis aceitveis s
conseguida na etapa terciria, correspondente ao polimento final da gua residuria. O
polimento final remove poluentes especficos ou complementa a remoo de poluentes que
no foram removidos de forma satisfatria nos tratamentos anteriores, gerando um efluente
final com alto grau de estabilizao.
Namour & Mller (1998) encontraram, em vrios efluentes de estaes de
tratamento anaerbio de esgoto domstico, os seguintes valores mdios de concentraes
de nitrognio: 30 mgN-NH4+/L, 17 mgN-org/L, menor que 0,4 mgN-NO3-/L e 0,03 mgN-NO2-/L.
Segundo os autores, esses valores ratificaram a necessidade de ps-tratamento desses
efluentes antes do descarte em corpos receptores, sob pena de causar desastres
ambientais.
Assim, os sistemas de tratamento de guas residurias devem ser projetados para
converter compostos de nitrognio na forma mais benfica ao meio ambiente, isto , N 2,
evitando problemas associados com excesso de nutrientes e escassez de oxignio. Os
compostos de nitrognio devem ser monitorados nos sistemas de tratamento de guas
residurias para que, entendidas as transformaes , sejam desenvolvidos balanos de
massa para suas remoes atravs dos processos de tratamento (Feree & Shannon, 2001).
Dois mtodos podem ser utilizados para determinao da concentrao de
compostos orgnicos de nitrognio em gua residuria,): titulomtrico, para anlises de
nitrognio orgnico convertido

a amoniacal, e espectrofotomtrico, para anlises de

nitrognio orgnico na forma de nitrato. Amnia pode ser determinada por mtodo
titulomtrico, aps destilao, e por mtodos espectrofotomtricos.
8.3.1. Mtodo Titulomtrico
Analiticamente, nitrognio orgnico e amnia podem ser determinados juntos e tm
sido referidos como nitrognio total Kjeldahl, um termo que reflete a tcnica utilizada em
sua determinao. O processo Kjeldahl muito usado por ser uma tcnica bastante
confivel e com rotinas bem estabelecidas.O mtodo baseado na digesto da amostra por
cido sulfrico concentrado em presena de um catalisador, a fim de converter o nitrognio
orgnico em on amnio. Aps alcalinizao da mistura, a amnia destilada e recebida em
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soluo de cido brico e titulada por soluo padronizada de cido (Vogel, 1989). Para a
determinao do nitrognio amoniacal, a etapa de digesto deve ser eliminada. Assim, o
nitrognio orgnico poder ser determinado pela diferena entre o nitrognio total Kjeldahl
(obtido aps as etapas de digesto, destilao e titulao) e o nitrognio amoniacal (obtido
aps as etapas de destilao e titulao).
O mtodo

Kjeldahl

pode

ser realizado em duas escalas, dependendo

das

concentraes de nitrognio na amostra: macro-Kjeldahl mais aplicvel para amostras


com baixas concentraes de nitrognio. A escala semi-micro-Kjeldahl permite menores
volumes de amostras com altas concentraes, mas os limites de sensibilidade geralmente
excedem as baixas concentraes de nitrognio encontradas em guas naturais (APHA,
1995).
O mercrio foi usado como catalisador da digesto da amostra para determinao de
nitrognio total. Entretanto, devido elevada toxidade, outros compostos foram testados
por Rocha et al. (apud Pulitano, 1998) como catalisadores na digesto sulfrica de amostras
de carnes. Sulfato de cobre e xido de selnio apresentaram resultados semelhantes
mercrio e, considerando as toxidades e os custos dos reagentes, o primeiro foi proposto
como catalisador da digesto. Assim, a seguinte mistura foi definida: sulfato de potssio +
sulfato de cobre, em proporo de 3:1. Sulfato de potssio utilizado para aumentar a
temperatura de ebulio da soluo.
Algumas interferncias so:
(a) Nitrato: Durante a digesto, nitrato em concentrao superior a 10 mg/L pode
oxidar uma poro da amnia liberada durante a digesto do nitrognio orgnico,
produzindo N2O e resultando em interferncia negativa. Por outro lado, se uma
quantidade suficiente de matria orgnica em baixo estado de oxidao estiver
presente, nitrato pode ser reduzido a amnia, resultando em uma interferncia
positiva. As condies sob as quais significantes interferncias ocorrem no
esto bem definidas e no so conhecidas maneiras de eliminar a interferncia
em conjuno com o mtodo descrito;
(b) Sais e slidos inorgnicos: O cido e os sais utilizados na digesto geram
temperaturas de digesto que variam entre 360C e 370C. Se a amostra
contiver uma grande quantidade de sais ou slidos orgnicos que se dissolvero
durante a digesto, a temperatura poder ser superior a 400C, com perda
piroltica de nitrognio. Para prevenir um elevado aumento da temperatura de
digesto, deve-se adicionar mais H2SO4. Entretanto, um excesso de cido
poder abaixar a temperatura para menos de 360C, impedindo a completa
digesto da matria nitrogenada;
(c) Matria orgnica: Durante a digesto, H2SO4 oxida matria orgnica a CO2 e H2O.
Se uma grande quantidade de matria orgnica estiver presente, uma grande
quantidade de cido ser consumida e a temperatura de digesto aumentar,
causando a perda piroltica do nitrognio, como no caso anterior;
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(d) Outros: A determinao de nitrognio amoniacal pode sofrer influncia de glicina,


uria,

cido

glutmico,

cianatos

acetamida,

que

hidrolisam-se

muito

lentamente. Desses compostos, 7% de uria e 5% de cianatos so hidrolisados


durante a etapa de destilao, em pH de 9,5. Compostos alcalinos volteis, tais
como hidrazina e aminas, influenciam nos resultados. Cloro residual reage com
amnia e deve ser removido atravs do pr-tratamento da amostra. Amostras
contendo cloro residual devero ser descloradas imediatamente aps a coleta.
Concentraes de nitrognio orgnico variando entre 0,05 mg-N/L e 100 mg-N/L
podem ser determinadas com um erro de 0,05 mg-N/L. A preciso do mtodo depender da
quantidade de nitrognio presente e da exatido do aparelho usado na determinao do
nitrognio amoniacal (Golterman, 1969).
Segundo APHA (1995), trs amostras sintticas, contendo amnia e outros
componentes dissolvidos em gua destilada, foram destiladas e analisadas por titulao. Os
menores valores de desvio padro e erro relativo foram encontrados quando os vrios
laboratrios participantes utilizaram amostras com as seguintes concentraes: 1500 gNH3/L; 10 mgCl-/L; 1,0 mgNO3-/L; 1,5 mgN-org/L; 10 mgPO 43-/L e 5,0 mg-slica/L. O desvio
padro e o erro relativo foram, respectivamente, 21,6 e 2,6%. Concentraes inferiores
resultaram em maiores valores de desvios padro e erros relativos.
Um outro mtodo de digesto de amostras descrito em Standard Methods(1999),
recomenda

tratamento com persulfato de potssio, em meio alcalino, a quente, para

converso de N orgnico, amoniacal e nitrito em nitrato. A determinao de N total na


forma de nitrato, em amostra cuja matria orgnica foi digerida, facilmente realizada
atravs de leitura em espectrofotmetro a 220nm, em cubeta de quartzo. Interferncia de
matria orgnica, se persistir aps a digesto, ser eliminada por leitura a 275nm,
comprimento de onda no absorvido por nitrato.
Para o acompanhamento de tratamento anaerbio de guas residurias, N amoniacal
pode ser determinado por titulao condutimtrica, atravs de reao com soluo
padronizada de NaOH, durante a determinao de alcalinidade devida a bicarbonato.
8.4.

Material

Digestor para anlise de nitrognio


Exaustor/neutralizador para gases de digesto (scrubber)
Tubos de vidro (tipo borosilicato) com fundo cnico e rosca com tampa em teflon
(tubos de digesto/destilao)
Tubos de vidro (tipo borosilicato) com fundo cnico (tubos de digesto/destilao)
Balana analtica (preciso 0,0001 g)
Balana semi-analtica (preciso 0,01 g)
Provetas de 25 e 50 mL
Buretas digitais de 50 mL ou Buretas de 10,00 e 50,0 mL

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Bqueres de 50 e 100 mL
Medidor de pH (preciso 0,01 )
Pipetador automtico de 10 mL ou Pipeta graduada de 10,0 mL
Agitador magntico sem aquecimento
Barra magntica de 7x25 mm
Frascos de Erlenmeyer de 500 mL
cido Sulfrico H2SO4 concentrado 96-97% P. A.
Hidrxido de Sdio NaOH P. A. (em lentilha)
Sulfato de Potssio K2SO4 P. A.
Sulfato de Cobre CuSO4 P. A.
cido Brico H3BO3 P. A.
Verde de Bromocresol P. A.
Etanol 96% C2H5OH P. A.
p-nitrofenol P. A.
Ponceau 2R P. A.
Acetato de Sdio CH3COONa P. A.
cido Actico CH3COOH P. A.
8.5.

Padronizao da soluo de cido sulfrico Soluo de H2SO4 0,01 N

C=0,01 N = 0,005 M

(Normalidade = K Molaridade; K = 2)

Massa molecular = 98 g/mol


(densidade) = 1,84 Kg/L
f (fator de diluio) = 97,5%
Portanto,
C = 0,005 mol/L 98 g/mol = 0,49 g/L
Logo, para preparar 1 litro de soluo H 2SO4 0,005 M, deve-se dissolver 0,49 g de
H2SO4 P. A. em 1 litro de gua destilada. Entretanto, considerando-se a soluo concentrada
de H2SO4, tem-se:

0,49g

1840g / L.0,975

0,273mL

A padronizao da soluo de H 2SO4 pode ser feita em triplicata, utilizando o padro


primrio tetraborato de sdio (ver padronizao da soluo em Anlise de cido Volteis
Totais).

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Observao: Quando o indicador utilizado uma soluo de Fenolftalena, tem-se


uma soluo transparente para regio cida e levemente rosada na regio
alcalina.
Observao: A diluio de cido sulfrico em gua muito exotrmica, assim
deve-se ter cuidado com o aquecimento do recipiente no preparo dessas
solues, adicionando-se o cido gua e no o oposto.
8.6.

Preparo do indicador para anlise de nitrognio amoniacal e total

Kjeldahl (indicador misto)


(a) Dissolver 0,35 g de verde de bromocresol em 10,0 mL de lcool etlico 96%
(soluo A);
(b) dissolver 0,75 g de p-nitrofenol em 5,0 mL de lcool etlico 96% (soluo B);
(c) misturar as solues anteriores e adicionar 10,0 mL de uma soluo de hidrxido
de sdio 0,1 N e 22,0 mL de uma soluo 1% de Ponceau 2R;
(d) colocar a mistura em um balo volumtrico de 250,0 mL e completar o volume
com gua destilada.
Ao se adicionar 3 gotas do indicador misto a 10,0 mL de uma soluo de tampo
acetato (pH 4,6), esta dever apresentar uma colorao marrom acinzentada. Caso a
colorao esperada no ocorra, o indicador poder ser corrigido pela adio de Ponceau 2R
ou verde de bromocresol.
8.7.

Preparo do tampo acetato (pH 4,6)

(a) Dissolver 1,36 g de acetato de sdio em 100,0 mL de gua destilada (soluo A);
(b) adicionar 0,57 mL de cido actico a um balo volumtrico de 100,0 mL e
completar o volume com gua destilada (soluo B);
(c) misturar 44,9 mL da soluo A a 55,1 mL da soluo B. Tem-se, assim, a soluo
de tampo acetato requerida.
8.8.

Preparo da soluo de cido brico (2%)

Dissolver 20 g de H3BO3 em 1000 mL de gua destilada.

Observao: Aquecer brandamente para facilitar a dissoluo.


8.9.

Preparo da soluo de NaOH (32%)

(a) Dissolver 320 g de NaOH em cerca de 700 mL de gua destilada. CUIDADO! A


dissoluo extremamente exotrmica;
(b) depois que a soluo estiver fria, transferir para proveta de 1000 mL e completar
o volume. Estocar em frasco plstico
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8.10. Determinao de nitrognio total Kjeldhal


(a) Digesto: colocar no tubo do digestor de nitrognio:

25,0 mL da amostra bruta


15 mL de cido sulfrico concentrado P. A. (proveta)
3,0 g de sulfato de potssio P. A.
1,0 g de sulfato de cobre P. A.
3 ou 4 prolas de vidro ou cacos de porcelana
A temperatura de digesto dever deve ser aumentada lentamente, em patamares
de 50oC, a cada 15 minutos, atingir cerca de 380 oC. Manter o aquecimento por,
aproximadamente, 2 horas ou at que apresente colorao verde claro. Aps a digesto,
resfriar naturalmente, at a temperatura ambiente.
(b) Destilao: antes de iniciar a destilao do branco (primeiro a ser destilado),
lavar o destilador com cerca de 150 mL de gua destilada. O destilado dever
ser recebido em frasco de Erlenmeyer de 500 mL, contendo 100 mL de soluo
de cido brico (2%) e 4 a 5 gotas do indicador misto, at que o contedo dobre
de volume (200 mL). Adicionar, cuidadosamente, 50 mL de gua destilada e
50 mL de soluo de NaOH (32%).

Observao: O destilador dever ser lavado com gua destilada a cada duas
destilaes.
Observao: As amostras com baixas concentraes de nitrognio apresentaro
colorao vinho. As mais concentradas apresentaro colorao azul a verde
bandeira.

(c) Titulao: titular o destilado do teste em branco com soluo padronizada de


H2SO4 0,1 N, at colorao alaranjada clara. Para as demais amostras, a
colorao do branco dever ser tomada como padro, ou seja, todas as amostras
tituladas devero apresentar a mesma tonalidade da cor.
A concentrao do nitrognio total Kjeldahl dever ser calculada pela seguinte
equao:

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NNTK

V1 V2 N
V

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14000
Equao 29
(13.2)

na qual:
NNTK representa a concentrao do nitrognio total Kjeldahl, em mgN-NH 4+/L;
V1 - volume da soluo de cido utilizado para titular a amostra (mL);
V2 - volume da soluo de cido utilizado para titular o branco (mL);
V - volume da amostra (mL);
Na - normalidade da soluo de cido utilizado na titulao;
14000 o equivalente-grama do nitrognio contido no NH4+.
8.11. Determinao de nitrognio amoniacal

(a) Acertar o pH da amostra bruta para, aproximadamente, 9,0 com uma soluo de
NaOH e colocar 100 mL de amostra no tubo do destilador de nitrognio;

(b) Seguir os passos (b) a (c) descritos na anlise de nitrognio total Kjeldahl. A etapa
de digesto suprimida para a determinao do nitrognio amoniacal e no h
adio de NaOH 32% e nem de gua destilada .

(c) A concentrao de nitrognio amoniacal dever ser calculada atravs da seguinte


equao:

NNH

V2
xNa x14.000
V

Equao 30
na qual:
NNH4+ - concentrao do nitrognio amoniacal, dado em mg NH4+/L;
V1 - volume de cido utilizado para titular a amostra (mL);
V2 - volume de cido utilizado para titular o branco (mL);
V - volume da amostra (mL);
Na - normalidade do cido utilizado na titulao (N);
14.000 o equivalente-grama do nitrognio contido no NH4+.
Efluentes de reator anaerbio devero apresentar grande quantidade de nitrognio
amoniacal, devido s reaes de amonificao sofridas por compostos nitrogenados
orgnicos.
8.12. Determinao de nitrognio orgnico

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70

Para a determinao da concentrao do nitrognio orgnico, deve-se subtrair o


valor da concentrao do nitrognio amoniacal do valor da concentrao do nitrognio total.
8.13. Operao do equipamento de anlise do nitrognio total Kjeldahl

Observao: A descrio de operao do Digestor de nitrognio restrita marca


Marconi. Para outras marcas, utilizar manual do fabricante.
Cuidados com o digestor:
O processo de digesto dever ser conduzido no interior de uma capela e com a
utilizao do sistema exaustor/neutralizador para gases de digesto (scrubber);
No levantar a galeria durante a digesto;
Adicionar as prolas de vidro ou cacos de porcelana aos tubos de digesto/destilao
para amenizar a turbulncia da ebulio, no caso do digestor/destilador Marconi; no h
necessidade das prolas no sistema Velp do LPB vou adicionar o arquivo para
metodologia Velp).
(a) Colocar os tubos de digesto/destilao limpos e secos no suporte. Adicionar a
cada tubo 3 ou 4 prolas de vidro (ou cacos de porcelana), a amostra a ser
analisada, a soluo de cido sulfrico e a mistura de sais;
(b) colocar o suporte sobre o bloco digestor e ajustar, no controlador, o set-point
de temperatura para 380oC. H grande formao de SO 3 (fumaa branca)
durante a digesto da amostra;
(c) a digesto estar completa quando as amostras apresentarem colorao verdeclara, em tempo dependente da composio da amostra;
(d) Terminada a digesto, desligar o bloco digestor, retirar o suporte e deixar as
amostras resfriarem naturalmente;
(e) Ento dar incio operao com o destilador.
(i) Destilador de amnia
Operao inicial:
(a) Verificar as conexes hidrulica e eltrica. O potencimetro de aquecimento e as
chaves (geral e aquecimento) devero estar desligados. O potencimetro dever
estar na posio mnima;
(b) abrir a torneira e aguardar que a gua flua pela mangueira de sada em direo
pia;
(c) ligar a chave geral. Verificar se a luz interna de trabalho ascendeu, bem como o
"led" geral;

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(d) acionar o interruptor indicativo da caldeira at que a gua da caldeira acione o


"led" verde (mnimo) e o "led" vermelho (mximo). Quando este ltimo aparecer
iluminado, solt-lo imediatamente para que o fornecimento de gua seja
interrompido;
(e) acionar o interruptor de aquecimento, girar o potencimetro at o mximo
(sentido horrio) e aguardar a fervura e a produo de vapor;
(f) quando vapor comear a sair pelo tubo lateral de teflon, desligar a chave de
aquecimento e voltar o potencimetro para a posio intermediria evitando um
"over-flow" na segunda bola de Kjeldahl, situao

observada atravs do visor

cilndrico frontal.
Operao de trabalho:
(a) Ao frasco de Erlenmeyer, que receber o destilado, adicionar 100 mL de soluo
de cido brico 2%, e 4 a 5 gotas do indicador misto. Introduzindo o bico do
condensador no frasco, posicion-lo sobre a mesa suporte e regular sua altura
atravs do parafuso com canopla preta;
(b)

a sada do condensador deve permanecer mergulhada na soluo de cido


brico para evitar perdas de nitrognio amoniacal. Porm, o bico no deve tocar
o fundo do frasco. Recomenda-se que seja colocado um pedao de mangueira de
silicone na sada do condensador , cortada em bizel, para evitar contato
completo com o fundo do frasco de Erlenmeyer;

(c) para a anlise de nitrognio total Kjeldahl, abrir a porta de acrlico, introduzir o
tubo de digesto contendo a amostra digerida e 50 mL de gua destilada;
(d) para a anlise de nitrognio amoniacal, abrir a porta de acrlico, introduzir o tubo
contendo 100,0 mL de amostra e 3 ou 4 prolas de vidro;
(e) apoiar o tubo na base do macaco e girar a plataforma para prend-lo no bocal
apropriado. Fechar a porta de acrlico. A presso exercida no deve ser muito
forte, devendo o tubo estar suficientemente acoplado ao bocal para evitar perda
de nitrognio amoniacal;
(f) cuidadosamente, completar o volume do copo, at 150 mL, com soluo de
NaOH. Este procedimento dever evitar transbordamento. Dosar, lentamente, 50
mL de soda atravs da vlvula frontal. Observar a colorao do lquido no interior
do tubo. Caso o lquido no tenha escurecido, adicionar mais soda;
(g) verificar se os dois "leds" (vermelho e verde) indicadores de nvel esto acesos.
Acionar a chave de aquecimento geradora de vapor e iniciar a destilao. O
volume final do destilado dever ser, no mnimo, o dobro do volume inicial da
soluo coletora;
(h) assim que terminar a operao, abaixar frasco de Erlenmeyer e lavar o bico do
condensador com gua destilada, recebendo a gua de lavagem no destilado.
Retirar o frasco e reserv-lo para titulao;

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(i)

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desligar a chave de aquecimento, sem mudar a posio do potencimetro, e


aguardar alguns segundos para retirar o tubo de destilao com o resduo.
Cuidado, temperatura muito alta!Transferir o contedo (atravs de peneira) para
frasco de resduo especfico e deixar o tubo com as prolas de vidro resfriar
normalmente, para posterior lavagem;

(j)

comear a prxima destilao, a partir do primeiro item de operao de trabalho;

(k) quando terminarem as amostras, limpar o equipamento, como descrito nos itens
a seguir.
Limpeza do equipamento
(a) Copo da soluo de NaOH:

Abrir a vlvula e coletar, em copo de Beacher, a soluo de NaOH


remanescente. Guard-la para posterior utilizao;

enxaguar vrias vezes o copo de soda com gua .


(b) Condensador:

Colocar 100 mL de gua destilada no tubo de destilao. Colocar o frasco de


Erlenmeyer, coletor de destilado, no local apropriado e proceder a destilao
durante 5 minutos;

desligar o aquecimento, retirar o tubo e o frasco coletor para posterior


lavagem. Cuidado: o tubo estar muito quente.
(c) Caldeira:

Esgotar a caldeira pela retirada do tampo da conexo marcado no prprio


equipamento. Se houver demora, acionar o interruptor de gua (nvel da
caldeira) para que o esgotamento se d mais rapidamente, aps retirada de ar
da linha;

encher novamente a caldeira, aquecer e repetir a operao. Desligar a


resistncia e permanecer com o comando de aquecimento desligado
durante essa operao.
(d) Vidraria:

Lavar criteriosamente os frascos de Erlenmeyer e os tubos de digesto, bem


como os demais recipientes utilizados, deixando-os em condies de uso para
a prxima srie de anlises;

guardar a vidraria limpa e seca prxima ao digestor e destilador.


Cuidados com o destilador:
(a) Encher a caldeira com gua antes de acionar a chave de aquecimento;
(b) no derramar soluo de soda pelas bordas do copo;
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73

(c) sempre colocar algumas prolas de vidro ou cacos de porcelana, secos em


estufa, no tubo de digesto;
(d) sempre enxugar o assoalho do equipamento e o macaco contra respingos de
gua e outros;
(e) diminuir a potncia do "dimer", ao verificar, pelo visor frontal, que o lquido a ser
destilado est atingindo a ltima bola de Kjeldahl. No confundir esse lquido
com condensado lmpido. Se atemperatura do condensado estiver alta, diminuir
a temperatura do dimer.

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74

9. NITRITO/NITRATO MTODO ESPECTROFOTOMTRICO


9.1.

Conceitos Fundamentais

A outra poro da matria nitrogenada inorgnica presente em guas naturais ou


residurias representada pelas formas oxidadas de nitrognio: nitrato (NO3-) e nitrito
(NO2-).
Nitrato (N-V) ocorre, geralmente, em pequenas quantidades nas guas superficiais,
mas pode atingir altos nveis em guas subterrneas. Em excesso, contribui para o
desenvolvimento da doena conhecida como metahemoglobinemia, que acomete crianas.
encontrado apenas em esgotos domsticos frescos, mas no efluente de instalaes de
tratamento, pode atingir concentraes superiores a 30 mgNO3-/L.
Nitrato

um

dos

nutrientes

essenciais

para

muitos

seres

autotrficos

fotossintezantes, sendo, em alguns casos, identificado como fator limitante ao aumento


desses organismos.
Nitrito apresenta nitrognio em estado de oxidao III. Pode ser produzido a partir da
reduo de nitrato em condies anaerbias ou por oxidao de amnio em ambientes
aerbios. As reaes de oxidao e de reduo podem ocorrer em instalaes de tratamento
de guas residurias, em sistemas de distribuio de gua e em ambientes naturais. Nitrito
pode estar presente no sistema de suprimento de guas por ser usado como inibidor de
corroso em processos industriais. O cido nitroso, formado a partir de nitrito em soluo
cida, pode reagir com aminas secundrias e formar nitrosaminas, muitas das quais,
carcinognicas. O significado toxicolgico das reaes de nitrosao in vitro e no meio
natural o objeto de muitas pesquisas.
Um processo de oxidao importante no tratamento de esgotos refere-se s formas
nitrogenadas. on amnio transformado em nitrito e este, em nitrato, durante o fenmeno
denominado nitrificao. Os microrganismos envolvidos nesse processo so auttrofos
quimiossintetizantes, cujos principais substratos so: de carbono, gs carbnico, e de
energia, transformao de fontes inorgnicas reduzidas, como amnio, a formas oxidadas. A
transformao de amnio em nitrito realizada pelas bactrias do gnero Nitrosomonas, de
acordo com a seguinte reao:

2NH4 3O2 2NO2 4H 2H2 O


Equao 31
A oxidao dos nitritos a nitratos d-se, principalmente, pela atuao das bactrias
do gnero Nitrobacter, sendo expressa por:

2NO2 O2 2NO3

Equao
32

A reao global da nitrificao a soma das reaes anteriores:


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75

NH4 2O2 NO3 2H H2 O

Equao
33

Por outro lado, em condies anxicas (ou seja, na ausncia de oxignio livre), nitrato
utilizado pelos microrganismos heterotrficos como aceptor de eltrons, em substituio
ao oxignio. Nesse processo, denominado desnitrificao, nitrato reduzido a nitrognio
gasoso, segundo a reao:

NO3 2H N2 2,5O2 H2 O

Equao
34

As

concentraes

de

nitrito

de

nitrato

nos

processos

de

nitrificao

desnitrificao ocorridos nos processos de tratamento de guas residurias podem ser


acompanhadas atravs de anlises espectrofotomtricas. A espectrofotometria um
processo de medida que emprega, basicamente, a propriedade de ons e molculas de
absorver energia de uma das regies do espectro eletromagntico, mostrada na Tabela 6.

Tabela 6. Regies do espectro eletromagntico.

ngstrom ()
Nanmetro
(nm)
Micra ()
Centmetro
(cm)

Raios
gama
1

10

Ultraviolet
a
1800

180

380

780

0,7

400

0,04

25

Raios X

3800

Infravermelho
7800

Microonda
-

Ondas
de rdio
-

Visvel

O mtodo espectrofotomtrico baseia-se na absoro de luz visvel ou outra energia


radiante pela soluo. A quantidade de energia radiante absorvida deve ser proporcional
concentrao do material absorvente na soluo. Assim, pela medida da absoro da luz, ou
outra energia radiante, possvel determinar quantitativamente a substncia absorvente
presente. A concentrao da substncia de interesse calculada pela luz absorvida e
comparada

com

absorbncia

de

solues-padro.

Para

determinao

espectrofotomtrica das concentraes de nitrato e nitrito, as regies consideradas so:


visvel (NO2- e NO3-) e ultravioleta (NO3-).
O mtodo de determinao espectrofotomtrica do nitrito proposto por Bendschneider e
Robinson (1952) baseia-se na sua reao, em meio cido (pH 2,0 a 2,5), com sulfanilamida,
segundo a reao:

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NH2 SO4 C6H4NH2HCl HNO2

76

NH2 SO2 C6H4N NCl 2H2 O

Equao 35
O composto formado reage com bicloridrato de (1-naftil)etilenodiamina e forma um
outro composto nitrogenado, colorido (roxo-avermelhado), cuja frmula no exatamente
conhecida. Os autores apresentaram duas possibilidades para o mecanismo dessa reao:

NH2 SO2 C6H4N NHCl C10H7NHCH2 CH2NH2 .2HCl

NH2 SO2 C6H4N NNHCH2 CH2NH(C10H7


Equao 36

NH2 SO2 C6H4N NCl C10H7NHCH2 CH2NH2 .2HCl

NH2 SO2 C6H4N NC10H6NHCH2 CH2NH2 .


Equao 37

A faixa aplicvel do mtodo para medidas espectrofotomtricas de 5 gN-NO2-/L a


1000 gN-NO2-/L. Segundo APHA (1998), para passo tico de 1,0 cm e comprimento de onda
de 543nm, usar concentraes entre 180 gN-NO2-/L e 1000 gN-NO2-/L. Para passo tico de
5,0 cm, usar concentraes entre 5gN-NO2-/L e 50 gN-NO2-/L. Concentraes mais altas
podem ser determinadas aps diluio das amostras em gua desaerada.
Segundo Golterman (1969), o branco deve ser preparado pela adio de 1,0 mL de
uma soluo de sulfamato de amnio 5% gua destilada (ou ultrafiltrada). Sulfamato de
amnio converte nitrito em xido nitroso. Esta sugesto geralmente no seguida nas
rotinas de laboratrio, j que a gua destilada de boa qualidade e se apresenta isenta
tanto de nitritos, quanto de nitratos.
De acordo com Strickland

e Parsons

(1968), este mtodo no afetado

apreciavelmente pela salinidade, pequenas mudanas na concentraes ou volumes dos


reagentes e pela temperatura. Entretanto, os pesquisadores sugerem que o trabalho seja
feito entre 15C e 20C. Correo de turbidez pode ser necessria com utilizao de cubeta
com passo ptico de 5,00cm. O mesmo pode ser dito quanto colorao da amostra. A
nica fonte de erro, citada por Golterman (1969), a causada por altas concentraes de
nitrito. Segundo este autor, se a quantidade de nitrito for estequiometricamente superior
quantidade de sulfanilamida adicionada (e, portanto, fora do alcance do mtodo), o excesso
de nitrito destruir o bicloridrato de n-(1-naftil)-etilenodiamina. Isto causar um erro
negativo, pois praticamente nenhuma colorao ser desenvolvida. Para esses casos,
diluies das amostras com gua destilada, livre de oxignio, sero necessrias.
A

incompatibilidade

qumica

torna

improvvel

que

nitrito,

cloro

livre

tricloronitrognio (NCl3) coexistam. Alm disso, NCl3 comunica uma falsa cor vermelha
quando o reagente colorido for adicionado. Os ons Sb 3+, Au3+, Bi3+, Fe3+, Pb2+, Hg2+, Ag+,
PtCl62- e VO32- interferem na anlise devido precipitao sob as condies do teste e
devem, portanto, estar ausentes. O on cprico pode causar baixos resultados em funo da
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decomposio catalisada do sal diaznio. ons coloridos que alteram a cor do sistema
tambm devem estar ausentes e os slidos suspensos devem ser removidos atravs de
filtrao (APHA, 1995).
Segundo Golterman (1969), a preciso e a exatido do mtodo so estimadas em
1,5%. Segundo APHA (1995), anlises realizadas em um nico laboratrio, com amostras de
guas residurias em concentraes de 0,04; 0,24; 0,55 e 1,04 mg(NO 3- + NO2-)/L, os
desvios padro foram: 0,005; 0,004; 0,005 e 0,01, respectivamente. Para as mesmas
amostras de guas residurias, nas concentraes de 0,24; 0,55 e 1,04 mg-(NO 3- + NO2-)/L,
as percentagens recuperadas foram: 100%, 102% e 100%, respectivamente.
A determinao de nitrato (NO 3-) difcil devido necessidade de procedimentos
relativamente complexos, alta probabilidade de interferncia por parte de algum composto
ou on e s limitadas faixas de concentrao das vrias tcnicas.
Uma das tcnicas mais utilizadas Espectrometria de Absoro Ultravioleta. Medidas
de absoro de luz ultravioleta, em um comprimento de onda de 220nm, permitem
determinao rpida do on nitrato. Entretanto, matria orgnica absorve ondas de 220nm e
de 275nm, mas on nitrato no absorve esta ltima. Uma segunda medida em 275 nm
necessria para que o valor de absorbncia referente matria orgnica seja subtrada.
A extenso dessa correo emprica est relacionada natureza e concentrao da
matria orgnica e dependem muito da origem da amostra. Contudo, para amenizar essa
interferncia, a amostra pode ser tratada com uma soluo de hidrxido de alumnio para
que a matria orgnica seja precipitada e, posteriormente, separada utilizando-se um filtro
com poros 0,45 m.
A amostra tambm poder ser acidificada com uma soluo HCl 1N para prevenir a
interferncia de hidrxidos ou carbonatos em concentraes superiores a 1g CaCO 3/L.
Uma correo mais eficaz da interferncia da matria orgnica pode ser realizada
pela digesto da amostra com persulfato de potssio, em meio cido, a quente. Neste caso,
N orgnico convertido em NH4+ e C orgnico, em CO2.
Alm da matria orgnica dissolvida, hidrxidos, carbonatos, nitrito, Cr(VI),clorito e
clorato, tambm podem interferir. Substncias inorgnicas podem ser compensadas por
anlises independentes com preparao de curvas de correo individuais.
9.2.

Material

Bomba de vcuo
Funil tipo Buchner para membrana com dimetro de 47 mm, Kitassato de 250 mL
ealongas de borracha para filtrao, ou
kit de filtrao vcuo da Millipore (Nalgene) para membrana com dimetro de 47
mm
Membranas de filtrao de ster de celulose de 0,45 m e 1,2 m de tamanho de
poro com dimetro de 47 mm
Provetas de 50 mL

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Bales volumtricos de 100,0 e 1000 mL


Bqueres de 50 e 100 mL
Medidor de pH (preciso 0,01)
Pipetador automtico de 10,0 mL ou Pipeta graduada de 10,0 mL
Cubetas de quartzo
Tubos de DQO (padro HACH)
Espectrofotmetro UV-VIS
Estufa 103oC
Dessecador com slica
Balana analtica (preciso 0,0001)
cido Sulfrico H2SO4 concentrado 96-97% P. A.
Hidrxido de Sdio NaOH P. A. (em lentilha)
Nitrato de Sdio NaNO3 P. A.
Nitrito de Sdio NaNO2 P. A.
Permanganato de Potssio KMnO4 P. A.
cido Oxlico H2C2O4.2H2O P. A.
Sulfanilamida NH2SO4C6H4NH2HCl P. A.
Bicloridrato de n-(1-Naftil)-Etilenodiamina C10H7NHCH2CH2NH2.2HCl P. A.
Sulfato de Alumnio e Potssio AlK(SO4)2.12H2O P. A.
9.3.

Determinao de nitrito

9.3.1. Preparo da soluo de sulfanilamida


Dissolver 5,0 g de Sulfanilamida em uma mistura contendo 50 mL de cido
Clordrico concentrado (ou seja, obtido diretamente do frasco) e 300 mL de gua
destilada; completar o volume do balo de 500 mL com gua destilada e guardar em
um frasco escuro na geladeira. Esta soluo se mantm estvel durante vrios
meses.
9.3.2. Preparo da soluo de bicloridrato de n-(1-naftil)-etilenodiamina
Dissolver 0,5 g de Bicloridrato de n-(1-Naftil)-Etilenodiamina em 500 mL de
gua destilada;estocar a soluo em frasco escuro, na geladeira, e renov-la
mensalmente ou quando se desenvolver uma forte colorao marrom.
9.3.3. Levantamento da curva de calibrao
(a) Dissolver 0,2460 g de NaNO2 (massa frmula = 69 g) e completar at 1000,0mL
com gua destilada (soluo A);
(b) diluir 5,00 mL da soluo A para 500,0 mL com gua destilada (soluo B);
(c) para o primeiro ponto da curva, diluir 200uL da soluo B em balo volumtrico
de 10,0 mL e completar o volume com gua destilada. Esta nova soluo
corresponder a uma soluo de 0,010 mgNO 2-/L. As demais solues de padres
devem ser preparadas segundo a Tabela 14.1;
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79

(d) construir a curva de calibrao, ajustando os valores de concentrao dos


padres em funo dos respectivos valores de absorbncia (543 nm).

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Tabela 7. Volumes requeridos da soluo B para preparar a curva de calibrao.


Concentrao padro NO2(mg/L)
0,010
0,020
0,040
0,060
0,080
0,10
(1)
Obs:
1,00 mL da

Volume (mL) da soluo B para


100,0 mL da soluo de
calibrao
2,0
4,0
8,0
12,0
16,0
20,0
soluo A corresponde a 0,050 mgN-NO2-.

(2)

1,00 mL da soluo B corresponde a 0,00050 mgN-NO2-.

(3)

(0,2460 g / 69 g) 14000 mg-N/mol-N = 50 mgN-NO2-.

(4)

14000 o equivalente-grama do nitrognio contido no NO2-.

(5)

A curva de calibrao dever ser refeita todas as vezes que novos


reagentes

forem

preparados

ou

que

aparelho

passe

por

manuteno.
9.3.4. Determinao da concentrao de nitrito
Se necessrio, diluir e filtrar a amostra atravs de membrana com 1,2 m de
tamanho de poro;
Transferir 9,0 mL da amostra para tubo de vidro com tampa rosquevel, adicionar 0,2 mL da
soluo de Sulfanilamida, tampar, agitar para homogeneizar e deixar em repouso por 2 a 8
minutos (no mximo) para que a reao de diazotisao se complete, e no haja
decomposio do produto formado. Em seguida, adicionar 0,2 mL da soluo de Bicloridrato
de n-(1-Naftil)-Etilenodiamina ,tampar e agitar imediatamente. A leitura deve ser realizada
em at 2 horas aps a adio do segundo reagente, utilizando os prprios tubos como
cubetas no espectrofotmetro, no comprimento de onda de 543 nm. Amostras e padres
mais concentrados apresentaro colorao rosada.
9.4.

Determinao de nitrato

9.4.1. Preparo da suspenso de hidrxido de alumnio


(a) Dissolver 125 g de sulfato de alumnio e potssio (AlK(SO 4).12H2O) em gua
destilada ou ultra filtrada e completar para 1000mL em balo volumtrico;
aquecer a mistura a 60oC e adicionar, lentamente e sob agitao, 250 mL de
soluo de NaOH 2,0 N. Ocorrer a seguinte reao:
Al3++ K+ + 2(SO4)2- + 4Na+ + 4OH- Al(OH)3 + K+ + OH- + 4 Na+ + 2(SO4)2- (14.1)
(b) deixar a mistura em repouso, descartar o sobrenadante e lavar o precipitado com
gua destilada por vrias vezes, para remoo dos ons.
sobrenadante e armazenar apenas a suspenso concentrada.

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Descartar o

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81

9.4.2. Preparo da soluo de hidrxido de sdio (2 M)


Dissolver 40 g de NaOH em 300 mL de gua destilada. A dissoluo dever ser
conduzida com muito cuidado, uma vez que a reao extremamente exotrmica; aps o
resfriamento da soluo temperatura ambiente, transferir para balo volumtrico de 500
mL e completar o volume com gua destilada.
9.4.3. Levantamento da curva de calibrao
(a) Secar cerca de 1,0 g de NaNO 3 (massa molecular 85 g/mol) em estufa, a 103 oC,
por 24 horas;
(b) aps resfriamento em dessecador, disolver 0,6071 g do reagente em gua
destilada e diluir para 1000mL em balo volumtrico;
(c) para o primeiro ponto da curva, tranferir 1,00 mL da soluo-me para balo de
100,0 mL e completar o volume com gua destilada. Esta nova soluo
corresponder a uma soluo padro de 1,0 mgNO 3-/L. As demais solues
devem ser preparadas segundo a Tabela 14.2;
(d) construir a curva de calibrao, ajustando-se os valores de concentrao padro
em funo dos respectivos valores de absorbncia (220 e 275 m).

Tabela 8. Volumes requeridos da soluo-me para preparar a curva de calibrao.


Concentrao padro NO3(mg/L)

Volume (mL) da soluo-me


para 100 mL da soluo de
calibrao
1,00
2,00
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0

1,0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
Obs.: (1) 1 mL da soluo corresponde a 100 g de N-NO3- = 0,10 mg N-NO3.
(3)

(0,6071 g / 85 g/mol) 14000 mg-N/mol-N = 100 mgN-NO 3-.

(4)

14000 o equivalente-grama do nitrognio contido no NO3-.

(5)

A curva de calibrao dever ser feita todas as vezes que novos


reagentes

forem

preparados

ou

que

aparelho

passe

por

manuteno.
9.4.4. Determinao da concentrao de nitrato
(a) Adicionar 2,0 mL da suspenso de Al(OH) 3 a 100 mL da amostra filtrada atravs
de membrana filtrante de 0,45 m de tamanho de poro;
(b) agitar e deixar em repouso por cerca de 2 horas, para que a matria orgnica
seja sedimentada;
(c) aps este perodo, filtrar novamente a amostra utilizando uma membrana
filtrante de 0,45 m de tamanho de poro. Pode-se utilizar a mesma membrana;
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(d) fazer a leitura de absorbncia das amostras, utilizando cubeta de quartzo, em


dois comprimentos de onda: 220 nm (nitrato e matria orgnica) e 275 nm
(matria orgnica);
(e)

subtrair o dobro da leitura de absorbncia a 275 nm, da leitura a 220 nm, para
obter a absorbncia devida a nitrato.

Absorbncia devida a nitrato = (absorbncia lida em 220 nm) 2 (absorbncia lida em 275 nm)
(14.1)

(f)

usar absorbncias corrigidas das amostras para se determinar as concentraes


das amostras diretamente da curva de calibrao.

A leitura em 275 m no deve exceder 10% do valor lido em 220 m. Se isto ocorrer,
significa que a matria orgnica no foi totalmente removida. Deve-se repetir o preparo da
amostra adicionando-se um volume maior de Al(OH) 3 e repetindo-se os procedimentos (b) a
(d).
O branco lido nos dois comprimentos de onda (220 e 275 nm).

Observao: Quando a alcalinidade for maior que 100 mgCaCO 3/L, deve-se
acidificar a amostra adicionando-se 1 mL de HCl 1N.
Observao: Quando nitrognio amoniacal for convertido a nitrito ou nitrato, a
alcalinidade da gua residuria diminui.

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10.FSFORO TOTAL

E INORGNICO

MTODO

83

DA REDUO COM CIDO ASCRBICO

10.1. Conceitos Fundamentais


Fosfatos so as principais fontes de fsforo em guas naturais e residurias, bem
como na matria orgnica. Em meio cido, molibdato de amnio e tartarato de potssio e
antimnio reagem com on ortofosfato (PO43-), formando cido fosfomolbdico (de colorao
amarela). Este cido reduzido pelo cido ascrbico, formando o complexo azul de
molibdnio, que absorve radiao de 882 nm. A absorbncia proporcional concentrao
de ortofosfato presente na amostra, at aproximadamente 1300g P.L -1.
A quantificao do fsforo total envolve duas etapas gerais: sua converso, atravs
de digesto, a ortofosfato dissolvido e sua determinao espectrofotomtrica.
Nitrito e dicromato interferem, diminuindo os resultados em 3% quando em
concentraes em torno de 1mg.L-1 e em 10% a 15%, a 10mg.L -1. Arsenatos reagem da
mesma forma que

fosfatos, interferindo positivamente. Concentraes da ordem de

-1

0,1mg.L de As j causam interferncias. Sulfeto (Na2S) e silicato podem interferir quando


suas concentraes superarem 10mg.L-1.
10.2.

Fsforo inorgnico

10.2.1.

Material

Balo volumtrico de 100,0 mL


Balo volumtrico de 1000 mL
Copos de Becker
Espectrofotmetro com cubetas de passo tico de 1,00 cm
Pipetas volumtricas de 1,00 e 10,0 mL
Tubos de ensaio de 20 mL com rosca e tampa de teflon
cido ascrbico
cido sulfrico H2SO4 P. A.
Fosfato monobsico de potssio KH2PO4 anidro
Molibdato de amnio (NH4)6Mo7O24.4H2O P. A.
Tartarato de potssio e antimnio K(SbO)C4H4O6.H2O P. A.
10.3. Preparo do reagente misto
Adicionar os reagentes na ordem apresentada.
(a)

Em frasco de Erlenmeyer de 50 mL, adicionar 12,5 mL de cido sulfrico.

(b)

Adicionar 1,25 mL de soluo de tartarato de potssio e antimnio e agitar.

(c)

Adicionar 3,75 mL de soluo de molibdato de amnio e agitar.

(d)

Adicionar 7,5 mL de soluo de cido ascrbico e agitar

Observaes:
A soluo estvel por 4 horas.

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10.4.

84

Preparao da soluo de molibdato de amnio

(a) Completar o volume at 500 mL;


(b) agitar e deixar em repouso por cerca de 2 horas, para que a matria orgnica
seja sedimentada;

Observao: estocar em frasco de vidro.


10.5. Preparao da soluo de tartarato de potssio e antimnio
(a) Transferir 1,3715 g de tartarato de potssio e antimnio para balo volumtrico
de 500 mL com certa quantidade de gua destilada, agitando para dissoluo.
Completar o volume com gua destilada.

Observao: estocar em frasco de vidro.


10.6. Preparao da soluo de cido sulfrico 5 N
(a) Em frasco de Erlenmeyer, adicionar 140 mL de cido sulfrico a 800 mL de gua
destilada;
(b) aps resfriar, transferir para balo volumtrico de 1000mL e completar o volume
com gua destilada.

Observao: estocar em frasco de vidro.


10.7. Preparao da soluo de cido ascrbico
(a) Dissolver 1,76 g de cido ascrbico em 100 mL de gua destilada.

Observao: Estocada a 4C, a soluo estvel por aproximadamente uma


semana.
10.8. Construo da curva padro de fsforo inorgnico
(a) Preparar a soluo padro de fosfato monobsico de potssio, de cerca de 40 mg
P.L. Usando gua destilada, transferir cerca de 0,1757 g de fosfato monobsico
de potssio anidro para um balo volumtrico de 1000 mL. Adicionar 1,25 mL de
soluo concentrada de H2SO4 e completar o volume. Estocar em frasco escuro.
(b) A partir das concentraes de fsforo inorgnico de interesse, transferir as
alquotas correspondentes s diferentes concentraes de fosfato para um balo
volumtrico de 100,0 ml, sabendo-se que, nessas condies, 1,00 mL de soluo
corresponde concentrao de 0,4 mg P/L. A tabela abaixo apresenta um
exemplo de construo de curva.

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Tabela 9. Preparao da curva padro de fsforo inorgnico.


Alquota de soluo
padro no balo de 100
ml
(mL)
0,25
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
3,50
4,00
4,50

Concentrao
(mgP/L)
0,1
0,2
0,4
0,6
0,8
1,00
1,20
1,40
1,60
1,80

ABS 01

ABS 02

ABS
mdia

(a) Dissolver 1,76 g de cido ascrbico em 100 mL de gua destilada;


(b) preparar rplicas de cada concentrao e dois ensaios em branco, utilizando o
mesmo procedimento de anlise apresentado no Item 10.10;
(c) efetuar a leitura da absorbncia no espectrofotmetro e no comprimento de
onda de 882 nm;
(d) a partir das leituras obtidas (utilizando a mdia dos valores de absorbncia),
traa-se a curva absorbncia concentrao de fsforo inorgnico, para
obteno de equao de correlao e avaliao da representatibilidade e
confiabilidade do mtodo (r2 = 0,999).
10.9. Preparao de soluo padro de fosfato monobsico de potssio

10.10.

Determinao da concentrao de fsforo inorgnico

(a) Transferir 10,0 mL de amostra, bruta ou diluda, ao tubo de ensaio;


(b) adicionar 1,00 mL de reagente misto e homogeneizar;
(c) aps o desenvolvimento da cor azul, ler em espectrofotmetro, no comprimento
de onda de 882 nm;
(d) preparar dois brancos, seguindo o mesmo procedimento, usando 10,0 mL de
gua destilada;
(e) determina-se a concentrao de fsforo de acordo com a equao da reta obtida
com padres pr-estabelecidos.
10.11.

Fsforo total

10.11.1.

Material

Autoclave
Balo volumtrico de 100 mL
Balo volumtrico de 1000 mL
Basto de vidro
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Copos de Becker
Espectrofotmetro (DR4000) com passo tico de 1 cm
Pipetas volumtricas de 1 e 10 mL
Tubos de ensaio de 20 mL com rosca e tampa de teflon
cido ascrbico
cido sulfrico H2SO4 P. A.
Fosfato monobsico de potssio KH2PO4 anidro
Molibdato de amnio (NH4)6Mo7O24.4H2O P. A.
Persulfato de sulfato xxxxxxxxx
Tartarato de potssio e antimnio K(SbO)C4H4O6.H2O P. A.
10.12.

Preparo da soluo saturada de persulfato de potssio

Transferir pequenas quantidades de persulfato de potssio para Becker contendo um


volume adequado de gua destilada para ser consumido imediatamente e agitar com
basto de vidro. A soluo dever estar saturada, o que constatado pela presena de
pequena quantidade de cristais no fundo do frasco. Usar apenas a soluo sobrenadante. A
soluo aquosa saturada de persulfato de potssio resultante apresenta concentrao
prxima a 20 g/L.
10.13.

Preparo do reagente misto

(a) Em becker de 50 mL, adicionar 12,5 mL de cido sulfrico;


(b) adicionar 1,25 mL de soluo de tartarato de potssio e antimnio;
(c) adicionar 3,75 mL de soluo de molibdato de amnio;
(d) adicionar 7,5 mL de soluo de cido ascrbico.

Observao: agitar aps a adio de cada reagente.


Observao: a soluo estvel por 4 horas.
Observao: adicionar os reagentes na ordem apresentada.
10.14.

Preparo da soluo de molibdato de amnio

(a) Dissolver 20 g de molibdato de amnio em uma certa quantidade de gua


destilada;
(b) completar o volume at 500 mL.

Observao: estocar em frasco fechado de vidro.


10.15.

Metodologia para preparo da soluo de tartarato de potssio

e antimnio
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(a) Transferir 1,3715 g de tartarato de potssio e antimnio para balo volumtrico


de 500 mL com certa quantidade de gua destilada, agitando para dissoluo;
(b) completar o volume at 500 mL com gua destilada.

Observao: estocar em frasco fechado de vidro.


10.16.

Metodologia para preparo da soluo de cido sulfrico 5 N

(a) Adicionar 140 mL de cido sulfrico a 800 mL de gua destilada em frasco de


erlenmeyer;
(b) aps resfriar, transferir para balo volumtrico de 1 L;
(c) completar o volume at 1 L com gua destilada.

Observao: estocar em frasco de vidro.


10.17.

Metodologia para preparo da soluo de cido ascrbico

Dissolver 1,76 g de cido ascrbico em 100 mL de gua destilada.

Observao: A soluo estvel por aproximadamente uma semana.


Observao: Estocar a 4C.
10.18.

Determinao da concentrao de fsforo total

(a) Transferir 10 mL de amostra, bruta ou diluda, aos tubos de ensaio;


(b) adicionar 1 mL de soluo saturada de persulfato de potssio;
(c) fechar os tubos de ensaio com tampa de teflon e aquecer em autoclave, a 120 C
e presso de 1 atm, durante 1 hora;
(d) resfriar temperatura ambiente;
(e) adicionar 1 mL de reagente misto;
(f) aps o desenvolvimento da cor azul, ler a absorbncia a 882 nm, em cubeta de 1
cm;
(g) preparar dois brancos, seguindo o mesmo procedimento, usando 10 mL de gua
destilada;
(h) determina-se a concentrao de fsforo total de acordo com a equao da reta
obtida com padres pr-estabelecidos.
10.19.

Metodologia para construo da curva padro de fsforo total

(a) Preparar a soluo padro de fosfato monobsico de potssio, de cerca de 123


mg PO42-/L;
(b) a partir das concentraes de fsforo total de interesse, transferir as alquotas
correspondentes s concentraes de fosfato pleiteadas para um balo

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volumtrico de 100 mL, sabendo-se que, nestas condies, 1 mL de soluo


corresponde a concentrao de 1,23 mg PO42-/L;
(c) preparar rplicas de cada concentrao e dois ensaios em branco, utilizando o
mesmo procedimento de anlise apresentado no Item 10.18;
(d) efetuar a leitura da absorbncia no espectrofotmetro e no comprimento de
onda de 882 nm;
(e) a partir das leituras obtidas (utilizando a mdia dos valores de absorbncia),
traa-se a curva absorbncia concentrao de fsforo inorgnico, para
obteno de equao de correlao e avaliao da representatibilidade e
confiabilidade do mtodo (r2 = 0,999).
10.19.1.

Metodologia

para

preparo

da

soluo

padro

de

fosfato

monobsico de potssio
(a) Transferir cerca de 0,1757 g de fosfato monobsico de potssio anidro para um
balo volumtrico de 1000 mL usando gua destilada;
(b) adicionar 1,25 mL de soluo concentrada de H2SO4 e completar o volume.

Observao: estocar em frasco escuro

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11.SULFATO MTODO TURBIDIMTRICO


11.1. Conceitos Fundamentais
O on sulfato, em meio contendo cido actico, precipitado por cloreto de brio,
formando micro-cristais uniformes de sulfato de brio, conforme a equao:

SO42 Ba2 BaSO4

Equao
38

A determinao da concentrao de sulfato em amostra feita atravs da


determinao da absoro de luz de 420nm pela suspenso de sulfato de brio em
comparao

com

curva

de

calibrao.

concentrao

2- -1

mnima

detectvel

de

2- -1

aproximadamente 1mgSO4 L e a mxima, 40mgSO4 L , com cubetas de de passo tico de


2,50cm e 10,0cm.
Colorao e slidos em suspenso da amostra podero interferir nos resultados.
Slidos em suspenso devem ser removidos atravs de filtrao. Interferncia de colorao,
se muito menor que a concentrao de on sulfato, pode ser corrigida utilizando-se, como
branco, a amostra sem a adio de cloreto de brio. Silicato em concentrao superior a 500
mg.L-1 precipitar com brio, interferindo positivamente. Elevada quantidade de matria
orgnica dissolvida afetar a precipitao de sulfato de brio.
Segundo APHA (1995), a anlise de uma amostra com valor mdio de concentrao
de 7,45mg SO42-.L-1 apresentou o desvio padro de 0,13mg SO 42-.L-1 e coeficiente de variao
de 1,7%. Duas amostras preparadas com sulfato apresentaram recuperaes de 85% e 91%.
Elevadas

concentraes

de

sulfato

devem

ser

determinadas

por

mtodo

gravimtrico, aps precipitao com cloreto de brio, filtrao e secagem do precipitado de


amostras pobres em matria orgnica. Precipitados gerados em amostras com altos teores
de matria orgnica devem ser calcinados.
11.2. Material
Agitador magntico ou agitador de tubos
Colher de medida com capacidade de 0,20 a 0,30 mL
Cronmetro digital
Espectrofotmetro com passo tico de 2,5 a 10.0 cm
Tubos de centrfuga
Becker de 50 mL
Acetato de sdio hidratado CH3COONa.3H2O
Acido actico CH3COOH P. A.
Cloreto de brio em cristais BaCl2
Cloreto de magnsio hidratado MgCl2.6H2O
Nitrato de potssio KNO3
Sulfato de sdio NaSO4

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11.3. Metodologia preparo da Soluo Tampo A


(a) Em Becker de 1 L, adicionar 500 mL de gua destilada;
(b) dissolver 30 g de cloreto de magnsio;
(c) dissolver 5 g de acetato de sdio;
(d) dissolver 1 g de nitrato de potssio;
(e) adicionar 20 mL de cido actico;
(f) completar o volume at 1000 mL.
11.4. Metodologia preparo da Soluo Tampo B
(a) Em Becker de 1 L, adicionar 500 mL de gua destilada;
(b) dissolver 30 g de cloreto de magnsio;
(c) dissolver 5 g de acetato de sdio;
(d) dissolver 1 g de nitrato de potssio;
(e) dissolver 0,111 g de sulfato de sdio;
(f) adicionar 20 mL de cido actico;
(g) completar o volume at 1000 mL.
11.5. Determinao da concentrao de sulfato (APHA, 1999)
A Soluo Tampo a ser utilizada durante a anlise funo da concentrao de
sulfato presente na amostra. Para amostras com concentraes superiores a 10 mgSO 42-/L,
utilizar a Soluo Tampo A. Em amostras com concentraes inferiores a 10 mgSO 42-/L,
utilizar a Soluo Tampo B.
(a) Medir 25 mL de amostra bruta ou diluda adicionando em Becker de 50 mL ou
tubos de plstico;
(b) adicionar 5 mL da Soluo Tampo A ou B, misturando em agitador de tubos ou
agitador magntico em seguida;
(c) enquanto ocorre a mistura, adicione 1 colher cheia de cloreto de brio,
cronometrando o tempo imediatamente;
(d) agite por 15 (agitador de tubos) ou 30 segundos (agitador magntico) com
velocidade constante;
(e) medir a absorbncia a 420 nm aps 5 minutos;
(f) para corrigir a cor e turbidez da amostra, utilize como branco a prpria amostra
bruta ou diluda sem a adio de cloreto de brio;
(g) calcula-se a concentrao de sulfato a partir da seguinte equao:

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mgSO42 /L

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mgSO42
1000
Vamostra

Equao 39.
Na qual:
Vamostra = Volume da amostra
Se a Soluo Tampo A foi utilizada, determine a concentrao de sulfato
diretamente da curva de calibrao aps substrair a absorbncia da amostra antes da
adio de cloreto de brio. Se a Soluo Tampo B foi utilizada, subtraia a concentrao de
sulfato do branco da concentrao aparente de sulfato da amostra. Como a curva de
calibrao no uma reta, este procedimento no equivalente a subtrair a absorbncia do
branco da absorbncia da amostra.
11.6. Levantamento da curva de calibrao
Para a construo da curva padro, prepare solues de sulfato de sdio com
concentraes conhecidas (como sulfato) de 5 em 5 mg/L at 40 mg/L. Acima de 40 mg/L a
preciso reduzida e a suspenso de BaSO 4 diminui a sua estabilidade. Verifique a
confiabilidade da curva padro analisando trs ou quatro amostras com concentraes
conhecidas.
11.7. Preparo da soluo padro de sulfato (1 mL = 100 gSO42-)
Dissolver 0,1479 g de sulfato de sdio anidro em 1000 mL.

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12.SULFETO MTODO IODOMTRICO


12.1. Conceitos Fundamentais
Neste mtodo, a preciso do ponto final varia com a amostra. Em guas limpas, deve
ser determinada por uma gota, a qual equivale a 0,1mg.L-1 em amostra de 200mL.
12.2. Material
cido sulfrico H2SO4 P. A.
Amido solvel
Iodato de potssio KIO3
Iodeto de potssio KI P. A.
Hidrxido de sdio NaOH
Iodo I2 P. A.
Tiossulfato de sdio Na2S2O3.5H2O
12.2.1.

Preparo da Soluo de cido sulfrico 3 M.

(a) Dissolver 20 a 25 g de KI em um pouco de gua;


(b) adicionar 3,2 g de iodo;
(c) aps a dissoluo de iodo, diluir a 1000 mL;
(d) padronizar com tiossulfato de sdio 0,025 N, adicionando 2,0 mL de soluo de
H2SO4 3 M e amido como indicador, apenas prximo ao ponto final de titulao.
12.2.2.

Preparo da Soluo Padro de iodo 0,025 N

(a) Dissolver 20 a 25 g de KI em um pouco de gua;


(b) adicionar 3,2 g de iodo;
(c) aps a dissoluo de iodo, diluir a 1000 mL;
(d) padronizar com tiossulfato de sdio 0,025 N, adicionando 2,0 mL de soluo de
H2SO4 3 M e amido como indicador, apenas prximo ao ponto final de titulao.
12.2.3.

Preparo da Soluo Padro de tiossulfato de sdio 0,025 N

(a) Dissolver 6,205 g de tiossulfato de sdio em gua destilada;


(b) adicionar 0,4 g de NaOH em lentilhas;
(c) diluir para 1000 mL;
(d) padronizar com soluo de iodato de potssio 0,0042 M.
12.2.4.

Preparo da Soluo Padro de iodato de potssio 0,0042 M

(a) Dissolver 0,8988 g de iodado de potssio em gua destilada;


(b) diluir para 1000 mL.
12.2.5.

Preparo da Soluo de amido

(a) Dissolver 2,0 g de amido solvel e 0,2 g de cido saliclico (preservativo) em 100
mL de gua destilada aquecida.
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12.3. Padronizao da soluo de tiossulfato de sdio


(h) Dissolver cerca de 2,0 g de KI, livre de iodato, em frasco de erlenmeyer com 100
a 150 mL de gua destilada;
(i)

adicionar 1,0 mL de soluo de cido sulfrico 3 M;

(j)

adicionar 20 mL de soluo padro de iodato de potssio;

(k) diluir a 200 mL com gua destilada;


(l)

titular o iodo liberado com soluo de tiossulfato de sdio, adicionando soluo


de amido quanto prximo do ponto final.

12.3.1.

Determinao da concentrao de sulfeto

(a) Transferir para um frasco de erlenmeyer de 250 mL, um volume de soluo de


iodo 0,025 N estimada para exceder a quantidade de sulfeto presente na
amostra;
(b) adicionar gua destilada, se necessrio, para elevar o volume a 20 mL;
(c) adicionar 2,0 mL de soluo de cido sulfrico 3 M;
(d) transferir a amostra para o frasco de erlenmeyer, colocando a ponta da pipeta da
amostra contendo sulfeto, abaixo da superfcie da soluo de iodo;
(e) titular com soluo de tiossulfato, o excesso de iodo, adicionando soluo de
amido quando o ponto final estiver prximo e continuar a adio at o
desaparecimento da colorao azul;
(f) a determinao da concentrao de sulfetos na amostra realizada a partir da
seguinte equao:

mgS 2 /L

I2

NI 2 VNa2S2O3 NNa2S2O3
16000
Vamostra
Equao 40.

Na qual:
VI2 = Volume de soluo de iodo (mL)
NI2 = Normalidade da soluo de iodo (N)
VNa2S2O3 = Volume da soluo de tiossulfato de sdio (mL)
NNa2S2O3 = Normalidade da soluo de tiossulfato de sdio (mL)
Vamostra = Volume inicial da amostra (mL).

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