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RESSALVA

Atendendo solicitao da autora, o texto


completo desta tese ser
disponibilizado somente a partir de
15/04/2015.

UNESP Universidade Estadual Paulista


Jlio de Mesquita Filho
Faculdade e Odontologia de Araraquara

ESTHER GOMES SAADE

Avaliao da ao bactericida e bacteriosttica das


nanopartculas TiO2 e Ag aplicadas em pinos intraradiculares.

Araraquara
2012

UNESP - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA


FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE ARARAQUARA

ESTHER GOMES SAADE

Avaliao da ao bactericida e bacteriosttica das


nanopartculas TiO2 e Ag aplicadas em pinos intraradiculares.
.

Tese apresentada ao Programa de Ps-Graduao


em Cincias Odontolgicas - rea de Dentstica
Restauradora, da Faculdade de Odontologia de
Araraquara, da Universidade Estadual Paulista
para a obteno do ttulo de Doutor em Cincias
Odontolgicas.
Orientador:Prof.Dr Marcelo Ferrarezi de Andrade

Araraquara
2012

ESTHER GOMES SAADE

Avaliao da ao bactericida e bacteriosttica das


nanopartculas TiO2 e Ag aplicadas em pinos intraradiculares.

COMISSO JULGADORA

TESE PARA OBTENO DO GRAU DE DOUTOR

Presidente e Orientador: Prof. Dr Marcelo Ferrarezi de Andrade


2 Examinador: Prof. Dr Vitor Obergoso Flores
3 Examinador: Prof. Dr Carlos Eduardo Francischone
4 Examinador: Prof. Dr Sizenando de Toledo Porto Neto
5 Examinador: Prof. Dr Jose Roberto Cury Saad

Araraquara, 27 de fevereiro de 2012.

DADOS CURRICULARES

ESTHER GOMES SAADE

NASCIMENTO

FILIAO

16.11.1974 CAMPINAS/SP

Celso Edmar Gomes


Elza Mota Gomes

1993/1996

Curso de Graduao na Faculdade de Odontologia


da Pontifica Universidade Catlica de CampinasPUCC/SP.

2001/2002

Curso de Especializao em Dentstica Restauradora


da

Associao

dos

Cirurgies

Dentistas

de

Periodontia

na

Campinas.

2004/2006

Curso

de

Especializao

em

Associao Paulista dos Cirurgies Dentistas Regional de So Bernardo do Campo.

2007/2009

Curso de Ps-graduao em Cincias Odontolgicas,


nvel Mestrado, rea de Dentstica Restauradora, na
Faculdade de Odontologia de Araraquara UNESP.

2009/2012

Curso de Ps-graduao em Cincias Odontolgicas,


nvel Doutorado, rea de Dentstica Restauradora,
na Faculdade de Odontologia de Araraquara
UNESP

DEDICO ESSE TRABALHO...

A Deus, pela bno da vida... por dar-me f, coragem e


sempre estar presente em minha vida.
Obrigado!
.

Ao Jorge, meu maior incentivador, pelo constante


apoio e companheirismo para que eu continue a cada
dia na busca dos meus sonhos. Obrigada por tornar os
meus dias melhores nessa jornada! Amo Voc!

Aos meus pais, Elza e Celso, pelo amor incondicional,


a quem devo minha formao humana e profissional.
Compartilho com vocs os mritos desta conquista,
porque ela nos pertence!

AGRADECIMENTOS ESPECIAIS

Ao meu orientador, Prof. Dr. Marcelo Ferrarezi de Andrade


pelas orientaes, pelo incentivo e ajuda sempre dispensada para o
enriquecimento desta pesquisa, pelas oportunidades durante esses anos de
convivncia. Muito obrigado!

Ao Prof. Dr. Sizenando de Toledo Porto Neto que sempre ser


meu orientador, agradeo pelo projeto inicial dessa pesquisa, pela colaborao e
orientao durante esses anos, que me fizeram crescer cientfica e pessoalmente,
pelas oportunidades profissionais, pela confiana e por sua amizade.

Ao Prof. Dr. Celso Luis de Angelis Porto por ser um incansvel


professor e profissional, que pelo seu exemplo me faz cada dia mais admirar e
querer buscar novos horizontes e aprimoramento na Odontologia Restauradora.
Muito obrigada pela sua valiosa participao na minha vida!

A Prof. Dr Denise M. Palomari Spolidorio pela receptividade


no laboratrio de microbiologia, minha imensa gratido pela sua contribuio
realizao desta pesquisa, na busca de melhorar a qualidade desse trabalho e pela
agradvel convivncia.

10

AGRADECIMENTOS

11

Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho Unesp, na


pessoas de seu Magnfico Reitor Prof. Dr. Prof. Dr. Julio Cezar Durigan.

Faculdade de Odontologia de Araraquara FOAr, da Universidade


Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho UNESP, nas pessoas de seu Diretor,
Prof. Dr. Jos Cludio Martins Segalla, e de sua Vice-Diretora Andria
Affonso Barreto Montandon.

Ao programa de Ps-Graduao em Cincias Odontolgicas da Faculdade


de Odontologia de Araraquara UNESP, coordenado pela Prof Dra Josimeri
Hebling Costa e pelo vice-coordenador Prof Dr. Edson Alves de
Campos.

Ao Departamento de

Dentstica Restauradora da Faculdade de

Odontologia de Araraquara Unesp, representado pelo chefe de Departamento,


Prof. Dr. Osmir Batista de Oliveira Junior, e pelo vice Prof. Dr.
Fbio Luiz Camargo Vilela Berbert.

12

Ao Prof. Dr Jos Roberto Cury Saad pelas oportunidades que me


deste desde o incio do meu caminho nessa Faculdade, pela confiana, incentivo e
apoio. Muito Obrigada!

Ao Prof. Dr Osmir Batista de Oliveira Junior pela colaborao


em minha formao em Dentstica Restauradora, pela ateno durante esses anos
de convivncia, por propiciar e incentivar novos rumos a ps-graduao.

Ao Prof. Dr. Edson Alves de Campos por esses anos de convivncia


agradvel, pelo apoio e por ser sempre gentil e prestativo.

A Prof. Dr Alessandra Nara de Souza Rastelli pelas


oportunidades, ensinamentos e ateno dispensada no decorrer desse curso.

13

A querida Amanda Fontana pela ateno, amizade e ajuda desde o


incio no laboratrio para concluso dessa pesquisa. Muito obrigada, voc uma
pessoa muito especial!

A minha amiga Desire, pela sua amizade, incentivo e conselhos, por


fazer parte de momentos to especiais e importantes na minha vida, pelas suas
palavras de conforto e apoio sempre. Muito Obrigada!

Ao colega de ps-graduao Matheus que deixou saudades no final dessa


jornada, obrigado pela sua ajuda cientifica e seu companheirismo, enriquecendo
meu aperfeioamento como ser humano e pelos bons momentos de amizade.

A todos os colegas da Ps-Graduao pela amizade, pelo apoio e pela


convivncia descontrada no transcorrer do curso. Obrigado!

14

A todos os meus familiares pelo apoio e incentivo dispensados durante


toda a minha vida. Muito obrigado pelo carinho!

Aos funcionrios da Ps-Graduao da Faculdade de Odontologia de


Araraquara UNESP, Mara, Rosngela, Jos Alexandre e Flvia pela
ateno e disponibilidade sempre quando precisei.

Aos funcionrios do Departamento de Dentstica Cida, Wanderlei,


Marinho e Creusa pela ajuda e pelo carinho com que sempre atenderam as
minhas solicitaes durante esses anos de ps-graduao.

Aos funcionrios da Biblioteca, pela ateno que sempre me receberam


principalmente a Ceres Maria Carvalho Galvo de Freitas pela correo,
pacincia e reviso dessa tese.

A todos que, embora no estejam aqui citados, tenham contribudo direta


ou indiretamente para a realizao deste trabalho. Muito Obrigado!

15

H pessoas que nos falam e nem as escutamos,


h pessoas que nos ferem e nem cicatrizes deixam.
Mas h pessoas que, simplesmente, aparecem em
nossas vidas e que marcam para sempre.

Ceclia Meirelles

16

Bem aventurado o homem que o seu prazer est na lei


do Senhor, e na sua lei medita de dia e noite. Ele
como a rvore plantada junto corrente de guas, que,
no devido tempo, d seu fruto, e cuja folhagem no
murcha; e tudo quanto ele faz ser bem sucedido...

(Salmos 1:2,3)

18

Saade EG. Avaliao da ao bactericida e bacteriosttica das nanopartculas TiO2


e Ag aplicadas em pinos intra-radiculares [Tese de Doutorado]. Araraquara:
Faculdade de Odontologia da UNESP; 2012.
RESUMO
O objetivo desta pesquisa foi avaliar in vitro atravs de experimentos
microbiolgicos a ao bactericida e bacteriosttica das nanopartculas TiO2, TiO2
e Ag e somente Ag no recobrimento de pinos intra-radiculares metlicos
fundidos e de fibra de vidro. Foram utilizados 120 pinos intra-radiculares, 60
metlicos fundidos confeccionados em laboratrio especializado, e 60 pinos prfabricados de fibra de vidro. Esses materiais foram recobertos pelo processo de
dip coating, e tratados termicamente com nanopartculas de dixido de titnio
(TiO2), com um compsito de titnio/prata (TiO2/Ag) e somente prata (Ag). Os
pinos recobertos apenas com nanopartculas de dixido de titnio (TiO2) foram
submetidos a fotocatlise heterognea com o auxlio de uma luz ultravioleta
(lmpada Starlux 25w-F). Os pinos intra-radiculares sem nenhum tratamento de
nanopartculas foram imersos na soluo de clorexidina 2% por 5 minutos, devido
eficcia conhecida desse antimicrobiano, para podermos comparar com os
demais grupos, sendo nosso controle positivo. No grupo controle negativo os
pinos intra-radiculares foram removidos do dispositivo e diretamente testados.
Para os experimentos realizados utilizamos o meio de cultura BHI (Brain Heart
Infusion) e a bactria Enterococcus Faecalis. O primeiro experimento realizado
foi para avaliar a descontaminao dos pinos intra-radiculares atravs do teste de
turvao no meio BHI caldo. As amostras (n=6) foram colocadas em estufa a
37C, e as leituras foram realizadas aps 24hs e 48hs. A anlise foi atravs da
presena ou no de turvao, sendo positivo: presena de turvao igual a
crescimento bacteriano e negativo: ausncia de turvao. Em seguida foi avaliada
a ao antimicrobiana dos pinos intra-radiculares sob a Enterococcus Faecalis em
meio BHI Agar. Os pinos foram inseridos no meio com a bactria semeada, e as
amostras foram colocadas em estufa a 37C. As leituras foram realizadas aps
24hs e 48hs, observando a presena ou ausncia de halo antimicrobiano.
PALAVRAS CHAVES: Nanopartculas; prata; clorexidina; bactrias.

19

Saade EG. Evaluation of the bacteriostatic and bactericidal action of TiO2 and Ag
nanoparticles applied in endodontic post [Tese de Doutorado]. Araraquara:
Faculdade de Odontologia da UNESP; 2012.
ABSTRACT
The objective of this research was to evaluate in vitro experiments using
microbiological bacteriostatic and bactericidal action of TiO2 nanoparticles, TiO2
and Ag and only Ag in the coating of the intraradicular molten metal and fiberglas
post. 120 posts were used intraradicular, and 60 posts made of cast metal, made in
a specialized laboratory, and 60 posts prefabricated fiberglass. These materials
were coated by the process of dip coating and heat-treated with nanoparticles of
titanium dioxide (TiO2) with a composite of titanium / silver (TiO2/Ag) and only
silver (Ag). The posts covered with only nanoparticles of titanium dioxide (TiO2)
were submitted to heterogeneous photocatalysis with the aid of an ultraviolet light
(lamp 25w Starlux-F). The intraradicular pins without any treatment of
nanoparticles were immersed in 2% chlorhexidine solution for 5 minutes due to
the known efficacy of that antibiotic, in order to compare with the other groups, as
our positive control. In the negative control group intraradicular posts were
removed from the device and directly tested. For the experiments we performed
using the BHI (Brain Heart Infusion) culture medium and the bacteria
Enterococcus faecalis The first experiment was conducted the decontamination of
intraradicular were evaluated by testing turbidity in the BHI broth. The samples
(n = 6) were placed in an incubator at 37 C, and the readings will be made after
24 hours and 48 hours. The analysis was through the presence or absence of
turbidity, if positive: the presence of tubidity equal to bacterial growth and
negative: the absence of turbidity. Antimicrobial activity of intraradicular posts
were assessed next under the Enterococcus faecalis in BHI Agar. The pins were
inserted in the contaminated atmosphere with the bacteria, and the samples were
placed in an incubator at 37 C. Readings were made after 24 hours and 48 hours,
observing the presence or absence of antimicrobial halo.
KEY WORDS: Nanoparticles; silver; chlorhexidine; bacteria.

20

1 INTRODUAO
Atualmente em odontologia os conceitos de preveno so indicados como
o melhor tratamento para a sade bucal. As restauraes minimamente invasivas,
preparos conservadores e procedimentos adesivos dominam a clnica diria e as
pesquisas cientficas. Entretanto ainda temos muitos casos onde o tratamento
endodntico se faz necessrio, e posteriormente o dente necessita ser restaurado
para devolvermos sua forma e funo. A escolha da tcnica restauradora depende
da estrutura coronria remanescente, da posio do dente no arco dental, da
ocluso e da anatomia radicular. Mtodos de restauraes de dentes no vitais tm
sido descritos por mais de 100 anos46. A restaurao de dentes com tratamento
endodntico merece especial ateno de clnicos e pesquisadores por
apresentarem predisposio s falhas biomecnicas em relao a dentes vitais.
Para suprir essa necessidade surgiram os pinos intra-radiculares. O pino ideal deve
promover o mnimo estresse aos remanescentes dentais; fornecer reteno e
estabilidade adequada ao ncleo de preenchimento; ser de fcil remoo se houver
necessidade, propiciar uma distribuio de tenses mais homognea nas estruturas
dentrias e transferir foras oclusais de maneira estratgica ao remanescente
dental, para no ocasionar fraturas17.
Ao longo dos anos o pino intra-radicular mais utilizado foi o ncleo
metlico fundido, que, apesar de algumas desvantagens como rigidez e falta de
esttica,

tem

considervel

documentao

cientfica

comprovando

sua

efetividade21. A busca por esttica uma exigncia da sociedade atual e novas


pesquisas e tecnologias foram aplicadas na odontologia surgindo materiais

21

restauradores livres de metal. A partir do final da dcada 80, foram desenvolvidos


os pinos cermicos e depois os sistemas de pinos de fibra, com colorao
semelhante estrutura dental5. Os pinos intra-radiculares de fibra de vidro so
compostos basicamente por fibras longitudinais de dixido de silcio e alumina
envolta em uma matriz de Bis-GMA juntamente com partculas de carga
inorgnicas. So estticos, resilientes, no sofrem corroso, e so compatveis
com compsitos e sistemas adesivos64, apresentam resistncia flexural32,64 e
mdulo de elasticidade semelhante ao da dentina, minimizando a transmisso de
tenses nas paredes da raiz e diminuindo a possibilidade de fraturas32.
Do ponto de vista biolgico a desinfeco do canal radicular tem sido uma
busca constante das pesquisas, visando eliminar no apenas os microrganismos
localizados na luz do canal, mas tambm aqueles localizados em todo o sistema de
canais radiculares. Nos casos de insucessos no tratamento endodntico a bactria
mais predominante a Enterecoccus faecalis. Este microrganismo tem
demonstrado a capacidade de sobreviver no interior dos canais radiculares, mesmo
aps a utilizao de determinadas medicaes intracanais com comprovada ao
antimicrobiana33,45,62.

A Enterococcus faecalis comumente associada

infeces persistentes periapicais41. No entanto, essas espcies correspondem a


uma porcentagem muito pequena da microbiota bacteriana inicial de dentes com
polpas necrticas sem tratamento61.
As bactrias do grupo Enterococcus faecalis so cocos gram-positivos
entricos facultativos, esto presentes em casos de infeces persistentes que no
respondem positivamente ao tratamento endodntico convencional contribuindo

22

assim para a perpetuao da infeco, infeces secundrias e pelos casos de


retratamento endodntico23,55,59,70. Esse microrganismo uma bactria anaerbia
facultativa comensal e capaz de realizar a colonizao e proliferao nas
infeces dos canais radiculares, sendo bastante prevalente em periodontite apical
ps-tratamento. A patogenicidade do Enterococcus faecalis est muito bem
documentada na literatura16. Diferente de todas as espcies bacterianas, estudos in
vitro, demonstraram a capacidade dessa bactria em penetrar nos tbulos
dentinrios53, 70.
Diferentes

exames

bacteriolgicos

em

culturas

mostraram

que

Enterococcus faecalis est presente em 30-48% de dentes com infeco pstratamento54. Ela isolada em dentes com tratamento endodntico sem leso
apical em torno de 81,5% dos casos e em infeces pulpares e periapicais
recorrentes. Essa espcie bacteriana impede a liberao de enzimas hidrolticas
por clulas polimorfonucleadas, o que pode explicar o seu domnio em infeces
pulpares70. Em um estudo foram coletadas amostras de 32 adultos submetidos a
retratamento de leses periapicais aps tratamento endodntico realizado, pelo
menos h dois anos antes. A prevalncia de Enterococcus faecalis foi de 18% na
saliva e 40,6% em canais radiculares69.
A seleo da bactria para esta pesquisa baseou-se na observao de que
alguns microrganismos prevalentes na cavidade oral e relacionados s infeces
do sistema de canais radiculares tm recebido ateno especial, sendo amplamente
estudados, como ocorre com o Enterococcus faecalis15,23,55.

Este projeto

pesquisou pinos intra-radiculares que entram em contato direto com o sistema de

23

canais radiculares do elemento dental, sendo assim, a seleo dessa bactria se


deve ao fato dela estar sempre presente em infeces recorrentes dos tratamentos
endodnticos.
Como uma alternativa temos o uso da clorexidina classificada
terapeuticamente como uma substncia antimicrobiana, antissptico tpico e
tambm na categoria de desinfetante. uma base antissptica forte e estvel na
forma de sal (gluconato, acetato ou hipocloreto) e foi introduzida na medicina em
1950 como desinfetante de amplo espectro bacteriano. A partir de 1954
empregada rotineiramente no tratamento de feridas na pele19. Em odontologia ela
vem sendo amplamente utilizada no controle de placa bacteriana no tratamento
das infeces periodontais e como medicao intracanal24. Na periodontia ela
considerada o padro ouro para o controle qumico da placa bacteriana1, pois tem
atividade antibacteriana ampla, baixa toxicidade e forte afinidade com o tecido
epitelial e membranas mucosas58. A clorexidina 0,12% esta sendo utilizada como
substncia irrigadora durante o tratamento endodntico de dentes com leso
apical, com resultados bem sucedidos reduzindo significativamente o nmero das
bactrias nos canais radiculares infectados52. Em forma de gel pode ser utilizada
como medicao intracanal entre sesses para eliminar os microorganismos que
no so alcanados pelos preparos biomecnicos10. Ela efetiva contra um grande
nmero de microrganismos gram-positivos, gram-negativos, leveduras, anaerbios
facultativos, e aerbios18,24.
Nanotecnologia refere-se a qualquer material, dispositivo ou processo cuja
principal propriedade derive da nanoescala, que compreende tamanhos de 0,1 a

24

100 nanmetros (nm). A manipulao de tomos em uma escala um bilho de


vezes menor que o metro ou um milho de vezes menor que o milmetro
representa um espao suficiente para, no mximo, dez tomos. A nanotecnologia
, essencialmente, transdisciplinar, envolvendo qumicos, fsicos, bilogos,
engenheiros e farmacuticos, entre outros profissionais. As nanocincias e as
nanotecnologias englobam projeto, manipulao, produo e montagem no nvel
atmico e molecular. Nanocincia o estudo dos fenmenos e a manipulao de
materiais nas escalas atmica, molecular e macromolecular, onde as propriedades
diferem

significativamente daquelas

em

uma escala

maior,

enquanto

nanotecnologias so o design, a caracterizao, a produo e a aplicao de


estruturas, dispositivos e sistemas controlando forma e tamanho na escala
nanomtrica47.
As aplicaes da nanotecnologia nas reas biomdicas uma realidade, a
obteno de estruturas em nanoescala atravs da diviso de objetos micromtricos
importante e tem sido realizado em diferentes reas. O encapsulamento de vrias
drogas atravs de micro e nanoestruturas complexas um exemplo dos progressos
significativos no tratamento do diabetes. Vrias empresas j esto se preparando
para aplicar insulina atravs da inalao de aerossis que alcance os alvolos
pulmonares e se espalhem para a corrente sangunea. Mas o sucesso de uma droga
requer no s o transporte adequado de medicamentos para os rgos e tecidos,
mas tambm controlar o tempo de administrao. Na rea gastrointestinal,
alteraes na acidez, a ao de enzimas proteolticas e presena de cidos biliares
que diminuem a tenso superficial, requer encapsulamento de drogas, onde o

25

tamanho da cpsula deve ser inferior a 400 nanmetros para no alertar o sistema
imunolgico. No tratamento do cncer o objetivo identificar clulas cancerosas
utilizando cpsulas que contm radionucldeos, toxinas e quimioterapia. Cada
cpsula deve identificar clulas cancergenas, ligar, entrar e liberar o seu
contedo. Outra alternativa o uso de nanopartculas vidro, 100 nm, recobertas
por uma fina folha ouro para anexar anticorpos especficos contra as clulas
cancergenas. O paciente submetido radiao infravermelha (seguro para ele)
que absorvida pelos tomos de ouro, a temperatura da superfcie da cpsula
aumenta e mata as clulas cancerosas. As propriedades de nanomateriais e
nanotecnologia para a sua implementao e difuso nas reas de biomedicina,
eletrnica e mecnica nos permitem vislumbrar uma realidade promissora em
reas interdisciplinares da qumica, fsica, biologia e medicina6.
Diferentes tipos de nanomateriais como cobre, zinco, titnio51, magnsio,
ouro26, alginato e prata tm surgido, mas nanopartculas de prata provaram ser
mais

eficazes,

uma vez que tm uma boa atividade antimicrobiana contra

bactrias, vrus e outros microrganismos25. Esses materiais usados em escala


nanomtrica reagem com as clulas atravs de mecanismos antimicrobianos e
inibem a atividade enzimtica envolvida na sntese de DNA. As nanopartculas
podem interagir diretamente com as clulas microbianas, interrompendo a
transferncia eletrnica transmembrana, rompendo a membrana ou a parede
celular, ou do componente celular oxidante, ou ainda produzir produtos
secundrios como espcies reativas de oxignio (ROS), causando danos40.

26

H muito tempo conhecida a ao bactericida de alguns ons metlicos,


entre eles a prata e o cobre. O efeito bactericida possui o poder de aniquilar a
bactria, impedindo sua proliferao atravs da assepsia de efeito oligo-dinmico
do on prata, sem prejuzo ao ser humano. Em 1929, na Alemanha, o Dr. Krausel
conseguiu tornar prtico o uso destes ons metlicos para ao bactericida. Desde
ento, muitos avanos tecnolgicos ocorreram nessa rea. importante salientar
que estes produtos atuam por meio da ionizao dos elementos metlicos
bactericidas, evitando que metais puros sejam liberados ao meio ambiente de
maneira a no prejudicar o ser humano. Historicamente a prata foi amplamente
utilizada em vrias reas da medicina. Em 1700, o nitrato de prata foi utilizado
para o tratamento de doenas venreas, fstulas das glndulas salivares, e
ssea e abscessos perianais35,37. Concentraes variadas de nitrato de prata foram
utilizadas para tratar queimaduras

7,35

. Na dcada de 1940, aps a introduo da

penicilina, a utilizao de prata para o tratamento de infeces bacterianas


reduziu-se drasticamente8,11,30. Recentemente, devido ao aparecimento de
bactrias resistentes e limitaes ao uso de antibiticos os mdicos tem voltado
prata, fazendo curativos contendo diferentes nveis de prata8,20.
A propriedade antimicrobiana da prata est relacionada quantidade e a
taxa de prata liberadas. A prata em seu estado metlico inerte, mas ela reage
com a umidade da pele e do fluido da ferida ficando ionizada e altamente reativa,
uma vez que se liga a protenas dos tecidos e traz mudanas estruturais na parede
da clula bacteriana e membrana nuclear provocando distoro celular e morte. A
prata tambm se liga ao DNA e RNA bacteriano por desnaturao e inibe a

27

replicao bacteriana37. Os ons de prata interagem com grupo tiis em protenas,


resultando em inativao de enzimas respiratrias e levando produo de
espcies reativas de oxignio43.
Vrios mecanismos de ao tm sido indicados para a propriedade
antimicrobiana da prata. As formas inicas da prata carregam uma forte carga
positiva, portanto elas tm uma grande afinidade pelos grupos carregados
negativamente de molculas biolgicas.

Dentre essas molculas, podemos

destacar os grupos sulfidrila, carboxila, fosfatos dentre outros comumente


encontrados nas estruturas macromoleculares distribudas ao longo das clulas
microbianas. A reao de ligao altera a estrutura da macromolcula, fazendo
com que esta se torne intil clula. Este ataque desativa funes como sntese
de parede celular, transporte de membrana e translao e sntese de cidos
nuclicos como o RNA e DNA de maneira eficiente. Em geral, propriedades
fsico-qumicas desempenham um papel importante na atividade antimicrobiana
da prata. As partculas de menos de 10 nanmetros so mais txicas para bactrias
como a Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa22,66 .
Recentemente, as nanopartculas de prata tm chamado a ateno por sua
atividade antimicrobiana oferecer a possibilidade de uso com propsitos mdicos
e de higiene. Estas nanopartculas de prata em diferentes formulaes, com
diferentes formas e tamanhos, exibem atividades antimicrobianas diferentes.
Entretanto, os mecanismos da atividade antimicrobiana de ons e de
nanopartculas de prata, assim como sua toxicidade em tecidos humanos no esto
totalmente esclarecidos. preocupante os possveis riscos para a sade humana

28

decorrentes de nanopartculas de prata em diversos produtos no mercado que


levam a um aumento de prata no ambiente, e disseminao da resistncia
bacteriana. Portanto mais estudos so necessrios para melhor caracterizar a
toxicidade e os mecanismos envolvidos com a atividade antimicrobiana dessas
partculas13.
Nos ltimos anos, tem havido um interesse renovado pelos pesquisadores,
empresas farmacuticas, empresas produtoras de alimentos, embalagens e
indstrias de revestimento em p para investigar novos e seguros materiais com
efeito antimicrobiano9. Em um estudo foram avaliados dois tipos de prata, a
Novaron (N) e a Amenitop (AM), com eficcia antibacteriana, incorporadas em
uma resina composta a base de TEGDMA-UDMA testando sua atividade
antibacteriana, as propriedades mecnicas desse compsito, e a liberao de ons
prata. Os dois materiais inibiram o crescimento do principal patgeno oral o S.
Mutans, no houve nenhuma ou pequena liberao de ons de prata aps um dia
ou aps seis meses. O compsito com a prata N no apresentou diferena
significativa em sua resistncia flexural ou a compresso. No entanto o compsito
incorporado com prata AM apresentou diferena nos parmetros de resistncia.
Estes resultados indicam que a prata Novaron pode ser incorporada na resina
composta sendo til clinicamente devido ao efeito de longa durao inibitria
contra o S. Mutans, sem alterar as propriedades mecnicas do material67.
As propriedades antibacterianas de nanopartculas quitosana sozinha e
misturada em cimento de xido de zinco e eugenol foram estudadas. A
incorporao de nanopartculas no cimento endodntico no alterou suas

29

caractersticas de selamento, melhorou diretamente a propriedade antibacteriana e


a capacidade de expelir componentes antibacterianos. Houve uma reduo
significativa na aderncia de Enterococcus faecalis na dentina34. Questes
relativas eliminao eficaz e rompimento da estrutura do biofilme bacteriano na
desinfeco endodntica permanecem pouco esclarecidas. As nanopartculas
quitosana e xido de zinco so conhecidas por possuir importantes propriedades
antibacterianas. Biofilmes de Enterococcus faecalis foram tratados com
nanopartculas de quitosana e xido de zinco para avaliar a eficcia das
nanopartculas na desinfeco e desestruturao do biofilme bacteriano em longo
prazo. O tratamento com nanopartculas reduziu as bactrias do biofilme,
rompendo a sua estrutura, e mantiveram a propriedade antibacteriana mesmo aps
o envelhecimento, apresentando assim um potencial para desinfeco de biofilme
no tratamento endodntico57.
As nanopartculas de TiO2 e Ag foram utilizadas para a fabricao de
produtos txteis de seda multifuncional. As nanopartculas so impregnadas em
um substrato da seda atravs de ligaes covalentes, devido forte ligao
qumica, o tecido de seda fibrona e as nanopartculas formam um sistema
composto estvel. A atividade antimicrobiana das amostras tratadas e no tratadas
com nanopartculas foi avaliada utilizando o teste de difuso em placa de gar.
Foram selecionados as bactrias Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e
Staphylococcus aureus. Amostras circulares de tecido foram colocadas de maneira
uniforme sobre a superfcie das placas inoculadas e incubadas a 37 1 C por 24h.
A avaliao de incubao foi baseada na ausncia ou presena de crescimento de

30

bactrias nas amostras testadas e na zona de contacto entre os gares. Os


resultados do teste da capacidade antibacteriana mostraram que o tecido no
tratado no possui atividade antibacteriana, mostrando a ausncia de uma zona de
inibio e crescimento bacteriano no meio sob as amostras. Em comparao, os
tecidos com TiO2 apresentam capacidade antibacteriana limitada, mostrando
pequeno crescimento bacteriano nas amostras. No entanto, no caso dos tecidos
com nanopartculas TiO2 e Ag, no houve crescimento bacteriano nas amostras, e
ocorreu uma zona de inibio contra os trs tipos de bactrias, ilustrando que
tecido tratados com nanopartculas possui atividade antibacteriana excelente.
Comparando-se as atividades antibacteriana das nanopartculas TiO2 e TiO2/Ag
pode-se concluir que o aumento da capacidade anti-bacteriana TiO2/Ag est
diretamente relacionada com a presena de nanopartculas Ag39. Segundo a
literatura, os ons Ag pode lentamente liberar partculas de prata no meio ao redor
das amostras para suprimir o crescimento de bactrias, como expressando a zona
de inibio em torno das amostras63. Vrios mecanismos antibacterianos de ons
prata foram propostos: (a) ons prata entram na membrana celular e aderem s
paredes celulares de bactrias danificando-as; (b) a ocorrncia de efeito de
desnaturao; (c) inibio da respirao56. Este material de seda multifuncional
satisfaz a demanda do mercado por produtos naturais inteligentes, e um
material promissor para uso prtico na indstria txtil, na esterilizao hospitalar e
limpeza ambiental56,63.
Os implantes dentrios so amplamente utilizados na clinica diria,
entretanto algumas vezes complicaes como infeces ps-operatrias. Uma

31

superfcie ostentando em longo prazo a capacidade antibacteriana altamente


desejvel, a fim de prevenir infeces associadas a implante. Foram testados
implantes de titnio revestidos com nanotubos de titnio (TiO2-NTs)
incorporados com prata (Ag). A quantidade de Ag apresentado ao NTs foi variada
alterando a concentrao AgNO3 e tempo de imerso. As nanoparticulas de Ag
foram preparadas por imerso em uma soluo de nitrato de prata seguido pela
radiao da luz ultravioleta aderindo firmemente parede dos nanotubos de
titnio. Os implantes de TiO2 carregados com nanopartculas de Ag (NT-Ag)
apresentaram a capacidade de matar as bactrias planctnicas suspensas durante
os primeiros dias, a capacidade para impedir a adeso bacteriana foi mantida por
30 dias, o que normalmente o suficiente para evitar a infeco ps-operatria
nas fases iniciais, intermedirias e talvez tardia ao redor do implante. Somente o
grupo que apresentava NT-Ag 0.5 %, a menor concentrao de Ag, no
apresentou resultado satisfatrio. Sendo as condies utilizadas nesse experimento
mais graves do que aquelas encontradas normalmente in vivo, os materiais
devero ser eficaz por um tempo muito mais longo na situao normal. Os
materiais NT-Ag tambm apresentam osteocondutividade satisfatria, alm do
bom desempenho biolgico esperado de TiO2-NTs. Embora a estrutura NT-Ag
mostra alguma citotoxicidade, pode ser reduzida atravs do controle da taxa de
liberao Ag, e as propriedades podem ser ainda mais adaptadas para realizar
tanto a capacidade antibacteriana em longo prazo e a bio-integrao. Esta
estrutura de nanopartculas NT-Ag que fornece relativamente a longo prazo a
capacidade antibacteriana e boa integrao dos tecidos tem aplicaes promissoras

32

em ortopedia, odontologia, e outros dispositivos biomdicos. Os materiais so,


portanto, muito atraentes para implantes biomdicos, devido preveno da
infeco de implantes associados e promoo da osseointegrao68.
As nanopartculas possuem excepcionais propriedades fsicas e qumicas
que levou rpida comercializao. Devido ao seu potencial antimicrobiano as
nanopartculas de prata (Ag-np) esto entre as mais comercializadas. As
nanopartculas de prata so base de cosmticos, agentes teraputicos e produtos
domsticos amplamente utilizados, o que levantou uma preocupao pblica em
relao sua segurana associada utilizao humana e ambiental. Na prtica no
existe regulamentao de segurana para a utilizao desses nanomateriais. Ainda
no foram bem esclarecidos s interaes de nanomateriais com as clulas, os
mecanismos de absoro, distribuio, excreo, toxicolgicos e mecanismo de
ao3.
Os filmes finos de dixido de titnio (TiO2) so o fotocatalisadores mais
pesquisados, so quimicamente estveis , possuem alto ndice de refrao, tm
excelente transmisso na regio infra-vermelha e visvel31,44. Filmes de dixido de
titnio tm o potencial de fornecer energia limpa, sustentvel e renovvel, sob a
ao da luz solar podem formar um fotodiodo que pode dividir a gua em
oxignio e hidrognio36,38. Estas propriedades extraordinrias funcionais surgem
porque o dixido de titnio sob luz UV gera um par eltron-buraco mveis que
podem migrar para a superfcie onde geram foto-oxidao a qualquer espcie
orgnica e os foto-eltrons gerados reduzem o oxignio da gua mediada por
formaes de radicais de oxignio44.

33

A fotocatlise heterognea um processo oxidativo que tem demonstrado


uma promissora tecnologia para o processo de oxidao/degradao de
contaminantes orgnicos. Muitos catalisadores tm sido testados, entre eles o
dixido de titnio (TiO2), que encontrado em vrias formas cristalinas50. O
xido de titnio na fase cristalina anatase, possui a propriedade de absorver o
comprimento de onda UV-A, o qual eficientemente exibe a atividade
fotocataltica. A ao bactericida da fotocatlise heterognea UV-A/TiO2 vem
sendo testada em microrganismos com diferentes fotossensibilidades e alta
eficincia foi encontrada em todos os casos estudados, particularmente no mais
resistente, o Enterobacter cloacal. Este microrganismo normalmente encontrado
no solo e na gua, e devido a um eficiente sistema defensivo antioxidante, no
inativado pela irradiao UV-A. Entretanto, em todos os casos estudados, doses
subletais de UV-A na presena de TiO2 foram eficientes na eliminao
microbiana4 . A desinfeco por fotocatlise de bactrias patognicas em gua foi
avaliada atravs da aplicao de uma irradiao de luz visvel sobre uma pelcula
de xido de titnio/prata. A fotocatlise mostrou-se um mtodo efetivo para
eliminar bactrias tais como, Escherichia coli e Staphylococus aureus29 .
O dixido de titnio (TiO2) tem sido amplamente utilizado como um
fotocatalizador devido sua alta eficincia fotocataltica, resistncia corroso e
custo relativamente baixo. Sobre a irradiao com luz UV, os eltrons na banda de
valncia TiO2 esto excitados na banda de conduo criando um par eltronburaco. Os pares eltrons buraco migram para a superfcie para produzir
poderosas espcies oxidantes ou radicais superxido28. Estas espcies oxidantes

34

possuem efetivamente uma ampla ao sob uma variedade de espcies orgnicas,


incluindo molculas de contaminantes, fungos e bactrias. A abertura da faixa de
TiO2 (~3.2 eV) limita o uso do catalisador por condies de irradiao luz
ultravioleta. Numerosos estudos visam aumentar a eficincia de fotos de TiO2 e
desenvolver atividade a luz visvel. A melhoria no desempenho funcional, com
incorporao de Ag na matriz de TiO2 pode ser explicada por uma carga modelo
de separao e maior taxa de produo de pares fotogerados27,42. medida que o
nvel de TiO2 maior do que o de Ag, os depsitos de Ag se comportam como
sites de acumulao para os eltrons fotogerados derivado TiO2, levando a uma
melhor separao de eltrons e buracos. Isso resulta em um maior nmero de
portadores de carga e portanto, um aumento de espcies reativas48.
A fotocatlise heterognea s ocorre quando a superfcie que recebeu o
recobrimento com nanopartculas de TiO2 permanece ativada constantemente
com a luz ultravioleta. Uma limitao do uso do catalisador TiO2 que ele requer
uma radiao na faixa (sub) 385nm

para funcionar. Pesquisas tm sido

direcionadas para mudar a banda de absoro no visvel. Isto permitir uma


melhor absoro solar que poderiam melhorar a eficcia global do fotocatalisador
e, alm disso, permitir uma superfcie ativada por luz visvel, utilizada em
ambiente de sade12, 42.
Foram preparados filmes antimicrobianos contendo nanopartculas de
prata em um substrato de titnio e testados com luz visvel suas propriedades
fotocatalticas. Os filmes poderiam ser transformados de roxo (prata xido) para
laranja (prata) por 254 nm, 365 nm ou radiao de luz branca e o processo

35

invertido quando os filmes foram armazenados no ar e no escuro. Os filmes foram


caracterizados por DRX, Raman, AFM, SEM, EDX, Espectroscopia UV-Vis e
XPS, bem como testados para a funcionalidade usando uma variedade de tcnicas,
incluindo a atividade antimicrobiana contra bactrias Staphylococcus aureus e
Escherichia coli em condies de iluminao de hospital. XRD e Raman
indicaram que os filmes foram anatase, X-ray de fotoeltrons confirmou a
presena de carregamento de prata na superfcie de titnio e EDX mostraram prata
doping na camada de TiO2. Amostras foram testadas para a foto-degradao do
cido esterico em trs diferentes condies de iluminao: UVA - 365 nm, a luz
branca (comumente encontrados em hospitais do Reino Unido) e UVA filtrada luz
branca. Os filmes de Ag e xido de titnio se comportaram como fotocatalisadores
ativos sob condies de luz visvel. Estas superfcies demonstraram uma reduo
de 99,99% no nmero de bactrias Escherichia coli vivel devido presena de
ons de prata, e 99,99% reduo do nmero de bactrias Staphylococcus aureus
devido fotocatlise reforada. Os filmes Ag-TiO2 provaram ser fotocatalisadores
excepcionais sob luz visvel, mesmo na presena de um filtro UV. Essa dupla
abordagem envolvendo um fotocatalisador e a prata benfica, a prata como uma
superfcie fotocataltica acrescenta um grau de adeso ao substrato permitindo que
os ons de prata se relacionem melhor com a superfcie. A unio da Ag com o
TiO2 utiliza menor quantidade de prata, o que bom dado ao alto custo desse
precioso metal. Uma dupla abordagem para mecanismo antimicrobiano
consistindo de uma relao sinrgica entre o fotocatalisador (TiO2) e a superfcie
ligada a nanopartculas de prata. O efeito sinrgico permite que mais bactrias

36

morrem por um curto perodo de tempo, e o mecanismo de ao multidirecional


faz uma superfcie com potente ao antimicrobiana a todos os tipos de bactrias.
Isto importante porque as bactrias tm diferentes susceptibilidade e abordagens
anti-microbiana. Essa associao proporciona uma superfcie multi-funcional que
eficazes contra mais tipos de bactrias. As amostras de prata mostraram a maior
promessa real no campo de revestimentos de auto-limpeza e poderiam ter
aplicaes importantes em ambientes de sade nos EUA e Reino Unido12.
Ao analisar o mecanismo de inativao de clulas Escherichia coli atravs
da ao oxidativa exercida pelo processo UV/TiO2, observou-se que a reao
iniciada por uma decomposio parcial da membrana externa, causada pelas
espcies reativas produzidas no processo fotocataltico. Nessa etapa no existe a
perda total da viabilidade da clula. Contudo, h alteraes na permeabilidade da
membrana externa, o que possibilita que as espcies reativas alcancem a
membrana citoplasmtica e que ocorra a peroxidao dos lipdeos da membrana
citoplasmtica, a perda da viabilidade e, finalmente a morte celular60.
Filmes finos de dixido de titnio (TiO2) e filmes de TiO2 contendo prata
(Ag-TiO2) foram preparados em uma slica pr-revestido com substratos de vidro
atravs do mtodo por uma sol gel spin coating. A atividade bactericida desses
filmes foi determinada contra Staphylococcus epidermidis em iluminao natural
e ultravioleta (UV) por quatro mtodos: ensaio de difuso em disco, teste
bactericida de UV-induzida, qualitativa liberao de ons Ag em bactrias
inoculado em gar e avaliao da superfcie topogrfica por laserscan. A
atividade fotocataltica dos filmes foi medida atravs da degradao de cido

37

esterico sob condies de luz UV, solar e visvel. Um objetivo especfico deste
estudo foi determinar as mudanas na atividade bactericida e fotocataltica, como
resultado de alteraes estruturais e qumicas na superfcie do filme com a
incorporao de Ag e modificao da temperatura de calcinao. Verificou-se que
todas os filmes finos TiO2 e Ag-TiO2 calcinado a 450C foram bactericidas e
apresentaram atividade fotocataltica ativa em todas as condies de iluminao
investigados. Sob qualquer condio de iluminao os filmes de TiO2 com Ag
incorporada apresentaram desempenho superior de atividade bactericida e
fotocataltica quando comparados com filmes somente de TiO22.
Os testes de sensibilidade antimicrobiana de substncias odontolgicas tm
se mostrado til tanto na orientao do tratamento clnico como nos estudos que
investigam o efeito antimicrobiano de susbstncias odontolgicas. O teste de
difuso em gar amplamente utilizado para avaliar a atividade antimicrobiana
de substncias utilizadas nas pesquisas odontolgicas49. Este teste oferece as
vantagens de ser eficiente em detectar a atividade antimicrobiana no meio de
cultura, ser de baixo custo e a tcnica, alm de reprodutvel, relativamente
simples de ser realizada no necessitando de equipamentos complexos para
anlise dos resultados65. O teste de difuso em Agar realizado em placas de Petri
contendo meio de cultura slido, sobre o qual ser semeado o microrganismo
indicado para o teste. Os agentes antimicrobianos a serem testados so colocados
em discos de papis ou mesmo em poos realizados no meio de cultura. O raio
formado da zona de inibio adjacente aos discos demonstra a difuso do agente
antimicrobiano.

Contudo, o tamanho da zona de inibio estar diretamente

38

relacionada solubilidade e a difusibilidade da substncia testada, podendo no


demonstrar o seu total potencial14,65.
O meio de cultura BHI (Brain Heart Infusion) um meio derivado de
nutrientes de crebro e corao, peptona e dextrose. A peptona e a infuso so
fontes de nitrognio, carbono, enxofre e vitaminas. A dextose um carboidrato
que os microrganismos utilizam para fermentao. utilizado como meio para
cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactrias, no
fermentadores, leveduras e fungos. Pode ser utilizado na preparao do inculo
para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, para realizao de teste de
coagulase em tubo, para teste de crescimento bacteriano14.
Na avaliao dos fatores que determinam o sucesso endodntico e
restaurador de um elemento dental, deve-se levar em considerao que alm da
escolha do melhor material para substituir a estrutura perdida, o cuidado para que
esse material seja descontaminado antes de ser inserido no interior dos canais
primordial, pois na tcnica clnica endodntica houve a descontaminao e a
obturao visando remoo dos microrganismos presentes. Pelo fato dos pinos
intra-radiculares ficarem no interior do canal radicular, prudente que um
protocolo de biossegurana deva ser realizado, para que esse material seja efetivo
em suas funes e ao mesmo tempo no recontamine o canal radicular ou estimule
o crescimento bacteriano. O uso de nanoparticulas para o desenvolvimento de
estruturas antimicrobianas tem sido amplamente estudado e apresentado
resultados satisfatrios em outras reas. Essa nanotecnologia aplicada a materiais
e instrumentos odontolgicos pode resultar em produtos com ao antimicrobiana

39

que podem ajudar os profissionais a combater as infeces e contaminaes,


sendo uma promissora inovao.

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5 CONSIDERAES FINAIS
Os pinos intra-radiculares so muito utilizados na clnica diria, pois eles
so responsveis pela reteno e estabilidade adequada das restauraes em dentes
com grandes destruies e com tratamentos endodntico.
Aps o tratamento endodntico realizado com todos os padres de
desinfeco do canal radicular imprescindvel que o tratamento restaurador siga
todos os cuidados para no ocorrer a recontaminao do sistema de canais. Os
pinos intra-radiculares permanecem em intmo contato com o sistema de canais,
sendo assim necessrio a desinfeco dos mesmos antes da cimentao no
elemento dental.
de interesse na rea de sade a fabricao de superfcies antimicrobianas
evitando contaminaes e infeces cruzadas. Muitos estudos so direcionados
para a desinfeco de materiais odontolgicos, e o desenvolvimento de produtos
inteligentes, ou seja, com ao autolimpante seria a resoluo de muitos
insucessos clnicos.
Atualmente a nanotecnologia utilizada em diversas reas e nos ltimos
anos vem sendo testada nas reas biomdicas. O uso de nanopartculas para o
desenvolvimento de estruturas antimicrobianas muito estudado e tem mostrado
resultados satisfatrios em outras reas.
As nanopartculas de prata tm chamado a ateno por sua atividade
antimicrobiana oferecer a possibilidade de uso com propsitos mdicos e de
higiene. Estas nanopartculas de prata em diferentes formulaes, com diferentes
formas e tamanhos, exibem atividades antimicrobianas.

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O dixido de titnio tem sido amplamente utilizado como fotocatalizador


devido sua alta eficincia fotocataltica, resistncia corroso e custo
relativamente baixo. A fotocatlise heterognea s ocorre quando a superfcie que
recebeu o recobrimento com nanopartculas de

TiO2

permanece ativada

constantemente com a luz ultravioleta, o que uma limitao do uso do


catalisador TiO2. As pesquisas nessa rea esto sendo direcionadas para mudar a
banda de absoro no visvel, para ampliar a sua utilizao.
Neste estudo os pinos intra-radiculares que receberam o recobrimento com
nanopartculas de Ag e a associao de TiO2 com 5% Ag comportaram-se como
superfcies descontaminadas e eficincia atividade antimicrobiana. Comprovando
assim a atividade antimicrobiana da Ag.
Os pinos intra-radiculares com recobrimento apenas de nanopartculas de
TiO2 no desempenharam atividade antimicrobiana, pois essa nanopartcula tem a
necessidade constante da ativao da luz ultravioleta para efetivar a ao
fotocataltica e se comportar como uma superfcie descontaminada.
Apesar do grande nmero de trabalhos com nanopartculas

nanotecnologia ainda existe uma carncia dessa tecnologia aplicada a materiais e


instrumentos odontolgicos, o que um campo promissor para obtermos
superfcies autolimpantes e bactericidas. Essa nanotecnologia aplicada a materiais
e instrumentos odontolgicos pode resultar em produtos com ao antimicrobiana
que podem ajudar os profissionais a combater as infeces e contaminaes,
sendo uma promissora inovao.