Director
Guillermo Henao R
FACULTAD DE CIENCIAS
MAESTRA EN BIOTECNOLOGA
Nota de aceptacin
AGRADECIMIENTOS
TABLA DE CONTENIDO
Pag
i.
1.
Resumen. 7
2.
Introduccin 9
3.
Objetivos13
3.1.
Objetivo general13
3.2
Objetivos especficos...13
4.
Marco terico.14
5.
Metodologa...21
6.
Resultados.25
7.
Discusin28
8.
Conclusiones.31
Bibliografa.32
LISTA DE TABLAS
Tabla
pg
Porcentajes obtenidos.25
LISTA DE FIGURAS
Figuras
pg
1. RESUMEN
movilidad individual, verificando que fuera mayor a 80% y que tuviera un 70%
de espermatozoides normales; luego se congel a concentraciones de 1.2 x
109, 0.8 x 109 y 0.4 x 109 millones de espermatozoides por pajilla de 0.5. Al
semen criopreservado se le evalu la movilidad individual, la integridad
acrosmica, la integridad de la membrana, la vitalidad y la morfologa, para
determinar su diferencia entre las concentraciones. Los datos fueron
estudiados mediante un anlisis de varianza (ANOVA) de dos vas y para la
observacin del acrosoma e integridad de la membrana plasmtica, se emple
un anlisis de varianza de una va. No se present diferencia significativa
(p>0.05) de las caractersticas espermticas posdescongelacin entre los
tratamientos, lo que indica que es posible empacar espermatozoides en las
pajillas y concentraciones antes mencionadas, sin que se alteren sus
caractersticas.
Palabras claves:
concentracin semen, espermatozoides porcinos, pajillas 0.5 ml, semen
porcino.
ABSTRACT
The objective of the present study is to evaluate the effect of the packing of
porcine sperm on the mobility, the vitality, the integrity of the acrosoma and the
one of the plasmatic membrane. The ejaculated was gathered in three
concentrations before its freezing, and it was taken from each of nine porcine
breeding of races Landrace, Duroc, Pietrain, and Belgian, located in three
commercial farms of Rionegro's municipality. It was made an analysis of the
sperm samples in terms of the individual mobility, checking that it was bigger
than 80 % and that it had 70 % of normal spermatozoon. After that, semen was
frozen at a spermatozoon concentration of 1.2 x 109, 0.8 x 109 , and 0.4 x 109
million for a 0.5 milliliter straw. The individual mobility, the integrity of the
acrosome, the integrity of the membrane, the vitality, and the morphology, were
evaluated in the criopreservated semen to determine the difference between
those different concentrations. The information was studied by means of an
analysis of variance (ANOVA) of two routes. The observation of both, the
acrosome and the integrity of the plasmatic membrane, was made by an
analysis of variance of one route. There was no after freezing significant
difference (p> 0.05) in the spermatozoon characteristics among the treatments,
which means that it is possible to pack sperm in the mentioned straws, and
concentrations, without changing its own characteristics.
Key words:
Boar semen, boar semen concentration, boar Spermatozoa, straws 0.5 ml,
2. INTRODUCCION
creada para el
de
su
uso
como
reproductores
(pruebas
de
progenie);
el
principalmente
debido al nmero de
profunda,
utilizando
una
sonda
que
permite
que
los
11
Por ello la
pajillas por dosis inseminante, y de sta forma contribuir a disminuir los costos
de almacenamiento del semen porcino congelado.
12
3. OBJETIVOS
hiposmtico.
13
4. MARCO TEORICO
la
desestabilizacin
prematura
de
la
membrana
fluida
del
Los envases utilizados tienen mucho que ver con el xito de supervivencia de
los
espermatozoides.
En
los
estudios
pioneros
en
esta
rea,
los
las
cantidades
de
glicerol
de
1-3%,
para
conseguir
aluminio de 4-5 ml, pajillas del 0.5 ml, y tambin Mini-pajillas de 0.25 ml
(Eriksson 2000). sta variedad de envases busca albergar una cantidad
18
indicadores
del
xito
de
la
criopreservacin
ya
que
son
20
5.0 METODOLOGIA
huevo (diluyente II) en una proporcin de 1:1 2:1 partes semen a diluyente
dependiendo de la concentracin espermtica. Adems se suplement con 200
M de vitamina E (Pea et al, 2003).
1.2x109, 0.8 y 0.4 x109 espermatozoides por pajilla y se les agreg un tercer
diluyente que consista en 89,5 ml del diluyente II, 9 ml de glicerol y de 1,5 ml
Equex STM (Nova Chemicals Sales Inc.) que es equivalente a Orvus Es Paste
(diluyente III). La proporcin es de dos partes de la dilucin II a una parte de
sta dilucin III para dar una concentracin final de glicerol 3% (Pea et al
2003). Los espermatozoides se envasaron en pajillas francesas de 0.5 ml, y se
sellaron con polivinilo antes de iniciar el proceso de congelacin.
Se
se
almacenaron
espermatozoides
considerando
segn
como
durante
la
una
coloracin
espermatozoides
semana
y
con
los
se
evaluaron
parmetros
acrosoma
los
morfolgicos
ntegro
los
que
6.0 RESULTADOS
Prueba
% Precongelamiento
Concentracin
(millones de espermatozoides por pajilla)
400
800
1200
Movilidad (%)
850.1
40 0.1
370.1
360.2
700.2
560.3
560.2
540.2
780.3
670.2
680.1
680.3
N.E
430.3
440.2
450.1
N.E
590.2
570.3
590.2
Vitalidad (%)
Morfologa (%)
Integridad de
membrana (%)
Integridad
acrosmica (%)
N.E no evaluado
25
Fuente de
Suma de
respuesta
Variacin
Cuadrados
gl
Cuadrado
Razn
Valor
Medio
Respuesta
A: Tratamiento
11,2593
5,62963
0,07
0,9355
Movilidad
B: Movilidad
30721,2
30721,2
364,52
0,0000
A*B
11,2593
5,62963
0,07
0,9355
Residuo
4045,33
48
84,2778
Total
34789,0
53
A: Tratamiento
21,3333
10,6667
0,55
0,5833
2521,5
2521,5
128,85
0,0000
A*B
21,3333
10,6667
0,55
0,5833
Residuo
939,333
48
19,5694
Total
3503,5
53
Respuesta
A: Tratamiento
1,03704
0,518519
0,03
0,9725
Morfologa
B: Movilidad
1340,02
1340,02
72,14
0,0000
A*B
1,03704
0,518519
0,03
0,9725
Residuo
891,556
48
18,5741
Total
2233,65
53
Respuesta
Vitalidad
B: Movilidad
26
Fuente de Variacin
Tratamiento
Residuo
Total
Tratamiento
Residuo
Total
Suma de
Cuadrados
20.2222
196.444
216.667
12.963
2745.11
2758.07
gl
2
24
26
2
24
26
Cuadrado
Medio
10.1111
8.18519
Razn
F
1.24
Valor
P
0.3086
6.48148
114.38
0.06
0.9450
27
7.0 DISCUCIN
47.7 % para
mejora
la
eficiencia
del
proceso
de
criopreservacin
de
Para disminuir los efectos de la concentracin en el presente se utiliz lactosa- yema de huevo que en otros trabajos ha permitido criopreservar
espermatozoides
en
concentraciones
resultados
en
concentraciones
ms
bajas
como
0.8
0.4x109
30
8.0 CONCLUSIONES
La concentracin de 1.2x109, 0.8x109 y 0.4x109 espermatozoides por pajilla de
0.5 ml no afect la movilidad individual, la vitalidad, la integridad de la
membrana plasmtica ni la integridad del acrosomica.
sin
afectar
las
caractersticas
seminales
31
9.0 BIBLIOGRAFIA
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36