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Lacriopreservacindelsemenporcino|AlbitarPortalVeterinaria

PVALBEITAR19/2014
Artculosporcino(archivo)

Lacriopreservacindelsemenporcino
09/02/2010@12:00:18GMT+1
Megusta

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Enesteartculosepretendeanalizarsucintamentelalaborqueunequipodeinvestigacinmulticntricoestrealizando,desdediversasperspectivas,enelcampodelsemencongel
Domnguez,J.C.1Cisale,H.2Kirkwood,R.1Breininger,E.3Gonzalez,R.Tejerina,F.3Alegre,B.Alegre,E.3Pelez,J.Garca,J.C.Bernal,S.Crdenas,S.Cordova,C.A.3Abad,M.
FacultaddeVeterinariadelaUniversidaddeLen(jcdomt@unileon.es)
1FacultaddeMedicinaVeterinaria.UniversidaddeBuenosAires(Argentina)
2LargeAnimalClinicalSciences.MichiganStateUniversity(USA)
3CentroTecnolgicodeInseminacinArtificial(CENTROTEC)

Lacriopreservacinespermticaesunabiotecnologadegrantrascendencia,todavezquetieneunpapelrelevanteenlaconservacinydifusinderecursosgenticos.
Sinembargo,enlaespecieporcinanohatenidoxitosuutilizacindebidoalaincapacidaddeobtenerresultadoscomparablesalosdelsemenfrescooconservadomedianterefrigeracina15

Elusodesemencongeladoenestesectorrepresentaapenasel0,2%deltotaldeinseminacionesrealizadasenelmundo(grfica)suutilidadhaquedadorestringidapuntualmentealaproducci
genticosytransporteinternacional(AlmlidyHofmo,1996),perdindoselagrandisponibilidadespacio/temporalqueofreceelsemencongelado.
Otrascausasdelabajautilizacindelsemencongeladoporcinoson:
Altocoste,conunaltonmerodeespermatozoidespordosisyunmanejocomplicado(Bolarinetal.,2006).
Excesivavariabilidaddelacongelabilidadentrerazas,individuosyeyaculados.
Imprecisindeloscriteriosdevaloracindelsemencriopreservadoenrelacinasufertilidad.
Precapacitacinydisminucindelavidatilespermtica.
Celoexcesivamentelargodelacerdayperiodoprolongadodeovulaciones.
Apesardeestepanoramadesalentador,lainvestigacinenelcampodelacrioconservacindelsemenporcinonohacesado,intentandomejorarlosresultadosdefertilidadyprolificidad.

Nuestrogrupodeinvestigacinaborda,entreotros,lossiguientesaspectos:laoptimizacindelosprotocolosdecongelacinlamejoradelacalidadseminalycapacidadfecundantemediantedi

plasmaseminal,etc.)eldesarrollodetestdecriorresistenciaytermorresistenciaespermticaqueprediganlacongelabilidadelestudioyevaluacinobjetivadelaslesionesdecapacidadfuncio
artificial(sistemasCASAASMA)ylainduccinysincronizacindeovulacionestraseldestetedelacerda.

Efectosdelacriopreservacinsobrelafuncionalidadyestructuraespermtica
Acontinuacinsedescribenloscincoefectosdelacriopreservacinsobrelafuncionalidadyestructuraespermtica.

Alteracionesenlasmembranascelulares

Elplasmalema(membranaplasmtica)eslaestructuraespermtica(figura1)queresultamsseveramentedaada(Parks,1997),aunquelamembranaacrosmicaexternaylasmembranasde
(Watson,1995).

Estasalteracionesestructuralesprovocanprdidadeenzimasintracelularesytrastornosenelbalanceinico,conprdidadelapermeabilidadselectivadelplasmalemaytrastornosenelmetabo

comprometiendotodasaquellasfuncionescelularesenergticodependientes,comolamotilidaddeigualformaseproduceprdidadeenzimasresponsablesdelametabolizacindelasROS(Re
compuestosantioxidantes(alfatocoferol,cidoascrbico,taurina,hipotaurina,etc.)enelmedioextracelulartrasladiluciny/ocentrifugacinpreviaalacongelacin(Brouwersetal.2005).

Modificacionesdelmediointerno

Seproducenalteracionesenelbalanceinicodelsodio,zincycalcio,queseacumulanenelespaciointracelular,ydelpotasioymagnesio,quesalenmasivamentedelaclula(WatsonyPlumm

Aunqueexistengrandesdiferenciasindividuales,elincrementodecalciointracelularesmuycaractersticodelaespecieporcinaencomparacinconotrasespecies,ysedebeaunaalteracind
lasprotenasdemembranaquefuncionancomobombadeionesdisminuyensuactividadconeldescensodelatemperatura(WatsonyPlummer,1985).

Efectossobreelcitoesqueleto

Muchasdelasprotenasdelcitoesqueletoejercenunafuncinestabilizadoradelplasmalema(HoltyNorth,1991),conuncomportamientodedespolimerizacinyrepolimerizacindependientede

Elglicerol,adems,alteraalosmicrotbulos,loquerepercuteindirectamentesobrelamembrana.Porotrolado,losrpidoscambiosdelvolumencelularinfluyensobreelsostnesquelticodela
pocoseconocealrespecto(Watson,1995).

Enlaalteracinestructuraldelamembranaplasmticadelareginacrosmicainfluyenlasdimensionesdelacabezaespermtica:enelespermatozoidedelasespeciesmsvulnerablesstae

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yconvexadelasespeciesresistentes.

Elcomponentecitoesquelticoestabilizadorparecenoestarpresenteenlareginanteriordelacabeza,conloquelasconsecuenciasdelenfriamientoseranmsgravesenlasespeciesconesp
(WatsonyPlummer,1985).

Congelacindesemendeporcino
Latecnologadecrioconservacinincluyeseisetapasimportantes:
1.Dilucinseminal.
2.Enfriamientodelasuspensinespermtica.
3.Adicindelagentecrioprotectoryenvasado.
4.Congelacin.
5.Almacenamientoenenvasecriognico.
6.Descongelacinyaplicacinalahembra.
Eldiseodecadaunadeestasfasesdebeirenfocadoaproducirelmenordaoposiblesobrelas
estructurasyelmetabolismodelespermatozoide,siendodeespecialimportancialafunciny
arquitecturadelamembranaplasmtica.
Lainadecuadaadaptacinalasetapascitadasanteriormente,ascomoloscambiosquevaasufrirla
cluladurantetandelicadoproceso,sonresponsablesdedaosoagresiones,quesuponenla
prdidadelacapacidaddelespermatozoideparallevaracabosusfuncionesconnormalidad
(Watson,1995Gaoetal.,1997).
Noobstante,seconsideraquelaadicindelagentecrioprotector(Watson,2001)ylasetapasde
enfriamiento,congelacinydescongelacin(Watson,1990)sonlasprincipalesfuentesdedaosobre
lasclulasenelconjuntodelproceso.
Detodoslosprotocolosdescritosdecongelacin,slohansidoutilizadosintensamenteanivel
comerciallosdePurselyJohnson,ydeWestendorfetal.(Johnson,1985).De1985aestaparteseha
desarrolladoungrantrabajoexperimentalparaestablecerlascondicionesptimasdecongelaciny
descongelacinyhacermsprcticoelusodesemen,perosiempretomandocomobaselosdos
protocolosanteriormentecitados.
Elprotocolodecongelacinutilizadopornuestroequipodeinvestigacineseldenominado
optimizadodeBwangaetal.(1990),basadoenlossiguientespasos:
Concentracinseminalporcentrifugacin.
Diluyentederefrigeracinconyemadehuevo.
Diluyentedecongelacinconglicerol.
Envasadoenminipajuelasde0,25ml.
Rgimentrifsicodecongelacindesde6Chasta100C,utilizandouncongeladordeNlquido
programableconcontroldeldescensodetemperatura.

Efectossobrelamovilidad

TalcomohaseadadoBrouwersetal.(2005),laperoxidacinlipdicaesparticularmenteintensaenlapiezaintermedia,loqueexplicaraladisminucindelamovilidadespermticatrasladesco

Loscambioscualitativosdelamovilidaddespusdeladescongelacin(Cremadesetal.,2005),presentansimilarescaractersticasalosespermatozoideshiperactivadosaconsecuenciadelac
fecundacin(SchmidtyKamp,2004).

Efectossobreelncleo

Elfenmenodesupercondensacindelacromatinanuclearsehaconstatadoenespermatozoidescriopreservadosdeverraco(Hamamahetal.,1990),relacionndoloconunaalteracindelacap
TambinMartnRilloetal.(1999)asocianlostrastornosdeldesarrolloembrionarioaalteracionesenlaorganizacindelacromatinanuclear,puesencuentranunamayorproporcindeembriones
tambindeembrionesdegeneradosencerdasinseminadasconsemendescongelado,encomparacinconotrasquelofueronconrefrigerado.
UnestudiodeFraseryStrzezek(2007)hadescritounincrementodelafragmentacindelADNdelncleodelosespermatozoidesporcinostraselprocesodecongelacindescongelacin.

Aportacionesalacriopreservacinespermtica
Nuestrasaportacionesaestalneadeinvestigacinhansidonumerosasyendiferentesaspectos,queresumidamentepodemosagruparenlassiguientes:
1.Criorresistenciaytermorresistenciacomopruebasdelavaloracindelacapacidaddecriopreservacin.
2.Lesionesespermticasdurantelacriopreservacinyvitalidadespermtica.Utilizacindeantioxidantesensuprevencin.

3.AplicacionesdelasnuevastecnologasCASAyASMAenlacuantificacindelesionesespermticasdurantelacriopreservacin:desarrollodenuevastcnicasdevisinartificialenlavalorac
durantelacriopreservacin.
4.UtilizacindeltesthomlogoFIVenlavaloracindelacapacidadfecundantedelsemendescongeladodeverraco.
5.Variacindelassubpoblacionesespermticasduranteelprocesodecongelacindescongelacin.
6.Protocolosdeinduccinysincronizacindelceloenlacerdaenlaayudaalprocesodeinseminacinconsemencriopreservado.
Lavaloracindelacriorresistenciadeuneyaculadodependedelparmetrodemedidadecalidadqueseconsidere(Pelez,2003Pelezetal.,2004).

Ennuestrotrabajolaestimacinmsprecisaseobtieneconsiderandoelporcentajedeespermatozoidesmtilesbajoestimulacinconcafenayelporcentajedeespermatozoidesconmembrana
fluorocromoyodurodepropidio.

Noobstante,lautilizacindeunapruebacomplementariadetermorresistenciaposdescongelacin,medianteincubacina37C,conunseguimientodelamotilidadespermtica(mejorquedela
tienemayorcapacidaddiscriminativaycontribuyeaunavaloracinmsacertadadelacriorresistencia.

Unasencillapruebadetermorresistenciaesuntestinteresante,todavezquedemuestracmoelporcentajedeespermatozoidesvivosy/omtilessereduceconsiderablementealas23hdeinc
paraelmantenimientodelavitalidady/omotilidadespermticasdesdelosprimeros15minutos.

Tambinhemosdemostrado(Pelezetal.,2006)cmoelprocesodecriopreservacinmermaconsiderablementelacapacidadfecundantedelosespermatozoides,posiblementeprovocada,entr

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extremadamenteaceleradaaexperimentarelfenmenodecapacitacinconreduccindesusposibilidadesdesupervivencia.

Porello,laadicindeplasmaseminalenelmomentodeladescongelacindelsemenquedetengaelprocesodecapacitacinhaciaelquellevalacriopreservacinestambinunabuenalnead
(Abad,M.etal.,2006).

Enestosmomentostrabajamosenunproyectoquevalorelacapacidaddecriorresistenciasintenerquerealizarlacongelacin:esunapruebatambinbasadaenlatermorresistenciayotrabasa
eyaculadorecinrecolectadoysimplementediluido.

Esperamosaspredecirlacapacidaddecriorresistenciadeloseyaculados,demaneraquesolamenteseprocedieraalacongelacinenaquellosquemerezcanlapena,segnsufertilidadposter

Otrafacetainteresantedenuestrasinvestigacioneseslaevaluacindelosfenmenosacaecidosduranteelprocesodecongelacindescongelacinmediantelatecnologadeanlisiscomputariz
presentanumerosasventajas,talescomolaobjetividad,laindividualizacindecadaunadelasclulasespermticasvaloradasyladeterminacindeparmetrosqueportcnicastradicionaless

Hemospodidocomprobarquetodosloscambiosmorfomtricosobservadosconmotivodelacriopreservacinespermticadeverracotienenlugarenlaetapacomprendidaentrelaadicindelag
ellosderivandeunareduccinsignificativadelejelongitudinaldelacabezadelespermatozoide,conunadistribucinsubpoblacionalquevaraalolargodelprocesodecongelacindescongelaci

espermatozoidesmvilesconcaractersticasprximasalahiperactivacindesdelarecogidaseminalhastaelfinaldelaincubacina5Cenelprocesodecongelacin,mientrasquedespusd
clulasespermticasquedescribentrayectoriasmslinealesyregulares,conunavelocidadlinealmsalta(Tejerinaetal.,2005,2006,Tejerina,2008).

Elusodedescriptoresdeformaytexturadentrodelanlisisdigitaldeimgenesnosestpermitiendodesarrollarmtodosdevaloracinespermticarealmenteinteresantes,nosloparaelcontr
elconjuntodelainseminacinartificialporcina,incluidalatradicional(semenfrescoorefrigeracin)(Snchezetal.,2005Fernndezetal.,2005,Alegreetal.,2005).

Porltimo,tambinestamostrabajandoeneldiseodemtodosdeinduccindelcelotraseldestetequepermitanunbuenagrupamientodelasovulaciones,conobjetodeprogramarlasinsemin
maneraquecoincidalavitalidadespermticaconaqullas.

Unodelosmtodosquemejoresresultadoshaproporcionadoeselqueutilizaunadosisalta(900UI)deeCG(gonadotrofinacorinicaequina)enelmomentodeldestete,80hdespusseaplica
procedindoseapracticardosinseminacionesespaciadas6hapartirdelas36hdelaadministracindelahCG.

Estemtodo,encombinacinconlaadicinposdescongelacindeplasmaseminal(Abadetal.,2006),nosestproporcionandofertilidadescomprendidasentreel7580%(datosprovisionales,s
Bibliografadisponibleenhttp://www.albeitar.grupoasis.com/bibliografias/congelacionsemenverraco119.doc
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