Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan sifatsifat yang khas, begitu pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Salah satu cara untuk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk diidentifikasi ialah dengan metode pengecatan atau pewarnaan. Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian pengecatan(Rismawati,2012). Pewarnaan sederhana merupakan teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan. Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit, karena selain bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat kecil. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri, sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Oleh karena itu, teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan
salah
satu
cara
yang
paling
utama
dalam
mikrobiologi(Fauziah,2012). 1.2 RUMUSAN MASALAH 1.2.1 Bagaimanakah teknik pewarnaan sederhana? 1.2.2 Apakah tujuan dari pewarnaan sederhana? 1.3 TUJUAN 1.3.1 Untuk mengetahui teknik pewarnaan sederhana 1.3.2 Untuk mengetahui tujuan dari pewarnaan sederhana 1.4 MANFAAT 1.4.1 Mahasiswa dapat mengetahui teknik pewarnaan sederhana 1.4.2 Mahasiswa dapat mengetahui tujuan dari pewarnaan sederhana
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
penelitian
2.1 DASAR TEORI
2.1.1 Tinjauan Umum Sel-sel mikroorganisme yang tidak diwarnai umumnya tampak hampir transparan bila diamati dengan mikroskop cahaya biasa sehingga sukar dilihat karena sitoplasma selnya mempunyai indeks bias yang hampir sama dengan indek bias lingkungannya yang bersifat cair. Kontras antara sel dengan lingkungannya dapat dipertajam dengan mewarnai sampel tersebut. Tujuan pewarnaan untuk mengamati dengan lebih baik tampang morfologi mikroorganisme secara kasar, mengidentifikasi bagian-bagian struktural sel mikroorganisme dan membantu mengidentifikasi atau membedakan mikroorganisme yang serupa. Pewarnaan yang biasa dilakukan adalah pewarnaan sederhana yaitu pemberian warna pada bakteri atau jasad renik lainnya dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna pada larutan tipis atau olesan yang sudah difiksasi. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka basa). Zatzat warna yang digunakan biasanya bersifat alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif). Pewarnaan sederhana memungkinkan dibedakannya bakteri dengan berbagai morfologi dan strukturnya. Pewarna yang biasa dipakai dalam pewarnaa umum adalah biru metilen. Biasanya hanya untuk membedakan sel dan latar belakangnya saja tanpa bermaksud melakukan kajian diferensiasi. Biru metilen memberi warna biru cerah yang bisa bergradasi (biru muda sampai biru agak tua). Akan tetapi pada beberapa mikroorganisme, beberapa granula di dalam sel tampak terwarnai lebih gelap daripada bagian sel lain(Citra,2012) Pewarnaan sederhana menggunakan satu macam zat warna (biru metilen/air fukhsin) tujuan hanya untuk melihat bentuk sel. Pewarnaan sederhana, merupakan pewarna yang paling umum digunakan. Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dan sebagainya) dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana, yaitu mewarnai sel-sel bakteri hanya digunakan satu macam zat warna saja. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa) sedangkan zatzat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif). Zat warna yang dipakai hanya terdiri dari satu zat yang dilarutkan dalam bahan pelarut. Pewarnaan Sederhana merupakan satu cara yang cepat untuk melihat morfologi bakteri secara umum.
Beberapa contoh zat warna yang banyak digunakan adalah biru metilen (30-60 detik), ungu kristal (10 detik) dan fukhsin-karbol (5 detik)(Switiani,2013). 2.1.2 Prinsip Dasar Pewarnaan Sederhana Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara komponen selular dari bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut kromogen. Terjadi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna. Berdasarkan adanya muatan ini maka dapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa. Pewarna asam dapat tejadi karena bila senyawa pewarna bermuatan negatif. Dalam kondisi pH mendekati netral dinding sel bakteri cenderung bermuatan negatif, sehingga pewarna asam yang bermuatan negatif akan ditolak oleh dinding sel, maka sel tidak berwarna. Pewarna asam ini disebut pewrna negatif. Contoh pewarna asam misalnya : tinta cina, larutan Nigrosin, asam pikrat, eosin dan lain-lain(Eka,2012) 2.1.3 Tujuan Pewarnaan atau pengecatan terhadap mikroba, banyak dilakukan baik secara langsung (bersama bahan yang ada) ataupun secara tidak langsung (melalui biakan murni). Tujuan dari pewarnaan tersebut adalah pewarnaan untuk:
Mempermudah melihat bentuk jasad baik bakteri, ragi ataupun fungi.
Memperjelas ukuran dan bentuk jasad Melihat struktur luar dan kalau memungkinkan juga struktur dalam jasad. Melihat reaksi jasad terhadap pewarna yang diberikan sehingga sifat fisik dan kimia yang ada akan dapat diketahui (Eka,2012)
BAB III METODOLOGI
3.1 WAKTU DAN TEMPAT
Waktu
: Pukul 11.00 13.00 WIB.
Tanggal
: 20 September 2014
Tempat
: Laboratorium Bakteriologi
3.2 ALAT DAN BAHAN
3.2.1 Alat
Ose bulat Lampu spiritus Mikroskop Obyek glass Kapas Korek api
3.2.2 Bahan
Suspensi kuman Gram I (Gentian Violet) Xylol Oil Immersi
3.3 PROSEDUR KERJA
Siapkan semua alat dan bahan
Panaskan ose bulat dengan api spiritus sampai merah membara dan dinginkan Mengambil kuman dalam tabung yang telah diflaming kemudian oleskan pada obyek glass searah jarum jam dan keringkan Sediaan difiksasi Sediaan digenangi dangan cat gentian vioplet selama 1 menit Cat dibuang dan dicuci dengan air kran Keringkan Tetes dengan oil immersa dan periksa dibawah mikroskop 100x BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 HASIL PEWARNAAN
Bentuk Warna Susunan Cat
: batang : ungu : menyebar : Gentian Violet
4.2 DISKUSI
Tujuan Pewarnaan melihat morfologi kuman melihat susunan kuman melihat sifat kuman terhadap pewarnaan mengarahkan pemeriksaan membantu klasifikasi kuman Macam-macam Pewarnaan 1. Regresif Staining 2. Progresif Staining (pewarnaan sederhana) 3. Negatif Staining (pewarnaan negatif) 4. Meta Chomatik Staining (pewarnaan granula) Pewarnaan Sederhana Adalah pewarnaan yang menggunakan satu macam cat Cat yang dipakai dalam pewarnaan sederhana 1. Methylen Blue hasilnya biru 2. Gentian Violet hasilnya ungu 3. Fuchsin/ Safranin hasinya merah Tujuan sediaan difiksasi 1. Untuk membunuh kuman 2. Agar kuman dapat diwarnai 3. Agar kuman sebelum dan sesudah diwarnai bentuknya tetap 4. Agar preparat tahan lama disimpan BAB V PENUTUP
5.1 SIMPULAN Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan dapat disimpulkan adanya bakteri dengan bentuk batang, berwarna ungu, dan susunannya menyebar. 5.2 SARAN Pada proses pewarnaan bakteri frekuensi untuk terinfeksi dengan bakteri sangat tinggi. Oleh karena itu, penggunaan Alat Pelindung Diri (APD) seperti masker, handscond, dan jas laboratorium sangat dianjurkan. Selain itu, kebersihan dalam proses identifikasi juga sangat diperlukan sehingga bakteri yang diisolasi bisa tumbuh dengan baik.
Oleh karena itu, sepatutnya lah kita menjaga kebersihan dan kesehatan diri kita dan lingkungan. Dengan melakukan hal-hal tersebut, frekuensi terserang penyakit bisa ditanggulangi.
DAFTAR PUSTAKA
Rismawati,Rike.2012.Cara
Pewarnaan
Bakteri.[online].
http://rikedianhusada.blogspot.com/p/cara-pewarnaan-bakteri.html (diakses tanggal
11 Desember 2014) Marhamah,Citra
Adilla.2012.Dasar
Teori
Pewarnaan
Sederhana.[online].
http://citraredprincess.blogspot.com/2012/10/dasar-teori-pewarnaan-sederhana.html (diakses tanggal 12 Desember 2014) Yuliani,Switiani
Eka.2013.Pewarnaan
Bakteri.[online].
http://switianiekayuliani.blogspot.com/2013/03/pewarnaan-bakteri.html tanggal 12 Desember 2014)
(diakses
Rustansi,Eka
Isty.2012.Pewarnaan
Sederhana.[online]
http://ekiisty.blogspot.com/2012/08/pewarnaan-sederhana.html (diakses tanggal 12
