UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIOSA

DEPARTAMENTO DE QUMICA
MTODOS DE SEPARAO EM QUMICA ANALTICA QUI 311
PROF. DRA. MARIA ELIANA LOPES R. DE QUEIROZ

GRUPO 05: IGOR FORATTINI PRATES CARVALHAIS NORONHA

GABRIELLA ALMEIDA DE MOURA

76034
70671

Separao e identificao de ons metlicos em amostra

desconhecida utilizando cromatografia em papel

VIOSA/MG
2015
1

SUMRIO
INTRODUO ................................................................................................... 3
1.1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico...................... 4
1.2. Classificao pela fase mvel empregada ............................................... 4
1.3. Classificao pela fase estacionria utilizada .......................................... 4
1.4. Classificao pelo modo de separao ................................................... 5
Cromatografia em papel (CP) ......................................................................... 5
OBJETIVOS ....................................................................................................... 8
MATERIAIS E MTODOS.................................................................................. 9
RESULTADOS E DISCUSSO........................................................................ 10
CONCLUSO................................................................................................... 12
REFERNCIAS ................................................................................................ 13

INTRODUO
Entre os mtodos de anlise modernos, a cromatografia ocupa um lugar de
destaque devido a sua facilidade em efetuar a separao, identificao e
quantificao das espcies qumicas, por si mesma ou em conjunto com outras
tcnicas instrumentais de anlise, como por exemplo, a espectrofotometria ou a
espectroscopia de massas [1].
A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est
fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que
ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel
e a fase estacionria. A grande variedade de combinaes entre fases mveis e
estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao
[2].
O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1903 e sua utilizao
atribuda ao botnico russo Mikhail Semenovich Tswett, ao descrever suas
experincias na separao dos componentes de extratos de folhas e gema de
ovo. Nesse estudo, a passagem de ter de petrleo (fase mvel) atravs de uma
coluna de vidro preenchida com vrios slidos (fase estacionria), qual se
adicionou o extrato, levou separao dos componentes em faixas coloridas.
Este provavelmente o motivo pelo qual a tcnica conhecida como
cromatografia (chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar errnea idia
de que o processo seja dependente da cor.
A cromatografia foi praticamente ignorada at a dcada de 30, quando foi
redescoberta. A partir de ento, diversos trabalhos possibilitaram seu
aperfeioamento, levando-a a um elevado grau de sofisticao, o qual resultou
no seu grande potencial de aplicao em muitas reas [2].
So vrios os critrios usados para a classificao das diferentes modalidades
de cromatografia, sendo os mais comuns relacionados tcnica empregada, ao
mecanismo de separao envolvido e aos diferentes tipos de fases
estacionrias.
3

1.1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico

Em relao forma fsica do sistema, a cromatografia pode ser subdividida em
cromatografia em coluna e cromatografia planar. Enquanto a cromatografia
planar resume-se cromatografia em papel (CP), cromatografia por
centrifugao (Chromatotron) e cromatografia em camada delgada (CCD), so
diversos os tipos de cromatografia em coluna, os quais sero mais bem
compreendidos quando classificados por outro critrio.

1.2. Classificao pela fase mvel empregada

Em se tratando da fase mvel, so trs os tipos de cromatografia: a
cromatografia gasosa, a cromatografia lquida e a cromatografia supercrtica
(CSC), usando-se na ltima um vapor pressurizado, acima de sua temperatura
crtica. A cromatografia lquida apresenta uma importante subdiviso: a
cromatografia lquida clssica (CLC), na qual a fase mvel arrastada atravs
da coluna apenas pela fora da gravidade, e a cromatografia lquida de alta
eficincia (CLAE), na qual se utilizam fases estacionrias de partculas menores,
sendo necessrio o uso de uma bomba de alta presso para a eluio da fase
mvel. No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por
cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resoluo
(CGAR). A diferena entre os dois tipos est na coluna. Enquanto na CGAR so
utilizadas colunas capilares, nas quais a fase estacionria um filme depositado
na mesma, a CG utiliza colunas de maior dimetro empacotadas com a fase
estacionria.

1.3. Classificao pela fase estacionria utilizada

Quanto fase estacionria, distingue-se entre fases estacionrias slidas,
lquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionria ser constituda
por um lquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte slido
ou

imobilizado

sobre

ele.

Suportes

modificados

so

considerados

separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem

dos outros dois em seus mecanismos de separao.

1.4. Classificao pelo modo de separao

Por este critrio, separaes cromatogrficas se devem adsoro, partio,
troca inica, excluso ou misturas desses mecanismos.
Para se ter uma viso mais ampla dos diferentes tipos de cromatografia, os
mesmos esto dispostos no diagrama da Figura 1.

Figura 1. Representao esquemtica dos diferentes tipos de cromatografia.

Cromatografia em papel (CP)

A cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio lquidolquido,
estando um deles fixado a um suporte slido. Baseia-se na diferena de
solubilidade das substncias em questo entre duas fases imiscveis, sendo
geralmente a gua presente na celulose (papel de filtro) um dos lquidos. [2]
O mecanismo de separao pode ser explicado da seguinte maneira: a celulose
constituda por 2000 ou mais unidades de glicose anidra ligadas por tomos
de oxignio; um lquido polar como a gua tem grande afinidade pelas hidroxilas
de cada glicose, formando pontes de hidrognio, ficando retida e funcionando
como fase estacionria, e os lquidos menos polares (solventes orgnicos) so
repelidos por esta estrutura e funcionam como fase mvel [1].

A cromatografia em papel uma tcnica muito til para a separao de

componentes de uma mistura e realizao da anlise qualitativa dos mesmos
em funo dos fatores de reteno (Rf) e das cores apresentadas pelas manchas
naturalmente ou aps revelao, sendo largamente usado nos laboratrios de
bioqumica e de qumica orgnica.
A forma mais simples da cromatografia em papel a cromatografia ascendente
que utiliza uma tira de papel de comprimento e largura variveis, em funo da
cuba cromatogrfica a ser utilizada [1].
A amostra deve ser aplicada a uma altura superior ao nvel da fase mvel na
cuba cromatogrfica que deve estar bem vedada para que no haja perda de
vapores da fase mvel.

Por capilaridade, a fase mvel comea a se

movimentar em fluxo ascendente, iniciando com velocidade elevada, diminuindo

gradativamente devido fora ascendente da capilaridade ser neutralizada pela
ao da gravidade.
A anlise qualitativa de uma substncia realiza-se atravs de seu Rf que se
determina utilizando-se a Equao 1:

Rf

Distncia cm percorrida pela substncia

Distncia cm percorrida pela fase mvel

(1)

Na prtica, a distncia percorrida pelo soluto em um tempo determinado, medese desde o ponto de aplicao ou ponto de partida da amostra at o centro da
mancha, e a distncia percorrida pela fase mvel, desde o ponto de partida at
o ponto extremo atingido por ela. [1]
O Rf uma constante fsica de uma determinada substncia, desde que se
observem as caractersticas do papel, a qualidade e a quantidade da fase mvel,
a temperatura, o volume e a concentrao da substncia aplicada. Deste modo,
aconselhvel, quando se realiza a anlise qualitativa e quantitativa de uma
substncia ou mistura de substncias, trabalhar com padro e amostra de forma
mais semelhante possvel e fazer-se a anlise de ambos nas mesmas condies,
6

evitando-se desta maneira, os erros de anlise devidos ao papel, fase mvel,

temperatura, etc. [1]
A eficincia de uma separao obtida por cromatografia em papel, pode-se
avaliada pelo fator de separao (), fator de resoluo (Rs) e o nmero de
pratos tericos (np). O primeiro est relacionado com a separao dos
componentes de uma amostra; o segundo com a resoluo das manchas de
cada componente e o ltimo com o nmero de equilbrios que ocorre entre o
analito e as fases estacionria e mvel.

OBJETIVOS

Analisar a separao de ctions pelo processo de cromatografia em

papel;

Determinar os componentes de uma amostra desconhecida.

Calcular os valores de Rf para cada ction e para a amostra

desconhecida;

Calcular os valores do fator de resoluo (Rs), fator de separao () e o

nmero de pratos tericos (np) para as manchas das amostras
desconhecidas.

MATERIAIS E MTODOS
Preparou

solues

aquosas

(0,1mol\L)

contendo

os

ctions

Fe3+,Co2+,Cu2+,Zn2+e Ni2+ em 50 ml. Soluo de 8-hidroxiquinolina 0,1% em

etanol(50 ml) e, soluo de dimetilglioxina 0,1% em etanol(50ml).
A fase mvel teve as sequintes propores:
HCl 1:1 (v:v):Acetona: acetato de etila (10:45:45)
HCl 1:1 (v:v):acetona: acetato de etila (20:40:40)
HCl 1:1 (v:v): acetona: acetato de etila (30:35:35)
Em uma folha de papel cromatogrfico(12X17 cm) marcou-se com um lpis
aproximadamente 2cm da extremidade (ponto de partida) e 10 cm desta marcar
a linha de chegada. A aplicao das solues( 5 padroes e uma amostra
desconhecida) mantendo uma distancia mnima de 1,5 a 2 cm. E, essas solues
so aplicadas com o auxilio de tubos capilares.
Colocou-se o papel cromatogrfico nas cubas contendo a fase mvel(com o
auxilio de clipes e barbante) de modo que o papel encoste mas, tomando o
cuidado de no ultrapassar o ponto de partida. Esperou-se o solvente correr ate
o ponto de chegada.
Aps a secagem do papel expe-se o mesmo em vapores de NH3 ,revelou em
8-hidroxiquinolina e dimetilglioxina e anotou-se os resultados. E, em seguida,
submeteu-se o cromatograma a luz UV com comprimento de onda igual a
365nm. Esses procedimentos foram realizados para melhorar a visualizao dos
ctions presentes nos padres e na amostra, podendo assim identificar os
constituintes da mesma.

RESULTADOS E DISCUSSO
Aps a corrida das amostras pelo papel na cuba contendo HCl (1:1 v/v) : Acetona
: Acetato de Etila (20:40:40) como fase mvel, utilizou-se os reveladores
indicados abaixo na Tabela 1, juntamente com os resultados obtidos aps a
aplicao dos mesmos:
Tabela 1: Resultados visuais obtidos aps a aplicao dos reveladores
posteriormente corrida cromatogrfica
Ctions

NH3

Ferro (III)
Cobalto (II)

Cinza
X

Zinco (II)

Cobre (II)

Nquel (II)

8Dimetilglioxima
hidroxiquinolina
X
X
Amarelo
X
X

AmareloMarrom
X

Luz UV
(365nm)
X
X
Mancha
fluorescente

Rosa

Identificando as manchas no papel cromatogrfico, possvel ento calcular o

Rf (fator de reteno) para os ctions utilizados como padres e tambm para
as manchas da amostra desconhecida (Amostra 3 M1 M2 M3), utilizando a
Equao 1, e tambm pode-se obter a largura das manchas. Os resultados se
encontram na Tabela 2, abaixo:
Tabela 2: Rf e W para as manchas obtidas aps a revelao utilizando os
mtodos descritos anteriormente

dR/ cm
Rf
W

Ferro
(III)
3,43
0,34
2,80

Cobalto
(II)
0,00
0,00
0,85

Zinco
(II)
2,53
0,25
0,80

Cobre
(II)
1,82
0,18
0,30

Nquel M1 M2 M3
(II)
0,00 2,83 1,31 0,00
0,00 0,28 0,13 0,00
0,50 1,75 0,65 0,55

Nota-se que os Rfs das manchas das amostras no apresentaram valores

correspondentes aos padres, mesmo sabendo que tal amostra era constituda
por alguns destes ons. Este fato pode ser explicado devido corrida ascendente
no linear da fase mvel, o que indica a no saturao da cuba cromatogrfica.

10

Tal situao implica em manchas de mesmo analito correrem mais que a outra,
obtendo-se assim Rfs diferentes, porm prximos.
Obtidos os fatores de reteno e as larguras das manchas da amostra
desconhecia, pode-se agora calcular o fator de resoluo (Rs) (Equao 2), fator
de separao () (Equao 3) e o nmero de pratos tericos (np) (Equao 4)
utilizando as equaes abaixo:
Rs = 2 (dR2 - dR1) / (ws2 + ws1)

(2)

= (RF2 / RF1) = dR2 / dR1

(3)

Np = 16 (RF / ws)2

(4)

Onde dR a distncia da mancha at o ponto de partida da corrida

cromatogrfica. Os resultados esto na Tabela 3:
Tabela 3: Resoluo, fator de separao e nmero de pratos tericos calculados
para as manchas da amostra desconhecida 3

M1/M2
M2/M3
M1
M2
M3

Rs
1,27
2,18
-

2,15
Indet.
-

Np
0,41
0,64
0,00

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CONCLUSO
Percebe-se que a fase mvel utilizada foi eficiente na separao dos ons
metlicos, de modo que se obteve bons fatores de separao e uma resoluo
maior do que 1.
Ao comparar os fatores de reteno dos padres com os das amostras, notouse que no h valores iguais, mas que, por comparao, conclui-se que a
amostra 3 constituda por nquel, zinco e cobre.

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REFERNCIAS
1. COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L.; BONATO, P.S. Introduo a Mtodos
Cromatogrficos. Editora da Unicamp, 7 Edio Campinas, 1997, 279
p.

2. DEGANI, A.L.G.; CASS, Q.B.; VIEIRA, P.C. Cromatografia: um breve

ensaio. In: Atualidades em Qumica. Qumica Nova na Escola, n 7, p.2125, mai. 1998.

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