Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Medicina
Escuela Acadmico Profesional de Nutricin

Curso de Bioqumica
Informe de Laboratorio N1
FOTOCOLORIMETRIA - METODO GRAFICO Y ANALITICO
DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE UNA MUESTRA

Grupo B
Mesa N 6

Cuti Zanabria Israel Domingo

Delgado Jimenez Danesy Maynne
Eslava Juarez Ruth Noemi
Fabian Nieto Roky Franklinn
Gallardo Bringas Arely Damarys

Blgo. Marco Antonio Nuez Fonseca

02 de abril
2015

INTRODUCCIN
La fotocolorimetra es la medida de la luz absorbida por una solucin mediante
un aparato que es un fotocolormetro. El equipo consta de una fuente de luz
artificial, un monocromador que separa exclusivamente luz de una sola longitud
de onda (la que sea preferente para la medida), un recipiente o tubo de vidrio (que
alberga la solucin a medir), una clula fotoelctrica que transforma la luz
trasmitida en corriente elctrica y una unidad de medida de la corriente elctrica o
galvanmetro.
Cuando hablamos de fotocolorimetra nos referimos a una tcnica
espectrofotomtrica, la cual utiliza la luz para poder medir la concentracin de una
sustancia qumica. Se sabe que los electrones en las molculas se encuentran
girando en niveles de energa bien definidos. En condiciones normales la
molcula no est excitada y los electrones se encuentran en el nivel ms bajo, si
la molcula absorbe energa, los electrones pasan del nivel ms bajo a otro de
energa ms elevada. En el nuevo estado tanto la molcula como los electrones
se encuentran excitados y los tomos y molculas pueden emitir radiacin en
todas las regiones del espectro, pero son la ultravioleta, visible e infrarroja los ms
usados. Es importante decir que en un espectro de Absorbancia, se absorben
diferentes longitudes de onda en distintos grados, es decir, la absortividad vara
segn la longitud de onda. Es por ello que se utiliza para la prctica la longitud de
onda ptima, medida en la cual se absorbe la mayor cantidad de sustancias
presentes en la reaccin y en ella se cumple la Ley de Lambert y Beer.
El fundamento terico que nos permite establecer la relacin entre la absorbancia
y la concentracin es la Ley de Lambert y Beer la cual nos dice que la
absorbancia est directamente relacionada con las propiedades intrnsecas del
componente, con su concentracin y con la longitud de la trayectoria del haz de
radiacin al atravesar la muestra. La expresin matemtica es:
A = C. . L
A = Absorbancia de la muestra
C = Concentracin del cromforo
L = Longitud del paso ptico que contiene la muestra
= Absortividad molar. Depende del cromforo en s mismo, de la y de las
condiciones de medida (pH, T...). Ya que la absorbancia es adimensional las
unidades son concentracin1 longitud-1.
Esta ley nos permite establecer una relacin entre la absorbancia del estndar y
la muestra problema, la cual nos da como resultado la siguiente frmula:
Concentracin de la M.P= Abs. de la M.P. X Concentracin del ST. / Abs. del ST.
La anterior frmula es la que nos permitir a travs del mtodo analtico obtener la
concentracin de la muestra problema (MP), pero con algunas modificaciones ya
que la nueva frmula ser:
Concentracin de la MP =Abs. MP. X Fc X Fd

El factor de calibracin es igual a la Concentracin del ST. / Abs. del ST. y el

factor de dilucin es igual a la inversa de la dilucin hecha debido a que la
absorbancia del estndar no se encuentra dentro del rango de absorbancia de las
dems muestras.
Para el mtodo grfico se trazan coordenadas en un plano cartesiano, en donde
el eje de las abscisas corresponde a las concentraciones de las muestras y el eje
de las ordenadas corresponde a la absorbancia. Lo que se hace es trazar una
lnea recta comenzando desde el cero y se observa si los puntos coinciden o no
con la recta. Muchas veces esto no pasa y se da debido a cuan precisa ha sido la
dilucin que la persona ha hecho. En este plano tambin se coloca la absorbancia
de la muestra problema y se prolonga para saber, segn el grfico, cunto es el
valor de la absorbancia aproximadamente. Lo que se busca es que haya
correspondencia o al menos proximidad entre la concentracin obtenida de
manera analtica y grfica.
Dentro de las aplicaciones de esta tcnica tenemos principalmente la aplicacin
bioqumica ya que a travs de este mtodo podemos por ejemplo determinar la
glucosa en sangre en un laboratorio de anlisis qumico, el anlisis cuantitativo de
protenas, la determinacin de cidos nucleicos, concentracin de rea en la orina
etc. En la parte de Bromatologa ayuda a saber el estado sanitario de un alimento
conociendo la absorbancia de este. Ayuda tambin en el control de enfermedades
y en la prevencin de posibles enfermedades que un alimento puede transmitir.
Es por ello que resulta de vital importancia conocer el mtodo da la
fotocolorimetra.

OBJETIVOS

Comprender el uso de la fotocolorimetria , mtodo ptico de anlisis que

mide la cantidad de luz absorbida por una sustancia coloreada.
De los valores predeterminados; Hallar la longitud de onda con la cual se
experimenta mayor absorcin.
Obtener el factor de calibracin de una solucin estndar aplicando:
concentracin de la muestra estndar/absorbancia estndar.
El alumno desarrollara analticamente la concentracin de una muestra
problema con la frmula: Abs = .l.c
Determinar la funcin y el correcto uso del espectrofotmetro.

PROCEDIMIENTO

En cuatro tubos de ensayo se agreg la muestra problema la cual era

KMnO4. En el tubo 1 se agreg 1ml de la muestra problema, en el tubo 2 se
agreg 2ml y as sucesivamente.
Luego se agreg a cada tubo agua destilada hasta completar los 10ml.
Una vez obtenida esta mezcla se procedi a llevarla al espectrmetro para
medir su absorbancia.
Despus de obtener la absorbancia de cada tubo, se hall la concentracin
estndar de cada tubo a travs de la formula.

C1.V1=C2.V2

El paso siguiente fue hallar la concentracin de la muestra problema por el

mtodo analtico y grafico para poder comprobar la concordancia entre
estos dos mtodos:
a) Mtodo analtico: Con los datos obtenidos se remplaz en la frmula
espectrofotomtrica la cual es :

[ ]MP= AbsSt.Fc.Fd

Paso seguido, se llev al espectrofotmetro la muestra problema; la

cual dio una absorbancia mayor al rango de valores de las
absorbancias estndares, es por ello que se tuvo que realizar una
dilucin (1ml/ 1ml + 1ml H2O). Como resultado el factor de dilucin igual
a 2.

b) Mtodo grfico:

1. Se ubic los datos obtenidos en un plano cartesiano (papel

milimetrado) con una escala determinada.
2. Luego se grafic una lnea recta desde el cero hasta el punto ms
distante de los datos.
3. Al unir los puntos se obtuvo una lnea curva que contrastaba con la
lnea recta, la cual era la ideal. Esto sirvi para ubicar la
concentracin de la muestra problema, localizndose en las
abscisas del plano que parti de la absorbancia de la muestra
problema, ubicada en las ordenadas.
4. Para finalizar se multiplic la concentracin de la muestra problema
ubicada en el plano por el factor de dilucin obtenido para ver si
haba correspondencia entre el valor obtenido analticamente y el
obtenido de manera grfica.

RESULTADOS
Mesa/tubo

T1

T2

T3

T4

T5

T6

T7

T8

525nm

0.5

1.0

1.5

2.0

Fc

[]

d MP

Fd

0.086

0.185

0.25

0.395

5.57

3.063

0.1

10

0.082

0.184

0.228

0.364

5.89

3.28

0.5

0.099

0.190

0.280

0.375

5.34

3.310

0.2

0.088

0.159

0.252

0.324

6.02

3.1

0.2

0.099

0.179

0.234

0.376

5.31

2.93

3/10

10/3

0.085

0.177

0.253

0.354

5.64

2.53

0.1

10

0.075

0.161

0.271

0.362

5.915

3.519

0.2

INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Sabiendo que la finalidad de la prctica es conocer la concentracin de la muestra
problema que en nuestro caso fue un valor de 3,28 aplicando el mtodo analtico
y 1.64 con el mtodo grfico, el cual al ser multiplicado por el Fd = 2 resulta que el
valor de este ltimo se aproxima al mtodo analtico. Por lo tanto se puede decir
que por ambos mtodos es factible averiguar la concentracin de permanganato
aunque siempre pueden existir errores, principalmente en el momento de pipetear
y mezclar.

CONCLUSIONES

Se demostr en la prctica que la longitud de onda ideal para obtener una

mayor absorbancia en la MP dada es la de 525 nm, descartando de esta
manera la idea de que a mayor longitud de onda mayor absorbancia.
Gracias a la absorbancia obtenida de una solucin es que podemos saber
la concentracin de ella y esto tiene una gran aplicacin principalmente en
las muestras biolgicas.
Saber tambin que se necesita la longitud de onda ptima para que la
absorcin sea la mxima y pueda existir la relacin entre la concentracin y
la absorbancia.
Reconocer el valor de la fotocolorimetra en el anlisis de los alimentos en
cuanto al estado sanitario de estos.

RECOMENDACIONES
Segn lo observado, podemos destacar lo siguiente:

Los tubos deben estar bien lavados.

Cada pipeta debe ser usada para cada sustancia, una para KMnO4 y otra
para el agua destilada.
Tener en cuenta el menisco de los lquidos, la parte cncava al ras de la
marca (medida deseada).
Agitar bien los tubos con el contenido.

Todas estas recomendaciones son necesarias para una buena lectura de

absorbancia y margen de error mnimo.

BIBLIOGRAFA
Espectrofotometra.
https://qcabiologica.files.wordpress.com/2009/11/tp-1espectrofotometrc3ada.pdf
Fotocolorimetra.
carlos_lavarez

http://www.academia.edu/4264776/FOTOCOLORIMETRIA_

Aplicaciones
de
la
https://books.google.com.pe/books?id=0NpJlN95G

espectrofotometra.

Espectrofotometra.https://www.ucursos.cl/usuario/2775c7595e300ed228a801eb8
341e457/mi_blog/r/Espectrofotometria__Uv___Visible2012.pdf