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PRACTICA DE LABORATORIO BIOQUMICA

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS


Universidad Nacional De Colombia - Sede: Palmira
Facultad De Ingeniera Y Administracin
Ingeniera Ambiental
RESUMEN
En esta prctica se realizaron diferentes procedimientos para explorar el efecto de
la temperatura, la variacin de pH y la presencia de cianuro sobre la actividad de
la Peroxidasa, con el objetivo de evidenciar los factores que afectan la actividad
de las enzimas. Ya que la enzima objeto de examen en esta practica se cataloga
como xido-reductasa, se encuentra de forma abundante en hortalizas verdes, en
este caso se utilizo la espinaca, por lo cual el primer procedimiento realizado fue la
deteccin de la actividad de la Peroxidasa, posteriormente se prob el efecto de la
temperatura, el efecto de la variacin del pH y el efecto del cianuro para
comprobar experimentalmente como afectan estos factores sobre la actividad de
dicha enzima.
Palabras Clave: Enzima, temperatura, pH, Cianuro, Peroxidasa

Introduccin.
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica y estructural que catalizan
reacciones qumicas, siempre que sean termodinmicamente posibles: una
enzima hace que una reaccin qumica que es energticamente posible pero que
transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable, es decir,
transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas
reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las
cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos
los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas
significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones
enzimticas.
La Peroxidasa es un tipo de enzima muy extendida en toda la escala filogentica.
Pertenecen a la categora de las xido-reductasas, catalizan reacciones bisustrato
de carcter redox, utilizando un perxido como oxidante (a lo que deben su
nombre) y un segundo sustrato de caractersticas reductoras que es oxidado por el
perxido.

Protocolo.

1.

2.

3.

4.

Resultados.
Deteccin de la Peroxidasa
La reaccin ocurre inmediatamente y cambia el color a caf rojizo inmediatamente
Efecto de la temperatura
A temperatura ambiente la reaccin ocurre de manera muy rpida y se observa la
formacin de espuma, al igual que un cambio de color a un tono caf rojizo
A una temperatura de 37C, la reaccin ocurre de forma casi inmediata un poco
ms lenta comparado con el tubo que estaba temperatura ambiente, pero tambin
se observa aparicin de espuma y cambio en la coloracin.
A una temperatura de 100C, no ocurre reaccin
Efecto de la variacin del pH
La velocidad de reaccin en cada tubo de ensayo en orden descendente, (del ms
rpido al ms lento) es la siguiente pH 5 , pH 9, pH 7, pH 12
Efecto del cianuro
No hubo reaccin

Anlisis de los resultados.


Los resultados obtenidos a partir de las pruebas realizadas para determinar el
efecto de la temperatura en la actividad de la enzima Peroxidasa, afirman que al
igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas, la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. Sin
embargo, a diferencia de lo que ocurre en otras reacciones qumicas, en las
reacciones catalizadas por enzimas se produce un descenso de la actividad
cuando se alcanza una temperatura crtica. Este efecto no es ms que un reflejo
de la desnaturalizacin trmica del enzima cuando se alcanza dicha temperatura.
Por otra parte, los resultados obtenidos a partir de las pruebas realizadas para
determinar el efecto de la variacin de pH en la actividad de la enzima Peroxidasa,
afirman que la mayora de las enzimas presentan un pH ptimo para el cual su
actividad es mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye.
Este efecto se debe a que, al ser las enzimas de naturaleza proteica, al igual que
otras protenas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH vara ms all de
unos lmites estrechos. De ah la conocida importancia biolgica de los sistemas
tampn.

Finalmente en los resultados obtenidos a partir de las pruebas realizadas para


determinar el efecto del cianuro, se observo que no hubo reaccin, puesto que
este es un inhibidor y anula la accin de la enzima.
La Peroxidasa, es una enzima que cataliza la oxidacin de un amplio nmero de
sustratos orgnicos e inorgnicos, utilizando el poder oxidante del perxido de
hidrgeno, esta enzima utiliza como cofactor el grupo hemo; es por esto que el
cianuro acta sobre dicho grupo dando lugar a una inhibicin; es decir impide la
entrada del sustrato al sitio activo de la enzima y afecta la catlisis
correspondiente a dicha enzima.

Conclusiones.

Diferentes factores ambientales como la variacin de pH, temperatura o


presencia de inhibidores pueden afectar a la actividad enzimtica.

Las enzimas son los catalizadores biolgicos muy importantes ya que casi
todos los procesos en las clulas los necesitan para que ocurran a unas
tasas significativas.

Bibliografa.

Ospina Giraldo, B. L., 2010. Manual de prcticas de laboratorio de


bioqumica. :Universidad Nacional de Colombia

Ospina Giraldo, B. L., Introduccion a la Bioquimica. Universidad Nacional de


Colombia

Lehninger, A. , Principios de Bioqumica. 4ed. New York Publishers