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PRTICA: Determinao espectrofotomtrica

aminolevulnico urinrio ( ALA-u)

do

cido

delta

1 Referncia
TOMOKUMI K; OGATA M - Clin. Chem., v. 18, p.1354-1356, 1972.
(TESTE MODIFICADO APENAS PARA FINS DIDTICOS
TOXICOLOGIA ANLITICA ATRAVS DA ESPECTROSCOPIA
UV/Vis.) NO DEVE SER UTILIZADO PARA EXAMES CLNICOS.
2- INTRODUO INTRODUO ESPECTROSCOPIA

Fundamento:

FISIOLOGIA DO CIDO ALA E AO DA INTOXICAO DO Pb

3 - Equipamentos e reagentes:
2.1 - Espectrofotmetro, regio visvel, duplo feixe
2.2 - Banho de gua fervente
2.3- Soluo padro estoque d e ALA (50 mg/L)
Preparo da soluo: dissolver 0,0064 g de cloridrato de -ALA em H2O e completar
volume para 100 mL com gua destilada. Esta soluo estvel por cerca de 2 meses,
quando guardada sob refrigerao (4C).
2.4 - Soluo tampo acetato - pH 4,6
Preparo da soluo: dissolver 13,6 g de acetato de sdio triidratado em 70 mL de gua
destilada e 5,7 mL de cido actico concentrado. Completar o volume para 100mL com
gua destilada.
2.5 - Reativo de Ehrlich modificado (preparar no momento do uso)
Preparo do reativo: dissolver 1 g de p-dimetilamino benzaldedo em 30 mL de cido
actico concentrado, adicionar 5 mL de cido perclrico 60%, 5 mL de gua destilada e
completar o volume para 50 mL com cido actico concentrado.
2.6 - Acetatoacetato de etila
2.7 - Acetato de etila
3 - Mtodo Analtico
3.1 - Fator de Calibrao (Fc)
Caso no seja possvel construir a curva de calibrao, usar o Fc para a quantificao
do ALA nas amostras de urina, empregando-se o padro de 10 mg/L ou de 5,0 mg/L.
Clculos:
[Am] = fc x Aam

fc = [Pa]
Apa

sendo:
[Am] = concentrao da amostra
[Pa] = concentrao do padro

Aam = absorbncia da amostra


Apa = absorbncia do padro

3.3 - Tcnica analtica


em 4 tubos de ensaio grandes, rotular amostra; padro; branco de urina e branco de
reativo.
adicionar aos tubos:
amostra
1 mL
1 mL
200 L

urina
sol. padres de uso
sol. tampo
acetoacetato

padro
1 mL
1 mL
200 L

branco de urina
1 mL
1 mL
-

agitar os tubos por 5 segundos no agitador de tubos e aquece-los em banho de gua


fervente durante 10 minutos.
resfriar os tubos e adicionar 3 mL de acetato de etila em cada um deles. Agitar por 20
segundos no agitador de tubos. Quando der emulso, caso seja necessrio, centrifugar a
2500 rpm por 3 minutos.
transferir 2 mL para tubos de ensaio mdios, limpos e secos e adicionar 2 mL do reativo de
Ehrlich modificado.(item 2.).
aps 10 minutos, fazer leitura da absorbncia do produto colorido em 553 nm. Zerar o
aparelho com o branco de urina.
Calcular o ALA-D nas urinas (amostras).
4 - Interpretao
VR at 4,5 mg/g de creatinina (quadro I, NR-7, 1994, MT/Br)
IBMP = 10 mg/g de creatinina (quadro I, NR-7, 1994, MT/Br)
5 - Fundamento Qumico
COOH
CH 2
CH 2
C
CH 2

CH3

CH 2

CH 2

CH 3

acetoacetato de etila

NH2

ALA

H
O

R3

R2

CH 3

HOOC

(CH2)2 COOH

( HC )
2 2

CH 3
3HC

Ehrlich

N
H

R2
3HC

R3
N

H
composto colorido

CH 3
CH

composto cclico

6- ATIVIDADES COMPLEMENTARES:

1.RELATRIO
2.EXPLIQUE O FUNDAMENTOS DA ESPECTROSCOPIA DA REGIO DO UV/VIS
3.QUANTO MAIOR A CONCENTRAO MENOS COLORIDO SER A SOLUO NA ANLISE NO
ESPECTRO DE LUZ VSIVEL EXPLIQUE SE V OU F E JUSTIFIQUE.
4.QUAL A FINALIDADE DO DOSEAMENTO DE ALA?
5.QUAL OUTRO MTODO PODE SER UTILIZADO PARA DOSEAMENTO DO ALA?
6. EXPLIQUE O MECANISMO DE TOXICIDADE DO Pb NA FISIOLOGIA DO ALA?