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Universidad de Chile

Facultad de Medicina
Instituto de Ciencias Biomdicas
Programa de Fisiologa y Biofsica

CURSO FISIOLOGIA INTEGRADA


Material de apoyo clases
CANALES Y EXCITABILIDAD
CELULAR

Canales inicos
Potencial de membrana
Propiedades elctricas de
las membranas

Prof. Gloria Riquelme

ENFERMERIA - NUTRICION Y
OBSTETRICIA
2007
1

EQUILIBRIO ELECTROQUIMICO Y DIFUSION A TRAVS DE CANALES


CONTENIDO
I.
II.
III.
IV.
V.

INTRODUCCION
IONES EN MOVIMIENTO
POTENCIAL DE MEMBRANA
CANALES INICOS
CIRCUITO EQUIVALENTE DE LA MEMBRANA

I.

INTRODUCCION

En las clulas, las seales elctricas son llevadas por corrientes inicas transmembranas
correspondientes a flujos de iones positivos y negativos (principalmente K+, Na+, Cl- y
Ca+2 ) que "viajan" al interior de la clula, entre clulas y finalmente, entre las diferentes
partes del cuerpo. Estos flujos de cargas originan cambios en el potencial de membrana de
las clulas y en muchas de ellas, estos cambios implican la primera seal para que un
mensaje inicie la cadena de transmisin hasta llegar al objetivo correspondiente. El
movimiento de los iones est definido por leyes fsicas que revisaremos en este captulo.
Los iones no estn uniformemente distribuidos en los sistemas biolgicos. En general, las
concentraciones inicas en cada compartimiento son muy diferentes entre s. Por ejemplo,
en la mayora de las clulas, el in K+ est mas concentrado en el citoplasma que en el
espacio extracelular. La diferencia en la distribucin inica genera gradientes de
concentracin a travs de la membrana dando origen a la diferencia de potencial qumico.
En ausencia de un potencial elctrico, este gradiente de concentracin determinar la
direccin del flujo. Los principios termodinmicos predicen que en estas condiciones el
flujo inico ocurrir desde la regin de mayor concentracin a la menor concentracin,
segn el fenmeno llamado difusin.
Los iones tienen carga elctrica, de modo que su movimiento estar influido no solamente
por la gradiente de concentracin, sino tambin por los campos elctricos generados por
diferencias de cargas de un lado a otro de la membrana. Como s vera ms adelante, la
mayora de las membranas sor permeables en forma selectiva, es decir, dejan pasar algunas
especies inicas y otras no. Esto produce separacin y asimetra de las cargas generando un
campo elctrico a travs de la membrana que a su vez, tendr una profunda influencia en el
movimiento de los iones. La diferencia de potencial electroqumico considera tanto ele
efecto de la diferencia de concentracin, como el potencial elctrico en el movimiento de
los iones a travs de la membrana. Durante este captulo veremos los principios bsicos del
movimiento de los iones dirigido por el gradiente de potencial electroqumico.
Como se sabe, las membranas biolgicas estn compuestas por una doble capa de lpidos
que es pobremente permeable a molculas polares grandes (azcares, aminocidos, etc.) y a
partculas cargadas. Tales molculas pueden atravesar la membrana solamente a travs de
molculas especiales que son protenas integrales de membrana y que se conocen
genricamente como molculas transportadoras. Un sub-grupo de estas protenas
transportadoras corresponde a aquella llamadas canales inicos, los cuales permiten un
flujo "muy rpido" (un milln de iones por seg.). Estos flujos de carga dan origen a
corrientes inicas involucradas en mltiples procesos biolgicos y que pueden ser
registradas y medidas por mtodos electrofisiolgicos.
Los canales inicos estn formados por varias sub- unidades o polipptidos que generan un
"poro" central. Estas sub-unidades experimentan cambios conformaciona les que determinan
que el canal permita el paso de iones (canal abierto) o no lo permita (canal cerrado). Los
canales varan segn la conducta de su "compuerta" de apertura y cierre, siendo regulados
por neurotransmisores, mensajeros citoplamticos o cambios de potencial de membranas
entre otros. La ereccin del ion permeante o selectividad del canal le dar otra caracterstica
identificadora, as como tambin su eficiencia de conduccin dada por el concepto de
conductancia. La conductancia es la relacin entre la corriente (flujos de carga por unidad
de tiempo) y la diferencia de potencial a travs de las membranas.
2

Histricamente, el estudio de los canales inicos es relativamente reciente antes de mediado


de la dcada del setenta, se midieron y caracterizaron corrientes totales, correspondientes a
una poblacin de canales individuales. A principio de la dcada del 80 Neher y Sakmann
(un fsico y un mdico) publican una metodologa que permite medir el flujo de cargas que
esta pasando por "una molcula" (patch-clamp). Esta tcnica revolucion la
electrofisiologa y permiti un gran avance en la caracterizacin de las protenas que
subyacen las corrientes inicas. Ms recientemente, la biologa molecular ha ayudado al
entendimiento de la estructura y de su correlacin con la funcin de estas molculas
transportadoras.
En este captulo se estudiarn las caractersticas estructurales de los canales y sus
propiedades biofsicas elementales.

II.

IONES EN MOVIMIENTO

II.1 Carga Elctrica


La existencia de cargas elctricas en la naturaleza es algo cotidiano y conocido por Uds.,
tambin lo es el hecho que tales cargas estn asociados a partculas sub-atmicas unitarias
que pueden dar el carcter positivo o negativo. De sus conocimientos de electricidad
recordarn que las cargas interaccionan con fuerzas de repulsin o atraccin entre s y que
la magnitud de tales fuerzas es directamente proporcional al producto de las cargas e
inversamente a la distancia que las separa, al cuadrado. Se requiere una cuota de energa
para juntarlas o separarlas segn el caso lo cual justificara que la materia sea esencialmente
elctricamente neutra, es decir posea igual nmero de cargas positivas que negativas.
Sin embargo, es posible acumular carga elctrica negativa o positiva en alguna regin, por
separacin de los electrones de sus tomo. Esta cantidad de carga elctrica Q se mide en
Coulomb (C).
Ejemplo 1:
La carga de un mol de iones Na+ se puede calcular con las siguientes consideraciones:
1. Cada tomo de Na+tienen una carga elemental equivalente a la carga del electrn
e = 1.602 x 10-19 C.
2. Un mol de iones monovalentes corresponde al nmero de Avogadro de iones
N0 = 6.022 x 1023 tomos
3. De 1 y 2 se deduce que la carga de un mol de iones es:
N0 x e = 96500 C/mol, este valo r se denomina Constante de Faraday (F).
F = 96500 C/mol
La constante de Faraday (F) corresponde a la carga elctrica por mol equivalante de un ion
monovalente.
En general la carga de un mol de iones ser:

Donde z es la valencia (1)

Q = zF

II.2 Flujo de carga


El movimiento de cargas de un punto a otro genera una corriente elctrica que es el
nmero de cargas que se mueven por unidad de Tiempo [i = dQ/dt (Amperes)]. La corriente
fluye de un punto a otro porque hay una diferencia de potencial entre los puntos (recuerde
que el potencial elctrico V se mide en Volt [V]. El potencial lo puede generar una pila
3

siendo la fuente de energa para que el movimiento de cargas ocurra en un circuito en


particular; la energa empleada, ser equivalente al trabajo realizado para trasladar la carga
entre dos puntos con diferente potencial.
Suponiendo que se lleva una carga Q desde un punto de potencial cero a un punto de
potencial V, la energa ser:

Eelec = Q V

(2)

Recuerde un circuito sencillo como el de la figura: un conductor con resistencia R (ohm) y


una fuente de energa, por ejemplo una batera con una diferencia de potencia V entre sus
bornes. La corriente elctrica i en es e circuito i = V/ R (ley de Ohm). El recproco de la
resistencia R es la conductancia g (g = 1/R), su unidad es Siemens [S] y corresponde a
(1/ohm) y, por lo tanto, la ley de ohm tambin se puede expresar como i = gV.

Otro elemento de un circuito es un Condensador de capacidad C. El ms simple de ellos es


el condensador plano, que consiste en dos placas de rea A, separados una distancia d y con
un medio aislante entre ellas de constante elctrica (). Las caractersticas geomtricas
determinan su capacidad C = A/d. La unidad de capacidad es farad (F). Si se aplica una
diferencia de potencial a travs del condensador, la cantidad de carga Q inducida en las
placas es directamente proporcional al potencial aplicado (V) y la capacidad del
condensador (C).

(3)

Q=CV
II.3 Iones en solucin

Los iones en solucin estn en constante movimiento debido a la agitacin trmica y


pueden difundir libremente de una regin a otra en funcin de dos condiciones: la gradiente
de concentracin y el campo elctrico generado por la diferencia de potencial. Por lo tanto,
el movimiento (electrodifusin) tendr su fuente de energa en una gradiente
electroqumica (potencial electroqumico) ( ).
Recordemos que la diferencia de potencial qumico entre dos zonas de concentraciones C1
y C2 (C 1 >C2 ) es:
= RT ln C2 / C1 energa qumica
La energa necesaria para llevar una carga Q desde el punto de potencial V1 a uno de
potencial V2 es:
Eelec = V
(con Q = zF)
energa elctrica
Luego la diferencia de potencial electroqumico = 2 - 1 es:
4

= RT ln C2 / C1 + zF V

(4)

II.4. Flujo de ione s a travs de la membrana biolgica.


Modifiquemos la situacin anterior, introduciendo la presencia de una barrera al proceso
de electrodifusin. Esto es la membrana biolgica, que separa dos compartimientos, cuya
matriz es una bicapa lipdica prcticamente impermeable al paso de molculas cargadas. La
solucin de la naturaleza ha sido la incorporacin de un tipo de protenas integrales
especializadas que forman una va de paso para los iones. Un tipo de estas protenas son los
llamados canales inicos los cuales permitirn el cruce muy rpido de los iones (106 - 107
iones/seg) en solucin de un lado a otro de la membrana. La direccin del flujo estar
determinada por la diferencia de potencial electroqumico, pero la eficiencia es funcin
adems de otros factores, entre ellos: naturaleza del in y la selectividad del canal, el
nmero de canales por unidad de rea, su conductancia individual y el tiempo que
permanecen abiertos en determinadas condiciones.
III.

POTENCIAL DE MEMBRANA

En todos los sistemas biolgicos los iones estn asimtricamente distribuidos generando un
gradiente a travs de las membranas celulares. Cuando los canales inicos estn abiertos,
los iones se mueven en la direccin del gradiente electroqumico. La densidad, selectividad,
modo de regulacin y la cintica de los canales determinarn la permeabilidad relativa de
la membrana y en consecuencia sus propiedades elctricas y las seales que generan.
La diferencia de potencial elctrico entre el lado interno y externo (intra y extracelular
respectivamente) se conoce como potencial de membrana (Vm = Vi - Ve ) y depende de la
permeabilidad relativa de la membrana a los iones especficos y del gradiente de
concentracin transmembrana para esos iones.
Problema 1. Una membrana M separa el interior y exterior de una clula con las
concentraciones inicas que se sealan en la figura. Adems se cuenta con un voltmetro
que permitir medir la diferencia de potencial V = Vin - Vex en las siguientes situaciones:

100 mM NaCl
ext.

V = lectura de
voltmetro

int
10 mM Nacl

I)

M es impermeable al paso de cualquier in:

V = 0 Por qu?

II)

M es slo permeable al paso de agua:

V = 0 Qu sucede en este caso?

III)

M es permeable de igual manera a ambos iones: V = 0 Por qu?

IV)

M es permeable slo a Na+ :

V = VeqNa+ Donde V eqNa+ es el


5

equilibrio del Na+


Qu significa potencial de equilibrio?
La respuesta la dio Nernst en 1888 mediante una ecuacin conocida como "Ecuacin de
Nernst" que a continuacin deduciremos.
El movimiento del Na+ ocurre en la direccin de la gradiente de potencial electroqumico
para el Na+, es decir desde el exterior al interior < 0

= in - ex = RT ln

Nain
Naex

El equilibrio se alcanza cuando = 0


RT ln

Nain +
Naex

+ zF (Vi - Vex)

(4)

flujo neto de iones = 0

zF (Vi - Vex) = 0

Vin - Vex = RT ln Naext


zF
Nai

(5)

(6)

Potencial de equilibrio para Na+ : NeqNa = Vin - Vex


Ecuacin de Nernst
VeqNa+ = RT ln Naext
ZF
Nain

(7)

R: 1.98 cal / K mol = 8.315 joule/ K mol


T= Temperatura absoluta (K)
F=96500 C/mol
Z =1 para el Na+
Si suponemos que la temperatura es 19 C (292 K) y las concentraciones de Na+, 100mM
(exterior) y 10mM (interior) el potencial de equilibrio ser VeqNa = 57.9 mV
Cuntos iones se movilizaron a travs de la membrana para establecer este
potencial?
La respuesta depende de la capacidad de la membrana. Cuanto mayor sea este valor mayor
ser el nmero de iones movilizados para establecer este potencial.
La capacidad de la membrana biolgica ha sido estimada en 1 F/cm2 y la carga por cm2
est dada por:
Q=C V
Q = 1 F/cm2 57,9 x 10-3 V = 57,9 x 10-9 C/cm2
Recordando que Q = zF y F significa que un mol de iones Na+ corresponde a 96500 C, se
puede calcular el nmero de moles y de iones movilizados.
6

# de moles = 57,9 x 10-9 C/cm2 = 6x 10-13 moles /cm2


96500
# de iones = # de moles x NA = 36 x 1010 iones /cm2
El nmero de moles resultantes representa cantidades muy pequeas en trminos qumicos.
Afectan la concentraciones iniciales en nuestro sistema?
La respuesta debe considerar el nmero real de moles que atraviesan la clula.
Si la "clula " de nuestro ejemplo tienen un radio de r = 10 m, es rea de esa esfera ser A
= 4 r2 = 12,6 x 10-6 cm2 .
Por lo tanto, el nmero total movilizados ser = # moles
cm2

x rea de la clula

# moles movilizados = 6 x 10-13 moles /cm2 x 12.6 x 10-6 cm2 = 75.6 x 10-19 moles
Es significativa esta cantidad como prdida o incremento de las concentraciones iniciales
interior y exterior de Na+?
Nota: Si usted quiere calcular el cambio de concentracin interna de Na+ debe considerar el
volumen de la clula que en este caso es 4,2 x 10-9 cm3 .
V)

Suponga que M es slo permeable al Cl-, es decir, contienen un canal slo


permeable al Cl-. En este caso el potencial de membrana ser igual al potencial de
equilibrio del Cl-.
V = VeqCl

Con igual razonamiento que el caso anterior. Puede obtener el valor numrico del
potencial de equilibrio para el Cl- en las condiciones dadas?
VI)

Suponga que M es una membrana un poco ms compleja que tienen canales


selectivos a K+ y a Na+ : V = ?

Qu consecuencia puede tener


el potencial de membrana?

100 m M K C l
10 mM Nacl

100 m M N a C l
10 m M K C l

La direccin de la gradiente de potencial electroqumico implica una entrada de Na+ y una


salida de K+. En algn momento se llegar a la situacin en que el flujo neto ser cero
(estado estacionario) es decir, los flujos de entrada sern igual a los de salida:
Flujo neto = 0 INa+ + IK+ = 0 estado estacionario (ninguno de los iones estn en
equilibrio)
INa = corriente de iones Na+
y IK+ = corriente de iones K+
Recordando que I = GV se puede obtener INa+ e IK+ con V = Vm - Veq
Reemplazando, se tiene:

GNa (Vm - VeqNa) + GK (Vm - VeqK+) = 0

Reagrupando y despejando Vm se tienen: Vm =


7

GNa

VeqNa +

GK

VeqK

GNa+ GK

GNa+ GK

De la expresin anterior se puede concluir que el potencial de membrana Vm en estado


estacionario depende de:
a) las condiciones relativas de la clula para Na+ y K+
b) los potenciales de equilibrio para cada in determinado por las gradientes de
concentracin para el K+, y el Na+ respectivamente.
Piense las siguientes situaciones
i)

ii)
iii)
iv)

Si GNa+ >> GK+ Vm VeqNa


Si GK+ >> GNa+ Vm VeqK+
Si GK+ = GNa+ Vm tiende a un valor equidistante entre los dos potenciales de
equilibrio
Qu sucede si la clula es permeable a K+, Na+ y Cl-? Puede llegar a una relacin,
en funcin de las conductancias, como la deducida anteriormente?
Con Ik + INa + I Cl = 0

Gk Veqk + GCl- VeqClGT


GT

Vm = Gna VegNa +
GT
Con GT = GNa + Gk + GCl-

Esta ecuacin permite determinar el potencial de membrana en funcin de las


conductancias y los potenciales de equilibrio.
Existe, adems, una relacin para obtener el potencial de membrana en funcin de las
permeabilidades, que se llama Ecuacin de Goldmann - Hodgkins y Katz.

Vm = RT ln
F

PkKex + P NaNaex + PCl- Clin


PkKin + P NaNain + P Cl- Clex

Donde Pk , PNa, PCl- son las permeabilidades al K+, Na+ y Cl- respectivamente.
Problema 2.
Las siguientes concentraciones (en mM) corresponden a las concentraciones intracelulares
y extracelulares de las clulas (nerviosas) gigantes de "Aplisia" un caracol de mar:
K+in = 168

Nain = 50

Cl-in = 41

K+ex = 6

Naex = 337

Cl-ex = 340

Las conductancias en reposos medidas:

Las razones de permeabilidad en reposo son:

GK+ = 0,57 x 10-6 S


GNa+ = 0,16 x 10-6 S
GCl- = 0,32 x 10-6 S

Pk : PNa : PCl = 1 : 0,019 : 0,381

Calcular el potencial de membrana (Vm) por utilizando las expresiones de las ecuaciones 8
y 9.
8

IV CANALES IONICOS
IV.1.1 "Algo" de historia
La idea de canal es bastante ms antigua que la etapa en que fue posible examinar sus
caractersticas como entidades individuales. A principios de este siglo, los fisilogos
plantearon la posibilidad de la existencia de "canales" llenos de agua por donde "nadaran"
los iones que tenan que "transitar" entre el medio intra y extracelular. Este modelo simple
fue descartado cuando un pudo explicar la selectividad de estos procesos. Pasaran varias
dcadas hasta su resurgimiento, con nuevas evidencias experimentales y con un modelo
mucho ms complejo para su estructura y funcin.
A. Hodgkin y A. Huxley (1952) en estudios electrofisiolgicos, hoy clsicos, registraron
corrientes macroscpicas implicadas en la transmisin del impulso nervioso y las
describieron mediante un modelo matemtico. Estos investigadores propusieron que las
corrientes inicas ocurren "en sitios particulares" de la membrana, tales "sitios" llegaran
ms tarde a ser los canales de sodio y potasio involucrados en el potencial de accin.
(ambos obtuvieron el Premio Nobel en 1963).
Experimentos posteriores realizados por B. Katz y R. Moledi (dcada del 70) de medicin
de corrientes activadas por acetilcolina en la placa neuromuscular (utilizando anlisis de
ruido para su cuantificacin) llegaron a la conclusin que tales corrientes son la sumatoria
de "paquetes" elementales de corriente que estaran pasando por "sitios" especializados de
la membrana (canales). Por lo tanto, se dedujo que las corrientes inicas eran la
consecuencia del flujo a travs de cientos o miles de esos "canales" funcionando.
En la dcada del 60 se descubrieron algunos bloqueadores especficos de las corrientes
cuya accin es directa y especfica para determinados canales. Por ejemplo, la tetrodotoxina
(TTX), veneno del pez globo bloquea especficamente los canales de Na+ dependientes de
potencial. La especificidad de este bloqueador signific un aporte fundamental, ya que
demostr que las corrientes de Na+ en el axn pasan por entidades moleculares separadas
de aquellas que conducen K+, dado que frente a la aplicacin de la toxina ests ltimas
permanecieron invariables.
Paralelamente a los estudios electrofisiolgicos en axones gigantes se desarrollaron
metodologas parta estudiar las caractersticas de la doble capa de lpidos que es la matriz
de la membrana biolgica. En esa poca se pudo determinar las propiedades elctricas de
las bicapas artificiales: capacidad (C) y resistencia (R), esta ltima result ser muy alta lo
que significaba que era muy impermeable al paso de los iones S. Dos biofsicos (S. Hladky
y D. Haydon) observaron que esta caracterstica era modificada al agregar una pequea
cantidad de un antibitico llamado gramicidina, pues la bicapa artificial adquira la
propiedad de "conducir" iones en una forma cuyo flujo era "saltatorio". La protena
agregada le permita a un no conductor tener vas de paso al flujo de iones que podan ser
detectadas como corrientes del orden de los pA.
La pregunta era si las membranas reales tenan protenas que le diera similares
caractersticas en la conduccin inica. La respuesta tuvo que esperar algunos aos hasta
que los avances de la bioqumica y de las tcnicas de registros electrofisiolgicos
permitieran tener acceso a "canales de verdad". Hubo importantes contribuciones
purificando membranas celulares por mtodos bioqumicos e incorporndolas a bicapas
planas. Numerosos canales se caracterizaron y se siguen caracterizando por este mtodo
llamado de Reconstitucin de canales inicos en bicapas artificiales. (Ver figura)

RECONSTITUCIN EN BICAPAS PLANAS: registro de

canales nicos

Por el gran salto ocurri cuando fue posible medir el flujo de carga que estaba pasando por
"una molcula" in vivo en la clula. Esto ocurri con el desarrollo de la Tcnica de
Patchclamp desarrollada por E. Neher y B. Sackmann (Ver figura). Ellos usaron
microelectrodos de vidrios de 1 m de dimetro que aplicado sobre la superficie de la
clula asla un pedacito de me mbrana. El potencial a travs de este parche fue fijado
mediante un amplificador que tambin puede medir la corriente del canal inico individual
"atrapado" en el "parche". Esta tcnica fue tremendamente productiva y hoy hay cientos y
miles de publicaciones de estudios de canales inicos en la cual se emplea. En 1991 Neher
y Sackmann fueron galardonados con el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina por este
aporte fundamental.
PATCH - CLAMP: registro de canales nicos

Otro gran avance ha sido el desarrollo de la biologa molecular que ha permitido el


conocimiento de la estructura de estas protenas. La primera secuencia de aminocidos de
las subunidades del receptor de acetilcolina se public en 1982 por el grupo de Numa,
Changeux y otros. Luego lo siguieron canal de sodio dependientes de potencial y muchos
otros. Numerosas secuencias se han publicado hasta ahora y la correlacin de la estructura
con la funcin ha implicado importantes aportes al entendimiento de cmo "trabajan" los
canales inicos de forma normal y/o como se explicaran algunas disfunciones que se
expresan en patologas constituyendo una nueva rama llamadas "Canalopatologas".

10

IV.2. Propiedades de los canales inicos


CANALES IONICOS: Caractersticas funcionales

Se puede registrar en el tiempo y medir el flujo de corriente que pasa por una canal
individual. El registro de tal actividad muestra (a lo menos) que el canal oscila entre dos
niveles de conduccin: estado cerrado (no hay flujo de corriente, estado conformacional
no conductor ) y estado abierto. Estos "saltos discretos" de corriente tienen una magnitud
del orden de los pA (10-12 Amperes) y duraciones variables de tiempo del orden de 10-3 seg.
Esta respuesta a un estmulo en saltos discretos de corriente, corresponde a cambios
conformacionales de la protena tales que el "poro" conductor se abra y cierre con una
amplitud (conductancia) y frecuencia que le ser caracterstica (cintica). Esta apertura y
cierre en el tiempo en presencia del estmulo lo diferencia de un cond uctor fsico
tradicional, como por ejemplo un alambre de cobre, el cual conducir todo el tiempo que
tenga una diferencia de potencial aplicada entre sus extremos. Sin embargo, estas protenas
conductoras tienen un comportamiento similar a un conductor elctrico inorgnico cada vez
que se abre, de modo que podemos definir su capacidad de conducir mediante su
"conductancia" al igual que un conductor clsico. Adems tiene otras caractersticas que le
darn la especificidad requerida para las funciones en las cuales estn involucrados, estas
son: selectividad y la capacidad de responder a seales especficas. La primera tienen que
ver con la eleccin del in a conducir y la segunda con la modulacin de la cintica del
canal, es decir, con las aperturas y cierres del mismo en el tiempo. Veremos estas
caractersticas con algn detalle.

IV.2.1. Los canales tienen la capacidad de conducir: Conductancia


Cmo podemos determinar la conductancia de un canal? Utilizando su "recordada" ley de
ohm: i = gV
Supondremos un experimento donde se est registrando la actividad de un canal en
soluciones simtricas, es decir, tienen igual concentracin inica a ambos lados de la
membrana. En respuesta a estmulos que consisten en diferentes potenciales se obtienen
registros como los de la figura. La medicin de la amplitud de corriente respectiva para
cada potencial permitir obtener un grfico de corriente versus V:

11

CANALES IONICOS: curva corriente - potencial

En este caso se obtuvo una lnea recta, la pendiente corresponde a la conductancia del canal
y por ser constante se dice que se est en presencia de un canal ohmico. Hay canales que no
se comportan de manera lineal conduciendo de manera preferencial hacia un lado ms que a
otro, esto se llama Rectificadores y su conductancia es variable en funcin del potencial.
Recuerde que la "fuerza" que dirige el flujo de iones es la diferencia de potencial
electroqumico () y que este depende de la gradiente de concentracin (C) y de la
diferencia de potencial (V). En funcin d esto puede explicar por qu la recta pasa por
cero? Qu sucedera si las soluciones no fueran simtricas?.
La conductancia es funcin de la concentracin del in permeante: Volvamos a la
curva corriente versus potencial en condiciones simtricas (Ej. 100 mM KCl) para un canal
ohmico que deja pasar slo K+; la conductancia es independiente del potencial, pero cmo
ser la relacin con la concentracin?
CANALES IONICOS: conductancia versus concentracin
del in permeante

Reflexione sobre las siguientes situaciones:


Cmo ser su grfico si la concentracin a ambos lados disminuye a 50, 10, 5, 1 mM
aumenta a 200, 300, 500 mM. Superponga en su grfico las posibles respuestas.
Est de acuerdo que fueran lneas rectas con diferentes pendientes? Esta familia de
rectas aumenta hasta que la pendiente sea infinitamente grande? Podra "saturarse" el
canal llegando a una situacin que aunque aumente la concentracin la pendiente
permanezca invariable? Por qu?
12

El grfico de las diferentes pendie ntes (conductancias) versus concentracin genera una
curva de saturacin similar a la obtenida en el caso de los transportadores, solamente que en
este caso se trata de la saturacin de una molcula.
La relacin de conductancia versus concentracin se puede ajustar por la Ecuacin de
Michaelis-Mentem, donde Km ser la concentracin a la cual se alcanza la mitad de la
conductancia mxima. En el caso de los canales la Km tiene valores bastante altos (~ 100
mM) a diferencia de los transportadores, indicando que la unin del ion con un sitio del
canal es dbil y no se quedar "atrapado" en el interior del canal sino "circulando
rpidamente". La permeacin dentro del poro del canal es ms compleja que la simple
difusin en una solucin libre y hay diferentes factores que la modulan.
La capacidad de conducir de un canal puede ser inhibida bloqueando el acceso al poro del
canal (molculas que se unen a la boca de entrada) o actuando en alguna parte dentro del
poro. La mayora de las molculas bloqueadoras son drogas o toxinas exgenas, sin
embargo, hay algunas presentes en condiciones fisiolgicas como por ejemplo, Mg+2 , Ca+2
que actan como tales en determinadas clases de canales.
IV.2.2. Los canales inicos son capaces de seleccionar los iones que transportan:
Selectividad.
Una de las caractersticas ms notables de los canales es su selectividad. Algunos son
extremadamente selectivos, por ejemplo los canales de potasio del axn que prefieren K+
sobre Na+ en una razn 100: 1. Cmo los canales discriminan entre los diferentes iones?.
Las enzimas reconocen su sustrato por su estructura qumicas y forma, pero en el caso del
ejemplo lo anterior el in K+ y Na+ tienen forma similar y carga positiva cul ser la forma
de distinguirlos?.

Los CANALES IONICOS seleccionan los iones que


Conducen

La forma ms simple de imaginarse la seleccin es por el tamao del ion con relacin al
tamao del poro del canal y de hecho, esto permite entender por qu un canal K+ que tiene
un radio de 3.3 no deja pasar iones con radios superiores. Sin embargo por qu no deja
pasar al ion Na+ que es incluso ms pequeo que el ion K+? Una posible explicacin es
considerar el radio de hidratacin en torno al ion. El Na+ es ms pequeo que el K+, sin
embargo su radio de hidratacin es ms grande, ya que la "nube" de molculas de agua
atradas en sus entorno es mayor. En estos trminos, la razn de la seleccin sera la
13

exclusin en funcin del tamao del radio de hidratacin con respecto al poro del canal. Sin
embargo la selectividad del canal es un proceso ms complejo y difcil que la simple
seleccin por tamao.
G. Eisenman y B. Hille han propuesto que al interior de los canales existe una zona estrecha
denominada "filtro de selectividad" en la cual tiene el encuentro ms "ntimo" con las
paredes internas del poro. En esta zona, el ion hidratado pierde la mayora de las molculas
de agua quedando expuesto a interacciones electroestticas con los residuos amoniacdicos
polares o cargados que forman las paredes internas del canal. El ion permeante permanece
unido un corto tiempo al filtro de selectividad y luego "sigue su camino". De modo que un
factor determinante podra ser la facilidad con que ion se deshidrate, en este caso, lo hace
ms fcilmente in ion ms grande que uno ms pequeo, lo que explicara la selectividad al
K+ citada en el ejemplo.
Existe una gran variedad de tamaos de poro de canales por lo tanto, tambin vara el
nmero de molculas de agua que pueden acomodar, as habr canales que no "exigen"
perder completame nte las molculas de agua. Las diferencias generarn mltiples tipos de
interacciones entre el ion y las paredes del canal. Todas las posibles variedades de
interacciones sern responsables del amplio rango de selectividad inica.
Problema 3
En un grfico de corriente versus potencial de membrana, la recta corta el eje de los
potenciales en -60 mV cuando la concentracin de NaCl es 100 mM y 10 mM en el extra e
intracelular respectivamente. Los datos se obtuvieron de los registros de un canal en
configuracin "inside out" Podra Ud. concluir si es selectivo a Cl- o Na+?. Cmo y por
qu?

IV.2.3. Los canales son modulados por diferentes seales que pueden ser elctricas,
qumicas o mecnicas
CANALES IONICOS: FAMILIAS PRINCIPALES SEGN LA
SEAL QUE LOS ABRE

Los diferentes moduladores o reguladores afectan la cintica del canal, es decir, la fraccin
de tiempo de apertura o cierre, que est directamente relacionado con la probabilidad de
encontrarlo abierto o cerrado a las diferentes condiciones.

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CANALES IONICOS: cintica

La fraccin de tiempo abierto (fa) es la razn entre la sumatoria de todos los tiempos
abiertos sobre el tiempo total de registro

Fa = ta1 + ta2 + ............. tan


tT

tT = tiempo total de registro

igual forma, la fraccin de tiempo cerrado (fc ) es la sumatoria de todos los tiempos
cerrados sobre el tiempo total de registro
De

fa + fc = 1

Fa = tc1 + tc2 + ............. tcn


tT

Se conoce relativamente poco acerca de los mecanismos de apertura y cierre de los canales,
aparte que estos involucran cambios conformacionales. La modulacin del mecanismo es
crucial para dar cuenta de las funciones en las que estn los canales involucrados.
Algunos canales son regulados por ligandos qumicos, constituyndose la familia de
canales dependientes de ligandos, tales como neurotransmisores, hormonas por el lado
externo de la clula o segundos mensajeros por el lado citoplasmtico. En otro conjunto de
ellos, son los cambios de potencial de membrana los que regulan la apertura y cierre
(familia de canales potencial dependiente) y tambin los hay que responden a cambios
mecnicos como el "estiramiento" de la membrana o cambios de presin.
IV.2.4. Nomenclatura
Se han encontrado muchos tipos de canales sobrepasando las expectativas de la bsqueda
inicial. Esta diversidad ha implicado gran variedad de clasificaciones y nomenclaturas. Una
forma ha sido agruparlos en familias segn su mecanismo de respuesta, de sus selectividad
y tambin segn el tejido del cual provienen. Por ejemplo, se habla de canales de K+
potencial dependiente del axn o canales catinicos asociados al receptor de acetilcolina de
la placa neuromotora, o canales de potasio activados por calcio, etc. La gran diversidad no
solo ha sido un desafo para nombrarlos sino en la comprensin del rol que pueden jugar.

15

IV.

3. Estructura molecular de los canales inicos

Los canales son protenas integrales que forman con su estructura un poro a travs del cual
pasan los iones. Un tpico canal dependiente de potencial es el canal de Na+. Su estructura
de Na+ presenta fue identificada en cerebro de rata y consiste en 3 subunidades ( de 260
KD, 1 de 39 y 2 de 37 KD), en general esta familia de canales tienen el "poro" en la
subunidad y las subunidades son reguladores de la cintica. Las unidades tienen
cuatro dominios homlogos y seis segmentos transmembranas siendo el llamado S4 el
sensor de potencial. Estas caractersticas estructurales se repiten parcialmente en los canales
de la misma familia selectivos a K+, Na+, Ca+2 .
Tal vez, el canal ms estudiado es el canal ligando dependiente de acetilcolina. Tiene una
estructura espacial de 5 sub-unidades con un total de 2305 aminocidos. De cada subunidad
se conoce la secuencia aminoacdica que la conforma, se ha identificado cuales son los
aminocidos presentes en el sitio de ligamen de la acetilcolina y el conjunto de aminocidos
implicados en el filtro de selectividad, etc. Estos estudios permiten establecer un correlato
entre la estructura y su funcionalidad.
Canal dependiente de potencial (canal de Na+)

En general, los canales inicos estn formados por una o ms unidades peptdicas. El patrn
comn es que estn formados por una "roseta" de 4, 5 6 subunidades con un poro central.
Cada subunidad contiene n secuencias peptdicas transmembranas. Con los 20 aminocidos
se han generado cientos de secuencias diferentes que a su vez pueden generar protenas con
diferentes caractersticas. El conocimiento de cmo funciona una determinada protena ser
enriquecido por la informacin sobre su estructura primaria as como de su estructura
secundaria y tercearia. El correlato estructura - funcin ha sido fundamental en el
conocimiento "fino" de los canales inicos.
IV.4. Canales con alteraciones en su funcin originan enfermedades en el ser humano
Los canales inicos estn implicados en los orgenes y tratamientos de varias
enfermedades. En algunas enfermedades autoinmunes el enfermo genera anticuerpos para
sus propios canales, as es el caso de la miastenia gravis. En esta enfermedad, se producen
anticuerpos para el receptor de acetilcolina de la juntura neuromuscular, provocando
parlisis parcial muscular.
Otros ejemplos de enfermedades asociadas a disfunciones de canales son, por ejemplo,
aquellas producidas por mutaciones en el canal de sodio del msculo esqueltico. Por lo
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menos hay tres tipos de ellas en que, electrofisiolgicamente, se ha demostrado que el canal
alteraciones en su funcin en biopsia de msculo enfermo. El entendimiento molecular de
estas enfermedades se logr en 1990 cuando se identific las alteraciones de la secuencias
aminoacdica del canal. En muchas ocasiones se ha encontrado que basta un reemplazo u
omisin de un solo aminocido para que suceda un cambio radical en la funcin de ese
canal.
Largas listas de enfermedades asociadas a canales de calcio, de potasio y canales de cloruro
se han ido incrementando a medida que el conocimiento de los canales y de su estructura
avanza.

V.

CIRCUITO EQUIVALENTE DE LA MEMBRANA

Con los conceptos revisados anteriormente, se puede representar las propiedades de las
membranas, desde el punto de vista biofsico, por un circuito elctrico simple que tienen
equivalencia con las caractersticas de ella.
CIRCUITO EQUIVALENTE DE LA MEMBRANA

En este circuito el elemento conductor est representado por la resistencia o su inverso que
es la conductancia (en nuestro ejemplo es un canal selectivo a K+), la bacteria o fuente de
poder, fem (el gradiente electroqumico para el in permanente) y la capacidad de un
condensador (la bicapa lipdica)es un condensador plano). En la siguiente etapa veremos
con ms detalle las caractersticas de estas protenas llamadas canales inicos.
BIBLIOGRAFIA
Ion Channels, D. J. Aidley and P. R. Stanfield, Cambridge University Press, 1996
Ion Channels of Excitable Membranes, B. Hille, Sinauer Associates INC., 1992
Foundations of Cellular Neurophysiology, D. Johnston and S Miao-Sin Wu, 1995

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