Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Equipo 7
Prez Zamudio Rodrigo

Snchez
Villegas Laura Alejandra

Practica 6
CROMATOGRAFA
Objetivos de la prctica:
1. Conocer la tcnica de cromatografa y los factores experimentales que la afectan.
2. Aplicar y comparar los mtodos cromatogrficos de capa fina y columna, para separar,
identificar y purificar compuestos orgnicos.
3. Observar el efecto de diferentes fases mviles y estacionarias en la separacin.
4. Determinar los valores de Rf, como un parmetro en la identificacin de los compuestos
separados.

Introduccin:
Las tcnicas cromatogrficas se emplean para separar los componentes individuales de
una mezcla y, en ciertos casos, para identificar un compuesto comparando su
comportamiento cromatogrfico con el de sustancias conocidas empleadas como patrn.
La base de la tcnica es que cuando un determinado soluto interacta con dos fases, una
de ellas, habitualmente slida, llamada fase estacionaria, experimenta una
serie de procesos (adsorcin en fase slida, solubilizacin en cada fase, arrastre por la
fase mvil, etc.) que, en ltimo extremo, llevan a que el soluto se reparta entre ambas
fases. En el equilibrio, la relacin entre las concentraciones del soluto entre ambas fases
es constante, y se denomina coeficiente de reparto. Si en una mezcla, cada componente
tiene un coeficiente de reparto diferente del de los otros, la separacin ser buena.
Naturalmente, dicho coeficiente depende de la naturaleza de las fases, as como de las
condiciones de la cromatografa.
Tomando en consideracin el estado fsico de las fases, la cromatografa se clasifica en
dos grandes categoras y dos subcategoras cada una:
1) CROMATOGRAFA DE GASES.
En sta, la fase mvil es un gas y la estacionaria puede ser un lquido o un slido, por lo
que existen dos variantes:
a) Cromatografa slido-gas (CSG)
b) Cromatografa lquido-gas (CLG)

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2) CROMATOGRAFA DE LQUIDOS.
En sta, la fase mvil es un lquido y la estacionaria puede ser un slido o un lquido, por
lo que existen dos variantes:
a) Cromatografa slido-lquido (CSL)
b) Cromatografa lquido-lquido (CLL)
Cuando la fase estacionaria es slida, la cromatografa puede ser en columna y en placa
(tambin llamada cromatografa de capa fina).
Las separaciones por cromatografa de reparto, son particularmente interesantes para los
compuestos solubles en agua. Asimismo, de acuerdo con el mecanismo predominante en
el reparto diferencial de solutos, las tcnicas cromatogrficas se clasifican de la siguiente
forma:
a) Adsorcin Fenmeno de adhesin superficial cuyo mecanismo consiste en
interacciones bipolares.
b) Particin Fenmeno de reparto entre las dos fases debido a su solubilidad. La
solubilidad es una medida de la polaridad y de otro tipo de interacciones moleculares.
c) Intercambio inico Fenmeno superficial debido a interacciones entre iones de
diferente carga.
d) Ultra filtracin Como su nombre lo indica, se debe a un fenmeno de tamizado
molecular.
Debido a su distribucin diferencial entre las fases mvil y estacionaria, dos solutos
aplicados en un extremo del sistema cromatogrfico recorrern el mismo camino a
diferentes velocidades, arrastrados por la fase mvil, con su consecuente elucin en
diferentes tiempos o volmenes, lo cual permite diferenciar a cada analito por sus
propiedades cromatogrficas.

Resultados de la prctica
En la cromatografa en columna se obtuvo una nica fase colorida, al verificarlas por
cromatografa en placa fina se tuvo el mismo problema de afinidad con el solvente.

EXPERIENCIA 1. CROMATOGRAFA EN PLACA FINA.

(Separacin de licopenos)

Cuando se observ a luz UV se comprueba que el solvente arrastro

completamente los compuestos a separar debido a su polaridad.

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Se obtuvieron 3 tubos donde el primero y el segundo son los ms importantes.

En el tubo 1. Se aprecia el tiempo muerto o bien el tiempo que tarda un soluto
idealmente no retenido, en salir del sistema cromatografico.
En tubo 2. El tiempo de retencin o el tiempo que tarda el 50% de un soluto en eluir y
este corresponden a la posicin de mxima concentracin en el cromatograma.

EXPERIENCIA 2. CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

Discusin
La mezcla de hexano: Acetato de etilo 1:1 es poco polar por lo que al hacerla pasar por la
columna, eluyeron las sustancias no polares, mientras que las polares quedan adheridas
a la matriz de la columna, es decir al slica-gel; al cambiar la mezcla a acetato de etilo:
metanol 1:1 de mayor polaridad, las molculas polares van movindose al reemplazarse

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su interaccin con la slica-gel por interaccin con la mezcla acetato de etilo: metanol 1:1.
As observamos una separacin.

Conclusiones
La cromatografa por columna se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de
sustancias, reteniendo en su fase estacionaria a algunos compuestos por su propiedad de
adsorcin, por la que a travs de ella se har pasar una corriente de disolventes o mezcla
de disolventes (fase mvil: eluyente) que arrastrar a los compuestos constituyentes de la
mezcla, hacindoles avanzar a travs de la columna. Este tipo de cromatografa se utiliza
para saber en qu recipientes se encuentra un componente buscado y para determinar la
cantidad de este cuantitativamente, contrario a la cromatografa por capa fina donde solo
se puede hacer un anlisis cuantitativo.

Bibliografa:
Q
umica Orgnica. Fox M. A. & Whitesell S. K., 2a edicin Addison Wesley
Mxico 2000, pgs 702-707.

Longman,

Q
umica Orgnica Experimental. Xorge A. Domnguez y Xorge A. Domnguez
S.,editorial Limusa 1a Edicin, 1982, pgs. 36-37, 88-97, 106-111, 113-126 y 352-353.
Experiments

in organic chemistry, J. S. Nimitz. Prentice-Hall Inc. 1991, pgs. 10-11, 2234, 61-71.