Se han desarrollado mltiples variantes de ensayos ELISA que permiten la

cuantificacin de un antgeno en solucin, la deteccin de un anticuerpo en

una solucin (por ejemplo en el clonaje de anticuerpos monoclonales) o la
determinacin de la subclase (idiotipo) de un anticuerpo. A continuacin se
describen los ms comunes.
ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas). Las placas ELISA se
preparan recubriendo los pocillos con las soluciones en las que se sospecha
se encuentra el antgeno. Se incuban con anticuerpos marcados. Indican la
presencia de antgeno en la solucin analizada. Es necesario incluir
controles negativos que sern muestras del mismo tipo que las analizadas
(sangre, orina...), pero en las que se tenga la certeza de la ausencia del
antgeno buscado. Asimismo se incluyen controles positivos (soluciones
donde se encuentra el antgeno buscado).
ELISA indirecto. Las placas ELISA se preparan de la misma forma a la
anterior. Los controles positivos y negativos son los mismos. El sistema de
deteccin emplea dos anticuerpos: uno primario contra el antgeno y uno
secundario marcado contra el primario. La deteccin tiene mayor
sensibilidad por presentar una amplificacin de seal debida a la unin de
dos o ms anticuerpos secundarios por cada primario. Es el ensayo ms
popular, como lo es la inmunofluorescencia indirecta, pues un mismo
secundario marcado y un mismo sistema enzimtico permiten cuantificar
una gran variedad de antgenos; por eso es un mtodo ms polivalente y
barato, aunque se pierda algo de precisin por tener un eslabn ms con
respecto al mtodo directo. La dilucin de la solucin que contiene el
anticuerpo primario por ejemplo, suero sanguneo es un factor muy
importante a tener en cuenta para evitar la aparicin de falsos negativos, ya
que si la muestra est muy diluida, no saldr positiva si la titulacin de
anticuerpos es muy baja. (Es decir, aunque los anticuerpos estn presentes,
la prueba no da positivo porque la concentracin de anticuerpos especficos
contra el antgeno que est pegado en el fondo del pocillo no es suficiente
como para dar una seal detectable.)
El ELISA indirecto es el mtodo de eleccin para detectar la presencia de
anticuerpos sricos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH),
agente causante del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Segn
esta tcnica, protenas recombinantes de la envoltura y el ncleo del VIH se
absorben como antgenos en fase slida a los pocillos. Las personas
afectadas de VIH producen anticuerpos sricos contra eptopos en estas
protenas vricas. En general, el ELISA indirecto permite detectar anticuepos
sricos contra VIH desde las primeras seis semanas de una infeccin.ELISA
sndwich (Ensayo de captura de antgeno y deteccin mediante
inmunocomplejos). Se trata de un ensayo muy empleado en el que se
recubre el pocillo con un primer anticuerpo anti-antgeno. Despus de lavar
el exceso de anticuerpo, se aplica la muestra problema en la que se
encuentra el antgeno, que ser retenido en el pocillo al ser reconocido por
el primer anticuerpo. Despus de un segundo lavado que elimina el material

no retenido, se aplica una solucin con un segundo anticuerpo anti-antgeno

marcado. As, pues, cada molcula de antgeno estar unida a un anticuerpo
en la base que lo retiene y un segundo anticuerpo, al menos, que lo marca.
Este ensayo tiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la
amplificacin de seal que permite el segundo anticuerpo.