1. Agua
La vida en la tierra, desde su origen
mismo, se ha desarrollado siempre con la
ayuda del agua, que ha provisto a los
organismos desde los principios de su
evolucin hasta la actualidad, de un
ambiente en el que las molculas que los
constituyen se han multiplicado
en
nmero y complejidad. En consecuencia,
la fisiologa de los seres vivos est
ntimamente ligada desde sus mismos
niveles moleculares a las propiedades de
3
este solvente vital.
A causa de su ubicuidad es
considerada, con frecuencia, un lquido
inerte, meramente destinado a llenar
espacios en los organismos vivos. Pero en
realidad, el agua es una sustancia de gran
reaccionabilidad, con propiedades poco
frecuentes, que la diferencian mucho,
tanto fsica como qumicamente, de la
mayora de los lquidos corrientes. El agua
posee, elevados puntos de fusin, la
temperatura de ebullicin mas alta, el calor
especfico de vaporizacin ms alto, el
calor de fusin y tensin superficial
elevados. Estas propiedades indican que
en el agua las fuerzas de atraccin entre
las molculas y, por tanto, su cohesin
5
interna, son relativamente elevadas.
Los tomos de hidrgeno y oxgeno
del agua se acomodan en una orientacin
no lineal donde el enlace H-O-H forma un
ngulo de 104.5, figura 1.1.
La naturaleza polar del agua da
lugar a la atraccin electrosttica entre sus
molculas. El hidrgeno de una molcula,
en virtud de su carga parcialmente
positiva, es atrado hacia el oxgeno de
otra molcula que a su vez posee una
carga parcialmente negativa. De esta
manera, cada hidrgeno de una molcula
puede ser compartido con los oxgenos de
otras molculas, del mismo modo en que
se comparten los electrones de dos
tomos, cuando estos forman una unin
covalente, a este tipo de interaccin o
Otra
de
las
propiedades
extraordinarias del agua que la hacen un
medio ideal para los organismos vivos es
su capacidad calorfica especfica, (el
nmero de caloras requeridas para elevar
la temperatura de 1 g de agua de 15 a
16 C) que es igual a 1.0 y es
notablemente alta entre las de varios
disolventes con enlaces de hidrgeno.
Cuanto mayor sea el
calor
especifico de una sustancia, menor ser el
cambio de temperatura que resulte cuando
dicha sustancia absorba una cantidad
dada de calor. De este modo, las
propiedades del agua la hacen apropiada
para mantener relativamente constante la
temperatura de un organismo vivo.
El calor de vaporizacin del agua es
muy alto. Expresado como el calor
especfico de vaporizacin (caloras
absorbidas por un gramo de agua
vaporizada), el valor para el agua es de
540 en su punto de ebullicin e incluso
mayor a temperaturas ms bajas. Este alto
valor resulta de gran utilidad para que los
organismos vivos mantengan constante su
temperatura ya que es posible disipar una
gran cantidad de calor por vaporizacin del
agua.
El alto calor de fusin del agua
reviste importancia en la estabilizacin del
medio biolgico. Aunque en las formas
superiores de vida rara vez se congela el
agua, el calor desprendido por sta al
congelarse es un factor importante para
disminuir la cada de temperatura de un
cuerpo de agua durante el invierno. As, 1
g de agua al congelarse a 0 C, debe
ceder 80 veces tanto calor como el que
pierde al disminuir de 1 a 0 C
exactamente antes de congelarse.
El agua se expande al solidificarse,
y por tanto el hielo es menos denso que el
agua. Solo otras pocas sustancias se
expanden al congelarse. Si el hielo fuera
mas pesado que el agua, se hundira. Esto
significa que los ocanos, lagos y
corrientes de agua se congelaran del
H3O + OH
Experimentalmente
se
ha
determinado que en un litro de agua pura
a 25 C se mantiene una concentracin
-7
promedio de 1.0X10 molar de iones
hidroxilo. Aunque no existen realmente
+
protones libres (H ) en el agua, para
facilitar la comprensin del proceso de
ionizacin del agua, consideraremos la
disociacin de sta en:
+
H2O
H + OH
Al producto de la concentracin de
los iones hidrgeno por la de los iones OH
se le da el nombre de producto inico del
agua, kw y tiene entonces el siguiente
valor.
-7
-7
-4
pH = -log [H ] o bien,
pH = log 1/ [H ]
-7
cidos y Bases
La ecuacin para la disociacin o
ionizacin de un cido (HA) en disolucin
acuosa diluida implica la transferencia de
un protn desde el cido al agua, la cual
puede actuar como aceptor del protn y
+
forma el cido H3O :
HA + H2O
H3O + A
Indicadores cido-Bsicos
El pH de una disolucin puede
determinarse mediante el empleo de
colorantes indicadores, la mayor parte de
las cuales son cidos dbiles (se designan
como HInd). Tales indicadores se disocian
de acuerdo con el equilibrio:
Hlnd
H + Ind
Tampones
Los
fluidos
intracelulares
y
extracelulares de los organismos vivos
contienen
pares
conjugados
cidobsicos, los cuales actan como tampones
al pH normal de dichos fluidos.
El
tampn
intracelular
ms
importante es el par conjugado cido2bsico H2PO4 / HPO4 (pK' = 7,2). Los
fosfatos orgnicos, tales como la glucosa6-fosfato y el ATP, contribuyen tambin a
la capacidad de tamponamiento en la
clula. El principal tampn extracelular en
la sangre y en los fluidos intersticiales de
los vertebrados es el sistema tampn del
bicarbonato.
Puesto que por la ley de Henry la
solubilidad de un gas en agua es
proporcional a su presin parcial, el pH de
su sistema tampn constituido por el
bicarbonato es funcin de la presin
parcial del CO2 en la fase gaseosa situada
sobre la disolucin tampn.
El rasgo distintivo del sistema
tampn del bicarbonato lo constituye que
el CO2 sea el producto final de la
combustin aerobia de las molculas
combustibles en los vertebrados, que se
expulsa en ltimo trmino por los
3,7,20
pulmones.
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRCTICA No. 1
PREPARACIN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS Y
DETERMINACIN DE pKa
NOMBRE:
GRUPO:
FECHA:
PREGUNTAS PRELABORATORIO
1.-Qu es el pKa?
2.-A partir de que parmetro podemos
calcular el pKa?
3.-Qu es una solucin buffer?
4.-Para que
buffer?
se utiliza una
solucin
FUNDAMENTO
Resulta muy til poder relacionar el
pH de la solucin de un cido dbil con la
constante de disociacin de este.
+
K = [H ][A ]
[HA]
A fin de lograr esta relacin se
puede reordenar la ecuacin para la
constante de disociacin del cido HA,
+
[H ] = Ka [HA]
[A]
si se toman logaritmos negativos
ambos trminos, encontraremos:
de
pH = pK + log10 [ A ]
[HA]
Esta es la ecuacin de HendersonHasselbach, que establece la relacin
entre el pH de la solucin acuosa de un
cido dbil, su pK y las cantidades de las
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formas disociada y no disociada.
Las soluciones buffer por otra parte
contienen un cido dbil y su base
conjugada o una base dbil y su cido
conjugado en donde el pH es igual o
cercano a su valor de pKa, la ecuacin de
Henderson-Hasselbach puede ser usada
para realizar los clculos necesarios para
20
su preparacin.
MATERIAL Y PROCEDIMIENO
EXPERIMENTAL
MATERIAL DE LABORATORIO:
- 2 Vasos de precipitados de 100 ml
- 2 Vasos de precipitados de 150 ml
- 1 Pipeta graduada de 10 ml
- 1 Pipeta graduada de 5 ml
- 1 Pipeta graduada de 1 ml
- 1 Matraz volumtrico de 100 ml
- 1 Bureta
- 1 Agitador magntico
- Piceta
REACTIVOS:
(Para su preparacin vase la preparacin
de soluciones).
- Glicina 0.025 M pH 2.0
- Lisina 0.025 M pH 2.0
- cido asprtico 0.025 M pH 2.0
- NaOH 1 M
EQUIPO:
- Potencimetro
a)
Preparacin
de
Soluciones
Amortiguadoras:
La seleccin
de una solucin
reguladora adecuada para un determinado
proceso bioqumico, debe ajustarse a los
siguientes criterios:
la ecuacin de Henderson-Hasselbach,
calcule las cantidades que debe pesar de
cido y base conjugada, para preparar 100
ml de disolucin.
2. Pese las cantidades que calcul o mida los
volmenes adecuados y disuelva. Afore
aproximadamente a 75 ml.
3. Transfiera esta disolucin a un vaso de
precipitados de 150 ml y verifique el pH en
un potencimetro previamente calibrado y
ajustar a la temperatura a las condiciones
de trabajo. Si el pH no es exactamente el
pedido, ajstelo agregando el componente
(cido o base), que sea necesario para
subir o bajar el pH hasta el valor requerido.
4. Afore a 100 ml con agua destilada y
verifique nuevamente el pH.
5. Determinacin de la capacidad buffer. La
capacidad buffer es la cantidad de base
fuerte requerida para alterar el pH de la
disolucin reguladora, en una unidad de
pH:
C.B.= db
dpH
Siendo dpH el incremento de pH
resultante de la adicin de un volumen db
de base.
6. Ponga su disolucin en un vaso, introduzca
los electrodos del potencimetro y
disponga una bureta con disolucin de
NaOH 1 N y un agitador
7.
b) Determinacin de pKa:
MTODO:
1. Ponga 20 ml de la solucin de glicina en
un vaso de precipitados de 100 ml.
2. Proceda a la medicin del pH.
3. Aada 0.1 ml de NaOH 1.0 M. Agitar el
vaso y volver a medir el pH anotando los
resultados.
4. Repita el paso 3 hasta llegar a un pH de
12 aproximadamente.
5. Haga lo mismo (pasos 1 a 4) para los
otros dos aminocidos.
6. Haga una grfica de pH contra volumen
en ml de NaOH gastados luego de tomar
en cuenta que cada 0.1 ml de NaOH
diluido en 20 ml aumenta la concentracin
de OH en 50 mmoles.
7. Localiza en la grfica los diferentes pK
de los aminocidos.
8. Identifica
a que pH tienen poder
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amortiguador.
HOJA DE RESULTADOS
NOMBRE:
a)
GRUPO:
FECHA:
Preparacin
de
soluciones b) Determinacin de pKa:
amortiguadoras:
ml de NaOH
pH obtenido
1.- Problema N
pH requerido
agregados
Concentracin molar
0.0
Volumen final
ml.
1.0
2.- Clculos efectuados.
2.0
3.- Cantidades por pesar o medir de A y
3.0
HA.
4.0
4.-Cul es el pH de la solucin inicial?
5.0
5.-Cul es el pH final de la solucin?
6.- Cul es la capacidad buffer?
DISCUSIN DE RESULTADOS
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
1.- Indica el pKa de los siguientes cidos:
a) cido pirvico.
b) cido lctico.
c) cido benzoico.
d) cido oxlico.
e) cido succnico.
f) cido carbnico.
g) cido ctrico.
h) cido fosfrico.
2.- Indique el nombre completo, pKa y
peso molecular (o frmula) de los
siguientes compuestos usados como
reguladores de pH en bioqumica: TRIS;
CAPS; MES; TES Y Tricina.
3.-Para qu valores de concentracin de
los componente de un buffer, tiene este la
mxima capacidad buffer?
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS