Informe Final de Pasantia Central de Biotecnologia Reproductiva y de Procesamiento de Semen y Embrionesla Espiga Ltda..

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada
1
Universidad de Pamplona - Ciudad Universitaria - Pamplona (Norte de Santander - Colombia)
Telfono: (7) 5685303 - 5685304 - 5685305 Fax: 5682750 - www.unipamplona.edu.co
INFORME FINAL DE PASAN TA CENTRAL DE

BIOTECNOLOGA REPRODUCTIVA Y DE PROCESAMIENTO DE
SEMEN Y EMBRIONES LA ESPIGA LTDA
DENIS ALBERTO QUINTERO AR VALO

CDIGO 13178339
INFORME FINAL DE PASANTA PARA OPTAR EL TTULO DE

MDICO VETERINARIO
COMIT EVALUADOR DE PRCTICAS

LVARO IVN QUINTERO RODR GUEZ DOCENTE DIRECTOR
DE PRCTICAS
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
DEPARTAMENTO DE MEDICINA VETERINARIA
X SEMESTRE
PAMPLONA
2008
2
AGRADECIMIENTOS
Me gustara expresar mi gratitud al Mdico Veterinario Z ootecnista

Arturo Vera Cala quien fue el profesor de reproduccin animal en mi
carrera de estudiante de Medicina V eterinaria y al cuerpo de
profesores que me formaron en las diferentes ramas relacionad as
con el programa de Medicina V eterinaria, un especial saludo de
agradecimiento al Decano y D irector de programas de la facultad de
ciencias agrarias de la Universidad de Pamplona del ao cursante.
Mdico Veterinario Zootecnista Especialista y Magister Carlos Mario
Duque Caas y el Filosofo Doctor Mdico Veterinario E specialista
John Jairo Bustamante Cano respectivamente, quienes confiaron
en m.
3
DIRECTIVAS
Dra. Esperanza Paredes Hernndez

Rectora
Carlos Mario Duque Caas

Decano Facultad de Ciencias Agrarias
Dr. John Jairo Bustamante Cano

Director de Programa de Medicina Veterinaria
lvaro Ivn Quintero

Director de Rotaciones y Pasantas
4
APROBACIN

Tutor trabajo de grado

Decano Facultad de Medicina Veterinaria
Dr. John Jairo Bustamante Cano

Presidente de comit de pasantas
5
CONTENIDO
PG
INTRODUCCIN
JUSTIFICACIN
OBJETIVOS
1. DESCRIPCIN CENTRAL DE BIOTECNOLOG A
19
REPRODUCTIVA LA ESPIGA LTDA
1.1 PRESENTACIN
19
1.1.1 INFORMACIN GENERAL DE LA INSTITUCIN
19
6
PG
1.1.2 Divisin comercial.
20
1.1.3 Divisin capacitacin.
21
1.1.4 Director general y jefe general del practicante.
21
1.2 RECURSOS CON LOS QUE SE CUENTA
23
1.2.1 rea.
24
1.2.2 Fuentes de agua y energa.
24
1.2.3 Aguas negras y manejo de desechos .
24
1.2.4 Instalaciones.
24
1.2.5 Funciones del mdico veterinario y/o zootecnista.
26
1.2.6 Horarios de trabajo y turnos.
27
2. MARCO TERICO
27
2.1 DIAGNSTICO DE GESTACIN POR

PALPACIN RECTAL
27
7
PG
2.1.1 Diferentes signos o parmetros para el

diagnstico de gestacin bovina.
2.2 COLECTAS Y CONGELACI N DE
30
35
SEMEN BOVINO
2.2.1 Concentracin.
39
2.2.2 Motilidad.
40
2.2.3 Viabilidad.
43
2.2.4 Estado del acrosoma.
46
2.2.5 Pruebas de funcionalidad espermtica.
47
2.2.6 Morfologa.
47
2.3 COLECTA DE SEMEN
53
2.3.1 Coleccin de semen con electroeyaculador.
53
2.3.2 Equipo.
53
2.3.3 Sujecin.
55
2.3.4 Tcnica de estimulacin.
56
8
PG
2.3.5 Tcnica de electroeyaculacin.
58
2.3.6 Disturbios en la funcin testicular y los epiddimos.
60
2.4 CONGELACIN DE SEMEN BOVINO
61
2.4.1 MTODO DE CONGELACI N
61
2.4.2 Procesado de la muestra.
61
2.4.3 Uso del fotmetro.
62
2.4.4 Evaluacin de la concentracin por

cmara de Neubauer.
63
2.4.5 Pasos para el proceso de la dilucin.
66
2.4.6 Evaluacin de la dilucin.
66
2.4.7 Importancia y propiedades de los

diluyentes de semen.
67
2.4.8 Soluciones buffer utilizadas para diluir

el semen.
68
2.4.9 Agentes antimicrobianos para

69
2.5 Uso de diluyentes comerciales.
9
70
PG
2.5.1 Triladyl.
71
2.5.2 PASOS PARA ENVASADO DE PAJILLAS
71
2.5.3 Clculos para el determinado del

nmero de pajillas.
71
2.5.4 Con un equipo manual.
72
2.5.5 Con equipo mecnico.
74
2.5.6 Proceso de congelado.
74
2.5.7 Pasos del procesado de congelado.
75
2.5.8 Evaluacin del semen congelado.
76
2.5.9 Proceso de descongelado.
76
2.6 EVALUACIN DE LA MOTILIDAD
77
2.6.1 Escala de evaluacin.
77
2.6.2 Evaluacin de la morfologa espermtica

luego del descongelado.
78
10
PG
2.7 CONCENTRACIN
79
2.7.1 MNIMO ACEPTABLE.
79
2.8 INSEMINACIN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO (I.A.T.F.)

Y PROTOCOLOS DE SINCRONIZACIN.
80
2.8.1 Inseminacin artificial a tiempo fijo.
80
2.8.2 Metas que se buscan.
81
2.8.3 Ventajas.
81
2.8.4 Beneficios.
82
2.8.5 xito de la I.A.T.F.
83
2.8.6 Seleccin de hembras para un programa de IATF.
83
2.8.7 Condicin Corporal 1.0 Flaca /Emaciada.
83
2.8.8 Condicin Corporal 1.5 Flaca /Conserva flaca.
84
2.8.9 Condicin corporal 3 Lmit e / Manufactura.
85
2.9 Condicin corporal 3.5 ptima / Empulpada.
86
2.9.1 Condicin corporal 4 ptima / Consumo especial.
87
2.9.2 Protocolos de sincronizacin.
89
2.9.3 Tratamiento con prostaglandinas.
89
11
PG
2.9.4 Otras variaciones en el tratamiento con prostaglandinas.
91
2.9.5 Parmetros para la eleccin del mejor protocolo.
92
2.9.6 ndices reproductivos.
92
2.9.7 Sincronizacin del desarrollo folicular y ovulacin

para IATF.
96
2.10 NORMAS ELEMENTALES DE HIGI NE

Y PROCEDIMIENTOS
97
2.10.1 Personal.
98
2.10.1 Estructura.
99
2.10.2 Condicin corporal y alimentacin.
99
2.10.3 Estado funcional de los animales.
100
2.10.4 Tiempos.
100
2.10.5 Formacin de grupos para programas de IATF.
101
2.10.6 Seleccin del semen.
101
3. ACTIVIDADES REALIZADAS
102
12
PG
3.1 DIAGNSTICO DE GESTACIN BOVINA

POR PALPACIN RECTAL
102
3.1.1 Parmetros indicativos de la forma en que realizo el .

diagnstico reproductivo por palpacin rectal.
3.1.2 Resultados obtenidos en diferentes fincas .
102
109
3.1.3 Relacin de los resultados obtenidos en

las diferentes fincas.
115
3.2 COLECTAS Y CONGELACIN DE SEMEN BOVINO
115
3.2.1 Equipos y materiales.
115
3.2.2 Parmetros indicativos de la forma en que realizo

las colectas y congelacin de semen bovino.
117
3.2.3 Colecta de semen por electroeyaculador.
117
3.2.4 Evaluacin pre congelacin.
120
3.2.5 Congelacin del semen.
121
3.2.6 Empacado de las pajillas.
124
3.2.7 Resultados y relacin de los resultados obtenidos en

125
13
PG
3.3 SINCRONIZACIN DE NOVILLAS Y VACAS

BOVINAS PARA INSEMINACIN ARTIFICIAL A
TIEMPO FIJO
132
3.3.1 Protocolo de sincronizacin utilizado.
133

la sincronizacin de novillas y vacas, para realizar la
inseminacin artificial a tiempo fijo.
134

138
3.3.4 CURSOS Y CONFERENCIAS DE BIOTECNOLOG AS

REPRODUCTIVAS BOVINAS
139
4. CONCLUSIONES
141
5. RECOMENDACIONES
142
14
PG
6. PROPUESTA A DESARROLLAR EN LA EMPRESA
143
BIBLIOGRAFA
145
15
INTRODUCCIN
La biotecnologa reproductiva aplicada a todas las explotaciones

productivas es vital para lograr los objetivos de maximizacin y
aprovechamiento en la explotacin de los recursos naturales,
teniendo siempre como punto de partida los objetivos bsicos y
claves de explotaciones pecuarias como son aumentar los
nacimientos, la produccin de kilos de carne de ternero, d e leche y
permitir adems adelantos genticos a corto plazo con animales
elite, estos son importantes para desarrollar un producto de
inmejorable calidad. En este trabajo se comenta n las experiencias
de campo de un semestre en una central de biotecnologa
reproductiva, ubicada en San Alberto D epartamento del Cesar
Colombia, regin ganadera del pas, mencionando y denotando las
asistencias tecnicas,
relacionadas al rea de reproduccin. Los
problemas
encuentran
que
se
hablando
de
biotecnologas
reproductivas, se relacionan en que no hay un numero grande de

profesionales que las conozcan y apliquen y que estas tecnicas
requieren costos grandes de inversin sobre todo para pases
subdesarrollados en los que las tecnologas son a ccesibles slo
para terratenientes, multinacionales y personas de altos recursos .
16
JUSTIFICACIN
Este informe lo realizo con la gran satisfaccin intele ctual que en mi

existe por la reproduccin bovina esperando que les pueda servir a
futuros mdicos veterinarios y profesionales que se dedican a este
rengln o rama de la medicina veterinaria . Qu comparten mi
pasin por la ciencia reproductiva bovina. El prin cipal objetivo de
este trabajo me es presentar un acercamiento terico y prctico de
las ltimas tcnicas reproductivas que se utilizan en la ganadera
actual, indicando el acercamiento prctico con base a las
experiencias de campo que realice
veterinario
en
la
central
de
como pasante mdico
biotecnolgica
reproductiva
procesamiento de semen y embriones la espiga LTDA (CBR). Y el

terico comparando los resultados en la prctica con lo escrito ,
producto de investigaciones en biotecnologas reproductivas que
existen en la actualidad de la reproduccin animal con nfasis en la
rama de los bovinos.
Espero que esta aproximacin a la reproduccin bovina en la que
relato los ltimos avances de la biotecnologa repro ductiva
utilizados en Colombia , las experiencias de campo y trabajos
realizados durante mi semestre de pasante como Mdico
Veterinario, sea de gran utilidad para los lectores de este trabajo en
su desempeo en el campo profesional y cientfico .
17
OBJETIVOS
General
Aplicar en la prctica de campo los conocimientos tericos y

prcticos adquiridos en lo transcurrido de mi programa con relacin
a tratamientos teraputicos y quirrgicos as como en el rea de
reproduccin en la Central de Biotecnologa Reproduc tiva la Espiga
Ltda.
Especficos
Aprender
aplicar
los
diversos
avances
biotecnolgicos
reproductivos bovinos que se manejan en la central biotecnolgica

reproductiva la espiga como inseminacin artificial, protocolos de
sincronizacin, colecta evaluacin y congelacin de semen bovino .
Promover en las diferentes situaciones prcticas de campo la

importancia de la medicina preventiva como mecanismo primario en
la optimizacin y mximo aprovechamiento de los recursos
naturales en las explotaciones pecuarias .
Actualizarme constantemente de acuerdo a los avances registrados

en publicaciones de diferentes autores con respecto a temas
relacionados en biotecnologa reproductiva bov ina.
18
1. DESCRIPCIN CENTRAL DE BIOTECNOLOG A

REPRODUCTIVA LA ESPIGA LTDA
1.1 PRESENTACIN
La Central de Biotecnologa Reproductiva y Procesamiento de

Semen y Embriones La Espiga Ltda. Es una empresa que fue
creada con el nimo de ayudar en el mejoramiento gentico y
ofrecer las ms avanzadas tecnologas en la reproduccin bovina .
Para que de este modo los ganaderos puedan acceder a un rpido
mejoramiento gentico me diante la aplicacin de la tran ferencia de
embriones y otras tecnologas. De este modo la emp resa quiere
ofrecer semen y embriones congelados al mercado internacional
con el propsito de ofrecerle otras alternativas econmicas que
apoyen el fortalecimiento del campo, de igual manera l a central
cuenta con un equipo de profesionales altamente especializados,
los cuales estn capacitados en los procedimientos operativos
estandarizados de las tcnicas ms avanzadas . Basndose en esta
rea las replantaciones y normas establecidas por la FAO, la OIE y
IETS.
1.1.1 INFORMACIN GENERAL DE LA INSTITUCIN
19
Razn
Social
--
Central
de
Biotecnologa
Reproductiva
procesamiento de semen y embriones la espiga Ltda.
Nit -- 900054047-2.
Sede San Alberto (Cesar) Colombia.
Direccin km 1 bomba la Y de la palma, San Alberto (Cesar).
Nombre de la finca La espiga la pradera.
Telfonos 095 564 56 13 -- 564 55 99.
Correo electrnico laespiga@gmail.com
1.1.2 Divisin comercial.
Hormonas para I.A.T.F. (inseminacin artificial a tiempo fijo) y

T.E. (Tranferencia de embriones).
Implementos para I.A. (inseminacin artificial), I.A.T.F. y T.E.
Productos para colecta y c ongelacin de semen y embriones.
Venta de embriones, semen y nitrgeno lquido .
Asistencia y servicios tcnicos reproductivos .
Venta de equipos.
20
1.1.3 Divisin capacitacin.
Diplomado en Biotecnologa Reproductiva con nfasis en T.E.

(Universidad.de la Paz, Universidad Cooperativa de Colombia ,
Univesidad.de Pamplona).
Cursos Personalizados.
I.A.
I.A.T.F.
Tranferencia de Embriones (T.E:).
Colecta, tranferencia y congelacin de embrion es.
Evaluacin androlgica del toro .
Congelacin de semen.
Ultrasonografa.
1.1.4 Director y jefe general del practicante .
El jefe directo y director tcnico que dirige la central biote cnolgica

reproductiva la ESPIGA es el Mdico Veterinario y Z ootecnista Ral
Sulpicio Sarmiento Cely, egresado Universidad de los Llanos y el
Mdico Veterinario y Zootecnista de la Universidad del Tolima
Diego Alejandro Snchez Vargas, quien presta sus servicios como
21
jefe de laboratorio y operador de este ; as como de asistente

tcnico agrcola.
Diagrama 1 Organigrama.
22
1.2 RECURSOS CON LOS QUE SE CUENTA
1.2.1 rea.
La central de Biotecnologa Reproductiva y Procesa miento de

Semen y Embriones La e spiga Ltda. Tiene una extensin de
veintisiete (27) hectreas y est aislada de las fincas vecinas por un
corredor de 10 metros de ancho, delimitada por una cerca externa
con alambre y otra interna de alambre de dulce de dos hilos.
Dispone de una zona de pastoreo para los animales donantes
residentes y un rea de cuarentena (lazareto) , aislada de las dems
reas del centro por un corredor de 10 metros , delimitado por dos
cercas de las mismas caractersticas del cercado general del
centro.
1.2.2 Fuentes de agua y energ a.
La central esta abastecida con agua potable proveniente de la

planta de tratamiento de San Alberto. Tambin se cuenta con un
pozo profundo a 90 Mtrs con su respectiva bomba que suministra
agua al ganado y un tanque elevado en fibra de vidrio con
23
capacidad de 10.000 Ltrs. La energa es suministrada por la

empresa Electrificadora de Santander.
1.2.3 Aguas negras y manejo de desechos .
Las aguas negras se vierten a la red de alcantarillado del municipio

de San Alberto las basuras y desechos de la limpieza de los toriles
y dems zonas de la central se recolectan manualm ente en bolsas
que son recolectadas por el camin de servicio de EMPOSANAL
S.A. E.S.P.
1.2.4 Instalaciones.
Parte fundamental de la infraestructura fsica de esta empresa son

las construcciones que aparecen en el Tabla 1
24
Tabla 1. Listado de construcciones y reas de las

dependencias de la central.
25
1.2.5 Funciones del mdico veterinario y/o zootecnista.
El mdico veterinario que brinda su atencin como practicante

en la central biotecnolgica reproductiva la espiga y como
pasante le corresponden las siguientes funciones.
Ejecutar las acciones orientadas por el jefe director de la

pasanta.
Demostrar aptitudes y actitudes positivas en todas y cada una

de las actividades a desarrollar.
Cumplir con el horario establecido por la institucin.
Atender a sus pacientes con respeto, moderacin y de acuerdo

a sus necesidades.
Promover el respeto por l a vida y la conservacin de las

especies.
Prevenir el desarrollo de enfermedades a travs de la oportuna

atencin mdica o de la vacunacin necesaria.
Colaborar adecuadamente en el diagn stico y tratamiento de

enfermedades haciendo uso de los recursos que ofrece la
central.
Participar en los procesos que soliciten los ganaderos realizar

en sus fincas; esto implica prestar ayuda en la colecta de
semen, palpacin de hembras para diagnosticar preeces o
funcionalidad ovrica y asimismo en el proceso de congelacin
de semen.
26
Participar en los procesos que tiene que ver con el

mantenimiento y embellecimiento de l a parte fsica de la central.
Mantener los materiales del laboratorio y espacios que

conforman la central con las condiciones higinicas requeridas.
Cumplir a cabalidad con cada una de las labores asignadas con

profesionalismo, tica, moral, responsabilidad, solidaridad entre
colegas y respeto.
1.2.6 Horarios de trabajo y turnos.
El mdico veterinario practicante cumple a cabalidad con el horario

establecido por la institucin que es de cinco y quince de la maana
a doce del medio da y de una y treinta de la tarde a seis de la tarde
de lunes a sbado y cumpliendo un turno dominical cada 15 das.
Tambin debe estar disponible a cualquier turno nocturn o de
acuerdo como se le asigne.
2. MARCO TERICO
2.1 DIAGNSTICO DE GESTACIN POR

PALPACIN RECTAL
27
La palpacin rectal es un mtodo fsico utilizado en las hembras

bovinas por el cual se puede explorar el aparato reproductivo de
estas con el fin de diagnosticar estados fisiolgicos como
funcionalidad ovrica, momento del ciclo estral, gestacin o
vacuidad. As como patolgicos entre los que encontramos
pimetra, quistes ovricos, aplasia segmentaria y otras).
El diagnstico por palpacin transrectal es limitado debido a, la alta
presencia de 41 %
de cuerpos lteos intraestromales
que
producen niveles de progesterona similares a los ovarios ; que

presentan cuerpos lteos palpables. La presencia de valores altos
de progesterona en ovarios lisos sugiere que la palpacin de
estructuras ovricas perse, no puede considerarse como tcnica
inequvoca a la hora de determinar si la gnada es funcional o no.
La ecografa veterinaria ha demostrado hasta la saciedad, todas
estas consideraciones que llevan a buscar un mtodo sencillo y
econmico sin ecgrafo, que permitiera p or medio de la palpacin
rectal llegar a un diagnstico exacto del estado ovrico, obviando
las fuentes de error analizadas por diferentes autores.
La ultrasonografa nos ha permitido entender hoy en da, la

presencia en el ciclo estral bovino de las ondas foliculares, que las
manifestaciones hormonales se reflejan tambin en los cuernos
uterinos y se pueden detectar con la palpacin re ctal.
La palpacin rectal para el diagnstico gineco -obsttrico en

bovinos, asistido por las manifestaciones de las hormonas,
28
progesterona y estrgenos, en los c uernos uterinos . El cuerpo

lteo, CL, produce progesterona, y los folculos, F, estrgenos,
hormonas estas que actan a travs de la sangre, reflejando su
accin en los cuernos uterinos de las va cas, de la siguiente manera:
VNC o VNS: Vaca normal con contractilidad o vaca normal
serpenteado, codifican aquellos cuernos uterinos que presentan esa
forma a la palpacin rectal y que incuestionablemente significan, si
las vacas estn con toro pueden tener una preez de un da; este
es el mnimo de das que el palpador sea capaz de detectar
preeces, o estar entre el da 5 y 17 del ciclo estral siguiente al
calor, que es cuando el cuerpo lteo, CL, es funcional, est intra o
extraovrico. Si las vacas estn sin toro, necesariamente estarn
entre el da 5 y 17 del ciclo estral siguiente. Presentaran calor
dentro de 3 a 15 das.
VNT, CT Y UT: vaca normal con tonicidad, cuer nos tnicos y teros
tnicos, codifican aquellos cuernos uterinos que a la palpacin, son
duros como un palo, tienen la forma de un gancho o de un anzuelo
estn enrollados sobre s mismos y oponen
resistencia al
estiramiento. Con toro o sin l, el significado es el mismo: la vaca

est en calor hoy, lo estuvo ayer o va a entrar en celo maana.
VCF, VOE, CF: vaca cuernos fl cidos, vaca ovarios estticos,
cuernos flcidos, codifican aquellos cuernos uterinos que por no
haber efecto hormonal estn flcidos a la palpacin, son de paredes
duras y no oponen resistencia al estiramiento , adems se tropieza
accidentalmente con los ovarios al recorrer los mismos. Los das 2,
3 y 4 despus del calor, al no haber suficientes niveles de
29
progesterona, hay es un CH, cuerpo hemorrgico, los cuernos

uterinos estarn igualmente flcidos pero los ovarios sern planos .
En realidad el trmino o varios estticos es incorrecto, ya que desde
antes del nacimiento, existe una dotacin gentica de folculos
primordiales.
Lo que sucede es la incapacidad del eje hipotlamo -hipfisis-ovario,
para leer las pequeas cantidades de hormonas producidas en
algunas etapas del ciclo estral, del puerperio y de la hembra bovina
prepber.
Por lo explicado anteriormente, son errneos los diagnsticos
basados en los ovarios y aquellos veterinarios que persistan en
ellas seguirn siendo profesionales del siglo xx y su s diagnsticos
en un 41 % errneo.
2.1.1 Diferentes signos o parmetros para el

diagnstico de gestacin bovina.
30 das: El signo positivo es la membrana fetal deslizable, (MFD),

que se puede percibir desde los 28 das , para ello, usando la
tcnica de palpacin con
cambio de posicin de la mano,
desplazaremos los dedos a travs de los cuernos uterinos,

sintiendo una tercera estructura, como cua ndo nos tocamos en la
pierna, la piel, el interior y el pantaln, la piel es la equ ivalente a la
membrana fetal; el sntoma es la presencia de lquido en el cuerno
uterino dnde hemos sentido la MFD.
30
35 das: El cuerno grvido, que es el derecho en el 60% de las

veces, mide 2.5 CMS de dimetro en su parte ms anc ha, la
vescula amnitica, signo positivo, se puede percibir, deslizando los
dedos a travs del cuerno asimtrico, como una bola que se mueve
dentro del agua. Las paredes de los cuernos estn delgadas y se
siente la presencia de lquido, el sntoma de preez son l os cuernos
permanecen en la cavidad plvica y el crvix, es mvil, permitiendo
hacer el cambio de posicin de la mano. La membrana fetal
deslizable, MFD, mide de 45 a 61 centmetros de largo y abarca
ambos cuernos, es palpable a sta edad con relativa facilidad,
deslizando
los
cuernos
entre
los
dedos.
42 das: El cuerno grvido mide 4 CMS de dimetro; se percibe no

solamente la presencia de lquidos sino la membrana fetal
deslizable, MFD. Al coincidir estos das de gestacin con el
momento de posible repeticin y por efecto de la maduracin de un
folculo que no alcanza a ovular, pero que si produce estrgenos,
en algunas vacas se observan signos externos de calor, con los
cuernos
uterinos
aproximadamente
algo
en
tnicos.
un
Este
5%
fenmeno
de
las
se
da
vacas.
La membrana fetal deslizable, MFD, se percibe claramente , se

produce la unin de los cotiledones con las carnculas, formando
as los placentomas, siendo sta la edad de la gestacin que
implica un mayor riesgo de producir reabsorcin embrionaria, por
consiguiente es necesario tener mucho cuidado con la m anipulacin
de ambos cuernos.
31
49 das: El cuerno grvido mide 5 CMS de dimetro; el conceptus

que ahora se palpa con facilidad, ha cambiado de denominacin,
siendo hasta el da 38 embrin y feto a partir del da 39.
El cuerno gestante, en un porcentaje alto de las veces, gira 180
grados sobre su eje, colocndose el no preado encima,
confundindose muchas veces el diagnstico con un embarazo de
30 das.
60 das: El cuerno grvido mide 6 CMS de dimetro ; el feto se
palpa fcilmente al igual que la membrana fetal deslizable, MFD.
Con mucha concentracin es posible percibir los cotiledones que
miden 0.5 centmetros de dimetro y las paredes del
grvido
se
tornan
cada
vez
ms
cuerno
delgada s.
El crvix contina siendo mvil, permaneciendo en la cavidad

plvica y la mejor manera de palparlo es ahuecando la mano para
poder
acunar
el
cuerno
que
tiene
el
conceptus.
70 das: Todava se puede hacer cambio de posicin de la mano;

el cuerno grvido empieza a descender hacia la cavidad abdominal
y deslizando la pared del mismo entre los dedos se logra palpar los
cotiledones
que
miden
0.75
CMS
de
dimetro.
Nos podemos valer de la ayuda de ahuecar el cuerno para poder

asirlo y encontrar con ms facilidad, el sign o positivo que son los
cotiledones y medirlos para decir los das de gestacin, adems el
feto se palpa fcilmente.
32
80 das: Tamao de los cotiledones: 1.0 CMS contina el descenso;

el crvix comienza a ser fijo por el contrapeso del contenido de la
preez. Muchas veces el ligamento ancho del tero impide una
manipulacin correcta de los cuernos, para solucionar este
inconveniente se debe desenrollar el cuerno gestante, que est
oculto
debajo
del
mismo
ligamento.
90 das: Tamao de los cotiledones: 1 .5 CMS contina el descenso.

El crvix est un poco ms fijo y el cuerno grvido se encuentra
generalmente en el reborde plvico. En vacas muy grandes se
puede dificultar el diagnstico por la distancia entre el contenido de
la gravidez y la entrada del r ecto. La arteria media uterina mide
entre 0.8 y 1.5 CMS de dimetro, mientras que en las vacas
vacas mide la mitad y se debe evitar confundirla con la arteria
femoral que siempre permanece fija.
100 das: Tamao de los cotiledones: 2.0 CMS el descenso

contina.
An
se
puede
delimitar
el
cuerno
grvido.
120 das: Tamao de los cotiledones: 2.5 CMS sigue el descenso;

todava se puede diferenciar el cuerno grvido del no grvido. El
feto mide de 24 a 30 CMS de largo y se palpa con facilidad la
cabeza del mismo; la arteria media uterina sigue
creciendo y
manifestando su murmullo.
150 das: Ha terminado el descenso, pero en algunos casos an es
posible delimitar el cuerno grvido. El tamao de los cotiledones es
33
de 3.0 CMS. Al finalizar el quinto mes d e preez el tero est en el

piso de la cavidad abdominal, sin embargo, no es extrao encontrar
gestaciones de esta edad sin que el descenso haya concluido. El
crvix est fijo y los cotiledones se palpan mejor colocando la mano
con la palma extendida haci a abajo yndose contra el reborde
plvico, como buscndole la ubre a la vaca.
180 das: A sta edad de la gestacin el tero est completamente

descendido. Los cotiledones miden 4.0 cms. de dimetro y an es
posible palpar el feto. Como ayuda en la preez de 150, 180 y 210
das, no olvide dirigir la mano no solamente por el centro de la
cavidad abdominal sino por el lado izquierdo y por el derecho. El
tamao
del
feto
asemeja
al
de
un
perro
mediano.
210 das: El tamao de los cotiledones es de 5.0 cms. la arteria

media uterina mide 1.25 cms. de dimetro. Hacia finales de los 210
das y comienzo de los 225 el feto comienza el ascenso,
permitiendo que se palpe fcilmente y mide de 60 a 80 cms. de
largo.
media uterina mide 1.50 cms. de dimetro. El feto se encuentra en
la parte media de la cavidad plvica y mide de 70 a 90 cms. de
longitud.
media uterina mide 2.0 cms. de dimetro. El feto se encuentra todo
34
en la cavidad plvica, palpndose generalmente las manos del

mismo al entrar al recto de la vaca
2.2 COLECTAS Y CONGELACI N DE

SEMEN BOVINO
Muchos investigadores en el rea de la reproduccin animal estn

tratando de disear el "anlisis seminal ideal", que valore
adecuadamente y prediga la fertilidad de una muestra seminal.
El anlisis de semen ideal sera aqul que de forma sencilla y eficaz

permitiera predecir la capacidad fecundante de un eyaculado
concreto.
Las cualidades que deben tener los espermatozoides d e un

eyaculado fecundante son: M otilidad progresiva, morfologa normal,
metabolismo energtico activo, capacidad para desarrollar una
motilidad hiperactivada, integridad estructural y funcionalidad de la
membrana,
integridad
de
las
enzimas
asociadas
con
la
fecundacin, capacidad de penetracin y transferencia ptima del

material gentico. Sin embargo, este anlisis integral es muy difcil
de desarrollar, debido a la enorme complejidad inherente a la
funcin espermtica.
35
Los estudios actuales sobre contrastacin seminal persiguen como

objetivo final identificar algn parmetro cintico, morfolgico o
bioqumico que indique el estado de la clula espermtica en un
momento dado y que, al mismo tiempo, pueda ser correlacionad o
con la fertilidad y calidad del eyaculado.
No hay que olvidar que el objetivo del examen cualitativo del semen
es asegurar que la fertilidad subsiguiente de dicho semen sea
ptima. Sin embargo, las tcnicas de contrastacin del semen, tanto
por su utilizacin en investigacin y especialmente, en la rutina de
produccin, deben ser precisas, sencillas, rpidas y econmicas.
Actualmente, el anlisis seminal clsico ha mejorado mediante la

introduccin de nuevas tcnicas analticas procedentes de otros
campos de la investigacin cientfica. As, el estudio de la motilidad
espermtica, la concentracin espermtica y las anomalas
morfolgicas que anteriormente se hacan de manera subjetiva,
pueden realizarse hoy en da mediante el uso de mtodos
computarizados de anlisis.
La incorporacin de estos mtodos informticos atena en gran

parte el factor subjetivo del anlisis seminal y garantiza una mejor
correlacin con la capacidad fecundante del espermatozoide.
36
Imagen 1 Espectrofotmetro.
Espectrofotmetro
ACUCELL
(IMV
Technologies,
Francia).
Microptic/Barcelona, versin 2005 ).
Tras todo lo dicho, cabe destacar que hasta el momento no se ha

conseguido un mtodo de evaluacin seminal in vitro, que al
utilizarlo solo o en combinacin con otros sea capaz de predecir de
forma segura la capacidad fecundante de una muestra de semen.
Sin embargo, debido a que la valoracin in vitro de la calidad
seminal es muy importante en la valoracin androlgica de los
machos y es, adems, e l mejor indicador del grado de conservacin
del semen congelado descongelado, se han dedicado grandes
esfuerzos al diseo de tcnicas que midan la capacidad fecundante
37
del semen fresco y congelado. Los parmetros clsicamente

usados para conocer la calidad seminal de un eyaculado son los
siguientes.
Imagen 2 Esquema del aparato reproductor de un toro.
HIDALGO ORDOEZ, Carlos Olegario. et al. Anlisis de semen

bovino: tecnologa agroalimentaria. Seleccin y reproduccin 2005 .
38
2.2.1 Concentracin.
Existe una alta correlacin significativa entre el nmero de

espermatozoides inseminados y la fertilidad del toro. La presencia
de un mayor nmero de espermatozoides, siempre y cuando sus
caractersticas sean normales, incrementa la posibilidad de
fertilizacin. Este aspecto es crucial en el caso de los toros con baja
concentracin espermtica, o en los casos en que se utiliza semen
descongelado, que ha sido diluido y sometido a estrs durante el
proceso de congelacin descongelacin, provocando un dao
irreversible en un porcentaje elevado de espermatozoides. La
fertilidad de un toro usado en IA, entre otras razones, depender
bsicamente del nmero de espermatozoides normales que se
utilicen al inseminar. (1,6).
Existe una variabilidad muy grande en la co ncentracin de un
eyaculado a otro, y de un toro a otro, siendo importante conocer el
nmero de espermatozoides por eyaculado, ya que de este
parmetro depende el nmero de hembras a inseminar. La
concentracin puede calcularse por varios mtodos a partir de la
muestra
de
semen.
Entre
estos
mtodos,
destacan
la
espectrofotometra, la colorimetra, la citometra de flujo y el uso de

cmara de recuento celular, como las de Brker, Neubauer o
Thoma. (1) La espectrofotometra, es una tcnica u mtodo
indirecto, que mide la luz monocromtica absorbida por las
partculas en suspensin o los espermatozoides. Esta densidad
39
ptica de la muestra es comparada frente a una curva estndar

patrn, previamente validada y permite, as, conocer el nmero de
espermatozoides.
Tabla 2 cualidades que deben tener los espermatozoides de un

eyaculado fecundante .

2.2.2 Motilidad.
La motilidad es uno de los parmetros ms importantes de la

analtica seminal. Hasta hace pocos aos el estudio de la motilidad
40
espermtica
se
haca
exclusivamente
mediante
mtodos
semicuantitativos. Estos mtodos evalan el porcentaje de

espermatozoides mviles, as como el tipo de movimiento que
presentaba la media de una poblacin espermtica. Estas medidas
ofrecen una descripcin general de la motilidad espermtica, pero la
exactitud y precisin estn limitadas por las condiciones del sistema
de medida y por la destreza del observador.
A pesar de ello, la valoracin subjetiva de la motilidad hecha por

personas experimentadas es de gran valor, debido a que la
informacin se presenta de forma inmediata, al tiempo que es un
mtodo econmico y de fcil eje cucin.
Los primeros intentos de objetivitas del movimiento espermtico se

basaron en exposiciones fotogrficas mltiples o video micrografas.
Estos mtodos son tediosos, largos y costosos, por lo que hoy en
da no son de eleccin. Sin embargo, la apari cin de los sistemas
informatizados de digitalizacin de imgenes abri un nuevo campo
en el estudio de la motilidad de los espermatozoides. Estos
sistemas, denominados genricamente CASA (Computer Assisted
Motility Analysis), han automatizado y simplifica do el proceso. El
anlisis computarizado de la motilidad fue propuesto por primera
vez hace 25 aos y es usado actualmente en centros de
investigacin en androloga y centros de reproduccin asistida.
41
El CASA establece, de una manera efectiva, medidas cu antitativas

del movimiento individual de los espermatozoides.
Con este tipo de anlisis se espera obtener medidas correctas de la
motilidad espermtica que proporcionen informacin precisa acerca
del
estado
funcional
del
axonema
de
las
membranas
espermticas. (1)
Los sistemas automticos de medicin de imgenes se basan en la

captura sucesiva de espermatozoides en movimiento provenientes
de un microscopio.
Estas imgenes se digitalizan identificando las clulas espermticas

que contienen la primera i magen. Luego se procede al seguimiento
de estas clulas en imgenes sucesivas y al establecimiento de
trayectorias definitivas.
Las trayectorias se procesan matemticamente, obteniendo as

resultados numricos precisos. Los parmetros determinados para
cada espermatozoide son la velocidad de movimiento sobre la base
de varios descriptores las trayectorias que realiza la cabeza del
espermatozoide y la frecuencia de los cambios de direccin que
efecta.
Actualmente, tambin existen en el mercado varios ti pos de CASA

que capturan el movimiento espermtico y lo analizan, tanto en
42
tiempo real, como de manera diferida, aportando un gran volumen

de informacin. (1,6)
Imagen 3 Componentes de un sistema CASA

(Microptic/Barcelona, Versin 2002).
Componentes de un sistema CASA (Microptic/Barcelona, Versin

2002).
2.2.3 Viabilidad.
La rotura de la membrana plasmtica est claramente asociada con

la prdida de viabilidad celular, pero una membrana plasmtica
intacta no siempre indica que la clula sea viab le. El procesado del
semen, incluida su criopreservacin, es "estresante" para el
43
espermatozoide y afecta, primeramente, a sus membranas. Los

daos que pueden producirse en stas pueden ser modificaciones
en su organizacin, permeabilidad y composicin lip dica. Las
membranas espermticas que pueden verse afectadas por la
criopreservacin incluyen la membrana plasmtica, la membrana
externa del acrosoma y las membranas mitocondriales.
En cualquier caso, la criopreservacin, cuyo propsito es garantizar

la supervivencia del semen, causa daos irreversibles en la
membrana plasmtica,
lo que conlleva la muerte de un g ran
nmero de espermatozoides o en los supervivientes, cambios

similares a los observados durante la capacitacin espermtica, que
provoca un acortamiento de su perodo de vida til. La evaluacin
morfolgica de la integridad de la membrana plasmtica se realiza
usando la ptica de contraste de fases, la ptica de contraste
diferencial de interferencia o de Nomarski o las tincione s supra
vitales, como el verde rpido/eosina o la eosina/azul de anilina, el
tripn azul/Giemsa o el amarillo de naftol/eritrosina.
Tambin ha sido valioso el examen a travs de la microscopa

electrnica o de barrido, para determinar aspectos de la inte gridad
espermtica.
Actualmente, se estn utilizando diversas tinciones fluorescentes,

las cuales presentan una mayor precisin en el estudio de las
caractersticas de la membrana plasmtica. As, se ha estado
44
usando ampliamente el diacetato de carboxifl uorescena y el ioduro

de propidio, visualizndose con esta tcnica los espermatozoides
viables de color verde, frente a los muertos que se observan de
color rojo anaranjado (1,6) .
Imagen 4 Espermatozoides teidos con ioduro de propidio y

diacetato de carboxifluorescena. El espermatozoide con
membrana plasmtica intacta se observa verde brillante, el
moribundo comienza a estar rojo y el daado es claramente
rojo (1000x) (1).

45
2.2.4 Estado del acrosoma.
El acrosoma juega un papel fundamental en la fecundacin y esta

importancia hace que convenga realizar una valoracin especfica
del mismo. En un espermatozoide que tenga el acrosoma en
perfectas condiciones se pueden distinguir tres regiones claramente
diferenciadas en la cabeza: la zona acrosomal, con un borde apical,
la zona postacrosomal y el segmento ecuatorial entre ambas.
Las muestras seminales con alta proporcin de acrosomas

alterados o ausentes suelen tener una fertilidad baja.
Para determinar el estado del acrosoma se han usado desde hace

mucho tiempo diferentes tinciones. Entre stas tenemos la tincin
de eosina/verde rpido Giemsa y la de eosina/nigrosina, las dobles
y triples tinciones basadas en la combinacin del azul tripn con
otros colorantes y tinciones comerciales como el Spermac7.
Recientemente,
se
han
utilizado
anticuerpos
acrosomales
especficos marcados con flu orescencia.
En el caso de los espermatozoides bovinos, su tamao permite

poder valorarlos mediante un microscopio ptico de contraste de
fases con un objetivo de gran aumento
46
Imagen 5 Izquierda, espermatozoide con acrosoma intacto.

Derecha, espermatozoide con acrosoma daado (1000x).

2.2.5 Pruebas de funcionalidad espermtica.
La membrana espermtica es una estructura dinmica que participa

en el reconocimiento y transporte de molculas. Estas funciones
permiten que el espermatozoide adapte su metabolismo al medio
47
circundante, proporcionando as un sistema molecular para el

reconocimiento del ovocito.
El anlisis de la integridad de la membrana constituye una

informacin importante en la evaluacin de la fertilidad del macho.
Adems, esta integridad no slo es fundamental para el
metabolismo espermtico, sino que tambin lo es
para una
adecuada capacitacin y reaccin acrosmica, y, por tanto, para la

fertilidad del macho.
Un grupo de pruebas de funcionalidad espermtica que han

centrado gran inters por su simplicidad y su valor predictivo son las
de resistencia osmtica.
Estas pruebas se basan en la capacidad del espermatozoide para
captar agua en un medio hiposmtico y en que la hinchazn
osmtica est asociada con el enrollamiento de la cola del
espermatozoide, que se desenrolla cuando la clula es devuelta a
un medio isosmtico.
Dentro de las pruebas desarrolladas a partir de este fenmeno

destaca el test de endsmosis que consiste en situar los
espermatozoides en presencia de un medio de presin osmtica
ms baja que la fisiolgica, lo que causa una entrada de agua en l a
clula en un intento de equilibrar la presin osmtica interna con la
del medio externo. Para que esta respuesta se produzca, la
membrana plasmtica del espermatozoide debe estar ntegra y con
48
los
mecanismos
de
intercambio
de
fluidos
funcionando
correctamente. La entrada de agua provoca en estas clulas un

hinchamiento y enrollamiento del flagelo.
Las clulas con la membrana fsica o funcionalmente daada no

experimentan cambios en la forma del flagelo. Los valores
obtenidos en esta prueba se correlacio nan con otros parmetros de
calidad seminal, como la motilidad, la viabilidad o la morfologa. (4)
2.2.6 Morfologa.
El anlisis morfolgico de lo s espermatozoides es uno de los

principales componentes de la evaluacin de las caractersticas de
una muestra seminal. La valoracin de la morfologa del
espermatozoide se basa en la relacin directa que haya entre la
proporcin de espermatozoides anormales en el eyaculado, el tipo
de defecto morfolgico y su relacin con la fertilidad in vivo de los
toros. Atendiendo a una clasificacin estrictamente morfolgica, las
anomalas que puedan generarse se clasifican en anomalas en la
cabeza, en el tracto intermedio y en la cola.
Segn el rgano donde pueden haberse generado diferenciamos
las anomalas primarias y secundarias. Esta evaluacin de la
morfologa espermtica puede ser utilizada para eliminar toros con
pobre calidad seminal.
49
Imagen 6.- Izquierda, espermatozoide negativo al test de

endsmosis. Derecha, espermatozoide endmosis positivo
(1000x).

50
Imagen 7 y refleja la funcionalidad de los testculos, epiddimos

y glndulas accesorias, por lo que siempre deben estar
incluidas en las pruebas de evaluacin espermtica Cabeza
desprendida de un espermatozoide, junto a otro normal (400x).

51
Imagen 8 morfologa espermtica

esquema de un espermatozoide .

52
2.3 COLECTA DE SEMEN
2.3.1 Coleccin de semen con electroeya culador.
La coleccin con electroeyaculador permite extraer semen a toros

sin previo acostumbramiento. Esto es de suma importancia para la
evaluacin de los toros a campo, donde la coleccin de semen se
puede realizar en la manga en el mismo momento del examen
clnico.
2.3.2 Equipo.
Existen diferencias en el modo de operar y en cmo los toros

responden a los distintos tipos de electroyaculadores. La eleccin
de la clase de electroeyaculador es generalmente una cuestin de
preferencia personal. (7)
Hay
algunas
diferencias
significativas
en
las
terminales
intrarrectales particularmente en cuanto al dimetro, el peso y la

orientacin de los electrodos. Es comnmente aceptado que debe
ser pesada para que los electrodos tengan un buen contacto con
los
rganos
reproductivos,
aunque
recientemente
se
ha
desarrollado un nuevo electroeyaculador (Sire Mster) usando fibra
53
de vidrio liviana. En una prueba prctica hecha con este eyaculador,

se comprob que la eficiencia del Sire Mster es comparable con
equipos usados previamente. Terminales rectales de un buen
dimetro producen una respuesta mayor que las de tamao
pequeo a un mismo estimulo elctrico. Para la mayora de los
toros que pesan entre 550 -900 Kg. de peso vivo, una terminal de
6.5 a 7.5 cm. de dimetro parece ideal. En toros de mayor tamao y
ms viejos, una terminal de 9 cm. de dimetro incrementa la
probabilidad de obtener un adecuado estmulo que determine una
buena ereccin del pene y eyaculacin. Las terminales rectales
modernas poseen tres electrodos distribuidos con una separacin
de 1 cm y son ubicados completamente dentro del recto y con los
electrodos orientados ventralmente.
Una extensin en forma de U que se ubica alrededor de la cola

asegura una apropiada orientacin de los electrodos durante la
electro eyaculacin. Este
tipo de terminales producen una
apropiada protrusin del pene y electro eyaculacin con una mnima

estimulacin de otros msculos. Las viejas terminales en cambio
tenan cuatro electrodos ubicados en toda la circunferencia
resultando en una excesiva estimu lacin de los msculos de los
miembros posteriores y del anca de los toros. Usualmente las
terminales de cuatro electrodos producen un estmulo desparejo en
los msculos de los cuartos traseros provocando que una pierna se
extienda ms que la otra, resulta ndo en la prdida de equilibrio del
toro. Es tambin recomendado que las terminales de cuatro
54
electrodos se inserten 2/3 en el recto hasta la protrusin del pene y

luego se inserta el resto para la estimulacin de la eyaculacin.
Este es un inconveniente que no ocurre con las terminales de tres
electrodos ventrales. Hay aqu gran espacio para la investigacin en
el desarrollo de nuevos tipos de terminales con el objetivo de
reducir la contraccin de los msculos de los cuartos tanto como
sea posible pero que, por el otro lado, produzcan una protrusin del
pene y eyaculacin con un mnimo de estimulacin elctrica. (7)
Recientemente, se han desarrollado nuevas terminales con dos
electrodos ventrales y a su vez, cada uno de estos electrodos est
dividido en tres segmentos. Los segmentos del electrodo se pueden
activar separadamente. El segmento ms caudal es utilizado para
producir ereccin y protrusin en todos los toros y tambin para
producir la eyaculacin en los toros jvenes. En toros adultos el
segmento medial y ocasionalmente el craneal son los ms usados
en la estimulacin de la eyaculacin. (7) .
2.3.3 Sujecin.
Para la extraccin de semen por electroeyaculador se recomienda

tener una manga de 76 cm de ancho que puede albergar a la
mayora de los toros. Se debe colocar detrs del toro un poste
fuerte a una altura ideal entre 71 -76 cm y otro poste a una altura de
30 cm del suelo como corrector durante la electro eyaculacin, dado
55
que es comn que los toros pierdan el equilibrio. Si es posible los

toros deben estar parados libremente y la manga debe tener un
buen piso. Los toros que son agarrados de la cabeza con el cepo
comnmente se arrodillan y luego durante la electro eyaculacin se
echan, y en estos casos un cinturn por debajo del trax puede s er
de utilidad. (7)
2.3.4 Tcnica de estimulacin.
Es muy importante destacar que la cantidad de estimulacin debe

ser estimada a travs de la respuesta del toro y no prestando
atencin al voltaje del aparato. La primera estimulacin debe ser
pequea hasta que el toro demuestre una respuesta mnima. Las
estimulaciones sucesivas deben ser incrementadas de a poco,
deben durar uno o dos segundos y despus deben discontinuarse
por medio segundo antes de comenzar con la siguiente
estimulacin. El fluido pre seminal no debe ser colectado porque
diluye el eyaculado y puede llevar a falsos resultados. Cuando el
fluido comienza a ponerse ms espeso y opaco comienza la
coleccin en el cono o en el tubo de examinacin colocado
directamente en el pene. Si el toro no protruye el pene, el ayudante
debe presionar sobre la flexura sigmoidea detrs del escroto y el
operador debe estar listo con una gasa para tomar el pene apenas
protruya. Aunque la estimulacin se contina hasta la coleccin de
56
2 a 5 ml de semen, la canti dad de semen colectado no tiene mucho

que ver con la calidad. La mayora de los toros eyaculan sin mucha
estimulacin, sin embargo, si se ha alcanzado el mximo de
estimulacin sin conseguir eyaculacin, se deben dar cuatro o cinco
estmulos mximos seguid os de uno o dos minutos de descanso.
El pene debe ser agarrado con una gasa y mantenido durante el
perodo de descanso dado que si lo dejamos libre luego no protruir
para la segunda coleccin. El operador debe estar atento a la
coleccin porque a menudo el semen es emitido cuando el toro se
relaja en el perodo de descanso. Se puede hacer una segunda
prueba para colectar semen tan pronto como el toro haya tenido un
corto perodo de descanso.
En la mayora de los casos el semen ser eyaculado al primer

estmulo despus del descanso. Un tiemp o similar de descanso se
les debe dar a los toros que eyaculan fcilmente cuando se desea
otra muestra. Frecuentemente, la segunda muestra es mucho ms
concentrada que la primera. El uso del cono no es siempre
necesario. El pene puede ser sostenido en una mano y manejar el
electroeyaculador con la otra. Hay un peligro inherente en este
mtodo que es cuando el toro se acuesta durante la maniobra y la
mano del operador puede quedar atrapada entre el toro y las barras
de la manga. Se debe evitar tomar el pene sobre la regin prepucial
para evitar que el pene se introduzca dentro del prepucio y se
pierda. Cuando el fluido emitido comienza a ser ms espeso, el
medio de coleccin es colocado sobre la punta del pene y sostenido
57
en ese lugar con el dedo menor de la mano tomando el pene con el

resto de los dedos durante toda la electro eyaculacin. La ventaja
de este mtodo es que el operador puede sentir la estimulacin a
travs del pene as como tambin mirar la respuesta del toro. El
mango de coleccin y el cono de ben ser tenidos a mano en caso
que el toro no protruya el pene y el semen deba ser colectado
desde el prepucio. De todos modos se debe tratar de hacer el
mayor esfuerzo por conseguir la protrusin del pene as ste y el
prepucio pueden ser examinados. Norm almente no se puede
colectar semen por electro eyaculacin de aproximadamente el 2%
de los toros frtiles. La razn de este fracaso puede residir en una
tcnica defectuosa, equipo inadecuado o escaso descanso sexual
de los toros. El uso de una vaca y una v agina artificial debe ser
considerado si el toro es difcil de colectar. Otra alternativa es
colocar al toro con una vaca en celo que previamente se le ha
lavado la vagina con solucin salina para la mucosidad. Luego que
la hembra ha sido montada es usualm ente fcil aspirar una muestra
de semen de la regin craneal de la v aginal (7).
2.3.5 Tcnica de electroeyaculacin.
La introduccin de aire durante la examinacin dejando grandes

cantidades de materia fecal
en el recto, y la insuficiente
estimulacin manual previa a, la electro eyaculacin, pueden
58
generar dificultades en la obtencin del eyaculado o producir una

muestra pobre. El volumen y la densidad estn directamente
afectados por la cantidad de fluido preseminal colectado, el
volumen y nmero de e yaculados colectados y la contaminacin
con orina. El fluido preseminal debe ser evitado y muestras de gran
cantidad de semen no son necesarias dado que no reflejan la
capacidad de producir esperma. Efectividad del equipo de
Electroeyaculacin. Las termina les de electrodos rectales pueden
estar pintadas con esmalte, resultando en aislamiento o reduccin
de la transferencia de los estmulos elctricos al toro. El barniz es
fcilmente quitado con una lija fina o lana metlica y debe ser hecho
regularmente.
En electro eyaculadores operados a batera, las de cadmio -nickel

deben estar completamente descargadas antes de ser recargadas.
Si no se sigue este procedimiento, luego de un corto tiempo de uso
las bateras no volvern a lograr una carga completa y bater as con
poca carga producen una estimulacin insuficiente y dificultan la
obtencin de un buen eyaculado. Las terminales rectales de 6.5 a
7.5 cm. de dimetro son eficientes para la mayora de los toros. Sin
embargo, en toros muy grandes es comn que produz can una
insuficiente estimulacin y son necesarias las terminales de 9 cm de
dimetro (toros de ms de 900 Kg.).
Respuesta individual de los toros al estmulo toros asustados o de
mal carcter, que no recibieron una adecuada estimulacin por
59
masaje rectal, son comnmente difciles de colectar y producen

muestras de poca densidad.
En algunas circunstancias se puede intentar tranquilizar al animal.

Sin embargo, los toros que han recibido acepromacina como
tranquilizante son en general ms difciles de colect ar y
frecuentemente el semen est muy contaminado con orina. Los
toros que han eyaculado varias veces en las ltimas 24 horas (Ej.
toros que estn en servicio) son generalmente difciles de electro
eyacular y producen semen de baja densidad. (7)
2.3.6 Disturbios en la funcin testicular y los epiddimos.
Disturbios en la espermatogenesis y degeneracin testicular

resultan en una reduccin de la produccin de esperma, muestras
de baja densidad y una gran cantidad de defectos en el esperma.
Generalmente los toros que poseen hipoplasia testicular producen
muestras seminales de baja calidad. Sin embargo toros con
testculos pequeos que hayan tenido un descanso sexual pueden
producir eyaculados de volumen normal aunque la produccin diaria
de semen es baja. Toros con aplasia segmental o con un bloqueo
unilateral del epiddimo y que tengan un descanso sexual adecuado
tambin pueden eyacular volmenes normales de semen de buena
60
concentracin aunque su produccin diaria de espermatozoide est

reducida al 50%. (7).
2.4 CONGELACIN DE SEMEN BOVINO
2.4.1 MTODO DE CONGELACI N
2.4.2 Procesado de la muestra.
Al llegar el semen al laboratorio se toma una pequea muestra

para evaluarlo.
Luego se mezcla con igual cantidad de diluyente, se

homogeneiza suavemente y se deja 10 minutos a bao Mara a
36 grados.
Durante este tiempo se debe calcular la dilucin final,

determinando la concentracin del semen directamente por
fotometra o contando en una cmara de Neubauer.
La dilucin final se puede calcul ar de la siguiente manera
VR (volumen recolectado) x CE (concentracin del eyaculado) =

DF (dilucin final (ml)
Este resultado se multiplica por CF (concentracin Final)
61
Ejemplo:
5 ml eyaculado.
Concentracin 1700x106 Esp.
Totales/pajuela = 30 millones.
VR1 (ml) X CE1 (esp/ml) = VR2 (ml) x CE2 (esp/ml)
5 x 1700 x 106 = VR2 x 60 x 106 VR2 = 5ml X 1700 x 106 =

141.6 ml.
Esto es igual a = volumen final diluido (VFD) .
60 x106 VFD eyaculado = volumen de diluyente a agregar

141.6 ml 5 ml =131.6 ml.
2.4.3 Uso del fotmetro.
Encender el fotmetro 30 min antes de realizar la lectura.
Calibrar con 4 ml. de SF (1) (blanco). SF: Cl Na 9% 7% .
Pajuela mediana: vol. til 0.49 ml, vol. total tomado 0.52 ml .
Pajuela fina: vol. til 0.21 ml, vol. total tomado 0.23 ml.
Diluir 20ul de semen en 4 ml. de SF (tasa de dilucin 1/200).
La muestra de semen se saca de la mitad del tubo.
Homogeneizar y colocar en la cubeta del fotmetro .
Esperar 3 seg. La estabilizacin de las turbulencias formadas

luego de homogeneizar la cubeta (mezcla de suero fisiolgico y
semen), ya que las mismas pueden modificar la lectura.
62
En el modelo de fotmetro IMV Aiglon estos 3 seg estn

incluidos en el programa informt ico, por lo tanto es suficiente
apretar la tecla measure para que el fotmetro comience a
hacer la lectura a los 3 seg.
Establecer el nmero de espermatozoides por pajuelas.
Realizar la lectura de los ml de diluyente necesario y el nmero

de dosis finales. (10)
Puede utilizarse citrato de sodio al 2,92 %.
No utilizar suero formolado porque modifica la concentracin.
El nmero de espermatozoides por pajuela debe asignarse en

funcin de la calidad original del semen, la edad del toro y de su
ritmo de colecta. (9)
Con toros muy frtiles pueden utilizarse concentraciones

extremadamente bajas de 5 -8 4 millones de espermatozoides
totales/pajuela, siempre que el toro tenga un ritmo de colecta
continuo (ej. 2 eyaculados 2 veces por semana ) (8, 9,10).
Cambiar el filtro del fotmetro cada 3 aos y la lmpara cada 1.5

aos. La precisin del fotmetro es del 95 %.(10)
2.4.4 Evaluacin de la concentracin por

cmara de Neubauer.
Se toma una muestra del semen a evaluar con la pipeta de

glbulos rojos y se enrasa a 0,1.
63
Se completa con agua hasta el enrase superior.
Se homogeniza el semen con el agua, se descartan las 3 o 4

primeras
gotas
luego
se
deposita
una
gota
en
el
hemocitmetro (entre la cmara y el cubre objetos).
Se observa con microscopio de contraste de fase con objetivo

de 400X. Se cuentan los espermatozoides que se encuentran
dentro de los 4 cuadrados primarios que estn en los extremo s
del cuadriculado de la cmara.
Estos son los cuadrados donde su cuentan los glbulos blancos

y tienen 1 mm2 de superficie. (8, 9,10) El nmero total de
espermatozoides se divide por 4 para obtener el nmero
promedio de espermatozoides por mm2 este nmero se
multiplica por 10, porque la altura de la cmara es de 0.1mm y
tenemos que calcular la cantidad de espermatozoides por mm3
de semen diluido luego se multiplica por 100 que es el factor por
el cual hemos diluido el semen (si hemos cargado semen hasta
0,1 en la pipeta).
La frmula resultante es la siguiente (10) N de espermatozoides x

10 x 100 = cantidad de espermatozoides por mm3 .
64
Figura 1 cmara de Neubauer Esquema de la cmara de

Neubauer utilizada para el recuento de espermatozoides como
se puede ver en la figura el retculo posee una zona
cuadriculada de 3 mm de lado (9 mm2), dividida en nueve
cuadrados de 1 mm de lado (1 mm2) denominados cuadrados
primarios.
Los cuadrados primarios en las esquinas I, II, III y IV estn a su
vez divididos en 16 cuadrados secundarios. Para el recuento
de espermatozoides utilizamos los 4 cuadrados primarios.
Jernimo L. Cabrera Instituto de Reproduccin Animal Crdoba

(IRAC), Facultad de Ciencias Agropecuarias Universidad Catlica
de Crdoba 106, 5000 Crdoba, Argentina., CONICOR .
65
2.4.5 Pasos para el proceso de la dilucin.
Colocar el diluyente calculado en un recipiente seco y estril ,

luego
el semen tamponado sobre el diluyente y no
homogeneizar.
Dejar 10 min. a temperatura de laboratorio (20 Grados al abrigo

de la luz)
Homogeneizar suavemente y en vasar en pajillas a temperatura

ambiente
Poner las pajillas en heladera a 4C. Asegurarse que la curva de
enfriamiento regular llegue de temperatura de laboratorio (20 C)

a temperatura de heladera (4 C) en 1 hora y media.
Equilibrar en 4 C por un mnimo de 5 hs (No abrir la heladera)
Colocar las pajillas en un catre de congelado previamente

enfriado a 4 grados y congelar. (10).
2.4.6 Evaluacin de la dilucin.
Una vez se hace la dilucin total se toma una muestra pequea,

una gota, para evaluar nuevamente la motilidad individual
progresiva de sus esp ermatozoides y verificar que el proceso de
homogenizacin y de dilucin haya sido correcto, que no se vea
66
demasiado concentrado y no se encuentre porciones aglutinadas

dentro de la mezcla. (10)
2.4.7 Importancia y propiedades de los

El xito de la inseminacin artificial en bovinos, porcinos y ovinos

depende grandemente del desarrollo de medios de diluyentes
satisfactorios. Los pioneros de la inseminacin artificial encontraron
que el semen no diluido viva por un corto perodo de tiempo y que
al refrigerarlo a 5 grados centgrados, causaba la muerte de la
mayora de los espermatozoides. As surgi la idea de la utilizacin
de los extenders o tambin llamados diluyentes del semen. Estos
diluyentes no solo debe ran incrementar el volumen del eyaculado,
sino
tambin
proteger
los
espermatozoides
durante
la
refrigeracin y el congelado. Las siguientes son las propiedades

que un buen diluyente debe poseer: (8,9)
Equilibrio de solucin isotnico como el semen.
Debe poseer capacidad de buffer (prevenir los cambios de pH,

neutralizando el cido producido por el metabolismo de los
espermatozoides).
67
El diluyente debe proteger a los espermatozoides del shock de

enfriamiento durante la refrigeracin desde la temperat ura
corporal hasta 5 grados centgrados (lecitinas y lipoprotenas).
Debe
proveer
de
nutrientes
para
el
metabolismo
del
espermatozoide.
Debe controlar la contaminacin bacteriana (antibiticos:

Gentamicina, Tilosina y Lincospectina).
Debe
proteger
al
se men
durante
la
congelacin
descongelacin (Glicerol).
Debe preservar la vida de los espermatozoides con la mnima

prdida de fertilidad. (8, 9,10).
2.4.8 Soluciones buffer utilizadas para diluir

el semen.
Las soluciones buffer que confor man la mayor parte del diluyente
seminal poseen un doble rol:
Uno es neutralizando el cido lctico producido por la actividad
metablica de los espermatozoides (evitando los cambios de pH).
El otro es proveyendo una correcta concentracin del buffer
conformando un medio isotnico para el semen.
Las sales utilizadas deben ser no txicas. Las siguientes son cuatro
soluciones que cumplen con estos requerimientos:
68
Solucin de buffer fosfatado: Esta fue descripta en 1939.

Actualmente no se utiliza, dado que al ser agregado a la yema
de huevo produce una mezcla opaca, la que no permite una
clara visualizacin microscpica del semen.
Solucin de buffer citrato: La utilizacin de la solucin de citrato

de sodio deshidratado como buffer fue descubierta en 1941.
Esta estaba compuesta de 2,9 gramos de citrato de sodio
deshidratado en 100 mililitros de agua destilada.
Este diluyente reemplaz a la anterior, dado que permite una

buena visualizacin microscpica del semen.
Solucin de buffer Tris: El tris aminometan o fue utilizado como

medio diluyente para semen de toros desde 1963. El Tris buffer
posee la propiedad de prolongar la vida del semen a
temperatura ambiente.
La leche entera o descremada, calentada a 90 grados

centgrados por 10 minutos, puede ser utilizada exitosamente
como otro diluyente seminal. (8,9, 10).
2.4.9 Agentes antimicrobianos para

Desde 1946 los antibiticos han sido utilizados para disminuir la

carga bacteriana del semen. La cantidad de microorganismos por
mililitro puede variar desde no detectables hasta varios millones.
69
Todo equipo utilizado en la colecta de semen, el procesamien to y el

almacenamiento del mismo, debe ser estril y no contribuir como
fuente de contaminacin. Una gran cantidad de microorganismos
han sido aislados del semen.
Mucho de ellos no son patgenos, pero compiten con el semen por

los nutrientes y producen metabolitos que disminuyen la viabilidad
seminal. Por aproximadamente 40 a_os se utilizaron diferentes
combinaciones de antibiticos hasta que finalmente la Asociacin
Nacional de Criadores de Estados Unidos (NAAB) recomend la
siguiente
asociacin
de
antib iticos:
500
microgramos
de
Gentamicina, 100 microgramos de Tilosina y 300/600 microgramos

de Lincomicina y Lincospectina, respectivamente. (10)
2.5 Uso de diluyentes comerciales.
Los
preparados
comerciales
utilizados
mundialmente
son:
BIOXCELL IMV Technologies ha desarrollado un nuevo diluyente

para semen bovino, libre de sustancias de origen animal,
especialmente
adaptado
para
producir
pajuelas
con
bajas
concentraciones de espermatozoides. BIOCIPHOS PLUSTM Es un

diluyente desarrollado por IMV en Fran cia, sus principales ventajas
son: Contiene sustancias de origen animal, es muy fcil de preparar
y su claridad facilita el anlisis del semen. Preparacin del
70
Biociphos Plus Homogeneizar el frasco de 100 ml y colocarlo en

bao Mara a 32 C durante 10 a 1 5 min. Preparar 400 ml de agua
bidestilada apirgena y colocarla a bao Mara durante 10 a 15 min.
Volcar en un elermeyer seco y estril el biociphos sin tocar los
bordes. Agregar los 400 ml de agua bidestilada Enjuagar el frasco
de Biociphos con la soluc in reconstituida Homogeneizar la
mezcla por rotacin y no sacudiendo para evitar la oxigenacin del
producto el producto est listo para ser usado. Debe utilizarse
dentro de las 6 horas de reconstituido para evitar la contaminacin
bacteriana. Si se quier e congelar la solucin reconstituida,
homogeneizar,
hacer alcuotas
y congelar en freezer.
No
recongelar. (10)
2.5.1 Triladyl.
Es un diluyente desarrollado por Minitub en Alemania. Al producto

comercial se le debe adicionar ye ma de huevo y agua bid estilada.
(9)
2.5.2 PASOS PARA ENVASADOS DE PAJILLAS
2.5.3 Clculos para el determinado del nmero de pajillas.
71
Al volumen total que tenamos anteriormente del semen ya diluido

lo debemos dividir por el volumen de cada una de las pajillas para
as saber cunto va a ser el nmero de pajillas a congelar.
Volumen final diluido (VFD) / Volumen de la pajilla (Vol. Paj.) =

Numero de pajillas.
Ejemplo: Continuando con el ejemplo anterior VFD/ Vol. Paj. =
Numero de pajillas 141.6 ml. / 0.5 ml. = 283 paji llas (10).
2.5.4 Con un equipo manual.
Poner las pajillas enhebradas en el peine.
Fijar con el broche sujetador de 15 pajuelas de 0.5.
Calzar el peine y conectar la bomba de vaco.
Sumergir las pajillas en una cuba con semen.
Cerrar el orificio superior del peine con el dedo.
Activar la bomba de vaco.
Las pajillas se llenan automticamente.
72
Vaciar la punta de la pajuela con el peine para que el sobrante

vuelva a la cuba con el semen.
Secar bien la punta de las pajillas.
Sellar con polvo alcohol polivinlico o con calor.
Secar nuevamente las pajillas para remover sobrantes de polvo.
Verificar que las pajillas hayan quedado selladas perfectamente.
Colocar el extremo de las pajillas selladas con polvo polivinlico

en un recipiente con agua a temperatura de laboratorio a los
efectos de polimerizar el alcohol. En caso tal de sella con esfera
previamente se colocaran las esferas de uno de los extremos
antes de cargas las pajillas y la esfera del extremo opuesto una
vez llenadas las pajillas haciendo la presin suficiente para que
queden bien selladas, pero dejando un espacio de aire
considerable, que evite el estallido de las mismas. Un ltimo tipo
de sellado puede hacerse mediante calor, en donde una vez
llenamos las pajillas, sellamos el extremo opuesto al algodn
con una plancha trmica por 10 seg, evitando que el calor haga
contacto directo con el material seminal y guarde igualmente un
especio prudente de aire dentro de la pajilla.
Secar bien la punta de las pajillas.
Poner las pajillas en una bolsa de nylon y sellarla bien.
73
Colocar la bolsa de nylon con las pajillas en un recipiente a

temperatura ambiente.
Llevar a la heladera y dejar 1 hora y media para llegar a 4

grados y luego dejarlas por 5 h. como mnimo (10).
2.5.5 Con equipo mecnico.
A diferencia del proceso anterior el proceso de empaque y sellado

se realiza por un sistema de vaco automtico y sellado por
ultrasonido. Se realiza con una maquina MRS1 de IVM. Igualmente
una vez empacadas son llevadas a la heladera y se dejan por una
hora para que lleguen a los 4 grados y luego se dejan por 5 horas
como mnimo. (8, 9,10)
2.5.6 Proceso de congelado.
Descripcin del equipo.
Rack.
Catre portapajuela.
74
Conservadora de icopor - cuba de congelamiento.
Nitrgeno Lquido.
Termocupla de hasta 250 C.
Timer (reloj).
Tanque de nitrgeno (10).
2.5.7 Pasos del procesado de congelado.
Todo el proceso desde ahora hasta el congelado de las pajillas

debe ser hecho a 4 grados.
Colocar en un recipiente de icop or nitrgeno lquido de manera

que la altura a la que deben quedar las pajillas en el catre de
congelado sea de -120 grados (Aprox. 4 cm) Controlar con la
Termocupla.
Sacar las pajillas de la bolsa y secar las pajillas con papel .

previamente enfriado.
Realizar una evaluacin previa al congelado.
Colocarlas en el rack y catre portapajillas.
Llevar el catre portapajillas con las pajuelas a la cuba de

congelado.
durante 10 min. La temperatura de congelado se debe mantener

entre -70 y -110 (regular agregando nitrgeno cuando sea
necesario).
Despus de los 10 min volcar la s pajillas en nitrgeno lquido.

75
Almacenarlas en Gobelets con el algodn hacia abajo.
Guardarlas en un termo.
Evaluar definitivamente a las 48 h. (10)
2.5.8 Evaluacin del semen congelado.
El semen al ser congelado sufre una serie de procesos que pueden

alterar la calidad del semen original.
Muchas veces semen de alta calidad al momento de la congelacin
ha resultado en semen de mediana y baja calidad al ser
descongelado.
De aqu, la importancia de evaluar el semen luego de la
congelacin. (10)
2.5.9 Proceso de descongelado.
A las 48 horas despus de procesar la muestra se retiran dos

pajillas por lote, y se evala su calidad, se descongela la pajilla en
agua a 37C durante 1 min, se seca la pajilla, y se coloca el semen
dentro de un recipiente de 1cc, para as mantener la muestra a la
temperatura adecuada y evaluarlo normalmente. (8, 9,10 )
76
2.6 EVALUACIN DE LA MOTILIDAD
2.6.1 Escala de evaluacin.
0: Sin movimiento.
1: Leve movimiento de cola sin desplazamiento progresivo.
2: Lento movimiento de cola co n algo de movimiento progresivo.
3: Movimiento progresivo a velocidad lenta.
4: Movimiento progresivo rp ido.
5: Movimiento progresivo rpido donde es difcil s eguir a una

clula Determinada.
El movimiento progresivo se debe evaluar inmediatamente

despus del descongelado y luego de 2 horas de incubacin a
37 C. El mnimo aceptable de motilidad es de 25 % de clulas
mtiles a una velocidad 3 inmediatamente desp us del
descongelado y un 15 % de clulas mtiles a una velocidad de 2
luego de 2 h. de incubacin a 37 C. (10)
77
2.6.2 Evaluacin de la morfologa espermtica

luego del descongelado.
La motilidad y la integridad del acrosoma son dos caractersticas

muy durante el proceso de la congelacin y la descongelacin. La
morfologa en general se mantiene sin grandes cambios. Sin
embargo es muy importante hacerlo porque cambios bruscos en la
calidad seminal pueden pasar desapercibidos por el centro de IA en
su fase ms temprana. La evaluacin se realiza al igual que
afectadas para semen fresco; una gota de semen ms una gota de
eosinanigrosina y se cuentan al menos 100 clulas. (10)
El mnimo aceptable es 70 % de los espermatozoides n ormales.

(11).
Viabilidad: Se consignan los datos de % de motilidad progresiva,

grado de motilidad y % de acrosomas intactos inmediatamente
despus de descongelado y luego de dos horas (mantenido en
bao mara a 37 C, de acuerdo a las pruebas descriptas ).
Morfologa: se cuentan por lo menos 100 clulas y se anotan los %
de normales y de las principales anormalidades.
78
2.7 CONCENTRACIN
Se puede utilizar la cmara para contar glbulos rojos de acuerdo a

lo descripto para contar el total de clulas y luego, de acuerdo al %
de motilidad progresiva a las 0 h, se determina la cantidad de
clulas mtiles por dosis. El semen puede resultar sati sfactorio
cuando supera los mnimos establecidos en Viabilidad, Morfologa y
Concentracin.
Cuestionable cuando existe uno de estos parmetros ligeramente
por debajo del mnimo exigido e insatisfactorio cuando existe un
parmetro muy por debajo del mnimo , o dos o los tres ligeramente
disminuidos. (10)
2.7.1 MNIMO ACEPTABLE.
Motilidad progresiva: 0 h = 25 % con grado 3.
h = 15 % con grado 2.
Acrosoma: 0 h = 60 % intactos.
h = 40 % intactos
70 % normales.
No ms del 15-20 % de defectos de cabeza .
No ms del 25 % de defectos de acrosoma y cola .
79
En nmero ideal es alrededor de 10 millones de clulas viables

por dosis (10).
2.8 INSEMINACIN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO (I.A.T.F.)

Y PROTOCOLOS DE SINCRONIZACIN .
2.8.1 Inseminacin artificial a tiempo fijo.
La inseminacin artificial a tiempo fijo o a observacin de celos es

una muy buena herramienta biotecnolgica con la cual cuenta el
mdico veterinario que se centra en el rea reproductiva para
mejorar los ndices reproductivos de un hato ya sea lechero, de
carne o doble propsito a continuacin se describe uno de los
muchos trabajos realizados en cuanto a este tema con sus
respectiva base terica. Los tratamientos p ara sincronizar los celos
y las ovulaciones a travs del control de las ondas de desarrollo
folicular del ovario, permiten inseminar sistemticamente un gran
nmero de vientres en el mismo horario obtenindose ndices de
preez idnticos a los obtenidos co n celo natural. Este desarrollo
constituye un avance de gran importancia para la aplicacin de la
inseminacin artificial y una herramienta complementaria del semen
congelado, que sin dudas abre nuevos horizontes para la industria
ganadera. (11)
80
2.8.2 Metas que se buscan.
Inseminar el 100% del rodeo a tiempo fijo (IATF) y obtener un alto

ndice de preez en novillas y vacas secas (60 -65%) y del 50-60%
en vacas con cra. Luego controlar el retor no al primer celo e
inseminar, para finalmente dar servicio de repaso con toro. Obtener
un 90% de los vientres preados en los primeros 90 das posparto.
2.8.3 Ventajas.
No es necesario detectar celo.
Es posible inseminar muchas vacas en un da de trabajo.
El porcentaje de concepcin es similar a los trat amientos

convencionales. Es una tcnica especialmente til para campos
en expansin y con problemas de deteccin de celos.
Se pueden implementar tanto en hatos con gran cantidad de

vientres como pequeos.
81
2.8.4 Beneficios.
Mejoramiento Gentico rpido.
Repoblamiento Bovino.
Programacin de cruzamientos.
Control de vientres.
Programa de reproduccin controlada.
Agrupamiento de animales y trabajo.
Reduccin de DA y IEP.
Disminucin de costos de operacin Aumento de la

productividad.
82
2.8.5 xito de la I.A.T.F.
Se basa en el conocimiento de 3 reas fundamentales.
Fisiologa del ciclo estral.
Productos farmacolgicos y su efecto dentro del ciclo estral.
Factores de manejo y seleccin de los animales. (11).
2.8.6 Seleccin de hembras para un programa de IATF.
2.8.7 Condicin Corporal 1.0 Flaca /Emaciada.
La estructura sea del hombro, dorso y cadera es angulosa, muy

sobresaliente y spera al tacto.
Hay una severa prdida muscular con ausencia total de grasa y

debilidad fsica.
83
Imagen 9 Condicin Corporal 1.0 Flaca / Emaciada .
CBR la espiga, presentacin inseminacin artificial. cursos de

capacitacin 2003 Cesar Colombia
2.8.8 Condicin Corporal 1.5 Flaca /Conserva flaca.
Estructuras seas con alguna cobertura muscular, especialmente

en el hombro y cuarto posterior.
Las apfisis espinosas y transversas de las vrtebras se ven con
facilidad, son speras al tacto y muestran los espacios entre ellas.
84
Imagen 10 Condicin Corporal 1.5 Flaca / Conserva flaca.

La cobertura muscular ha aumentado pero es an insuficiente para

cubrir costillas o rellenar el dorso, lomo y cadera.
Las apfisis espinosas todava son visibles y las tuberosidades de
la cadera se mantienen angulosas. (10)
2.8.9 Condicin corporal 3 Lmite / Manufactura.
Las marcas de las costillas anteriores no son visibles.
85
Los cuartos posteriores presentan una cobertura muscular de forma

recta.
Las tuberosidades de la cadera comienzan a redondearse. Se
detecta leve mullidez en la zona lumbar. (11)
Imagen 11 Condicin Corporal 3 .0 Flaca / Manufactura.

2.9 Condicin corporal 3.5 ptima / Empulpada.
No son visibles las costillas excepto en animales desbastados. La

zona lumbar y la grupa comienzan a redondearse. La zona media
de las costillas comienza a palparse esponjosa. Las reas a cada
lado de la base de la cola estn rellenas pero no abultadas. (12)
86
Imagen 12 Condicin Corporal 3 .5 Flaca / Emaciada.

2.9.1 Condicin corporal 4 ptima / Consumo especial.
Los cuartos posteriores se observan rellenos y redondeados.

La cobertura de las costillas, el ala de la cadera y base de la cola es
gruesa y muy esponjosa. (11)
87
CBR la espiga, presentacin inseminacin artificial. Cursos de

capacitacin 2003 Cesar Colombia .
CBR la espiga, presentacin inseminacin artificial. Cursos de

88
2.9.2 Protocolos de sincronizacin.
2.9.3 Tratamiento con prostaglandinas.
La respuesta no es del 100% porque no todos los cuerpos lteos

maduros son lisados por la PG . Vacas entre los das 6 a 16
responden a la primera PG.
Las que no responden a la primera
dosis a la segunda se
encuentra en los das 6 a 9 y responden a esa segunda aplicacin.

(6, 13,11).
DIA 6: 25% de los CLs reponden a la PG.
DIA 7: 66% de los CLs reponden a la PG.
DIA 8 en adelante: Menos del 100% reponden a la PG.
Nota animales cclicos y en bu en plano nutricional (CC). Se dan

celos dispersos.
500 mcg en fase luteal animales que estaban y no en la 1era PG .
89
Figura 2 protocolo prostaglandinas PG
2.9.4 Variaciones del tratamiento con prostaglandinas.
Figura 3 Variaciones del tratamiento con prostaglandinas.
90
Figura 4 Variaciones del tratamiento con prostaglandinas.
2.9.5 Parmetros para la eleccin del mejor protocolo.
La eficiencia de deteccin de celos.
Destreza en la palpacin del CL.
Disponibilidad de adquirir las PGs.
Costos de las dosis de semen.
Disponibilidad de mano de obra Objetivos del programa. (12) .
91
2.9.6 ndices reproductivos.
Tasa de Concepcin (%) TC (%) = # de Animales Preados /

# Animales Servidos X 100 .
Tasa de Preez (%) TP (%) = # de Animales Preados /

# Animales en edad Reproductiva X 100 .
2.9.7 Sincronizacin del desarrollo folicular y ovulacin

para IATF.
Sincronizacin del desarrollo folicular y la ovulacin con GnRH +

PG (OVSYNCH).
Sincroniza el desarrollo folicular induce ovulacin induce pico de LH
y la ovulacin del F.D. Generaci n de una onda a los 2 -3 dias
sincroniza folculos.
Figura 5 GNRH y PG.
92
Sincronizacin del desarrollo folicular y la ovulacin (COSYNCH+

CIDR).
Sincroniza el desarrollo folicular induce ovulacin induce pico de LH
y la ovulacin del F.D.
Generacin de una onda a los 2 - 3 dias. Sincronizacin de los
folculos.
Figura 6 CIDR, GNRH, PG.
Figura 7 variaciones con progesterona, PG, y estrgenos .
93
Figura 8 GnRH + PG (Hybrid-SYNCH).
Sincronizacin del desarrollo folicular y la ovulacin con GnRH +

PG (Hybrid-SYNCH).
Sincronizacin del desarrollo folicular con progestgenos y

estrgeno.
Progestgeno: Persistencia del folculo dominante y ovulacin de un
ovocito degenerado. + Estradiol FB - que induce la regresin del FD
y una nueva onda en 3 a 8 das. Generacin de un nuevo FD y un
ovocito viable.
El xito de la IATF consiste en la sincronizacin del de sarrollo
folicular pero tambin de la ovulacin
Algunos de los productos ms utilizados como fuente de
progesterona (P4) son.
94
PRID (SANOFI 1.55 gr)
CIDR-B (Pfizer 1.9 y 1.38 gr)
DIB (Syntex 1 gr),
TRIU-B (Biogenesis 1 gr).
En general los mecanismos de accin de las hormonas sobre el

ciclo estral son estos.
Figura 9 tcnicas de manipulacin estral.
95
2.10 NORMAS ELEMENTALES DE HIGI NE

Y PROCEDIMIENTOS
El confort de las vacas m anejar los animales despacio, sin

perros, evitando los excesos de corridas, golpes, picanas o
gritos. El estrs de las vacas en celo afecta la ovulacin y la
normal fertilizacin de los ovocitos. Recordemos que el objetivo
es que queden preadas.
Todas las inyecciones sern aplicadas por va intramuscular,

con agujas 18G x 2" y jeringas descartables, cuidando la
higiene de todas las operaciones.
Respetar las dosis recomendadas de todos los medicamentos.

Desinfectar la regin perineal, ano y vulva antes de aplicar el
DIB, evitando la contaminacin del dispositivo y del aplicador.
Limpiar con rasqueta y esponja embebida en solucin de Yodo

povidona, luego secar y aplicar alcohol, e sta operacin
controlar en gran medida las vaginitis catarrales o purulentas
que normalmente ocurren por irritacin mecnica del dispositivo.
Lubricar con vaselina lquida el aplicador e insertar hasta el
fondo de la vagina.
Pellizcar el dorso de la vaca para que baje el lomo facilitando la

insercin del aplicador.
Controlar que el DIB haya quedado por delante de la

desembocadura de la uretra.
96
Descongelar una pajuela por vez, controlando los tiempos y

temperaturas con el instrumental especfico, durante 10
segundos a temperatura ambiente y 30 segundos en bao de
agua a 35-38C. Secar bien la pajuela y armar el pistolete
previamente desinfectado con alcohol.
Evitar el contacto de los catteres y camisas sanitarias con

cualquier superficie u objeto fuente de contaminacin.
Desinfectar la regin perineal antes de la inseminacin, evitando

la contaminacin del instrumental con orina, agua o materia
fecal estos elementos afectan la viabilidad del semen y
contaminan el tracto genital de la vaca, reduciendo el ndice de
preez.
Descargar el semen en el cuerpo del tero, accionando

suavemente el mbolo del pistolete en tres o cuatro segundos.
2.10.1 Personal.
Inseminadores, un mnimo dos tcnicos, uno descongela y

anota, el otro insemina, rotacin cada 20 -30 minutos.
Personal de apoyo, para atender los puestos de brete, cola,

trancas, manga y caballo, mnimo 4 personas.
El personal que aplicar los tratamientos y la inseminacin

ser el del campo apoyado por tcnicos. (11 )
97
2.10.1 Estructura.
Manga y corrales en perfecto estado de funcionamiento.

Repuestos para el brete y herramientas para preparar
desperfectos rpidamente.
Casilla para descongelar el semen al lado del brete (cuidado con

la lluvia, el sol de verano y excesivo calor, no se suspende por
clima).
2.10.2 Condicin corporal y alimentacin.
La condicin corporal es un parmetro importante, que mide la

deposicin de grasa sobre el animal como garanta de reservas
de energa. En una escala de 1 a 5 (1 flac o, 2.5 intermedio y 5
exceso de gordura) es necesario que los animales estn con
una condicin mnima de 2 a 2.5 y ganando peso).
Es indispensable que los animales estn comiendo bien, de

acuerdo a su estado funcional y poca del ao, recuperando
condicin corporal y ganando peso. El balance energtico
positivo favorece la actividad ovrica, la fertilidad y la viabilidad
embrionaria. (11).
98
2.10.3 Estado funcional de los animales.
Vacas: Paridas de ms de 40 das, con involucin puerperal

normal, tero en posicin pelviana y de dimetro menor de 6
cm., son aptas cuando estn ciclando y aunque estn en
anestro, siempre que estn ganando peso.
Novillas: Que hayan alcanzado la edad reproductiva (mayores

de 15 meses), con desarrollo corporal, genital y con sntomas de
actividad ovrica, es decir, ciclando. (11)
2.10.4 Tiempos.
Es indispensable cumplir con los horarios de los tratamientos y

de las inseminaciones, a pesar de las inclemencias del clima y
de condiciones adversas de los corrales y caminos.
Los tiempos de colocacin y retiro de dispositivos vaginales son

breves. La colocacin se realizar durante el tacto previo.
La extraccin o retiro del DIB se realizar en la manga sin

necesidad de utilizar el brete para sujetar los animales, salvo
complicaciones.
99
Los tratamientos se realizan durante la maana, y las

inseminaciones por la tarde es importante respetar los tiempos,
la IA.
Debe efectuarse 54 a 60 horas despus
de retirar los
dispositivos.
O se puede inseminar 30 horas despus de inyectar la 2da dosis

de Benzoato de Estradiol.
2.10.5 Formacin de grupos para programas de IATF.
De acuerdo con el nmero de animales, las diferentes categoras o

lotes aptos para la IA, de las instalaciones y del personal, se
realizar el programa dividiendo el lote en grupos de hasta 300
vientres por da. (11)
2.10.6 Seleccin del semen.
Utilizar semen de calidad controlada, de toros con alta fertilidad y

facilidad de parto garantizada. Cuando alguno de estos factores es
negativo, puede hacer fracasar el servicio y el riesgo de distocia y
graves prdidas es altsimo. (12)
100
3. ACTIVIDADES REALIZADAS
3.1 DIAGNSTICO DE GESTACIN BOVINA

POR PALPACIN RECTAL
3.1.1 Parmetros indicativos de la forma en que realizo el.

diagnstico reproductivo por palpacin rectal.
Las bases que tengo en cuenta para diagnosticar las diferentes

estructuras del aparato reproductor de la hembra bovina en sus
diferentes estadios tanto del ciclo estral como en la etapa de
gestacin son anatoma de est a la base principal es ubicar el cerviz
(cuello uterino) que se encuentra en el piso de la pelvis, para ubicar
este introduzco mi mano por el ano previamente cubierta por una
manga de palpacin, con la palma de la mano hago un barrido por
todo el borde del hueso pelviano (piso de la pelvis) y ubico el cerviz
que se percibe como una estructura cartilaginosa de una contextura
parecida al cartlago auricular pero en forma redondeada, anillar y
tubular, una vez ubicada esta estructura la fijo sobre la palma de mi
mano y lo aseguro en ella, ya fijo el cerviz me dirijo con l en la
palma de la mano hacia distal (atrs) con relacin al ano,
101
permitiendo que este se deslice sobre la palma de la mano, hasta

llegar a su inicio reconociendo su orificio de entrada (hocic o de
tenca o flor radiada) una vez reconocida esta estructura me dirijo
con el cerviz fijo en la mano hacia proximal (adelante) con relacin
a la cabeza, permitiendo que este se deslice suavemente por la
palma de mi mano, al finalizar el cerviz percibo un cambio en la
consistencia anular y cartilaginosa de este a una estructura tubular
pero de caracterstica blanda, denominada el cuerpo del tero. Al
continuar hacia delante encuentro una bifurcacin en la que se
percibe como si el tero se partiera en dos e structuras tubulares de
su misma consistencia, estas nuevas estructuras se denominan
cuernos uterinos y al recorrerlos cada uno de estos hasta el final de
ellos encontramos unas estructura en cada finalizacin de estos
denominada ovarios que pueden ser gra ndes o pequeos,
redondos y lobulados estos lobulados hacen relacin de acuerdo a
su consistencia a la etapa del ciclo estral en que se encuentra el
ovario entre el ovario y los cuernos uterinos o viceversa, se
encuentran las trompas de Falopio u oviductos uno respectivamente
entre cuerno y ovario Que no se palpa debido a su tamao tan
pequeo menos que sea en procesos patolgicos como salpingitis
(inflamacin de la salpinge) ligamento que recubre el oviducto por
procesos infecciosos o traumticos.
Para diagnosticar un cerviz torcido bien sea en zeta, en u o se; me

baso en que los anillos pierden esa estructura tubular derecha y se
sobreponen encima de los otros anillos del cerviz haciendo parecer
102
que a la palpacin rectal el cerviz se perciba de las formas ya

mencionadas. La posible preez la diagnostico, cundo la fecha del
ltimo parto es superior a 60 dias, si la hembra a estado con toro 30
dias atrs, si a la palpacin del tero y cuernos uterinos hay
contenido pero no hay una diferencia asimtrica corn al y los ovarios
alguno de los dos presenta un cuerpo lteo que lo percibo de
consistencia dura como pellizcar un tomate verde y el dimetro de
este es superior a 18 milmetros alrededor del ovario, o se percibe
solo una punta alrededor de este pero el ova rio tiene una
consistencia dura.
Para el diagnostico de gestacin (vaca o preada) en sus

diferentes etapas me baso en los siguientes signos perceptibles
por palpacin rectal bovina.
Asimetra cornal del 35 dias en adelante en el cuerno uterino

gestante. Cuerpo lteo palpable de ms de 20 mm de dimetro,
siempre y cuando haya cuerno uterino asimtrico de los 35 dias
hasta los 140 dias.
Deslizamiento de las membranas fetales (vescula embrionaria)

se pellizca suavemente el cuerno gestante, del da 35 has ta el
final de la gestacin.
Fluctuaciones en el cuerno gestante, del la vescula embrionaria

del da 35 hasta el final de la gestacin .
No repeticin de celos en animales que se caracterizan por

ciclar entre 18 y 21 en bos indicus y 21 y 24 en bos tauru s
siempre y cuando en la finca haya destinado una persona
103
encargada para la deteccin de celos naturales y que las

hembras no gestantes estn con un macho que est capacitado
para la monta.
Asimetra cornal del cuerno gestante en el cual palpo un

contenido de un volumen aproximado de
200 ml a 350 ml en 60 a 65 dias de gestacin.
850 ml a 1000ml en 75 a 95 dias de gestacin.
1.2 lts a 3.5 lts en 105 a 12 dias de gestacin.
4.0 lts a 6.5 lts en 150 a 180 dias de gestacin .
6.7 lts a 8.5 lts en 185 a 210 dias de gestacin.
Los placentomas los percibo a partir del da 75 del tamao de una

lenteja y van aumentando de tamao con la siguiente formula TP
tamao del placentoma.
TP ms 2 cm por treinta igual a dias de gestacin .
TP tamao del placentoma .
Dos numero estndar.
Treinta dias de un mes.
Otro factor que percibo y que tengo como parmetro para el

diagnostico de gestacin y tiempo de esta, es que el c erviz al tratar
de retraerlo apartir de los 5 meses hasta los 6 y medio es muy difcil
104
o casi que imposible ya que este desciende por el piso de la pelvis

por el crecimiento del feto.
Apartir de los 6 meses y medio el feto es fcilmente palpable y este

se encuentra ascendiendo, el crecimiento de este conforme avanza
la gestacin es el doble con relacin al mes anterior.
Para determinar el tamao del cuerpo lteo me baso es decir (CL 1,
CL 2, CL 3) en el tamao en milmetros determinado por la medida
de un borde del cuerpo lteo, al borde posterior de este. A unque en
muchas ocasiones los cuerpos lteos exhiben solo el borde de
estos, para diferenciar esta situacin nos guiamos en el ovario,
cuando esto ocurre es de una consistencia dura y los cuernos y
cuerpos del tero son flcidos o duros pero no con tono.
CL 1 mide entre 8 a 12 milmetros.
CL 2 mide entre 13 a 16 milmetros.
CL 3 entre 17 a 22 o ms.
Cuando en el ovario se siente al recorrerlo como cabezas de

alfiler esto se determina como F1 .
Estructuras redondas y liquidas por dentro de un tamao entre

12 y 16 milmetros es un F2 o folculo preovulatorio que puede
medir hasta 22 milmetros antes de ovular.
Si la percepcin de los ovarios es de una estructura pequea de

un tamao de 1.5 por 2.2
cm y se les siente como
105
protuberancias o lobulaciones en su superficie externa se

denomina pequeos funcionales PF.
Si los ovarios se sienten lisos o planos se denomina planos

funcionales PLF.
Imagen 15 gestacin bovina 30 dias.
CBR la espiga, presen tacin palpacin rectal bovina. Cursos de

capacitacin 2006 Cesar Colombia.
106
CBR la espiga, presentacin palpacin rectal bovina. Cursos de


107


108
Imagen 20 Ovario izquierdo con folculo preovulatorio o

maduro.

Imagen 21 Ovario izquierdo con un cuerpo lteo regresando y

un folculo en crecimiento de caractersticas F2 .

109
3.1.2 Resultados obtenidos en diferentes fincas.
Tabla 3 registro palpaciones .
CBR la espiga, formato estndar de palpacin bovina . 2008. San

Alberto Cesar Colombia.
110
CBR la espiga, formato estndar de palpacin bovina. 2008. San

111

112

113

114
3.1.3 Relacin de los resultados obtenidos en

Los resultados obtenidos en las diferentes fincas demuestran los

bajos ndices de preez, que por lo visto en las fincas donde se
realizaron los diagnsticos pueden deberse, a estos parmetros
que fueron comunes en todas las fincas
Escases de sales mineralizadas.
Toros flacos y sin examen de androlgico comprobado .
Potreros sobre cargados y con altas proporciones de malezas a
excepcin de la zanja ya que en esta finca trabajan sales de alta
calidad Somex al 10%, hay sistema de rotacin de potreros y el toro
lo trabajan es como calentador ya que trabajan inseminacin
artificial.
3.2 COLECTAS Y CONGELACIN DE SEMEN BOVINO
3.2.1 Equipos y materiales.
Equipo electroeyaculador (prove o bala, cables transmisores de

energa, generador de energa).
115
Imagen 22 electroeyaculador .
CBR la espiga, presentacin colecta de semen bovino. Cursos de

capacitacin. 2008. Cesar Colombia.
Materiales
Corral.
Mangas de palpacin.
Manga.
Solucin salina.
Brete.
Cinchas y lazos.
Agua potable.
Cono colector.
Jabn neutro.
Tubo con mango colector.
Toallas absorbentes.
Bolsas
Catter
equipo
de
de
coleccin
seminal.
Tubos volumtricos.
conduccin de venoclisis.
Guantes de ltex.
Una liga de caucho.
Tijeras.
Vara.
Cinta mtrica.
116
Imagen 23 equipo de colecta.


las colectas y congelacin de semen bovino.
3.2.3 Colecta de semen por electroeyaculador.
La electroeyaculacin la realizo de la siguiente manera y en el

orden de los siguientes pasos.
Corral y brete limpio.
Inmovilizacin del toro en el brete.

117
Medida de circunferencia escrotal, entre mayor sea esta siempre

y cuando no haya ninguna patologa, ser mayor la cantidad del
eyaculado y de concentracin de espermatozoides de este.
Depilacin pelos del prepucio.
Lavado con agua y jabn (neutro) la piel del prepucio y se seca

de adentro hacia afuera con una toalla absorbente o servilleta,
nunca pasando el lado ya usado por la misma superficie.
Con la mano cubierta por un guante de ltex se masajea suave

la mucosa prepucial con el fin de estimular la miccin.
Una vez orina con una vara le estimulo, frotndole la vara sobre
el dorso con el fin de que retraiga mas el prepucio y evacue el
resto de la orina.
Con un catter y un equipo de venoclisis con el que vamos a

adicionar cloruro de sodio al 0.9%, se lava la mucosa prepucial;
llevando el lquido a lo largo del prepucio hacia posterior (atrs)
y sacando el lquido, se realiza esta operacin hasta que el
lquido que sale sea transparente, luego de lavar la mucosa
prepucial, se lava la piel del prepucio con la solucin salina y se
seca de la misma forma que cuando se lavo la m ucosa.
Me recubro la mano y el brazo con una manga de palpacin, la

introduzco por el ano y eva cuo el estircol del toro, reconozco
por anatoma las glndulas productoras de lquido seminal
palpables (prstata, y vesculas seminales) , reconociendo la
primera como una protuberancia que sobresale por encima del
piso de la pelvis y las vesculas que se encuentran hacia ventral ,
118
con relacin al borde p bico es decir hacia el ombligo; estas se

perciben del tamao de un limn o ms grandes.
Al recorrerlas se sienten, sus lobulaciones bien definidas,

masajeo las glndulas ya mencionadas , suave, con el objetivo
de realizar una primera estimulacin en la que el toro expone el
pene y retrae el prepucio.
El siguiente paso es conectar el equipo que se hace de la

siguiente manera, se conecta el generador de impulsos al
controlador de estos impulsos, el generador de impulsos se
puede programar en automtico o manual de acuerdo el toro es
decir si no eyacula en automtico se pasa a manual en donde
por medio de una perilla permitimos el paso de impulsos y la
carga elctrica de estos.
Armo el tubo colector con su respectiva bolsa colectora de

semen, e introduzco la bala o prove dentro del recto del animal ,
fijndonos que los electrodos queden hacia ventral ya que por
estos es que se transmiten los impulsos elctricos hacia las
glndulas seminales.
Por ltimo, conecto la salida de los impulsos a la bala.
La colecta se hace de acuerdo a estos parmetros.
Ya conectado todo el electroeyaculador lo ponemos a funcionar

bien sea en automtico o manual.
Cuando el animal empieza hacer golpes de rin , se denota la

salida de un liquido de un color acuoso que es liquido
119
preseminal, este no se colecta, se colecta cuando notemos un

cambio en las caractersticas de este liquido a una consistencia
lechosa.
Durante este momento se mantiene la cantidad del impulsos que

se transmiten al animal, manteniendo presionado el botn del
controlador de impulsos esperamos que eyacule co mpletamente
y si notamos un cambio en la coloracin se deja de colectar si
este es acuoso.
3.2.4 Evaluacin pre congelacin.
La muestra colectada se debe proteger de la luz directa , para que

no mueran espermatozoides.
Se observar en el microscopio y se determina sus caractersticas, si
es acto o no para fecundar o si es acto para congelarse . Si se va a
congelar, se mantiene el semen a 37 grados centgrados en un
bao serolgico, esta evaluacin se realiza de la siguiente manera .
Primero evaluamos su motilidad Masal (fuerzas de los

remolinos).
Tomamos una gota de semen y la colocamos en un

portaobjetos.
La observamos en el microscopio .
120
La motilidad Masal se clasifica de 1 a 5 cruces siendo uno un

movimiento casi nulo y 5 un movi miento muy marcado, esto en
los objetivos de 4 y 10 x.
Cubrimos la muestra con un cubre objetos y la observamos en

40 x evaluando la motilidad individual , que se determina por la
fuerza que tienen los espermatozoides vivos y normales para
moverse, el movimiento debe ser lineal y progresivo; esta
motilidad individual se clasifica de 0 a 100 por ciento siendo
cero,
un movimiento nulo y 100 un movimiento fuerte y
marcado.
Se toma una gota de semen y la colocamos en un portaobjetos,

le adicionamos una gota de tincin de eosina nigrosina;
realizamos frotis, dejamos secar la muestra; y en el objetivo de
40 x evaluamos las anormalidades de los espermatozoides, las
cuales no deben dar un porcentaje superior a 30 por ciento; con
relacin a los espermatozoides del c ampo observado.
3.2.5 Congelacin del semen.
Para congelar el semen se procede a realizar los siguientes pasos.
Se toma un centmetro de agua destilada en un vial (epemdor).
Se saca 5 microlitros de esta agua y recuperamos en el vial, los

5 microlitros sacados; con 5 microlitros de la muestra de semen
y homogenizamos obteniendo una solucin de 1 en 200.
121
Con una micro pipeta, sacamos 10 microlitros de la solucin

preparada; y realizamos un montaje en cmara de Neubauer.
Realizaos un conteo de este montaje, tomando como punto de

referencia, el recuadro interno de la cmara de Neubauer,
contamos 5 de los cuadros internos de este, y el resultado
obtenido lo comparamos con el obtenido en la cmara de abajo.
Tomando como principio que no debe dar un a diferencia mayor
a10 entre las dos.
Sumamos los resultados y los dividimos entre dos , el resultado

obtenido lo multiplicamos por el coeficiente de la cmara; la cifra
obtenida, es el nmero de espermatozoides por mililitro
eyaculado.
Le restamos a la cif ra obtenida los muertos y anormales y de

igual manera el porcentaje de no motiles individualmente, el
resultado obtenido es el nmero de espermatozoides con buena
calidad con los que contamos por mililitro eyaculado.
Multiplicamos la cifra obtenida por los mililitros del eyaculado,

este nmero obtenido, lo dividimos en la concentracin en la que
vamos a dejar cada pajilla . Segn las normas debe ir como
mnimo 25 millones de espermatozoides por pajilla, en la central
congelamos a 60 millones y en pajillas de 0.52 ml es decir
dividimos el nmero total de espermatozoides de la muestra en
60 millones obteniendo el nmero total de pajillas, luego lo
multiplicamos por 0.52 ml para obtener el total de volumen que
necesitamos para sacar el numero de pajillas obtenid o, entonces
adicionamos la cantidad de diluyente necesaria p ara alcanzar el
122
numero de pajillas. De la siguiente manera, la primera parte la

adicionamos a partes iguales en caso de triladyl , con relacin al
volumen de l eyaculado ; y en caso de continental 2 pasos,
dividimos la diferencia obtenida , entre el volumen de semen y
volumen final para obtener la cantidad de pajillas deseadas, es
decir la primera mitad del diluyente parte A la agregamos
inmediatamente y la B la agregamos 6 horas despu es de
agregada la primera parte.
La muestra con diluyente se lleva a la nevera y en una hora y

media debe llegar a 4 grados centgrados .
Dividimos el total de mililit ros a adicionar de continental B en 4 o

5 intervalos de una hora en partes iguales y de igual manera el
triladyl.
Despues de la ltima adicin de diluyente esperamos dos horas

y procedemos a empacar y congelar , para congelar llevamos la
pajilla a una cava de icopor, la cual debe tener un volumen
mnimo y mximo de 2 cm y un raquer descubierto por debajo,
en el cual solo la punta de la pajilla es la que hace contacto con
el metal; se dejan por cinco minutos con la cava tapada para
congelarlas a vapor de nitrgeno liquido .
Luego se dejan otros 5 minutos sumergidas en nitrgeno liquido

y se empacan en el termo .
48 horas despues descongelamos una para hacer la evaluacin

de si es viable o no.
123
3.2.6 Empacado de las pajillas.
Las pajillas en la central, se hace automticamente ya que se

cuenta con una mquina, cuyo principio es como una bomba de
vacio la cual hace que se llene la pajilla, y el sellado lo hace con
ultrasonido.
Imagen 24 toro 523-4
523-4, fotografa, XXI feria nacional de brahm n, 2008,

Bucaramanga Colombia.
124

Tabla 8 registro de colecta y congelacin.

125

126

127

128

129

130
Tabla 14 resultados obtenidos en los d iferentes toros en total

dos bos taurus un ayrshire y un beef master; cuatro indicus
dos brahmn rojo un gyr y un brahmn gris en los protocolos
de congelacin con diluyente triladyl .
CBR la espiga, colectas y congelaciones de semen bovino

realizadas en el segundo periodo del 2008. Cesar Colombia.
El biotipo con mayor productividad con relacin a mililitros

eyaculados respecto al nmero final de espermatozoides es el bos
indicus con un nmero promedio de 9.47 pajillas por mililitro
eyaculado con diluyente triladyl.
131
El toro con mayor productividad con relacin a mililitros eyaculados

respecto al nmero final de espermatozoides es el brahmn gris
681-1con un total de 11.2 pajillas por mililitro e yaculado con
diluyente triladyl.
El de menor el toro AYRSHIRE 361 con un total de 5.12 pajillas por
mililitro eyaculado.
3.3 SINCRONIZACIN DE NOVILLAS Y VACAS

BOVINAS PARA INSEMINACIN ARTIFICIAL A
TIEMPO FIJO
3.3.1 Protocolo de sincron izacin utilizado.
Da 0 benzoato de estradiol 2 mg y dispositivo intravaginal.
Da 8 prostaglandina efe dos alfa, 2 unidades internacionales

ms retiro de dispositivo.
Da 9 benzoato de estradiol 1 mg.
Da 10 I.A. 30 horas despues de la aplicacin del benzoato

de estradiol.
132
Las inyecciones se colocan intramusculares y las realizamos

con guantes.

la sincronizacin de novillas y vacas, para realizar la
inseminacin artificial a tiempo fijo.
Antes de sincronizar animales para un programa reproductivo las

hembras deben ser seleccionadas bajos los siguientes parmetros.
Cervix derecho.
Ovarios funcionales y de tamao de 2.5 cm de dimetro

como mnimo.
Presentacin por lo menos dos celos en el caso de novillas.
Buena condicin corporal animales tipo carne (4.5 a 6.4) y

tipo leche (3 a 3.7) Despues de cumplir estos requisitos
procedemos a la sincronizacin de hembras bovinas.
Para efectuar el proceso, se tiene un bald con agua yodada,

dentro de el mantenemos el aplicador, lavamos con agua la vulva y
despues secamos. Lavaos nuevamente con agua yodada y
secamos.
Cargamos el dispositivo en el aplicador , lo lubricamos con el agua
yodada.
133
Abrimos vulva e introducimos el aplicador, con el dispositivo en

ngulo de 45 grados hacia dorsal, accionamos el aplicador y
retiramos.
Imagen 25 forma de poner el dispositivo en el aplicador.
CBR la espiga, presentacin inseminacin artificial a tiempo fijo.

Cursos de capacitacin 2003 Cesar Colombia .
134
Imagen 26 forma de poner el dispositivo en el aplicador

equipo de inseminacin artificial de izquierda a derecha funda
sanitaria, pistola de inseminar, corta pajillas y tijeras, camisa
sanitaria, termmetro, termos con nitrgeno lquido y agua
caliente.

Cursos de capacitacin 2003 Cesar Colombia .
135
La tcnica de inseminacin la realizamos de la siguiente manera .

Inmovilizacin del animal .
Lavado de la vulva con solucin yodada y secamos de adentro

hacia afuera y nunca pasando el papel absorbente por el mismo
lado.
Calentamos agua en un termo descongelador de pajillas

llevndola a una temperatura de 37 grados centgrados .
Dentro de una manga, p reparamos la pistola de inseminar ,

cubrimos la funda sanitaria con la camisa sanitaria .
Sacamos la pajilla que vamos a utilizar.
Se descongela, mantenindola 10 segundos al ambiente y 30

segundos dentro del agua caliente , la sacamos del termo y la
secamos bien secada.
Cortamos con una tijera o el corta pajillas el extremo contrario

del tapn de algodn de la pajilla y la aseguramos en la funda
sanitaria. Sacamos el estilete de la pistola hacia atrs y
enfondamos la pajilla en la pistola, la llevamos hacia delante
hasta el final de la funda sanitaria y aseguramos la funda con la
pistola.
Recubrimos nuestro brazo y mano colocando una manga,

llevamos la pistola siempre en forma horizontal.
Abrimos la vulva e introducimos la pistola en ngulo de 45

grados con relacin a dorsal, metemos la mano por el recto y
ubicamos el cerviz. Replegamos hacia craneal y reconocemos el
orificio de entrada del cerviz u hocico de tenca, llevamos la
136
pistola hacia delante y la reconocemos con la punta del dedo

pulgar.
Se gua la pistola hacia el hocico de tenca, una vez estamos en

la entrada rasgamos la camisa sanitaria y empezamos a pasar
la pistola por los anillos del cerviz, al llegar al final del cerviz
encontramos el cuerpo del tero y aqu accionamos el estilete
hacia delante, vaciando el contenido de la pajilla en el cuerpo
del tero retiramos la pistola y masajeamos el cltoris.
Imagen26 manipulacin rectal del cervix

Cursos de capacitacin 2003 Cesar Co lombia.
137

Tabla 15 porcentajes de preez
CBR la espiga, programas de inseminacin artificial a tiempo fijo

realizadas en el segundo periodo del 2008. Cesar Colombia.
138
El porcentaje promedio de preez en estos trabajos es 83.5 %.
El toro que mayor respuesta dio con respecto a estos trabajos

es Guzerat 0-18 de conaga con 93.3%.
Todas las novillas se encontraban en condiciones corporales de

3.2 a 3.5.
La hora de inseminaciones en todas las fincas se empez a las

4: 00 pm.
El tiempo promedio de inseminacin por animal fue entre 2 y 5

minutos.
En todas las fincas se contaba con un buen corral y brete de

trabajo.
Los animales eran dciles en todas las fincas a excepcin de la

finca agua linda.
139
3.3.4 CURSOS Y CONFERENCIAS DE BIOTECNOLOGIAS

REPRODUCTIVAS BOVINAS
Los siguientes cursos y conferencias me fueron asignados para

dictarlos por el director de la central de biotecnolo ga reproductiva la
espiga LTDA.
El material utilizado para la enseanza de estos es de archivo

propio de la empresa y por lo tanto es prohibido divulgarlo o realizar
cualquier tipo de copia o reproduccin de este.
Los fines de semana se dictan cursos de ens eanza de
inseminacin artificial e inseminacin artificial a tiempo fijo en los
cuales colabore en algunas conferencias.
Presentaciones de la central la ESPIGA y conferencias sobre
androloga e inseminacin artificial bovina a los alumnos de
medicina veterinaria primer semestre de la UDES universidad de
Santander sede Bucaramanga el da 17 de septiembre del 2008.
Curso de inseminacin artificial alumnos de tercer semestre UDES

de medicina veterinaria hacienda santa helena 18 de septiembre del
2008.
Introduccin a una central de biotecnologa reproductiva a los

alumnos del SENA sede Aguachica de tecnologa reproductiva
bovina 8 de noviembre del 2008 .
140
Asistente tcnico (mdico veterinario), cubculo de la central de

biotecnologa reproductiva la ESPIGA, en la 61 feria nacional del
cebu Bucaramanga Colombia 19 al 23 de noviembre del 2008 .
141
4. CONCLUSIONES
Aplique en la prctica de campo los conocimientos tericos y

prcticos adquiridos en lo transcurrido de mi programa con relacin
a tratamientos teraputicos y quirrgicos relacionados con la
medicina interna de grandes especies y el rea de reproduccin.
Adquir destrezas en el rea de las biotecnologas reproductivas

como inseminacin artificial, inseminacin artificial a tiempo fijo,
colecta evaluacin y congelacin de semen bovino .
Asistiendo las diferentes explotaciones promov la importancia de

las barreras de bioseguridad tanto biolgicas como artificiales y
programas de vacunacin, presentando estos en las diferentes
situaciones prcticas como un mecanismo por el cual se ahorran
gastos en una explotacin, previniendo tratamientos teraputicos y
diseminacin de enfermedades.
Actualic mis conceptos en el rea de las biotecnologas

reproductivas en forma regular, conforme han avanzado
los
estudios en publicaciones de las diferentes revistas a las que est

suscrita la central.
142
5. RECOMENDACIONES
Mantener el enfoque de expansin que se est aplicando en estos

momentos, en el cual la meta es ser la central de biotecnologa
reproductiva nmero uno del oriente Colombiano .
Incursionar
en
otras
biotecnologas
reproductivas
como
la
aspiracin folicular (OPU) fe cundacin in vitro (FIV) y biparticin

nuclear.
Publicar los resultados obtenidos y protocolos utilizados en los

diferentes
trabajos
relacionados
con
las
biotecnologas
reproductivas, para que estos sirvan de apoyo tecnico a futuros

profesionales.
143
6. PROPUESTA A DESARROLLAR EN LA EMPRESA
La propuesta que les recomendara es abarcar el rea reproductiva

de los equinos, ovinos, caprinos y especies no convencionales
como bfalos.
Introduccin
Las biotecnologas aplicadas a la reproduccin animal nos han

ayudado a mejorara la gentica y con esto la calidad de nuestro
animales, hacindonos competitivos en mercados internacionales.
En el caso de la especie equina Colombia es de los pases fuertes
en este medio y la empresa debe abarcarlo para ayudar a preservar
y mejorar esta gentica; y a su vez este mercado genera altos
recursos que ayudaran a incrementar el capital y prestigio de esta,
por parte de los ovinos y caprinos son especies de alta
productividad y baja demanda alimentaria, y en la zona que se
encuentra la central es estratgica ya que limita en los Santanderes
donde el comercio de estos animales es alto al igual que la parte
bufalina ya que la industria de la palma se encuentra cerca d e la
empresa y en esta industria utilizan los bfalos como medio de
carga.
144
Conclusiones
Este tipo de proyectos generaran una fuente adicional de ingresos

a la central y de igual manera seria una fuente generadora de
empleo. Este tipo de proyectos se pu eden abarcar y relacionarlos
con las biotecnologas reproductivas para aumentar el pie de cra
de estos especmenes y calidad gentica de ellos.
145
BIBLIOGRAFA
1 HIDALGO ORDOEZ, carlos olegario.

Seleccin y Reproduccin , anlisis del semen bovino.
Tecnologa Agroalimentaria. Crdoba: Universidad de Crdoba.
Argentina. poca 2. Nmero 2.
2005.
2 SOTO C, hctor, et al.

Instituto de estudios Cientficos y Tecnolgicos , evaluacin de las
actividades ovricas de bovinos explota dos en condiciones
tropicales.
Universidad Experimental Simn Rodrguez.
2004.
3 S. VELASQUEZ, carlos, et al.

Reproduccion bovina, d ivulgaciones experimentales.
Instituto de Estudios Cientficos y Tecnolgicos .
2005.
4 CANABAL NARVAZ, carlos.

www.produccion-animal.com.ar, reproduccin bovina, d escripcin
de los diferentes estados en vacas vacas , Crdoba.
146
Universidad de crdoba, Colombia.

2007.
5 B, Gabriel.
IRAC CGR Bogot.
II Seminario Internacional de Reproduccin Bovina.
Febrero.
2001.
6 PTASZYNSKA, monika.
Compndio de Reproduo Animal Reproduo de Bovinos .
Segundo congreso internacional de reproduccin bovina.
Intervet Pesquisa desempeho integridade.
2008.
7 CGR biotecnologa reproductiva, hacienda la primorosa.

Diplomado
en
biotecnologa
reproductiva
con
nfasis
en
transferencia de embriones.
Universidad del Tolima facultad de medicina veterinaria y
Zootecnia.
Modulo III, pgina 142 153.
2003.
8 TARDIF FARRELL, trouern -trend.

Journal of Andrology, use of Hoechst, 33342 stain to evaluate live
fresh and frozen bull sperm by CASA.
147
Vol 12.
April.
1998.
9 OCONORS AMANN, saacket.

Laboratory test. J.of animal science, comparison of computer
evaluation of spermatozoa motility with standard.
53, 1368.
10 CABRERA, jernimo l.
Instituto de Reproduccin Animal Crdoba (IRAC) , facultad de
ciencias agropecuarias.
Universidad Catlica de Crdoba, CONICOR.
106, 5000 Crdoba.
Argentina.
11 B, gabriel.
14th International Congress on Animal Reproduction (ICAR).
Fixed-time artificial insemination in CIDR -B treated cows induced to
ovulate with estradiol benzoate or GnRH.
Stockholm,
Sweden.
2000.
12 CENTRAL DE BIOTECNOLOGIA REPRODUCTIVA LA ESPIGA

LTDA, Cursos de capacitacin.
148
Presentacin inseminacin artificial.

Cesar, Colombia.
2003.
13 LOONEY, ROBERTS, jones, a nderson.

Theriogenology, Synchrony and conception to insemination or
embryo transfer in beef females treated with an intravaginal
progesterone releasing device with or without an injection
of
estradiol.
1999.
14 SISSON Y GROSSMAN, anatoma de los animales domsticos.

Anatoma del aparato reproductivo de la hembra bovina.
ltima edicin.
15 MEL, jarnette, RAY, nebel.

ReproAnatPhys_Spanish.qxd Select reproductive solutions , select
series, anatoma y fisiologa de la reproduccin bovina (hembra).
2006.
16 CGR, biotecnologa reproductiva hacienda la primorosa.

Diplomado
en
biotecnologa
reproductiva
con
nfasis
en
transferencia de embriones. Universidad del Tolima facultad de

medicina veterinaria y zootecnia.
Modulo 2, tercer capitulo.
2003.
149
150

Informe Final de Pasantia Central de Biotecnologia Reproductiva y de Procesamiento de Semen y Embrionesla Espiga Ltda..

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Informe Final de Pasantia Central de Biotecnologia Reproductiva y de Procesamiento de Semen y Embrionesla Espiga Ltda..

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

INFORME FINAL DE PASAN TA CENTRAL DE

DENIS ALBERTO QUINTERO AR VALO

INFORME FINAL DE PASANTA PARA OPTAR EL TTULO DE

COMIT EVALUADOR DE PRCTICAS

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

Me gustara expresar mi gratitud al Mdico Veterinario Z ootecnista

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

Dra. Esperanza Paredes Hernndez

Carlos Mario Duque Caas

Dr. John Jairo Bustamante Cano

lvaro Ivn Quintero

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

Carlos Mario Duque Caas

Carlos Mario Duque Caas

Dr. John Jairo Bustamante Cano

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

1. DESCRIPCIN CENTRAL DE BIOTECNOLOG A

REPRODUCTIVA LA ESPIGA LTDA

1.1.1 INFORMACIN GENERAL DE LA INSTITUCIN

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

1.1.2 Divisin comercial.

1.1.3 Divisin capacitacin.

1.1.4 Director general y jefe general del practicante.

1.2 RECURSOS CON LOS QUE SE CUENTA

1.2.2 Fuentes de agua y energa.

1.2.3 Aguas negras y manejo de desechos .

1.2.5 Funciones del mdico veterinario y/o zootecnista.

1.2.6 Horarios de trabajo y turnos.

2.1 DIAGNSTICO DE GESTACIN POR

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

2.1.1 Diferentes signos o parmetros para el

2.2 COLECTAS Y CONGELACI N DE

2.2.4 Estado del acrosoma.

2.2.5 Pruebas de funcionalidad espermtica.

2.3 COLECTA DE SEMEN

2.3.1 Coleccin de semen con electroeyaculador.

2.3.4 Tcnica de estimulacin.

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

2.3.5 Tcnica de electroeyaculacin.

2.3.6 Disturbios en la funcin testicular y los epiddimos.

2.4 CONGELACIN DE SEMEN BOVINO

2.4.1 MTODO DE CONGELACI N

2.4.2 Procesado de la muestra.

2.4.3 Uso del fotmetro.

2.4.4 Evaluacin de la concentracin por

2.4.5 Pasos para el proceso de la dilucin.

2.4.6 Evaluacin de la dilucin.

2.4.7 Importancia y propiedades de los

2.4.8 Soluciones buffer utilizadas para diluir

2.4.9 Agentes antimicrobianos para

2.5 Uso de diluyentes comerciales.

Universidad de Pamplona, una Universidad para una Sociedad Inteligente e Interconectada

2.5.2 PASOS PARA ENVASADO DE PAJILLAS

2.5.3 Clculos para el determinado del

2.5.4 Con un equipo manual.

2.5.5 Con equipo mecnico.

2.5.6 Proceso de congelado.

2.5.7 Pasos del procesado de congelado.

2.5.8 Evaluacin del semen congelado.

2.5.9 Proceso de descongelado.

2.6 EVALUACIN DE LA MOTILIDAD

2.6.1 Escala de evaluacin.