INFORME Microbologia

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PER
FACULTAD E INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
INTRODUCCI
Las bacterias presentan una amplia variedad de formas. Algunas, como la bacteria
Escherichia coli, tienen forma de bastn. El paramecio, un tipo de protozoo, tiene

forma de zapatilla y la ameba, otro protozoo, tiene una forma irregular que cambia
conforme se mueve.
Existen varias formas de reconocer el tipo de bacterias; entre ellas estn la tincin
simple, tincin Gram, tincin acido-resistente (tcnica de Domer, tcnica de Schaeffer
y Fulton, etc.)
La tincin simple es un mtodo bsico y directo que mediante el uso de un solo
colorante nos permite contrastar para poder identificar el tipo de microorganismo.
Se denominan bacterias Gram positivas a aquellas que retienen la tincin azul y
bacterias Gram negativas a las que quedan decoloradas. Algunas bacterias presentan
capacidad variable de tincin de Gram y se llaman Gram variables. Bacterias Gram
positivas tpicas son los estafilococos que producen fornculos; Gram negativas
representativas son la Escherichia coli de la flora intestinal o los bacilos de la tos
ferina; Gram variables son los bacilos de Koch de la tuberculosis.
Tcnica de Schaeffer y Fulton; este mtodo se utiliza para aquellas bacterias que
posen endosporas.
Objetivos generales:
Identificar los microorganismos previa coloracin.

Desarrollar las tcnicas de coloracin simple, diferencial y de estructuras.
Objetivos especficos:
Tincin simple con colorantes bsicos:
Identificar
las
bacterias
mediante
las
diferentes
formas,
tamaos
agrupaciones que presentan aplicando un mtodo simple de tincin.

Tincin diferencial de Gram:
Desarrollar la tcnica de tincin diferencial de Gram y demostrar la existencia
de dos grupos principales de bacterias.
Tincin diferencial Acido Resistente:
Distinguir a travs de la tcnica de Schaeffer y Fulton la presencia de
endosporas bacterianas.
REVISIN BIBLIOGRAFICA
CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS BACTERIAS
Ing.Mg. Vilma J. Reyes de la Cruz

TINCIN:
Segn (Fernndez Mara 1994). Es el proceso por el cual las molculas de un
colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color
de las clulas de los microorganismos y poder realizar la observacin en microscopio
ptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio
en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observar se claramente sin algn
tratamiento previo. De acuerdo a la reaccin que ocurre, existen diferentes tipos de
tincin.
MECANISMOS DE COLORACIN:
La coloracin celular y tejidos son una combinacin de fenmenos fsicos y qumicos
de absorcin: los fenmenos fsicos de absorcin, capilaridad y smosis participan en
cierto grado. La afinidad de colorantes bsicos por los tejidos cidos y viceversa
indican que hay reaccin qumica.
TINCION SIMPLE:
Segn (Gerard J. Tortora, 2007). La tincin simple se basa en la afinidad del
colorante por los componentes celulares. La tincin puede ser uniforme o presentar
algunos grnulos en su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de
metileno, fuscina diluida).La tincin simple se utiliza para destacar el microorganismo
completo para que se vean las formas y las estructuras celulares bsicas. En las
tinciones simples se usa un nico reactivo, que preferentemente es de tipo bsico y
contiene un cromgeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la
pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y
enlazan el cromgeno. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las
clulas absorbern el colorante y quedarn teidas del mismo color. Por tanto, la
tincin simple mejora la observacin de la clula completa. Se fija el espcimen, se
aade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el
exceso de colorante y la preparacin ya est lista para ser observada. Si se utiliza un
mordiente (sustancia qumica utilizada para intensificar la coloracin), hay que aadirlo
justo antes del colorante.
Tcnica:

Las tinciones simples se realizan sobre preparaciones previamente
secadas. Sobre un portaobjetos con una suspensin de microorganismos
previamente secada y fijada a la llama, se vierte una solucin diluida de un
colorante y se mantiene durante uno o dos minutos; a continuacin se lava
varias veces con agua y se seca. Debido a que las clulas son muy pequeas,
este tipo de preparacin suele observarse con aceite de inmersin en la lente
objetivo.
Colorantes:
En la tincin simple se utilizan tintes como safranina, azul de metileno, cristal
violeta y carbolfuesina.
TINCIN DIFERENCIAL:
Segn (Evelyn Rodrguez,2005). El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias
entre clulas bacterianas o entre partes de una misma clula. Estas tcnicas utilizan
ms de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tincin.
Ejemplos: Tincin de Gram, Tincin de Ziehl Neelsen, etc.
Colorantes
Los colorantes ms utilizados: azul de metileno, cristal violeta, safranina, son
catinicos y se combinan fuertemente con componentes celulares cargados
negativamente, como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos (las
envueltas externas de los microorganismos estn por lo general cargadas
negativamente).
TINCIN DIFERENCIAL DE GRAM:
Esta tincin se denominada as por el bacterilogo dans Christian Gram, quien la
desarroll en 1844. Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias
pueden dividirse en dos grupos, gram positivas y gram negativas (en este caso, los
trminos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga elctrico, sino
simplemente designan dos grupos morfolgicos distintos de bacterias). Descripta en
forma breve, la secuencia de la tincin es la siguiente: el Frotis fijado con calor se tie
1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con solucin
Yodada durante 1 - 2 min. y se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla alcohol
etlico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 1 2 min.
Lavar y secar.
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tien de forma distinta debido a las
diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la
clula bacteriana sirve para dar su tamao y forma al organismo as como para

prevenir la lisis osmtica. El material de la pared celular bacteriana que
confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la clula gram-positiva es gruesa y
consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano as como algo de cido
teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la clula gram-positiva es
peptidoglicano.
La pared de la clula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho ms
delgada, nicamente de peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior
compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la
pared de la clula gram negativa es peptidoglicano.
FUENTE:http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa
Descripcin de la tincin de GRAM:

Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una
solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son
lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las
clulas, tanto las gram positivas como las gram negativas, estn teidas de
azul.
El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico.
El ingrediente activo es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I2en agua.
El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal
violeta. De nuevo tanto las clulas gram positivas como las gram negativas se
encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo despus la decoloracin,
usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el

complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (gram positivos) no se
decoloran, mientras que otros(gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial
entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la
decoloracin; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el
caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente
lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin
puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La
delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal
violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas gram positivas, a causa de sus
paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no
son permeables al disolvente, provocando que el de complejo cristal violetayodo quede atrapado dentro de la pared celular. Despus de la decoloracin
las clulas gram positivas son todava azules, pero las gram negativas son
incoloras. Para poner de manifiesto las clulas gram negativas se utiliza una
coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la
safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas
gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas permanecen azules.
Bacillus anthracis (Gram positivo) Pseudomonas aeruginosa (Gram negativo)
TINCIN DIFERENCIAL- CIDO RESISTENTE:

Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos
miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la
propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con
colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistente.
El frotis se tie durante unos 5 min con Fucsina fenicada aplicando calor suave. Lavar
con agua. Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y
teir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar.

http://www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones.shtml#ixzz2hYyFxAfj
MATERIALES Y MTODOS
A. TINCIN SIMPLE CON COLORANTES BSICOS
a. Materiales .
i. Laminas fijadas de microorganismos
ii. Aceite de inmersin
iii. Colorantes bsicos
iv. Azul de metileno
v. Cristal violeta
vi. Carbolfucsina
vii. Papel secante
viii. Pizeta de agua
ix. Soporte para tincin
PROCEDIMIENTO

Coloque las laminas fijadas

de microorganismos sobre
el soporte para tincin..
Agregue 5 o 6 gotas de
cada colorante dejando que
acten por un tiempo de :
30 segundos para el azul
de metileno; 10 segundos
para el cristal violeta; y 5
segundos para a
carbolfucsina.
Una vez cumplido el
tiempo para los
colorantes, lave cada
lamina con la pizetta de
agua.
Elabore esquemas de sus

observaciones destacando
las diferencias en tamao,
forma y agrupaciones que
se presenten.
Examine las preparaciones

tenidas bajo objetivo de
inmersin (100-150X) de
un microscopio
compuesto.
Segu las laminas al aire

o dentro del papel
secante.
B. TINCIN DIFERENCIAL GRAM

a. Material y mtodo
i. Cultivos jvenes de microorganismos (18-24 horas) Bacillus sp.
Staphylococcus sp. Escherichia coli.
ii. Aceite de inmersin asa de kolle
iii. Colorantes bsicos: cristal violeta safranina
iv. Decolorante :alchol cetona
v. Laminas porta objetos
vi. Mordiente: lugol
vii. Papel secante
viii. Pizeta de agua
ix. Soporte para tincin

PROCEDIMIENTO
Prepare una lamina

fija de cada uno de
los cultivos
microbianos
proporcionados y ua
lamina fija con la
mezcla de
staphylococcus y
Escherichia coli.
Agregue cristal
violeta y deje que
acte por 30
segundos.
Enjuague con
agua.
Cubra la pelcula
tenida con lugol y
deje que actue
por 30 a 60
segundos.
Enjuague con
agua
Enjuague con
agua.
Aplique el
colorante de
contraste
safranina por 30
segundos.
Decolore con
alcohol cetona.
Para una pelcula
delgada, la
exposicin al
colorante por 10
20 segundos es
suficiente.
Enjuague con agua y

seque la lamina al
aire o dentro de papel
secante.
Examine cada
muestra bajo el
objetivo de inmersin
C. TINCION DIFERENCIAL ACIDO RESISTENTE

a. Material y mtodo
i. Tcnica de dorner
Cultivos de 48 horas Bacilus y Clostridium
Aceite de inmersin
Asa de kolle
Bao de agua a 100C
Laminas portaobjeto
Soluciones colorante carbolfucsina nigrosina
Tubos con agua destilada estril
PROCEDIMIENTO

Haga una suspensin

concentrada del
organismo en 2 o 3
gotas de agua
destilada contenida
en un tubo pequeo
de prueba.
Agregue un agota de
nigrosina y extineda
la mezcla con ayuda
de otra lamina hasta
obtener una delgada
pelcula.
Aada igual volumen

de carbolfucsina y
coloque el tuo n un
recipiente hirviendo
por 10 minutos.
Seque la lamina al
aire o dentro de
papel secante
Transfiera una gota

de a suspensin de
clulas hervidas a
una lamina
portaobjetos
Examine al
microscopio
compuesto bajo el
objetivo de inmersin
Elabore los esquemas

correspondientes.
ii. Tcnica de schaeffer y fulton

Cultivo de 48 horas bacillus clostridium
Aceite de inmersin
Asa de kolle
Laminas portaobjeto
cocinilla
pinzas
soluciones colorantes Safranina Verde malaquita
solucin decolorante : alcohol acido

PROCEDIMIENTO
Prepare una muestra

fija del
microorganismos
proporcionado y
luego colocar sobre
agua hirviente.
Lavar con agua y

secar con papel
filtro.
Examinar con
objetivo de
inmersin
Agregue a la
preparacin verde
malaquita hasta
cubrirla totalmente y
dejarlo por 5
minutos.
Lavar con agua
suavemente.
Enjuague con agua

Cubra la preparacin
con verde malaquita
dejando que acte
por 2 minutos
Cubrir con safranina.

Mantenga esta
condicin durante 3
minutos, evitando
que el colorante se
seque o entre en
ebullicin
Enjuague con agua

Seque la lammina al
aire o dentro del
papel secante
Examine al
microscopio
compuesto bajo un
objetivo de
inmersin
Elabore los esqumas
correspondientes.
RESULTADOS Y DISCUSIONES

TINCION SIMPLE CON
COLORANTES BASICOS
Segn la pagina: http://es.wikipedia.org/wiki/tincionsimple

La tincion simple mejora la observacion de la celula completa. Se fija el
especimen, se aade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se
absorba, se retira el exceso de colorante y la preparacion ya esta lista para
ser. Si se utiliza un mordiente (sustancia quimica utilizada para intensificar la
coloracion) hay que aadirlo justo antes del colorante.
Tal como lo comprabamos en la practica despues de realizar correctamente
los procedimientos indicados para la tincion simple con una muestra de yogurt
natural y utilizando el colorante azul de metileno; se pudo observa a traves del
microcopio que las bacterias del yugurt tienen forma redonda y forman grupos
de dos,lo que significa que son diplococos.
TINCION DIFERENCIAL GRAM
Segn: Brooks GF. Butel JS y Morse SA. Microbiologa Mdica de Jawetz, Melnick
y Adelberg. 17Edicin. El Manual Moderno, Mxico D.F. 2002.
La tincin de Gram es usada para catalogar bacterias sobre la base de sus
formas, morfologas celulares y reaccin Gram (color). A nivel del laboratorio es
til como test para un rpido anlisis presuntivo de agentes infecciosos, tanto
en muestras como en cultivos en crecimiento. Las bacterias se tien Gram
positivas, Gram negativas o no se tien debido a sus diferencias en la
constitucin de su pared y diseo celular.
Tal como lo comprobamos en la prctica, despus de realizar correctamente
los procedimientos se pudo observar a travs del microscopio que la muestra
de yogurt natural es Gram positiva, ya que al ser observado a travs del
microscopio se puede percibir un color azul.
C. TINCIN DIFERENCIAL CIDO RESISTENTE

Para este caso utilizamos una

especie de batera( bacillus
clostridium),al ser llevar al
microscopio pudimos ver pocas
bacterias llamadas endosporas
DISCUCIONES:
Segn la INAL (Instituto Nacional de Alimentos) 2004: Este tipo de
procedimiento se utiliza para poner en evidencia algunas estructuras
subcelulares. Esta tcnica utiliza ms de un colorante en forma secuencial. Lo
cual usamos dos colorantes como: verde malaquita y safranina.
Segn Jwest, Melnick y Adelberg: las bacterias acido alcohol resistente son las
que retiene la carbolfucsina incluso al ser tratadas con cido clorhdrico en
alcohol , estas bacterias se observan rojas mientras que otros tomas el color de
la contra tincin.

TINCION SIMPLE CON

COLORANTES
BASICOS
Se utiliza para destacar

el
microorganismo
completo para que se
vean las formas y las
estructuras
celulares
basicas
En las tinciones simples

se
usa
un
unico
reactivo,
TINCION DIFERENCIAL
GRAM
TINCIN DIFERENCIAL
CIDO RESISTENTE
Usada para catalogar

bacterias sobre la base
de
sus
formas,
morfologas celulares y
reaccin Gram (color).
Despus de la coloracin ,las
clulas Gram negativas son
rojas, mientras que las Gram
positivas permanecen azules.
se utiliza para poner en

evidencia
algunas
estructuras subcelulares.
En la tincin gram se
usan
tres
colorantes
(safranina, cristal violeta y
lugol)
utiliza ms de un
colorante en forma
secuencial. Lo cual
usamos
dos
colorantes
como:
verde
malaquita
y
safranina.

BIBLIOGRAFIA
Pedro Garca Martos, Fernando Paredes Salido, Mara Teresa Fernndez
del Barrio - 1994
Evelyn Rodrguez Cavallini - 2005
Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case - 2007 - Vista previa
- Ms ediciones
http://www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones.shtml#ixzz2h
YyFxAfj
http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa
CONCLUSIONES

Esta prctica done se aprendi a realizar adecuadamente las diferentes
tinciones que se utilizan en microbiologa; para observar la forma, agrupacin y
tipos de bacterias.
Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con
precaucin, ya que pueden conducir a errores.
Se pudo observar a travs del microscopio que la muestra de yogurt natural es

Gram positiva, ya que al ser observado a travs del microscopio
se puede
percibir un color azul.
En la tincion simple con la muestra de yogurt natural y utilizando
el colorante
azul de metileno; se pudo observa a traves del microcopio que las bacterias del
yugurt tienen forma redonda y forman grupos de dos,lo que significa que son
diplococos
CUESTIONARIO
CUESTIONARIO DE LA TINSION SIMPLE
1. Cules son las asociaciones ms frecuentes en bacterias?

2. En qu rango de tamaos se define las bacterias?

Bacillus megaterium mide 1.3 x 3 m.
Una bacteria relativamente pequea es Haemophilus influenzae, que mide 0.25
x 1.2 m.
Los organismos celulares cultivables
ms pequeos que existen son los
micoplasmas, muchos de los cuales no
superan los 0.2 m de dimetro.
Las nanobacterias o ultramicrobacterias
miden en torno a 0.05 m, pero la
mayora no se han podido cultivar, y
slo se pueden estudiar al microscopio
3. Cules son las formas bacterianas
ms frecuentes?
cocos (clulas ms o menos esfricas)

bacilos (en forma de bastn, alargados)
espirilos: al igual que los bacilos, tienen un eje ms largo que otro,
pero dicho eje no es recto, sino que sigue una forma de espiral, con una
o ms de una vuelta de hlice.

vibrios: proyectada su imagen sobre el plano tienen forma de coma,

pero en el espacio suelen corresponder a una forma espiral con menos
de una vuelta de hlice.
4. Cul es la diferencia a una tincin directa de una tincin negativa?
Tincin directa simple: Utiliza un solo colorante, el cual debe ser bsico para
que la clula bacteriana se tia. Permite mostrar la morfologa general de una
clula de manera rpida ,al emplearse un nico colorante.

Tincin negativa: la clula bacteriana permanece sin sin teir y resalta sobre el
fondo coloreado. Tie el exterior, pero no el interior de clulas y estructuras.
5. Qu importancia le atribuye a las diferencias en reactividad de los

colorantes empleados?
Los colorantes hacen posible la observacin, igualmente de diferentes tipos de
bacterias.Existen las tinciones simples que se usan para observar la morfologa y el
agrupamiento bacteriano, entre los colorantes tenemos el azul de metileno, cristal
violeta y fuscinaLas tinciones dobles ,se usan para poner de manifiesto diferencias
entre microorganismos o parte de ellos, la tincin de gram, es la ms utilizada en, ya
que diferencia a las bacterias en gram positivas y gram negativas, segn retengan el
cristal violeta utilizado en la tincin.( las gram negativas no retienen el cristal violeta
cuando son decoloradas por una mezcla de alcohol y acetona. las gram positivas (+) si
retienen el colorante inicial, las gram negativas (-) se cogern el segundo colorante; la
safranina y presentan color rojo).
CUESTIONARIO DE TINCIN GRAM
1. Para qu casos la tincin Gram podra resultar errada?
Los peores obstculos de la Tincin, que impiden conseguir el resultado perseguido,
son los errores del tcnico. Para evitarlos hay que elegir bien los reactivos y ser muy
cuidadosos al ejecutar la tcnica. A continuacin describimos algunas de las fuentes
de error:
Impurezas en los reactivos de Tincin.

Concentracin inadecuada de los reactivos de tincin.
pH inadecuado.
El colorante se fija a la clula por mecanismos fsico-qumicos, que se alteran
si el Ph no es el apropiado.
Los colorantes pueden ser cidos, bsicos o neutros.
Tiempo de Tincin incorrecto.

Temperatura suficiente.
2. Qu efecto traera reemplazar el lugol con otro agente oxidante?

No habra el mismo resultado. El Lugol, es una sustancia que aumenta la afinidad de
la clula, qu suele aadirse despus del colorante en determinadas tinciones
diferenciales
En las tinciones simples se usa un nico colorante de carcter bsico. Todas

las clulas de la preparacin quedan teidas y se observan del mismo color.
Las tinciones diferenciales se utilizan para distinguir entre tipos de

microorganismos. Se basan en el uso de dos colorantes. Se realiza una tincin
primaria y posteriormente una tincin de contraste para teir las clulas que no
se hayan teido previamente.
3. Podra usted variar el colorante primario y el contraste obteniendo los

mismos resultados?
Si cambiamos el orden del colorante con del contraste de ,se obtendra resultado la
coloracin del contraste ya que las bacterias del yogurt son gran positivas y retendran
la primera decoloracin , al poseer una pared celular ms resistente y con mayor
proporcin de peptidoglicano, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico,
sino que este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda
escaparse la primera decoloracin , y manteniendo la coloracin primaria.
4. Qu es la influencia del pH en la reaccin de Gram?
La reaccin de Gram no es constante; puede variar con el tiempo del cultivo y el pH
del medio, y por otras causas.
Los microorganismos Gram positivos tienen una escala de pH inferior a la de

los microorganismos Gram negativos, es as que el pH afecta la reaccin de
Gram de una manera extraordinaria
ya que los microorganismos Gram
positivos pueden hacerse Gram negativos al aumentar la acidez, de la misma

forma los microorganismos Gram negativos pueden hacerse Gram positivos al
aumentar la alcalinidad
Liste cinco ejemplos de bacterias Gram positivos y cinco de Gram negativas,
sealando su importancia.
Gram negativas:

Escherichia coli es el lder en infecciones seguida por la Klebsiella, el

factor de riesgo en este tipo de infecciones hospitalarias es el husped y si
presenta un catter urinario es ms importante an Neisseria meningitidis:
causa meningitis.
Yersinia enterocoltica provoca una fiebre entrica
Shigella son responsables de la disentera bacilar
Pectobacterium carotovora:Una bacteria asociada con el deteriorode hortalizas
Helicobacter pylori: enfermedades gastrointestinales.
Gram positivas:
Lactobacillus pueden ser anaerobias facultativos o microaerfilas.
Clostridium altera con frecuencia alimentos que han sido sometidos a calentamiento.
Los clostridios productores de cido butrico pueden crecer a bajas temperaturas y
ocasionan deterioro en algunos quesos.
Carnobacterium se encuentra en pescados, canales de aves y carnes rojas

envasadas al vaco
Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum es un organismo termoflico
que deforma los envases de hojalata.
Clostridium sporogenes produce putrefaccin,
Clostridiumbutyricum y Clostridium tertium causan el deterioro butrico
Clostridium bifermentans genera sulfuro de hidrgeno
CUESTIONARIO DE TINCIN DIFERENCIAL O ACIDO RESISTENTE

1. Cul de los mtodos utilizados le permiti observar mejor las
endosporas bacterianas? A qu atribuye la diferencia?
La tincin diferencial ,fue el mtodo ms eficaz pues es el ms usado ya que las

bacterias con endosporas. Este mtodo es el ideal para este tipo de bacterias. La
diferencia est en el tipo de colorantes usados los cuales(capaces de distinguirse en
las endospora).
2. Qu efecto producira al reemplazar el alcohol cido por otro
decolorante como el alcohol cetona?
La mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior
de la pared de la clula (y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se
une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de
complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivas, a
causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos
lpido), no son permeables al disolvente ya que ste deshidrata la pared celular y
cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y provocando que el

de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular.
Despus de la decoloracin las clulas grampositivas son todava azules, pero las
gramnegativas son incoloras.
3. Qu otro gnero de bacterias pueden formar endosporas?
Las bacterias capaces de esporular pueden crecer y reproducirse en forma de clulas
vegetativas durante muchas generaciones. Sin embargo, en cierto perodo del
desarrollo del cultivo en medio nutritivo apropiado, se produce, dentro del citoplasma,
la sntesis de nuevo protoplasma destinado a transformarse en espora.
Algunas bacterias pueden transformarse en pequeos ovoides o esferas, que son
formas celulares muy resistentes, denominadas esporas, o endosporas, porque se
producen intracelularmente. Todos los organismos de los gneros Bacillus y
Clostridium se caracterizan, en parte, por su propiedad de producir esporas. Tambin
tienen esta propiedad otros gneros de bacterias verdaderas, pero slo en casos
aislados.
4. Revise otras tcnicas de tincin de esporas y comprtelas con las usadas
en este ejercicio. Determine ventajas y desventajas:
TINCION DE ESPORAS
Las esporas son la forma de resistencia de las bacterias, tienen forma esfrica u oval.
Al microscopio sin teir, presentan una estructura de granulo brillante. Segn la
localizacin de la espora puede ser: central subterminal y terminales (en el centro,
prxima al extremo y al final del extremo de la bacteria), lgicamente la esporas solo lo
formaran estructuras bacilares. Existen dos tipos de tinciones: Moeller y Wirtz-Conklin.
Moeller .
Como reactivos se emplean, solucin acuosa 5% de cido crmico, fucsina fenicada
de Zhiel-Neelsen, solucin acuosa de clorhidrato de anilina 5%, solucin de azul de
metileno y alcohol absoluto.Las esporas se observan con objetivo de inmersin y se
visualizando color rojo o rosado y las bacterias de color azul.
Wirtz-Conklin
Los reactivos empelados son, solucin acuosa de verde malaquita 5% y solucin
acuosa de safranina al 0,5%. Se observaron objetivo de inmersin y las esporas e
habrn teido de verde y las bacterias de color rojo intenso.
TINCION DE NARANJA DE ACRIDINA

Esta tincin se utiliza principalmente para el estudio de microorganimos en
hemocultivos y liquido cefalorraquideo (LCR), el colorante presenta una gran afinidad
por el cido nucleico bacteriano.
TECNICA
Como reactivos se emplean Naranja de Acridina al 0,01% en tampn de acetato de pH
4, el procedimiento es el siguiente:
se extiende y se seca la preparacin.

se fijan los frotis con metanol o por calor.
se cubre la preparacin con el colorante y se deja durante dos minutos
se lava con agua
se seca al aire.
se examina la preparacin con objetivo de inmersin en microscopio de
fluorescencia.
Las bacterias presentan un color naranja brillante sobre un fondo verdoso u oscuro.
TINCION DE RODAMINA-AURAMINA.
Los fluorocromos auramina y rodamina tienen la propiedad de fijarse a las paredes
celulares de las micobacterias, que aparecern de color amarillo o naranja brillante
sobre un fondo verdoso. Se utiliza, adems un colorante de contraste (permanganato
potsico) que tiene como funcin evitar la fluorescencia inespecfica.
TECNICA.
Como reactivos reemplean: solucin colorante rodamina-auramina, solucin de
colorante, colorante de contraste. El procedimiento es el siguiente:
se cubre la preparacin con el colorante auramina-rodamina, durante quince
minutos
se lava con agua destilada
se cubre la preparacin con solucin decolorante (alcohol clorhdrico)
dejndose actuar durante dos o tres minutos.

se lava con agua destilada

se cubre la preparacin con el colorante de contraste y se deja
actuar durante tres o cuatro minutos.
se lava y se deja secar al aire.
Se observa a microscopia de fluorescencia, las bacterias cido alcohol

resistentes aparecen de color amarillo-naranja sobre un fondo verdusco.
TINCION DE CALCOFLUOR
Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de
calcoflor aumentando considerablemente su visibilidad en los
tejidos y otras muestras. Segn fue descrito por Hageage y
Harrington, este colorante se emplea en lugar de KOH al 10% para
el examen inicial de los materiales clnicos. Tambin se emplea
para aumentar la visualizacin de los elementos morfolgicos de
los cultivos puros de los hongos. En algunos laboratoros ha
suplantado al azul de lactofenol en muchas aplicaciones. Los
organismos fluorescen con luz blanco-azulada o verde manzana,
segn la fuente luminosa que se utilice.

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PER

FACULTAD E INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

Escherichia coli, tienen forma de bastn. El paramecio, un tipo de protozoo, tiene

Identificar los microorganismos previa coloracin.

agrupaciones que presentan aplicando un mtodo simple de tincin.

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Descripcin de la tincin de GRAM:

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TINCIN DIFERENCIAL- CIDO RESISTENTE:

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Coloque las laminas fijadas

Elabore esquemas de sus

Examine las preparaciones

Segu las laminas al aire

B. TINCIN DIFERENCIAL GRAM

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Prepare una lamina

Enjuague con agua y

C. TINCION DIFERENCIAL ACIDO RESISTENTE

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Haga una suspensin

Aada igual volumen

Transfiera una gota

Elabore los esquemas

ii. Tcnica de schaeffer y fulton

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Prepare una muestra

Lavar con agua y

Enjuague con agua

Cubrir con safranina.

Enjuague con agua

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Segn la pagina: http://es.wikipedia.org/wiki/tincionsimple

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Para este caso utilizamos una

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TINCION SIMPLE CON

Se utiliza para destacar

En las tinciones simples

Usada para catalogar

se utiliza para poner en

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Se pudo observar a travs del microscopio que la muestra de yogurt natural es

percibir un color azul.

En la tincion simple con la muestra de yogurt natural y utilizando

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