Praktika/Prctica: Extraccin de ADN humano

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19/06/2015

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KURTSOA/CURSO:
Biologa/biologia

OBJETIVOS
Generales
1. Aplicar los conceptos, leyes, teoras y modelos aprendidos a situaciones
reales y cotidianas.
2. Utilizar con cierta autonoma destrezas investigativas, tanto
documentales como experimentales (plantear problemas, formular y
contrastar hiptesis, realizar experiencias, etc.), reconociendo el carcter
de la ciencia como proceso cambiante y dinmico.
3. Desarrollar actitudes que suelen asociarse al trabajo cientfico tales
como la bsqueda de informacin exhaustiva, la capacidad crtica, la
necesidad de verificacin de los hechos, el cuestionamiento de lo obvio
y la apertura ante nuevas ideas.
4. Explicar expresiones cientficas del lenguaje cotidiano segn los
conocimientos biolgicos adquiridos, relacionando la experiencia diaria
con la cientfica.
5. Comprender la naturaleza de la biologa y sus limitaciones, as como sus
complejas interacciones con la tecnologa y la sociedad, valorando la
necesidad de trabajar para lograr una mejora de las condiciones de vida
actuales.

Especficos
1. El objetivo fundamental de esta prctica es utilizar unas sencillas
tcnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto
que presenta confirmar su estructura fabrilar.
2. A partir de la longitud enorme de las fibras tambin se confirma que en el
ncleo el ADN se encuentra replegado.
3. Realizar una tincin especfica de ADN (con un colorante bsico) y
observar al microscopio las fibras de ADN.

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FUNDAMENTO TERICO
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de
que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN,
permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula. Se empieza por
lisar (romper la membrana plasmtica) las clulas mediante un detergente,
vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se
disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido
de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en
menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn
fraccionado en cadenas ms pequeas y separado de l por accin del
detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y
detergente, para lo cual se utiliza alcohol etlico.

MATERIAL NECESARIO
Material general de laboratorio

Un vaso de precipitados. (250 ml)

Un tubo de ensayo
Una probeta
Una varilla de vidrio
Balanza digital
Papel de filtro
Un portaobjetos
Un cubreobjetos
Microscopio

Productos qumicos y reactivos

Clulas de la mucosa bucal.

Detergente lquido para vajillas (Mistol)
Cloruro sdico.
Alcohol etlico de 96.
Bicarbonato clcico.
Agua destilada.
Azul de metileno.

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PROCEDIMIENTO
1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes:

120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua

del grifo.
1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
5 g de bicarbonato sdico.
5 ml de detergente lquido.

2. Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca para eliminar restos

de alimentos. Luego con ayuda de la lengua y la saliva arrastrar el mayor
nmero posible de clulas de descamacin de la mucosa bucal.

3. Mezclar en un tubo de ensayo 1 ml de saliva con 5 ml del tampn y agitar

suavemente para no producir espuma.

4. Colocar 5 minutos en un bao de agua a 37 C para acelerar el proceso.

5. Aadir, poco a poco, la misma cantidad de alcohol que la que aadiste entes
de disolucin tampn; inclinando el tubo y vertiendo sobre la pared para que no
mezclen las dos partes.
6. Agitando suavemente el tubo de ensayo, veremos cmo aparecen unos
filamentos blancos disueltos en el alcohol.
7. Introducir una varilla de vidrio en la parte del alcohol hacindola rotar, siempre,
en la misma direccin, haciendo que se adhieran los filamentos blancos que se
observan.
8. Pon una porcin de esos filamentos en un portaobjetos, y adele una gota de
azul de metileno.
9. Cubre la preparacin con un cubreobjetos y obsrvala al microscopio con un
objetivo de 40.

INFORME DE LABORATORIO

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Felicidades! Acabas de completar la extraccin de tu ADN!

Ahora que has extrado exitosamente tu ADN, ests listo para contestar
las siguientes preguntas.
Por qu hemos utilizado detergente?

Para qu hemos utilizado el cloruro sdico? Y bicarbonato?

El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior.
Debido a que se han formado dos capas separadas, el ADN y el resto de
materia orgnica tienden a separarse. Quin se queda en la capa acuosa,
la del fondo? Y en la capa superior, el alcohol?

Qu es esa cosa pegajosa?

La cosa blanca y pegajosa es ADN puro o una mezcla de cidos

nucleicos?

Por qu decimos que el azul de metileno es un colorante especfico para el

ADN?

Por qu crees que es necesario dejar libres los ncleos?

Al aadir un detergente se produce un medio hipertnico. Que efecto tiene

dicho medio en las membranas del ncleo?

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