Paciente
En 2006 se admiti al Hospital Xiangya un hombre de 32 aos de edad con
dolor progresivo de cuello y espalda, entumecimiento y debilidad de las
piernas y retencin fecal y urinaria por 5 das. Los MRI (Imgenes por
Resonancia Magntica) revelaron tumores en el cerebelo, tallo cerebral, medula
espinal y en el rion. Los tumores en la mdula espinal fueron extrados
quirrgicamente. Al analizar los tejidos extrados se analizaron con tinciones de
hematoxilina-eosina, en las cuales se encontraron ncleos hipercormticos,
caracterstica comn a las neoplasias, y con inmunohistoqumica para varias
protenas. Solamente se encontr positivo para el Factor 8 Relacionado a
Antgeno (F8RAg) en las clulas endoteliales de los vasos. El paciente mejoro
con la ciruga y no recay durante los 5 aos de seguimiento.
Se extrajo el material gentico del individuo de los leucocitos de la sangre
perifrica. Para secuenciar el gen se utilizaron sets especficos de primers para
la amplificacin (aumento del nmero de copias) de los 3 exones (partes
codificantes) a travs de la tcnica PCR (Reaccin en Cadena de la ADN
Polimerasa) y su posterior caracterizacin en un secuenciador automtico.
El proceso de exmenes mdicos y secuenciacin gentica tambin se realizo a
los 7 miembros de la familia del paciente, de los cuales ninguno resulto
positivo. Como individuos de control positivos, tambin se estudio el DNA de 8
sujetos con diferentes mutaciones para el gen de VHL, los cuales haban sido
previamente identificados por Southern blot analysis (sta es una tcnica
usada para detectar o descartar la presencia de una secuencia especfica en el
DNA) y 30 individuos control con VHL negativo.
Tanto el diagnstico clnico (hemangioblastoma y tumor en el rion) como la
secuenciacin indicaron enfermedad de VHL. Se encontr una mutacin en la
que se eliminaban los pares de bases de 227-228, codn el cual codificaba
para el aminocido 76, una fenilalanina, la cual al parecer cumple un papel
importante, bien sea en la conformacin o en el sitio activo de la protena
supresora de tumores VHL.
Discusin y conclusin
La protena VHL tiene dos dominios, el primero caracterizado por hlices alfa, el
cual permite a la protena unirse a los otros dmeros del complejo VEC y el
segundo por hojas beta, el cual permite la unin con los HIF en su subunidad
alfa para su ubicuitinizacin, dependiendo del lugar de la mutacin, la protena
perder alguna de sus capacidades mencionadas anteriormente. La mutacin
encontrada en el paciente se encuentra en el dominio beta de VHL y es
conocida desde 1994 y correlacionada con el tipo 1 de la enfermedad.
Los dos principales ejes de discusin son la adquisicin espordica de la
mutacin por el individuo de estudio y segundo, la inexplicable alta incidencia
(23%) de estos casos espordicos, especialmente en China. Otra cuestin en la
cual hace falta investigacin, son los mecanismos funcionales de los HIF
dependientes e independientes de la protena de VHL.
El estudio no revela como el paciente adquiri la mutacin, pero se sugiere
algunas ideas. La mutacin pudo haberse originado en las clulas germinativas
de alguno de los padres, o sino, puede que alguno de los padres,
aparentemente inalterado por la mutacin, es mosaico para sta, es decir,
tiene una poblacin de clulas afectadas por la mutacin, debido a error en la
mitosis de la embriognesis tarda.
Para concluir, el estudio reporta una mutacin de novo o surgida en un padre
mosaico. Para el momento del artculo, los autores buscaban estudiar ms
casos, debido a la importancia para el desarrollo de tratamientos, en
correlacionar el genotipo con el fenotipo.