BIOQUMICA FUNDAMENTAL
PROF. DR. MARCELO DE CERQUEIRA CESAR
ENGENHARIA DE ALIMENTOS XIV - DIURNO
Pirassununga
2015
SUMRIO
RESUMO......................................................................................................... 3
1.
INTRODUO........................................................................................... 4
2.
OBJETIVO................................................................................................. 9
3.
MTODO................................................................................................. 10
4.
RESULTADOS E DISCUSSO...................................................................12
5.
CONCLUSO.......................................................................................... 15
6.
BIBLIOGRAFIA........................................................................................ 16
RESUMO
Para analisar propriedades de protenas necessrio purifica-las
primeiro. Existem diversos mtodos descritos na literatura para se fazer a
purificao. Um deles chamado de eletroforese, mtodo pelo qual as
protenas de uma determinada amostra a ser analisada so separadas, no
experimento desse relatrio elas sero separadas de acordo com o seu peso
molecular.
Para a realizao da corrida eletrofortica h a preparao de dois gis,
o gel de separao e o gel de empilhamento, no gel de empilhamento sero
colocadas as amostras e no gel de separao, como o prprio nome diz,
onde as protenas sero separadas. A separao s possvel pois o gel de
separao poroso, fazendo com que protenas mais leves caminhem por ele
mais rapidamente e portanto, a uma distncia maior. necessrio tambm
uma fonte de tenso para que as protenas caminhem.
Ao final da corrida, o gel corado e pode-se verificar os pesos
moleculares das protenas contidas nas amostras. essencial que junto com
as amostras tenha uma amostra padro de pesos moleculares conhecida, para
que, assim, a partir de uma curva padro, calcule-se os pesos moleculares das
outras amostras.
No experimento desse relatrio, verificou-se os pesos moleculares das
protenas dos pescados Sardinha e Aruan e pode-se identificar, alm de
outras, as protenas actina e miosina.
Palavras chave: protena, purificao, eletroforese, gel de poliacrilamida, SDSPAGE, peso molecular, sardinha, Aruan, actina, miosina
1. INTRODUO
Protenas esto presentes em praticamente toda nutrio humana e
animal e tambm nas clulas que os compe, torna-se interessante ento
analisar as propriedades e atividades das mesmas. Para determinao dessas
caractersticas necessria a purificao das protenas. Sendo assim vrios
mtodos para separao de protenas esto descritos na literatura, podendo
classificar a separao em tamanho, carga, propriedades de ligao, entre
outros (LEHNINGER, 2006).
Um dos mtodos de separao de protenas e outras macromolculas
a eletroforese, fenmeno no qual uma molcula com carga eltrica move-se em
um campo eltrico (BERG; TYMOCZKO; STRYER, 2008). Apesar de possuir
uma grande vantagem, ao possibilitar uma boa visualizao das protenas
separadas e permitir ao pesquisador estimar rapidamente os diferentes tipos de
protenas presentes na mistura bem como seu peso molecular aproximado, a
eletroforese no utilizada, geralmente, para purificar grandes quantidades de
protena, j que existem mtodos mais simples e que no afetam a estrutura e
funo das protenas (LEHNINGER, 2006).
Para
realizao
da
eletroforese
necessrio
um
aparelho
O gel formado entre duas placas de vidro que so mantidas juntas por
uma pina, porm separadas por um espaador (WILSON; WALKER, 2005),
como mostra a Figura 2. Primeiramente colocado o gel de separao (gel de
corrida) e aps sua solidificao colocado o gel de empilhamento (gel de
concentrao) junto a um pente, para formar cavidades onde sero colocadas
as amostras.
SDS-PAGE
(Sodium
Dodecyl
Sulphate-Polyacrylamide
Gel
2. OBJETIVO
Esse experimento teve como objetivo identificar os pesos moleculares
das protenas presentes nos pescados Sardinha e Aruan.
3. MTODO
Primeiramente, adicionou-se 250
gua deionizada
1,5M Tris-HCl, pH 8,8
SDS 10% - estoque
12%*
3,35 mL
2,5 mL
100 L
4,0 mL
50 L
TEMED
10
gua deionizada
0,5M Tris-HCl, pH 6,8
SDS 10% - estoque
4%
3,04 mL
1,25 mL
50 L
664
25
L
L
TEMED
10
11
4. RESULTADOS E DISCUSSO
Realizada a eletroforese, foi obtido o gel da Figura 6, na quarta coluna
est o padro que foi adicionado, nas outras cavidades esto amostras dos
pescados Aruan e Sardinha intercalados, comeando (esquerda) por Aruan.
Mobilidade (mm)
6
10
15
18
27
35
41
47
52
12
Mobilidade (mm)
9
12
18
19
21
23
27
31
33
34
36
39
41
45
48
50
54
Mobilidade (mm)
5
7
11
14
18
21
23
25
30
32
33
36
37
38
49
52
58
53
44
41
42
35
32
31,5
18
15
14
5. CONCLUSO
Pode-se concluir que a eletroforese um mtodo bastante eficiente de
separao proteica, conseguindo identificar protenas que se diferenciam por
apenas 1kD.
As protenas miosina e actina puderam ser identificadas em ambos
pescados, apesar de eles possurem constituies proteicas diferentes.
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6. BIBLIOGRAFIA
Berg, J. M., Tymoczko, J. L., & Stryer, L. (2008). Bioqumica (6 ed.). Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan.
(2014). ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA SDS (SDS-PAGE).
Universidade de So Paulo, Instituto de Fsica de So Carlos, So
Carlos.
Lehninger, D., & Cox, M. (2006). Princpios de Bioqumica (4 ed.). So Paulo:
Sarvier.
Wilson, K., & Walker, J. (2010). Principles and Techniques of Biochemistry
and Molecular Biology (7 ed.). New York: Cambridge University Press.
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