BIOQUMICA FUNDAMENTAL
PROF. DR. MARCELO DE CERQUEIRA CESAR
ENGENHARIA DE ALIMENTOS XIV - DIURNO
Pirassununga
2015
SUMRIO
RESUMO......................................................................................................... 3
1.
INTRODUO........................................................................................... 4
2.
OBJETIVO................................................................................................. 7
3.
MTODO................................................................................................... 8
4.
RESULTADOS E DISCUSSO...................................................................10
5.
CONCLUSO.......................................................................................... 13
6.
BIBLIOGRAFIA........................................................................................ 14
RESUMO
Devido a diversidade de funes realizadas pelas protenas torna-se
interessante utilizar mtodos para quantifica-las, o mtodo de Lowry
vantajoso, pois apresenta uma alta sensibilidade. No experimento, foram feitas
amostras padro, para posterior clculo de uma curva padro, e amostras de
leite integral e desnatado diludos na proporo de 1:200. A partir da curva
padro foi ajustada uma reta onde y representa as absorbncias obtidas por
um espectrofotmetro e x a concentrao de protenas em mg/mL. Pela
equao da reta ajustada foi possvel calcular as concentraes das amostras
de leite depois de medir suas absorbncias e substitu-las na equao
calculada. Foi feita uma mdia das concentraes e concluiu-se que a mdia
do leite desnatado foi superior a mdia do leite integral, porm a diferena foi
mnima, sendo justificada por erros experimentais que esto envolvidos em
qualquer experimento e confirmando a informao dos rtulos de leite integral e
desnatado que dizem que as concentraes de protenas so iguais.
Palavras chave: protenas, mtodo de Lowry, leite, reativo de Folin,
absorbncia, espectrofotmetro
1. INTRODUO
Protenas so as macromolculas biolgicas mais abundantes que
ocorrem em todas as clulas e em todas as partes das clulas (LEHNINGER,
2006). Sua unidade estrutural bsica so os aminocidos, que existem em
grandes quantidades, porm apenas 22 so considerados proteinognicos, ou
seja, podem ser encontrados como constituintes de protenas (MORAES et al.,
2013).
Com exceo da glicina, todas as molculas de aminocidos so
assimtricas, o carbono central ligado a um grupo amina (-NH2), a um grupo
cido carboxlico (-COOH), a um hidrognio e a uma cadeia lateral variada.
Sendo assim, as protenas possuem uma grande variedade estrutural devido
ao grande nmero de possibilidades de sequncias de aminocidos. Para
formar protenas necessrio que se formem ligaes peptdicas (Figura 1)
entre os aminocidos, essas ligaes ocorrem quando o grupamento amina de
um aminocido se liga ao grupamento cido carboxlico de outro aminocido
(MORAES et al., 2013).
Figura 2 Componentes de um espectrofotmetro: (a) fonte de luz, (b) colimador, (c) prisma,
(d) fenda seletora, (e) compartimento de amostras, (f) clula foteltrica e (g) amplificador.
Fonte: http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/componentes.html
2. OBJETIVO
Esse relatrio tem por objetivo determinar a quantidade de protena do
leite pelo mtodo de Lowry.
3. MTODO
Primeiramente foram identificados 2 micro tubos com leite integral e leite
desnatado. As amostras de leite foram diludas com gua destilada na
proporo 1:20 em outros dois micro tubos identificados como leite integral
diludo e leite desnatado diludo. Sendo assim, os micro tubos diludos
continham 50 L de leite integral ou desnatado e 950 L de gua
destilada. Aps a diluio os micro tubos foram homogeneizados.
Cinco tubos de ensaio foram enumerados de 1 a 5, em outro tubo
escreveu-se BRANCO, em outros 3 tubos escreveu-se LID (Leite Integral
Diludo) e em outros 3 LDD (Leite Desnatado Diludo).
Foi ento colocada nos tubos BRANCO e os enumerados de 1 a 5 uma
soluo padro de albumina e gua destilada nas medidas indicadas na tabela
1 para a curva padro e depois fez-se a leitura de absorbncia dos tubos.
Tabela 1 Quantidade de soluo padro de albumina e gua destilada nos respectivos tubos
Tubos
Soluo Padro
gua Destilada
de Albumina
BRANCO
1
2
(0,4mg/mL)
100 L
200 L
300 L
400 L
500 L
500 L
400 L
300 L
200 L
100 L
-
Tabela 2 Quantidade das amostras diludas e de gua destilada nos respectivos tubos
Tubos
Leite Integral
gua Destilada
Triplicata
Diludo 20x
50 L
450 L
Tubos
Leite Desnatado
gua Destilada
Triplicata
Diludo 20x
50 L
450 L
4. RESULTADOS E DISCUSSO
Ao fazer a leitura dos tubos de 1 a 5 (Figura 3) e do tubo BRANCO
foram obtidas as seguintes absorbncias:
Tabela 3 Absorbncias dos tubos 1 a 5 e BRANCO
Tubos
Leitura
BRANCO
0,234
0,121
0,239
0,280
0,316
Era esperado que fosse obtida uma absorbncia crescente ao longo dos
tubos, porm, por algum erro de pipetagem, o tubo 2 apresentou uma
absorbncia menor do que a esperada. Com esses valores montou-se uma
curva padro e ajustou-se uma reta como pode ser visto na Figura 4.
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Figura 4 Curva padro das amostras padres e reta ajustada com equao
y=0,6557x + 0,0672
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Tubos - LID
1
2
3
Leitura
Concentrao de
Mdia
0,139
0,168
0,157
protena (mg/mL)
21,9002
30,7458
27,3906
26,6789
mg/mL
Tubos LDD
1
2
3
Leitura
Concentrao de
Mdia
0,189
0,155
0,131
protena (mg/mL)
37,1511
26,7805
19,4601
27,7972
mg/mL
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5. CONCLUSO
Aps realizar o experimento concluiu-se que feitas as mdias pode-se
notar que a concentrao de protenas no leite desnatado foi maior que no leite
integral. E importante ressaltar que, por ter mais gordura que o leite
desnatado, o leite integral pode sofrer alteraes nas medidas de absorbncia,
pois a gordura um fator interferente na espectrofotometria.
Apesar de as mdias diferirem, a diferena pouca e justificada por
erros inatos ao experimento, podendo concluir que no existe diferena
significativa entre as concentraes de protenas do leite desnatado e integral,
como est nos rtulos.
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6. BIBLIOGRAFIA
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