FORMULAO E PREPARO DE MEIOS

O sucesso de um dado processo fermentativo depende muito de uma correta

definio de quatro pontos bsicos: o microorganismo, o meio de cultura, a forma de
conduo do processo fermentativo e as etapas de recuperao do produto.
Os meios de cultivo so projetados para atender a demanda nutricional do
microorganismo produtor, aos objetivos do processo e escala de operao. A seleo
desses meios depende, para a maioria dos processos em larga escala, do custo,
disponibilidade e propriedades de manejo dos componentes dos mesmos. Pode ressaltar
tambm que o desempenho do microorganismo depende muito da composio do meio de
cultura em que cultivado.
Estes meios de cultivo devem atender as caractersticas desejveis:
1) Ser o mais barato possvel minimamente oneroso.
2) Atender as necessidades nutricionais do microorganismo - a fim de que o produto
possa ser sintetizado.
3) No ocasionar problemas na recuperao e purificao do produto no conter
substncias incompatveis com o produto formado, ou que dificultem sua
recuperao (por exemplo, alterando a viscosidade do meio (uso excessivo de antiespumantes) ou criando modos de proteo ao produto, ou mesmo levando a
liberao pelo microorganismo de substncias que possam degradar o produto
formado como o caso da produo de protenas e ao mesmo tempo de
proteases).
4) Auxiliar no controle do processo, como o caso de ser ligeiramente tamponado, o
que evita variaes drsticas de pH, ou evitar uma excessiva formao de espuma.
5) Os componentes devem permitir algum tempo de armazenagem, a fim de estarem
disponveis todo o tempo.
6) Ter composio razoavelmente fixa
7) No causar dificuldades no tratamento final do efluente
A EVOLUO DOS MEIOS DE CULTIVO
Podemos dizer que, o desenvolvimento dos meios de cultivo e a utilizao de
solidificantes marcaram pontos importantes na evoluo da biotecnologia.
A primeira notcia da utilizao destes meios foi realizada pelo miclogo Brefeld,
em 1872, que conseguiu cultivar esporos de fungos em meios slidos realizados a base de
gelatina.
Como este sistema no era adequado para as bactrias (por seu menor tamanho), no
ano de 1878 Lister, divulgou um mtodo enfocado no cultivo puro baseado em diluies

feitas em srie em um meio lquido. Em 1881, caldo de carne lquido foi utilizado pela
primeira vez como componente nutricional de meio, formando um meio transparente ideal
para a observao da morfologia macroscpica das colnias microbianas.
Em 1882 despontou um dos grandes avanos nesta rea: o mdico alemo Walter
Hesse introduziu o Agar-agar (polissacardeo extrado de algas vermelhas) como
solidificante de meios. Anos mais tarde, em 1887, um ajudante seu chamado Petri,
comeou a usar placas de cristal planas, que passaram a se chamar placas de Petri, para
substituir as clssicas bandejas de vidro cobertas que usavam at ento.
Beijerinck e Winogradsky, foram de grande importncia no desenvolvimento de
meios seletivos e de enriquecimento. Formularam a composio destes tipos de meio de tal
forma que sua composio qumica favorecia o crescimento de certos tipos de
microorganismos que, em funo de seus processos metablicos, eram os nicos capazes de
utilizar certos nutrientes do meio.
Em 1892 Wrtz impulsionou o uso de meios diferencias, incorporando indicadores
de pH a composio de certos meios com o qual podia-se observar a produo de cidos em
fermentaes de certos microorganismos.

COMPONENTES BSICOS DE UM MEIO DE CULTIVO

Os componentes bsicos, nutricionalmente importantes, so gua, fontes de
carbono, de nitrognio, fsforo, enxofre, sais minerais e, em alguns casos, fatores de
crescimento.
A maioria dos processos biotecnolgicos industriais usam carbono e nitrognio a
partir de misturas complexas de produtos ou subprodutos naturais de baixo custo, buscando
resduos e guas residurias com boa composio e em disponibilidade.

1- gua
A maior parte dos microorganismos requer um certo grau de umidade para
crescer. Desta forma, a gua atua como meio universal onde ocorrem as reaes
biolgicas. Em geral so de fonte exgena (procedentes do meio e a gua disponvel, no
ligada ao soluto ou a outra substncia, difundem atravs da membrana celular). A
disponibilidade da gua se mede atravs de um parmetro chamado, atividade de gua,
indicativo da gua livre, e que se expressa como:
aW = PS/PW
Onde PS a presso parcial de vapor de gua na soluo e PW a presso
parcial de vapor de gua pura destilada.

De 80 a 90 % do peso do microorganismo de gua e os microorganismos mais

exigentes em relao a sua proporo disponvel so as bactrias (aw = 0,93 a 0,99)
seguidas das leveduras (aw = 0,83 a 0,91 ) e bolores (aw = 0,77 a 0,93).
A gua tambm constitu um importante veculo de contaminao, desta forma gua
utilizada na diluio ou no preparo dos meios de cultivo deve ter padres adequados e ser
isenta substncias que possam ser contaminantes. A gua deve ser tratada e em alguns
casos destilada e at deionizada.

2- Fontes de Carbono
So especialmente carboidratos: glicose (glicose pura, amido

hidrolisado), lactose (lactose pura, soro de leite ou de queijo, em p), amido ou fcula
(cevada, centeio, trigo, aveia, farinhas e farelos diversos, soja, amendoim, algodo, batata,
batata-doce, mandioca, sorgo), sacarose (melao de cana-de-acar, de beterraba, acar
mascavo, acar refinado) e D-xilose (madeira, resduos florestais e agroindustriais). Cerca
de 50% da massa de clula seca composta de carbono.
3- Fontes de Nitrognio
podem ser cevada (1,5 a 2,0%), melao de beterraba (1,5 a
2,0%), gua de macerao de milho milhacina (4,5%), farinha de aveia (1,5 a 2,0%),
farinha de centeio (1,5 a 2,0%), farelo de soja (8,0%), soro de leite (4,5%), vinhaa ou
vinhoto (resduo da destilao do mosto fermentado da produo de etanol), ou ainda
sulfato de amnio (que pode provocar em alguns casos reduo do pH ou, em alguns casos,
fenmenos de inibio por sulfato), (NH4)2HPO4, aminocidos ou uria (permite reduzir
problemas de controle de pH). O nitrognio essencial para a sntese de aminocidos,
protenas e nucleotdeos (DNA, RNA) pela clula, sendo que 7 a 12 % da massa seca de
clula composta de nitrognio.
EXEMPLOS DE FONTES DE NITROGNIO
PRODUTO
FONTE DE NITROGNIO
Penicilina
Milhocina, Extrato de levedo, farinha de
soja, soro de leite
Bacitrocina
Amendoim
Novobiocina
Vinhoto de destilados
Riboflavina
Homogeneizado de pncreas ou gelatina
Rifamicina
Farmamedia, leite de soja ou (NH4)2SO4
Butirosina
Extrato de sangue seco ou de hemoglobina
com (NH4)2SO4
Giberelina
Sais de amnio e fonte de vegetais naturais
Polienos
Leite de soja
lcool
(NH4)2SO4, uria, aminocidos
cido lctico
(NH4)2SO4, milhocina

4- Fontes de Fsforo
so solveis como monoamnio fosfato (MAP) ou diamnio

fosfato (DAP), ou ainda usado na forma de fosfato inorgnico. Usado na sntese de ATP e
de cidos nuclecos DNA e RNA, estando na proporo de 1 a 3% na massa seca de clula.
5- Fontes de enxofre
fazem parte da constituio de aminocidos (cistena, biotina,
tiamina, glutationa) das cadeias proticas da clula, usadas na composio de meios de
cultivo na forma de sulfatos ou tiossulfatos. Algumas clulas de bactria tm a
caracterstica de usarem enxofre como fonte de energia. Em geral, esta presente na massa
seca de clulas na proporo de 0,5 a 1,0%.
6- Traos de metais
necessrios (ferro, cobre, cobalto) geralmente esto presentes na
gua corrente ou na maioria das matrias-primas.
7- Sais minerais
so adicionados especialmente como fontes suplementares de
nitrognio, fsforo, enxofre, clcio, mangans, magnsio ou clcio, na forma de seus sais
solveis.
Entre os metais e os sais minerais podemos classificar estes em macronutrientes ou
micronutrientes:
- Macronutrientes: So necessrios em concentraes de 0,1 mM aproximadamente.Mg +2,
K+, Fe+3, Mn+2, Zn+2, Na+, Ca+2, Cl- , onde sdio e potssio esto envolvidos no sistema de
transporte celular por este motivo so essenciais ao crescimento das clulas. Ferro, Zinco e
magnsio atuam como cofatores necessrios para a ao enzimtica. O Ferro para enzimas
catalase e aconitase, o Zinco para a lcool desidrogenase e o magnsio para enzimas
relacionadas ao grau de associao de unidades ribossomais e a integridade da membrana.
- Micronutrientes So necessrios em concentraes de 10-3 a 10-5 mM. Nquel, Cobalto,
Vandio etc.
FAIXA DE CONCENTRAES DE SAIS MINERAIS USADAS
COMPOSTO
FAIXA
KH2PO4
1,0-4,0
MgSO4.7H2O
0,25-3,0
KCl
0,5 12,0
CaCO3
5,0 17,0
FeSO4.4H2O
0,01- 1,0
ZnSO4.8H2O
0,1- 1,0
MnSO4.H2O
0,01-1,0
CuSO4.5H2O
0,003- 0,01

7- Vitaminas ou Fatores de crescimento
os necessrios geralmente pertencem ao

grupo das vitaminas B ou compostos afins (biotina, tiamina, riboflavina), de certos
aminocidos ou cidos graxos. Em geral so necessrios aos meios na proporo de:
- Aminocidos 20 a 50 g/mL
- Vitaminas 10-20 g/mL
-Purinas e pirimidinas 1 -50 ng/mL
A adio destes fatores ao meio pode tornar invivel, especialmente para instalaes de
grande porte, a menos que isto signifique um enorme ganho econmico na recuperao do
produto, ou ainda, que preserve alguma caracterstica fundamental de um produto de alto
valor agregado.
Para suprir as necessidades de linhagens mais exigentes pode-se adicionar aos meios de
cultivo, certos materiais complexos como:
-

Extrato de levedura (autolisado de leveduras altamente protico)

Extrato de carne, extrato de malte ou peptona (hidrolisados de protenas).

Estes materiais adicionados conjuntamente ou individualmente permitem introduzir ao

meio de cultura os fatores faltantes, mas alm de onerosos, so complexos e de composio
varivel ao longo do tempo. Com isto, podem provocar oscilaes no processo fermentativo
e tambm dificultar as operaes de recuperao do produto.

TIPOS DE MEIO DE CULTIVO

EM RELAO A COMPOSIO:
Em relao composio os meios de cultivo podem ser classificados:
A) Sintticos ou Quimicamente definidos
Meios de cultivo constitudos apenas de substncias qumicas puras definidas (fonte
de C (glicose), sais e fontes complexas, vitaminas) so definidos como Meios sintticos ou
quimicamente definidos ou, onde neste caso a composio qumica conhecida e pode ser
reproduzida a qualquer instante. Por esta razo, para as clulas que apresentam um bom
desempenho em meios deste tipo, espera-se a ocorrncia de um sistema produtivo muito
estvel, alm de no apresentarem, em geral, problemas quanto recuperao e purificao
do produto final. Estes meios mesmo sendo mais onerosos, muitas vezes so preferidos
caso permitam uma maior economia nas etapas de recuperao do produto.
Estes meios levam ingredientes como extrato de levedura, peptona, infuso de
crebro, extrato de carne, etc. que contm nutrientes em abundncia.
Meios definidos so utilizados por exemplo, quando se quer estudar os nutrientes
essenciais para o crescimento de um determinado microorganismo.

B) Meios complexos ou de composio indefinida.

Meios de cultivo que utilizam matrias-primas como principal fonte de carbono
recebem esta denominao e so algumas vezes de composio varivel, sendo muitas
vezes necessrio corrigi-los, ajust-los, para que estes alcancem sempre composies
semelhantes, de modo a evitar oscilaes no processo fermentativo. So menos onerosos e
precisam ser complementados com alguns sais (particularmente contendo nitrognio e
fsforo)
O adequado balano de C/N pode ser fundamental, especialmente, se o pH no for
controlado.
C) Meios de Enriquecimento.
So meios complexos (normalmente) com aditivos
adicionais para favorecer o crescimento de determinados
microorganismos (particularmente hetertrofos exigentes).
Exemplo: adio de sangue, soro ou extratos de tecidos de
animais e plantas.
Meio Tioglicolato- o meio de enriquecimento mais utilizado
em microbiologia. Contm 0,075% de agar para evitar as
correntes de conveco no transporte de oxignio e o cido
tiogliclico adicionado atua como agente redutor diminuindo o
potencial de oxi-reduo do meio. So utilizados ainda outros
fatores nutrientes (casena, extrato de levedura e carne,
vitaminas etc.). Es el caldo de enriquecimiento ms utilizado
en Microbiologa. Permite o desenvolvimento da maior parte
das bactrias patogenas.

D) Meios seletivos.
So aqueles que favorecem por sua composio o crescimento especfico de um
microorganismo particular (ou grupo de microorganismos). So de grande utilidade para o
isolamento de microorganismos a partir de uma populao microbiana mista.
Exemplo: CO2 como fonte de carbono seletivo para auttrofos; adicionando cristal
violeta se inibe o crescimento das bactrias Gram (+); utilizando maltose como nica fonte
de carbono s cresceram os que usam maltose.
Os microorganismos que so utilizados como biagentes em bioprocessos industriais
podem ser obtidos de vrias formas: comprados em colees de cultura (prtica bastante
vivel tendo em vista a existncia de muitas colees de cultura em vrios pases
Agricultural Research Service Culture Collection (USA), Coleo de culturas Tropical (SPBrasil)), podem ser obtidos atravs de tcnicas de melhoramento gentico (aplicando

tcnicas de engenharia gentica para obter clulas mais produtivas ou produtoras de

substncias que normalmente no produzem) ou ainda serem isoladas a partir de recursos
naturais como solo, plantas, guas etc. Quando as clulas so extradas destes recursos
naturais, na maior parte das vezes, esto em conjunto com outras espcies e por este motivo
precisam ser isoladas, onde neste caso se aplicam meios de isolamento. A atividade de
isolamento do microorganismo uma prtica de grande importncia para a obteno de
novas linhagens de interesse industria, envolve muito trabalho experimental e custo elevado
muitas vezes, porm pode levar ao isolamento de linhagens que so melhores produtoras e
at mesmo a descoberta de novos produtos.
E) Medios diferencias.
So aqueles destinados a facilitar a identificao de microorganismos de uma
mistura por suas propriedades diferenciais de crescimento em tais meios. Assim permite
diferenciar uma espece da outra pelo aspecto macroscpico de seu crescimento, ou seja,
por diferenas no aspecto das colnias, cor, textura, etc. Exemplo: meio Agar de sangue
que diferencia microorganismos hemolticos de no hemolticos.

Agar Sangue (a base de soja com 5% de sangue de

carneiro desfibrinado- funo protica)- Meio de uso
geral que permite o crescimento tanto de
microorganismos exigentes como no exigentes, que
incluem bactrias aerbias e anaerbias. Permite
visualizar reaes hemolticas de muitas especies
bacterianas, neste caso, bacterias produtoras de
hemolisina criam um halo em funo da enzima lisar as
hemcias do sangue utilizado.

F) Meios de manuteno e Transporte.

Costumam ser distintos dos meios de crescimento timos, j que o crescimento
rpido e prolfico costuma ocasionar morte rpida das clulas. So utilizados para o
armazenamento e manuteno temporria de determinado material. A principal funo
desse tipo de meio manter a viabilidade de possveis microorganismos presentes, ainda
que no favorea a sua multiplicao, o que muitas vezes no aconselhavl, considerando
os produtos metablicos txicos que se acumulam no meio.
Exemplo: ao adicionar glicose e metaboliza-la os microorganismos produzem cidos,
acidificando o meio, por este motivo prefervel no adicionar glicose aos meios de
manuteno.

Desta forma podemos concluir que em processos mais complexos, como por
exemplo, na produo de vacinas e antibiticos, os meios de cultura empregados
normalmente apresentam tambm uma composio complexa. No caso da produo das
vacinas, os processos utilizam volumes menores (25 a 3500 litros - escala piloto), quando
comparados a outros processos industriais de cultivo sendo o produto final considerado de
elevado valor agregado.
O conceito da vacina baseia-se em se introduzir no organismo o antgeno do
microorganismo patognico, induzindo-se assim a produo de anticorpos pelo mecanismo
de defesa do hospedeiro, sem que este contrarie a doena, que seria provocada pelo
microorganismo invasor. Este processo de induzir a formao de anticorpos na pessoa,
atravs de uma introduo artificial do antgeno (de natureza humana ou animal) como o
caso das vacinas, conhecido como imunizao ativa artificialmente adquirida. Se a
introduo deste antgeno for acidental por vias de acesso ao organismo e este tiver
quantidade de anticorpos suficientes para evitar a instalao da doena esta chamada
imunizao ativa naturalmente adquirida, que no e o caso das vacinas.
Os meios de produo das vacinas so variados, estas podem ser: de origem
bacteriana (tcnicas de cultivo de bactrias) ou virais (tcnicas de cultivo de clulas de
mamferos e aves).
No caso das de origem bacterianas dependendo da localizao do antgeno no corpo
bacteriano ou no meio, vai variar sua classificao e seu processo final de obteno e
purificao. Outra caracterstica na produo das vacinas que muitas vezes so
necessrios mais de um tipo de meio de cultivo, para produo de uma nica vacina e
normalmente so complexos, alguns necessitando de soro de sangue animal. Abaixo so
citados alguns exemplos de meios de cultivo usados na produo de vacinas bactrias e
virais.

Meios de cultivo para Vacinas bacterianas:

Vacina bacteriana BCG Mycobacterium bovis Meio Sauton (composio por litro)
L-asparagina (4,0 g)
Citrato de ferro amoniacal (0,05 g)
cido ctrico anidro (2,0 g)
Sulfato de magnsio (0,5 g)
Fosfato de potssio dibsico (0,5 g)
Glicerina (60 g)
Tensoativo Tween-80

Vacinas bacterianas que excretam toxinas Difteria Corynobacyerium diphtheriae

(/L) Meio desenvolvido por Linggood e Fenton
Carne bovina (155 g) previamente digerida (papana, NaOH, HCl, cido actico e
hidrocloreto de cistena)
Extrato de levedura em pasta (0,15 g)
Lactato de sdio (soluo 60% p/v) (1,5 ml)
Maltose ( soluo 50% p/v) (50 ml)
Sulfato de magnsio heptahidratado (0,62 g)
-alanina

(1,75 mg)

cido nicotnico (1,75 mg)

cido pimlico (0,11 mg)
Sulfato de cobre pentahidratado (0,75 mg)
Sulfato de zinco heptahidratado
Cloreto de mangans II tetrahidratado (0,22mg)
No caso das vacinas virais o seu preparo normalmente realizado com cultivos invitru de clulas animais. Tais cultivos so obtidos diretamente em rgo de animais
(clulas rim de macaco ou de cobaia) inoculados com o vrus apropriado, onde aps o
cultivo apropriado o vrus separado, purificado, inativado ou no, para dar origem a
vacina correspondente.
Os meios tambm na maior parte das vezes so extremamente complexos mais at
do que para o cultivo de microorganismos, necessitando na sua composio de fludos
biolgicos. Na tabela seguinte apresentado a formulao, de um dos primeiros meios
semi-sintticos desenvolvido para crescimento de clulas de mamfero.
A complexidade destes meios, tanto para produo de vacinas bacterianas, quanto
virais, pode ser explicada:
- No caso das vacinas bacterianas
pela grande flexibilidade metablica que certos
microorganismos tm desenvolvido para sobreviver a bruscas variaes que possam ocorrer
ao seu redor.
- No caso das vacinas virais
pelo fato de que os cultivos que envolvem clulas animais
que provm de um organismo vivo altamente diferenciado, s sobrevivem dentro de uma
estreita faixa de condices ambientais altamente especficas, dado que em seu ambiente
natural, o sistema global do organismo superior o responsvel por ministrar e regular o
nvel de nutrientes e manter o ambiente homeosttico.

Meio mnimo desenvolvido por Eagle

COMPONENTE

CONCENTRAO
(Mm)

COMPONENTE

Aminocidos

CONCENTRAO
(Mm)

Vitaminas

Arginina

0,6

cido flico

0,0023

Cistina

0,1

Colina

0,0083

Fenilalanina

0,2

Inositol

0,011

Glutamina (Fonte C)

2,0

Nicotinamida

0,0082

Histidina

0,2

Pantotenato

0,0046

Isoleucina

0,4

Piridoxal

0,006

Leucina

0,4

Riboflavina

Lisina

0,4

Tiamina

Metionina

0,1

Treonina

0,4

Triptofano

0,05

NaCl

116,0

Tirosina

0,2

KCl

5,4

Valina

0,4

CaCl2

1,8

MgCl2.6H2O

1,0

Outros

0,00027
0,003

Sais Inorgnicos (isotonidade do meio)

Glicose (fonte C)

30,0

NaH2PO4.2H2O

1,1

Vermelho de fenol

0,014

NaHCO3

23,8

Soro sanguneo

10% (v/v)

(bovino e equino)
Antibiticos: Penicilina (100 UI/ml), Estreptomicina (50 g/ml) e Anfotericina (25 g/ml)

EM RELAO AO ESTADO
Podem ser classificados em meios lquidos, slidos ou semi-slidos
A.- Meios lquidos maior parte dos bioprocessos industriais utilizam meios lquidos para
obteno dos produtos de interesse.
B- Meios Semi-slidos ou Slidos quando ao meio lquido so adicionados agentes
solidificantes como Agar que um polissacardio produzido por algas vermelhas que
gelefica o meio em temperaturas abaixo de 45 C.

Meios Slidos utilizam Agar na concentrao de 1,5% e semi-slidos utilizam Agar

a uma concentrao de 0,7%. Meios com agar em geral so usados como meios seletivos,
diferencias ou de identificao.
Poucos bioprocessos utilizam como meios de cultura, meios semi-slidos, em geral
estes so compostos por matrias-primas em estado slido (bagao de cana-de-acar,
sabugo de milho, resduos florestais, cereais, polpas de frutas, etc) enriquecidas com meio
nutriente ou mesmo levemente umedecidas, de modo que, o nvel da gua no sistema
assegura o crescimento e o metabolismo das clulas, mas no excede a mxima capacidade
de ligao da gua a matriz slida. Estes processos so denominados de fermentao semislida e datam desde 1000 AC, onde se usavam massas de cereais cozidos e midos para
produo de bioprodutos alimentcios. Atualmente h exemplos da possvel aplicao de
fermentaes semi-slidas para obteno de diversos produtos como: etanol, cidos
orgnicos, enzimas, toxinas, antibiticos, biopesticidas, alimentos orientais etc.

CONDIES ESSENCIAIS NO PREPARO DO MEIO DE CULTIVO

No preparo do meio de cultivo essencial ajustar bem a concentrao do
substrato j que um excesso de substrato equivale a um maior gasto alm de comprometer
o rendimento do mesmo, em funo de uma possvel inibio do metabolismo enzimtico
microbiano por conta desta frao excedente.
O meio deve ser ainda bem homogeneizado j que os microorganismos se nutrem e
degradam o substrato solvel no meio - da sua caracterstica haloflica, alguma frao mal
misturada ou mesmo insolubilizada pode acarretar quedas de produo (rendimento e
produtividade).
O meio deve ser ainda fortificado, suplementado com as quantidades ideais de
sais, metais e cofatores necessrios ao metabolismo microbiano. Sem excessos j que, por
exemplo, on sdio em quantidades excessivas pode ser malfico a clula e outros ons
devem ser colocados em quantidades suficientes como potssio e o clcio, necessrios e
benficos a clula.

METODOLOGIA PARA FOMULAO DE MEIOS

Podemos representar os microorganismos, bactrias e fungos, por uma formula
emprica baseada nos seguintes elementos bsicos: C, H, O e N. A composio elementar
de um microorganismo durante um cultivo no se modifica, no entanto a composio
macromolecular, isto : protenas, cidos nuclecos, etc, pode variar sensivelmente.
Assim tendo a composio mdia elementar do microorganismo, possvel escrever
a formula mnima deste microorganismo como: CHON (na qual esta representado 95% p/p

da biomassa) e com fins meramente prticos definir um C-mol de biomassa como a

quantidade de biomassa que contm um tomo grama de carbono.
Precisamos ainda ter o conhecimento de que:
1- Em aerobiose de 50 a 60 % do carbono contido no substrato incorporado
biomassa.
2- Em anaerobiose 10-20 % do carbono contido no substrato incorporado
biomassa.
Desta forma o meio a ser formulado dever conter uma composio em C, N , O e H
mais ou menos prxima a composio elementar do microorganismo relacionada a estes
componentes.
A tabela abaixo descreve a composio elementar de alguns microorganismos em
base seca (%peso seco).
Composio de Microorganismos (% peso seco)
ELEMENTO

BACTRIAS

LEVEDURAS

BOLORES

Carbono

46-52

46-52

45-55

Oxignio

20

20

20

Hidrognio

10

10

10

Nitrognio

10-14

6-8,5

4-7

Enxofre

0,2-1,0

0,01-0,3

0,1-0,5

Fsforo

2 -3

0,8-2,6

0,4-4,5

Magnsio

0,1-0,5

0,1-0,5

0,1-0,3

Potssio/Clcio

0,1-0,5

0,1-0,5

0,1-0,5

Sdio/Ferro

0,01-0,1

0,01-0,1

0,01-0,1

Outros

Traos

traos

Traos

COMPOSIO DA LEVEDURA SECA Matria Seca

Matria Seca

90,70

Protena Bruta

30,77

Extrato Etreo

1,10

Fibra Bruta

0,13

Matria Mineral

9,81

Clcio

1,48

Fsforo

0,75

Lisina

1,87

Metionina

1,27

Hisitidina

0,47

Arginina

0,98

cido Aspartco

3,06

Treonina

1,57

Serina

0,94

cido Glutnico

4,08

Prolina

0,90

Glicina

1,45

Valina

1,97

Alanina

1,87

Isoleucina

1,37

Leucina

2,02

Tirosina

0,87

Penilalanina

1,06

Fonte: MIYADA, 1978 citado por CAMPOS NETO (1986)

Assim para se determinar a massa de C,H, O e N em microorganismo (composio

elementar), lava-se e seca-se, calculando a gua residual do microorganismo e em funo
desta anlise elementar (dividindo a massa dos componentes pelo peso atmico de cada um
destes componentes) pode-se quantificar C, N, O ou biomassa.
Vamos tomar como exemplos dois problemas:

1) Sugerir um meio de cultivo constitudo de glicose como fonte de Carbono e

amnio como fonte de nitrognio para se obter 10g/l de Escherichia coli (bactria
aerbia que incorpora 60% de Carbono a sua biomassa. Dada a composio da
bactria:
C 50%
Fonte de C = glicose C6H12O6 PM =180 = 40%C
N 10%
Fonte de N = (NH4)2SO4
PM = 132 = 21% de N e 24% de S
S 1%
Fonte de Mg = MgCl2
PM = 94 = 25 % Mg
Mg 0,5% Fonte de P = KH2PO4
PM = 136 = 23 % de P
P 2%
O 10%
Glicose 60% absorvida
1g glicose
0,4 de C

x glicose
10 g/l * 0,5 C na clula

x= 12,5 g de glicose como somente 60% deste incorporado a biomassa devemos

ento usar :
x = 12,5 * 1,6 = 21 g/l de glicose

Nitrognio (100% absorvido)

1 g de (NH4)2SO4
0,21 N

x de(NH4)2SO4
10 g/l de clula * 0,1 N na clula

x= 4,8 g/l de (NH4)2SO4

Fonte de Enxofre
1g (NH4)2SO4
0,24 S

x de (NH4)2SO4
10 g/l * 0,015 na clula

x= 0,42 g/L de (NH4)2SO4

Fonte de magnsio
1 g de MgCl2 =
0,25 Mg

x de MgCl2
10 g/l de clula * 0,005 Mg na clula

x= 0,2 g/L de MgCl2

Fonte de Fsforo
1 g de KH2PO4 =
x de KH2PO4
0,23 P
10 g/l de clula * 0,02 P na clula
x= 0,869 g/l de KH2PO4

2) Assuma que clulas possam converter 2/3 (p/p) do carbono contido no

substrato (alcano ou glicose) em biomassa. Calcule os coeficientes estequiomtricos
para utilizao de hexadecano (PM 226 g) e glicose (PM 180 g)
S + 1 O2 + 2 NH3 1 ( C4,4 H 7,3 N 0,86 O12) + 2 CO2 + 3 H2O
Para Glicose lembrando que 2/3 do carbono incorporado a biomassa
Mol glicose 180 g C6 H12O6
6 x 12 g de C ______ 180 g de Glicose
72 g de C
_______ 48 g de C incorporado a biomassa
48 g = 1 (4,4) (12)
1 = 0,9
Para Nitrognio
2 (14) = (0,9) (14) (0,86)
2 = 0,77
Para Hidrognio
(0,77) (1) (3) = (7,3) (0,9) (1) +
3 (1) (2)
3 = 3,9
Para Carbono
(6) (12) = (0,9) (4,4) (12) + 2 (1) (12)
2 = 2,0
Para Oxignio
1 (2) (16) = (12) (16) (0,9) + 2 (2) (16) + 3,9 (16)
1 = 6,4
Assim para Glicose os coeficientes estequiomtricos seriam:
S + 6,4 O2 + 0,77 NH3 0,9 ( C4,4 H 7,3 N 0,86 O12) + 2 CO2 + 3,9 H2O

Para Hexadecano lembrando que 2/3 do carbono incorporado a biomassa

Mol hexadecano 226 g C16 H34
16 x 12 g de C ______ 226 g de Hexadecano
192 g de C
_______ 128 g de C incorporado a biomassa
128 g = 1 (4,4) (12)
1 = 2,42
Para Nitrognio
2 (14) = (2,42) (14) (0,86)
2 = 2,08
Para Hidrognio
(2,09) (1) (3) = (2,42) (7,3) (1) +
3 (1) (2)
3 = 11,28
Para Carbono
(16) (12) = (2,42) (4,4) (12) + 2 (1) (12)
2 = 5,35
Para Oxignio
1 (2) (16) = (2,42) (12) (16) + 2 (2) (16) + (11,28) (16)
1 = 25,51
Assim para Glicose os coeficientes estequiomtricos seriam:
S + 25,51 O2 + 2,08 NH3 2,42 ( C4,4 H 7,3 N 0,86 O12) + 5,35 CO2 + 11,28 H2O

3) A partir da composio de Escherichia coli dada abaixo, calcular a formula mnima

para esta bacteria
Elemento

Percentual

50%

20%

14%

8%

3%
Somatrio = 95%

Para C = 50% de 95% 52,63 % de C dividido pela massa atmica

52,63%/12 = 4,385
Para O = 20% de 95% 21,05% % de O dividido pela massa atmica
21,05%/16 = 1,315
Para N = 14% de 95% 14,736 % de N dividido pela massa atmica
14,736%/14 = 1,053
Para H = 8% de 95% 8,42 % de H dividido pela massa atmica
8,42%/1 = 8,42
Para P = 3% de 95% 3,16 % de P dividido pela massa atmica
3,16% /