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Biorremediacin

UNIVERSIDAD CIENTFICA DEL SUR

Facultad de Ingeniera y Gestin Ambiental

Curso:

Biorremediacin

Profesor: Alexandra Muos

Ttulo:

Aislamiento de Materia Orgnica de Suelos y Agua

Alumnas:
Gallardo Hctor
Nieuwland Antoinette
Ponce Zuleika
Valladares Eduardo

Lima- Per

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1.- Introduccin
El muestreo es una herramienta para la investigacin cientfica. El objetivo de esta
prctica es a partir de una realidad en estudio mediante la representacin
adecuada de la poblacin, la determinacin de inferencias sobre dicha poblacin.
Existen dos formas de ejecutar el muestreo: simple y compuesta; la diferencia
radica en el nmero de toma y la frecuencia de la misma.
La realizacin del muestro se lleva a cabo mediante una metodologa, en este
punto no existe una nica forma de ejecucin debido a la intervencin de factores
principalmente del rea o poblacin bajo estudio. Cabe resaltar, que la existencia
de mltiples mtodos implica el establecimiento de criterios bsicos para
asegurar la calidad en el proceso.
El muestreo del suelo debe de realizarse en reas homogneas a fin de evitar
reas con posible influencia de anormalidades en el momento del anlisis. El
tiempo de muestreo debe ser suficiente para efectuar de manera correcta el
procedimiento, asimismo debe de realizarse en la misma poca del ao. En caso
de lluvia o riego debe dejar pasar 48 horas. Entre los puntos importantes del
muestreo es asegurar la representatividad de las propiedades edficas de la zona.
En el caso del muestreo de agua simple empleado para la determinacin de
parmetros de calidad del agua; en cambio la muestra compuesta permite la
medicin del caudal instantneo. Asimismo la muestra debe ser homognea y
representativa, adems no debe modificar las propiedades fsicas, qumicas o
biolgicas del agua. En cuanto al volumen de la muestra se encuentra definido
principalmente por las sustancias de estudio y de la concentracin esperada,
normalmente se selecciona entre 1 y 2 litros. Los analitos de la muestra deben de
estar estables con el fin de asegurar resultados representativos, la misma
condicin debe aplicarse durante el almacenamiento.
Otro punto a tratar corresponde a las diluciones seriadas. Estas diluciones son
hechas a partir de la primera disolucin y posteriormente poseen el mismo factor
de dilucin.
En la presente practica el muestreo de agua y suelo resulta ser una de las
tcnicas con importancia relevante para la realizacin de las actividades; debido a
que partir de estas se obtendrn una serie de microorganismos para su cultivo
mediante la tcnica del raspado en el agar nutritivo.

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Objetivos
o
o
o
o

Elaborar diluciones seriales a parir de la disolucin concentrada

Comprender el fundamento de las diluciones seriadas.
Comprender el fundamento del muestro en agua y suelo.
Cultivar las muestras (agua o suelo) en el agar nutritivo.

2.- Materiales y Mtodos

2.1 Materiales:

Muestra de Agua
Muestra de Suelo
Agua Destilada
Mechero
Bagueta
Vaso de Precipitado de 50 mL
Bombilla para Pipeta
Asa de Digralsky
Incubadora
Rotuladores
12 Tubos de Ensayo
14 Pipetas de Vidrio de 1mL
1 Pipeta de Vidrio de 10 mL
4 Placas Petri con Agar

2.2 Mtodos
Caracterizacin del terreno y puntos de muestreo
1. Se observ el rea alrededor de los puntos de muestreo y se tom nota si
haba presencia de vegetacin y su naturaleza, el tipo de suelo, la
presencia de contaminacin de las aguas y sus posibles causas, el clima,
tipificacin de la zona (urbana/rural) y actividades antropognicas que se
realizan en zonas colindantes.
2. Se escogieron los puntos de muestreo del lugar utilizando dos criterios:
accesibilidad y presencia de contaminacin.
Imagen N 1: Punto de muestreo.

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Fuente: Elaboracin Propia

Imagen N 2: Colindancias del punto de muestreo.

Fuente: Elaboracin Propia

Muestreo de agua
1. Se acondicion una botella de plstico para almacenar la muestra.
2. Entre dos personas se logr una posicin segura para extraer la muestra de
la asequia.
3. Se procedi a sumergir la botella (con las manos totalmente cubiertas por
plstico) hasta unos 10 cm por debajo de la superficie, aproximadamente.

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4. Al llenarse por completo, se retir de la fuente, se tap y guard en una

bolsa de plstico hasta su uso en el laboratorio.
Imagen N 3: Fuente de la muestra de agua.

Fuente: Elaboracin propia

Imagen N 4: Procedimiento de muestreo.

Fuente: Elaboracin Propia

Muestreo de suelo
Imagen N 5: Procedimiento de muestreo.

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Fuente: Elaboracin Propia

Procedimiento de Laboratorio

Dilucin Seriada
Consiste en una serie de Diluciones simples que amplifican el factor
de dilucin rpidamente, comenzando con una pequea cantidad
inicial de muestra. La fuente del material para diluir en cada paso
viene del material diluido en el tubo anterior. En una dilucin seriada
el factor de dilucin total en cualquier punto es el producto del factor
de dilucin individual en cada uno de los tubos.
Imagen N 6: Procedimiento de laboratorio.

Fuente: Elaboracin propia

Sembrado en Superficie con Asa de Digralsky

Sobre una Placa Petri se vierte el medio de cultivo, en este caso
usaremos Agar, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie la

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muestra diluida. Con ayuda de un Asa de Drigalsky se extiende la

muestra hasta su absorcin total por el medio de cultivo. La muestra
debe estar diluida en agua, puede provenir de un medio Acuoso
como tambin de un medio Terrestre. Al igual que cualquier mtodo
de siembra este proceso debe ser realizado cerca de un mechero
encendido con la finalidad de esterilizar el ambiente en el cual se
est trabajando, evitando as la contaminacin de la muestra.
Imagen N 7: Procedimiento de Laboratorio.

Fuente: Elaboracin propia

3.- Procedimiento
3.1 Muestra de Agua
Cultivo microbiolgico: Se realiz dos veces para la muestra de agua y suelo
contaminados.
1. Se extrajo 1 mL/ gr de agua/ tierra de la muestra y se coloc en la balanza
con papel toalla como contenedor (2.3 gr), en caso de la tierra, y para el
agua se calcul con la misma pipeta de extraccin (de 1mL de capacidad).

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Imagen N 8: Paso N 1 para muestra de agua.

Fuente: Elaboracin Propia

2. Con la pipeta de 10 ml se extrajeron 9 ml de agua destilada desde su
recipiente. Se mezcl el agua/ la tierra con el agua destilada en un beaker
hasta que la tierra se diluya.
3. En 6 tubos de ensayo se coloc 9 ml de agua destilada cada uno, y se
procedi a agregar 1 ml de la mezcla anterior en el tubo n 1; del tubo n 1
se extrajo 1 ml en pipeta de 1 ml estril para el tubo n 2 y del n 2 al n 3,
sucesivamente hasta llegar al tubo n 6.
Imagen N 9: Paso N 3 para muestra de agua y tierra.

Fuente: Elaboracin Propia

4. Se encendi el mechero y se procedi a esterilizar el asa de Drigalsky que
posteriormente fue utilizada para sembrar bacterias en 4 placas de agar
nutritivo (2 para la muestra de tierra y 2 para la muestra de agua). Asimismo
se procedi a la siembra de ambos en caldo.

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5. A 2 de las placas agar (una de tierra y una de agua) se agregaron 3 gotas

de disolucin cada una y las otras 2 placas recibieron 1 ml cada una desde
la micropipeta.
Imagen N 10: Pasos N 4 y 5 del procedimiento de laboratorio.

Fuente: Elaboracin propia

6. Se dej reposar las placar agar en el laboratorio de Ingeniera Ambiental
bajo condiciones de temperatura ambiente debidamente identificadas con la
fecha, nombre del grupo, integrantes del grupo y disoluciones.
7. Despus de 1 semana se procedi a hacerle un conteo de colonias y su
diferenciacin.

3.2 Muestra de Suelo

a. Diluir la muestra de la siguiente manera:
i. Muestra de Suelo: Diluir 10 gr de la muestra de suelo en 90
mL de Agua Destilada. Homogenizar.
b. Verter 9 mL de Agua Destilada en doce Tubos de Ensayo, seis para
la Muestra de Suelo.
c. Para cada Muestra se realizara el mtodo de Dilucin Seriada
usando seis Tubos de Ensayos con 9 mL de Agua Destilada cada
uno, en donde se ira diluyendo 1 mL de la muestra en el 1er Tubo,
luego 1 mL de la dilucin del 1er Tubo en el 2do Tubo y asi
sucesivamente hasta llegar al Tubo Nro 6, este procedimiento se
realiza para la muestra de suelo:

Imagen N 11: Procedimiento de laboratorio.

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Fuente: Elaboracin Propia

d. Se proceder a colocar 0.5 mL de la Muestra, diluida en el Tubo Nro
6, en una Placa Petri para luego aplicar el mtodo de Sembrado en
Superficie con el Asa de Degralsky. Realizar este procedimiento en
dos Placas Petri por Muestra (Dos para la Muestra de Suelo).
e. Incubar las Placas Petri a 26C durante tres das en una estufa
incubadora.
f. Toma de resultados.
g. Anlisis de Resultados.

4.- Resultados

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Dilucin Muestra Suelo

Tapa - Repeticin 1
Presencia de Colonias

Dilucin Muestra Suelo

Contratapa - Repeticin 1
Presencia de Colonias

Dilucin Muestra Suelo

Tapa- Repeticin 2- Presencia de

Dilucin Muestra Suelo.

Contratapa-Repeticin2-

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Colonias

Presencia de Colonias

Dilucin Muestra Agua

Tapa - Repeticin 1- Pres.
Colonias

Dilucin Muestra Agua

Contratapa Repeticin1. Pres
Colonias

Dilucin Muestra Agua

Tapa - Repeticin 2
Presencia de Colonias

Dilucin Muestra Agua

Contratapa - Repeticin 2
Presencia de Colonias

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5.- Discusin

La muestra de agua se recolectaron de una de las lagunas de Pantanos de

Villa. Por ende se encontrarn colonias de Coliformes fecales y Coliformes
totales, por la presencia de aguas residuales de descargas.
La muestra de suelo se recolectaron de una de la fraccin de suelo
adyacente lagunas de Pantanos de Villa. Por ende son las colonias
presentes en Placas Petri con agar nutritivo, tanto en la muestra de agua y
de suelo son las mismas.
El Mtodo de Dilucin Seriada es muy efectivo para separar los
microorganismos de la muestra base, este se complementa con el mtodo
de siembra el cual nos permite cuantificar y determinar los microrganismos
presentes en la totalidad de la muestra.

6.- Conclusiones

El Mtodo de siembra utilizado no es el ms adecuado para determinar

microorganismos ya que en los resultados solo hubo crecimiento de
bacterias ms no de hongos u otros microorganismos presentes en las
muestras. Para cada tipo de microorganismo existe una tcnica y un
procedimiento ms efectivo.
Segn los resultados obtenidos se puede concluir que no todos los
microorganismos encontrados en el agua son iguales a los encontrados en
el suelo, esto se puede verificar observando la presencia de bacterias de
color amarillento en la muestra de Suelo las cuales no se encuentran en la
muestra de Agua.

7.- Recomendaciones

Se recomienda verificar, antes de la prctica, si todos los equipos e

instrumentos a usar estn en buenas condiciones; de no ser as los
resultados pueden variar considerablemente.
Se recomienda el correcto uso de los Equipos de Proteccin Personal en un
laboratorio, as se evitara o minimizara cualquier accidente o incidente
durante la prctica.
Se recomienda tener una adecuada y estricta manipulacin de las muestras
al momento de desarrollar la prctica, siguiendo un protocolo ya
establecido, esto evitara cualquier contaminacin de los usuarios con la
muestra.

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Se recomienda, al momento de desarrollar la prctica, la toma de apuntes

con la finalidad de poder usar estos datos en el anlisis de los resultados.