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INTRODUO AO EQUILBRIO

CIDO-BASE E
POTENCIOMETRIA DE H+
TITULAO POTENCIOMTRICA DE UM
AMINOCIDO
TERMODINMICA

Mestrado integrado em Bioengenharia


2014/2015

Ana Filipa Adonias Costa up201403759


Data do trabalho: 27/02/2015

Maria Joo Ferreira Pacheco up201405251


relatrio: 6/03/2015

Mariana Mendes Martins Coelho up201405133


Grupo 3, MIB 2

Data do

NDICE
Introduo 3
Procedimento experimental 4
Cuidados a ter

Condies experimentais 5
Resultados experimentais

Dados obtidos experimentalmente


Dados conhecidos

Incertezas dos instrumentos de medida

Dados a retirar da titulao da


glicina.9
Formulrio

Processamento dos dados experimentais


Clculos e respetivos erros

10

10

Erros absolutos 15
Erros relativos

16

Compilao dos resultados 17


Discusso dos resultados

21

Concluso 23
Bibliografia

24

INTRODUO
2|Pgina

Esta atividade experimental teve dois objetivos principais: a


calibrao do eltrodo de pH, e a titulao da glicina com a
determinao da sua concentrao.
A calibrao do eltrodo foi possvel atravs da medio do
potencial eltrico de 3 solues diferentes (cida, bsica e neutra),
todas de pH conhecido, o que nos permitiu traar a reta de calibrao
do pH ( E=apH +b ) e calcular a sensibilidade do aparelho, sabendo
que sensibilidade=a/( 2,303 RT /F ) , sendo F a constante de Faraday, e
R a constante dos gases perfeitos. Este valor ser menor que um,
sendo que quanto mais prximo deste valor, mais precisa ser a
medio do potencial eltrico, uma vez que o aparelho mais
sensvel passagem de eletres.
A 2 parte consiste numa titulao potenciomtrica da glicina. A
glicina um aminocido e, como tal, possui um grupo amina (-NH 2,
grupo bsico) e um grupo carboxilo (-COOH, grupo cido) sendo, por
isso, necessrio recorrer a um cido forte, o HCl, e a uma base forte,
o NaOH, para contrariar o efeito tampo produzido por ambas as
espcies. Com a adio de HCl, a glicina fica sob a sua forma mais
protonada, NH3+-CH2-COOH, sendo por isso titulada com o NaOH, base
forte. O pH da soluo no ponto inicial da titulao ento
determinado

pela

protlise

da

espcie

NH3+-CH2-COOH.

Com

pequenas adies de NaOH, o grupo carboxilo vai perdendo os seus


protes e, por isso at ao 1 ponto de equivalncia, o efeito tampo
dado pelo par conjugado -COOH/-COO-. Isto significa que no 1 ponto
de equivalncia, o grupo carboxlico encontra-se completamente
desprotonado (NH3+-CH2-COO-). A partir deste momento, o grupo
NH3+ que se vai encarregar de tamponar a soluo perante a adio
de base forte (tampo -NH3+/- NH2). No 2 ponto de equivalncia,
temos ento toda a glicina sob a forma de NH 2-CH2-COO-. Neste 2
ponto de equivalncia, a variao de pH menos notria do que no
1 ponto devido fraqueza do cido NH3+.

3|Pgina

O objetivo principal da titulao ento determinar o volume


de titulante (NaOH) para o qual esto presentes quantidades
estequiomtricas do titulante e do titulado,

C glicina*Vglicina= Ctitulante*

Vtitulante..
Toda esta 2 parte foi acompanhada pela medio do potencial
eltrico que foi possvel converter para valores de pH atravs da reta
de calibrao obtida na 1 parte.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Como j foi referido anteriormente, esta atividade experimental
pode ser divida em duas partes: a calibrao do eltrodo do pH e a
titulao da glicina com a determinao da sua concentrao.
Em ambas as partes o procedimento experimental foi de
encontro ao protocolo dado pelo docente da parte prtica da unidade
curricular, com apenas uma pequena alterao de relevncia pouco
significativa: na 1 parte do protocolo o pH-metro j se encontrava
configurado em modo de leitura para potencial eltrico em mV (1
parte, passo 5). Isto permitiu poupar tempo aos alunos, prosseguindo
a experincia mais rapidamente.
Para

alm

disto,

relativamente

condies

em

que

experincia foi realizada, apesar de a temperatura prevista ser a


temperatura padro (25 C ou 298 K), a temperatura do laboratrio
rondava os 24 C, o que, obviamente, no produziu qualquer efeito
significativo nos resultados obtidos.
O restante procedimento experimental em nada diferiu do
protocolo dado.

4|Pgina

Cuidados a ter:
importante referir alguns cuidados especiais que tivemos que
ter em relao ao procedimento e manuseamento dos materiais ao
longo desta experincia:

Ao secar a membrana do eltrodo com papel absorvente, NO A

FRICCIONAR.
Ao mergulhar o eltrodo na soluo padro de pH ter em conta
que a que a ponte salina se encontra abaixo da sua superfcie e

IMPEDIR QUE O AGITADOR BATA NO ELCTRODO;


No final da utilizao do eltrodo, proteg-lo, introduzindo-o,
COM MUITO CUIDADO, na cpsula que foi retirada no passo 2 do
Procedimento 1.

Condies experimentais:
Tambm importante referir as condies em que o trabalho foi
realizado:

A temperatura do laboratrio no diferia muito de 25 C;


Presso atmosfrica, aproximadamente 1 atm;

5|Pgina

RESULTADOS EXPERIMENTAIS
Dados obtidos experimentalmente
Tabela 1 - Valores das medies das variveis experimentais do
procedimento 1
PH DA SOLUO

E (mV)

TEMPERATURA ( C)

174
-2
-130

23,7
24,3
23,9

TAMPO

4,01
7,00
9,21

Tabela 2 - Valores das medies das variveis experimentais do


procedimento 2

VOLUME

ADICIONADO

(mL)
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
4,5
5,0
5,5
6,0
6,5

E (mV)

TEMPERATURA ( C)

291
289
286
283
279
276
273
269
265
261
257
253
248
243

24,3
24,2
24,2
24,3
24,3
24,3
24,3
24,3
24,3
24,4
24,4
24,4
24,4
24,4
6|Pgina

7,0
7,5
8,0
8,5
9,0
9,5
9,7
9,9
10,1
10,3
10,5
10,7
10,9
11,1
11,6
12,1
12,6
13,1
13,6
14,1
14,6
15,1
15,6
16,1
16,6
17,1
17,6
18,1
18,6
19,1
19,6
20,1
20,7
21,1
21,6
22,1
22,3
22,5
22,7
23,2
23,7

235
231
223
212
195
150
-9
-62
-85
-91
-101
-103
-111
-113
-125
-133
-139
-145
-150
-155
-161
-166
-171
-175
-181
-189
-199
-201
-210
-221
-236
-251
-269
-270
-277
-282
-284
-286
-287
-290
-292

24,4
24,4
24,4
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,4
24,4
24,4
24,4
24,4
24,4
24,4
24,4
24,4
24,4
24,4
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,6
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5
24,5

Dados conhecidos
Tabela 3 - Dados conhecidos das experincias 1 e 2
7|Pgina

SOLUO

CONCENTRAO

NaOH
HCl
Glicina
pKa1 terico
pKa2 terico
pH isoeltrico terico

0,250 M
1,000 M
0,050 M
2,34
9,60
5,97

Incertezas dos instrumentos de medida


Tabela 4 - Incertezas dos instrumentos de medida

INSTRUMENTO

INCERTEZA

Pipeta volumtrica de 50 mL
Pipeta graduada de 5 mL
pH-metro
Bureta graduada de 25 mL

0,05 mL
0,03 mL
1 mV
0,05 mL

Dados a retirar da titulao da glicina (com base


na Tabela 2)
Tabela 5 Titulao da glicina

VOLUME DE
NAOH

POTENCIAL

LIDO

PH

pKa1
1 Ponto de

9,60/2=4,80 mL
(9,50+9,70)/2=9,

0,257 V
(0,15-

2,58
5,77=pHisoeltr

Equivalncia

60 mL

0,009)/2=0,0705

ico

pKa2

1,5*9,60=14,40

V
-0,161 V

9,73

2 Ponto de

mL
19,10 mL

-0,221 V

10,76

Equivalncia
Tabela 6 Formas mais comuns da glicina

FRMULA

CONDENSADA

FRMULA MOLECULAR
8|Pgina

H2G+
HG
G-

NH3+-CH2-COOH
NH3+-CH2-COONH2-CH2-COO-

Formulrio
c=

n
V , onde n o nmero de moles (em mol) e V o volume da

soluo (dm3)
na =nb , no ponto de equivalncia, onde
de cido (em mol) e

nb

na

o nmero de moles

o nmero de moles de base

E = Econstante (2,303 RT / F ) pHext, em que a corresponde a,


aproximadamente, -2,303 RT / F, e b corresponde medio do
Econstante do elctrodo

PROCESSAMENTO DOS DADOS EXPERIMENTAIS


Clculos
Na primeira parte deste trabalho, foi realizada a calibrao do
eltrodo de pH, utilizando trs solues tampo a trs valores de pH
diferentes, 4,01, 7 e 9,21, respetivamente, de modo a traar uma reta
de regresso linear de E=f(pH), obtendo para isto os valores lidos no
pH-metro do potencial eltrico de cada uma das solues. Assim
sendo, ao linearizar os dados obtidos na Tabela 1 com uma
calculadora grfica (CASIO), obteve-se a seguinte reta:

9|Pgina

Figura 1 - Reta de regresso linear de


E=f(pH)

E=0,05848pH + 0,408185

Nesta primeira parte, pde determinar-se a sensibilidade do


aparelho,

atravs

do

quociente

entre

declive

obtido

experimentalmente e o declive terico (a=-2,303RT/F):


S=

declive experimental
0,05848
0,05848
=
=
=0,9888876
declive terico
2,303 RT
(2,3038,314298/96485)
(
)
F

Pde tambm determinar-se, nesta fase, o potencial de


assimetria, ou seja, o valor de potencial lido pelo eltrodo quando
pH=7, e que deve encontrar-se na gama dos 20 mV relativamente
ao zero. O valor lido pelos utilizadores foi de -2 mV.

Quanto segunda parte da experincia, esta teve incio com


uma soluo de glicina de concentrao 0,050 M. Depois de, com o
pH-metro, se analisar o pH da soluo (pH=6,416, derivado de
E=0,033 V), concluiu-se que a espcie da glicina mais abundante na
soluo seria HG, ou NH3+ - CH2 - COO-, espcie anfiprtica, o que
justifica o valor mais ou menos neutro de pH encontrado. Assim, para
conseguir realizar a titulao potenciomtrica da glicina e analisar os
seus dois pontos de equivalncia, sabendo que esta teria que estar na
sua forma completamente protonada (H2G+), foi-lhe adicionado HCl,
tal que:

10 | P g i n a

nb =na

CbV b=CaV a

0,050 M5010 dm =na

na =2,510 mol

n 2,5103 mol
V= =
=2,5 mL de HCL
C
1,000 M
pH inicial da soluo de H2G+:
Einicial = 291 mV
E=0,05848pH + 0,408185

0,291 V =0,05848pH + 0,408185

pH=2,00

pH da soluo de glicina ao atingir V(NaOH)=Vequivalente/2


Quando o volume de hidrxido de sdio adicionado corresponde
a metade do volume equivalente, tem-se
n( NaOH )=CV =0,25 M4,8103 dm 3=1,2103 mol

( aq ) HG ( aq ) + H 2 O ( l )
+ ( aq )+O H
H 2 G
3

Incio: 2,410 mol 1,210 mol 0


Fim:1,2103 mol 01,2103 mol
,ou seja, n(HG)=n(H2G+), e segundo a equao de HendersonHasselbach:

11 | P g i n a

H2 G

[ HG ]
[ )

pH =pK a 1+ log ( 1 ) pH = pK a1=2,58

pH =pK a 1+ log

pH no 1 ponto de equivalncia pH isoeltrico


Vequivalente = 9,6 mL=Vpico 1 - Vpico 2

(atravs dos picos da derivada do grfico da

figura 2)

E = 0,0705 V
E=0,05848pH + 0,408185

0,0705 V =0,05848pH+ 0,408185

pH =5,77= p H isoeltrico

pH quando V=1,5*Vequivalente (

pK a2

V = 1,5*9,6 mL = 14,4 mL
E = -0,161 V
E=0,05848pH + 0,408185

0,161 V =0,05848pH +0,408185

pH=9,73

pH no 2 ponto de equivalncia
V total = (50,00+2,50+19,10) mL = 71,6 mL
12 | P g i n a

n(NaOH) = 0,25 M * 19,1*10-3 dm3 = 4,8*10-3 mol


( aq ) +2 H 2 O ( l )

( aq ) G
+ ( aq )+ 2O H
H 2 G

incio :2,4103 mol 4,8103 mol 0

variao :x 2 x+ x

fim : 0 mol 0 2,410 mol

Depois destes clculos, pode inferir-se acerca da concentrao


da glicina, antes e depois da titulao.

- Concentrao inicial da glicina completamente protonada, H2G+:


+

[ NaOH ]V ( NaOH ) 0,250 M 9,6103 dm3


H 2 G =
=
=4,6102 M
3
3
V ( glicina )

52,510 dm

Erro associado concentrao inicial da glicina:


2

S=[glicina ]

S V (base )2
V 2base

S[2NaOH ]

S 2V (glicina)

2
(0,05103 L)2
(0,05103 L)
2
(
)
= 4,610 M
+ 0+
2
3
3 2
3

+
[ NaOH ]2 V ( glicina)

(9,610 dm )

- Concentrao da glicina aps a titulao, na sua forma mais bsica,


G-:
( aq )
( aq ) + H 2 O ( l ) HG ( aq )+ OH
G
incio :3,34102 mol0 0
variao :x+ x+ x

fim :3,34102xx x

13 | P g i n a

(52,510 dm

pk b= pk w pk a =149,73=4,27
2

OH

[ HG ]

k b=
4,27

10

x2
2
3,3410 x

x 2+5,37105 x1,79106=0

OH
x=1,31103 M =

OH

pH=14+ log
Todos estes clculos podem ser ilustrados pelo grfico obtido
com os dados da Tabela 2, e respetiva derivada destes valores:

14 | P g i n a

Figura 2 - Grfico pH em funo do volume equivalente de NaOH e


derivada

ERROS

ABSOLUTOS:

De seguida, so apresentados os erros absolutos relativamente


a cada valor obtido experimentalmente.
V

equivalente

E=x ix =9,60 mL10,0 mL=0,4 mL

pKa 1:
E=x ix =2,582,34=0,24
pKa 2:
E=x ix =9,739,60=0,13
[glicina]:
E=x ix =0,0500,046=0,004 M
pH isoeltrico:
E=x ix =5,775,97=0,2

15 | P g i n a

ERROS

RELATIVOS:

Calculou-se, tambm, os erros relativos para, assim, avaliar


melhor a exatido dos valores obtidos.~

V equivalente:
Er =

x ix
0,4 mL
100=
100=4,00
x
10,0

pKa 1:
Er =

x ix
0,24
100=
100=10,30
x
2,34

pKa 2:
Er =

x ix
0,13
100=
100=1 , 35
x
9,60

[glicina]:
Er =

x ix
0,004
100=
100=8,00
x
0,050

pH isoeltrico:
Er =

x ix
0,2
100=
100=3,35
x
5,97

| |

COMPILAO DOS RESULTADOS


Nesta seco, feito um confronto entre os valores obtidos
pelos restantes grupos e os que foram apresentados anteriormente.
Para avaliar a preciso, e, uma vez que o grupo apenas efetuou um
ensaio, procedeu-se ao clculo da mdia dos resultados obtidos pela
turma, calculando-se, de seguida, o desvio padro.
16 | P g i n a

Tabela 7 - Resultados obtidos pela turma relativamente ao volume


equivalente

GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO

1
2
3
4
5
6

V equivalente mdio =

PRECISO (DESVIO

10,1
10,2
9,60
9,90
10,1
9,80

mL
mL
mL
mL
mL
mL

10,1+10,2+9,60+9,90+ 10,1+ 9,80


mL=9,95 mL
6

PADRO):

( xi x )2
=
=0, 226
N1

Tabela 8 - Resultados obtidos pela turma relativamente concentrao da


glicina

GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO

[glicina ]mdia =

1
2
3
4
5
6

0,0505
0,0510
0,0460
0,0495
0,0510
0,0460

M
M
M
M
M
M

0,0505+0,0510+0,0460+0,0495+ 0,0510+0,0460
M =0,0490 M
6
17 | P g i n a

PRECISO (DESVIO

PADRO):

(xi x )2
=
=2,39103
N1

Tabela 9 - Resultados obtidos pela turma relativamente ao 1 ponto de


equivalncia

GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO

1
2
3
4
5
6

2,45
2,46
2,58
2,39
2,29
2,45

pka1 mdio =

2,45+2,46 +2,58+2,39+2,29+2,45
=2,44
6

PRECISO (DESVIO

PADRO):

( xi x )2
N1 =0,095

Tabela 10 - Resultados obtidos pela turma relativamente ao 2 ponto de


equivalncia

GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO

1
2
3
4
5
6

9,75
9,78
9,73
9,65
9,59
9,69

pka2 mdio =

9,75+ 9,78+9,73+ 9,65+ 9,59+9,69


=9,70
6

18 | P g i n a

PRECISO (DESVIO

PADRO):

( xi x )2
=
=0,07
N1
Tabela 11 - Resultados obtidos pela turma relativamente ao ponto isoeltrico

GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO
GRUPO

1
2
3
4
5
6

6,60
6,17
5,77
6,02
5,94
6,07

pI mdio =

6,60+6,17+ 5,77+6,02+5,94+6,07
=6,10
6

PRECISO:

( xi x )2
=
=0,282
N1
Tabela 12 - Resultados obtidos pelo grupo

VARIV
EL

Vequivale

VALOR

9,60 mL

INCERTEZ
A

ERRO
RESULTADO

IVO

0,05 mL

(9,60 0,05) mL

0,00001

(0,046000,0000

1) M

nte

[glicin
a]

0,0460 M

RELAT

pka1

2,58

---

2,58

pka2

9,73

---

9,73

pI

5,77

---

5,77

4,00
%
10,30
%
1,35
%
8,60
%
3,35
%

DESVI
O
PADR
O

0,226
2,39*
10-3
0,095
0,07
0,282

19 | P g i n a

* - NO EXISTE UMA INCERTEZA ASSOCIADA AOS VALORES DE PH, VISTO QUE ESTES FORAM CALCULADOS COM
BASE NA RETA DE REGRESSO LINEAR

DISCUSSO DOS RESULTADOS


Aps a realizao de ambas as partes do protocolo fornecido na
aula

prtica-laboratorial

2,

respetivo

clculo

dos

erros

experimentais associados execuo do trabalho, podemos refletir


acerca da preciso e exatido dos valores obtidos:
- quanto primeira parte da experincia, que consistiu na
calibrao do eltrodo de pH, obtivemos uma reta de calibrao, cujo
declive pode ser relacionado com a sensibilidade do aparelho, que foi
calculada anteriormente e da qual se obteve o valor de 0,9888876, o
que bastante satisfatrio, pois, sabendo que este parmetro tem de
ser sempre menor que a unidade, mas to prximo deste valor
quanto possvel, o valor que resultou dos clculos apresentados
20 | P g i n a

muito prximo da idealidade, o que revela a exatido do aparelho em


posteriores medies. Para alm disso, pode tambm discutir-se o
resultado obtido para o potencial de assimetria, potencial medido
pelo aparelho quando pH=7 (neste caso em especfico), e que deve
ser to prximo quanto possvel do valor nulo, o que prova do seu
bom funcionamento. O valor obtido foi de -2 mV, e sabendo que este
valor no deve afastar-se do zero mais que 20 mV, este foi tambm
um resultado muito satisfatrio;
- quanto ao valor do volume equivalente de hidrxido de sdio
gasto para titular a soluo de glicina at ao 1 ponto de
equivalncia, que calculado pela diferena entre os volumes do
segundo e primeiro picos da derivada, obtivemos o valor de 9,6 mL,
que quando comparado com o valor terico encontrado (10 mL),
apresenta um erro relativo de 4,00%. Disto conclui-se que o valor
obtido relativamente exato. No entanto, reconhece-se que podero
ter ocorrido alguns erros ao longo da realizao do protocolo, como
por exemplo na medio dos volumes de base a adicionar de cada
vez, visto que se tratava de quantidades muito pequenas (de 2 mL ou
5 mL), o que dificultava a medio acurada destes volumes. Para
alm disso, o facto de apenas termos realizado adies de 2 mL de
NaOH quando a soluo se aproximava dos seus pontos de
equivalncia leva-nos a pensar que, principalmente relativamente ao
segundo ponto, a adio de base no ter sido feita nos momentos
mais corretos, pelo que podero surgir alguns fatores de erro deste
facto. Para alm disto, o facto de os instrumentos de medida
utilizados serem analgicos limita bastante a preciso das medidas,
visto que estas so dotadas de uma quantidade reduzida de
algarismos significativos, o que acaba por ser tambm um fator de
incremento do erro.
- quanto preciso do valor obtido para o volume equivalente,
comparando o resultado obtido pelo grupo com os resultados da
turma, pode dizer-se que estes tm todos a mesma ordem de
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grandeza, o que indica que foram razoavelmente bem calculados, o


mesmo acontecendo com as variveis pKa1, pKa2, pH isoeltrico e
concentrao de glicina, pois em todas estas se verificou, aps o
clculo da mdia e do desvio padro, que no houve erros de maior
relevncia em nenhum dos grupos; apesar de existirem algumas
discrepncias, que tero surgido das diferentes formas de adicionar a
base glicina, pois este ter sido o fator de maior influncia nos
resultados obtidos, no se verificam erros muito grandes;
- por ltimo, quanto exatido dos restantes valores, os quais
ainda no foram mencionados, verifica-se que a maior percentagem
de erro encontrada ter sido para o caso do pKa 1, o que se percebe
facilmente, visto que esta fase da titulao a mais brusca, e por isso
mais difcil de captar exatamente. Todos os erros das restantes
variveis (excetuando o Volume equivalente, o qual j foi discutido),
sofreram influncia direta precisamente deste volume, pois todos
estes advm de clculos realizados a partir dos valores do volume
obtido.

CONCLUSO
Aps a realizao deste trabalho podemos concluir que, tal
como previsto por ns antes da realizao do trabalho, a glicina,
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sendo um aminocido que, dissolvido em gua, pode adquirir diversas


formas, apresenta dois pontos de equivalncia numa titulao com
uma base forte se estiver na forma H 2G+. Como inferido pelo grupo,
esta encontrava-se na sua forma HG, anfiprtica, tendo sido essa a
razo da adio de cido clordrico soluo ainda antes de a
titularmos, para a glicina ficar completamente protonada (H2G+) e,
assim, podermos cumprir o objetivo do trabalho.
Depois de analisarmos o grfico obtido a partir destes clculos,
podemos concluir tambm que a glicina na sua forma completamente
protonada apresenta dois pares tampo, que criam duas zonas em
que o pH varia muito lentamente, o que resultou em que houvesse
apenas dois picos na derivada, respetivos s duas subidas mais
bruscas do pH, que correspondem ao fim da capacidade tampo de
cada um dos pares conjugados, nomeadamente, H2G+/HG e HG/G-.
Este trabalho contribuiu no s para que os alunos pudessem
contactar com um aminocido e com o seu funcionamento, mas
tambm com a tecnologia prpria da potenciometria, que o eltrodo
de pH, neste caso, e com todas as bases tericas associadas a este.

BIBLIOGRAFIA
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PEREIRA, Jos Augusto, Introduo ao equilbrio cido-base e


potenciometria de H+ , em Documentos da unidade curricular
Termodinmica

do

Instituto

de Cincias

Biomdicas

Abel

Salazar, pp. 5-6, 16-20


http://www.qo.fcen.uba.ar/quimor/wpcontent/uploads/AA_alumnos_v2.pdf - valores tericos sobre a
glicina [Consultado em 4/03/15]

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