Gentica bacteriana II

Gentica de bacterifagos

Generalidades de Virus
Tamao 24 300 nm
DNA o RNA, de cadena simple o doble
Cubierta de protenas con o sin lpidos
Forma icosadrica, de varilla, o cabeza y cola

Virus de la influenza (200 nm)

Clasificacin de fagos por su estructura.

Icosahdricos sin cola (X174)

Icosahdricos con cola ()

Filamentosos (M13)

Estn formados por un cido nucleico (DNA/RNA) y una cpside

de protena

El genoma de los fagos

RNA simple cadena (MS2, Q)
RNA doble cadena (phi 6)
DNA simple cadena (phi X174, fd, M13)
DNA doble cadena (T3, T7, lambda , T5, Mu, T2, T4)
Estos cidos nucleicos pueden contener bases inusuales que son
sintetizadas por protenas del fago. En los fagos T-pares, el
genoma no contiene citosina sino 5'- hidroximetilcitosina,
mientras que en otros tipos de fago alguna de las bases est
parcialmente sustituida.

Fago libre

Componentes del Fago

Bacteriofago T4 virulento
Cabeza
Cuello y collar

Fago infectando

Centro

Vaina
Placa Basal

Fibras

Ciclo Ltico
Ciclo de Replicacin del Bacteriofago T4
1. Adsorcin del fago a receptores en la
superficie de la bacteria (protenas
transportadoras de maltosa o de Fe2+)
2. Inyeccin del material gentico viral
3. Transcripcin del DNA del bacterifago y
produccin de protenas virales
4. Replicacin del material gentico viral
5. Empaquetamiento del DNA dentro de la
envoltura proteica y ensamblaje de la
envoltura
6. Lisis y liberacin de las partculas virales

Halos placas de lisis de los fagos

Ciclo Lisognico
(Fagos temperados)
1. Una molcula de DNA del fago es inyectada a la bacteria.
2. Transcripcin de genes necesarios para la integracin.
3. El DNA del fago se inserta en el cromosoma bacteriano.
(Integracin)
4. La bacteria replica su DNA (y el del fago) y se divide
normalmente.
5. El fago insertado se denomina profago y a la bacteria
lisgeno.
6. La bacteria es ahora inmune a la infeccin de otros fagos.

Integracin del DNA del fago al

cromosoma bacteriano
El cromosoma del bacterifago
lambda () en estado libre es circular.
El sitio de integracin es una regin
del cromosoma que se alinea en un
sitio del cromosoma bacteriano (entre
los genes gal y bio).

Ocurre un entrecruzamiento recproco

entre el fago circular y el cromosoma
bacteriano resultando en la
integracin. Esta integracin es
mediada por los genes del
bacteriofago y no por el sistema de
recombinacin de la bacteria.
Al DNA del fago integrado al
cromosoma se le llama profago.

Bacteria lisognica
portadora de Profago

Molcula lineal de DNA

del bacteriofago

Integracin de al
cromosoma bacteriano

Bacterifago lambda (
) (fago temperado)
Ciclo lisognico

Ciclo ltico

TRANSDUCCIN
Transferencia de material gentico entre bacterias a travs de un
bacterifago

Transduccin
Transferencia de material gentico bacteriano
por los virus de bacteria (fagos)

phe trp tyr

met his

WT

TRANSDUCCIN
Profago

Cromosoma
bacteriano

Induccin
del ciclo
ltico

La escicin del DNA

del fago acarrea
DNA cromosomal

Replicacin
del fago

Lisis celular y
liberacin del fago
La clula receptora
adquiere nuevos
genes

El fago infecta a la
Integracin del DNA del
fago al cromosoma

clula receptora

Transduccin

Transduccin generalizada
Transduccin especializada

Transduccin generalizada

Transduccin especializada

Durante la transduccin se pueden mapear genes

Clulas donadoras:
arg+; met+, strs

Infeccin con el fago P1.

Ciclo lisognico. Integracin

Ciclo ltico y cosecha de fagos.

Mezclar los fagos con la bacteria

receptora: arg-; met-; strr

Ciclo lisognico del

bacteriofago

Seleccin fenotpica de las

bacterias receptoras.

Transposones
(Elementos genticos mviles)
La transposicin es otro tipo de recombinacin de
DNA en el cual un elemento transponible o
transposn se mueve de una molcula de DNA a
otra (recombinacin ilegtima).
Fueron descubiertos originalmente en maz por
Barbara Mc Clintock y su presencia se ha
documentado tambin en otras especies, desde
bacterias hasta humanos.

Descubrimiento de los transposones eucariontes

Elementos de Control

Barbara Mc Clintock, 1951

Tipos de transposones
Secuencia de Insercin o Elemento de
Insercin (IS): contiene una secuencia
central con el gen de la transposasa y en
los extremos una secuencia repetida en
orden inverso no nesariamente idntica,
aunque muy parecida. Cuando un
transposn simple se integra en un
determinado punto del DNA aparece una
repeticin directa de la secuencia diana (512 pb).

Transposn Compuesto (Tn):

contiene un elemento de insercin (IS)
en cada extremo, en orden directo o
inverso y una regin central que adems
suele contener informacin de otro tipo.
Por ejemplo, los Factores de
transferencia de resistencia (RTF)
poseen informacin para resistencia a
antibiticos (cloranfenicol, kanamicina,
tetraciclina, etc.).

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Mutacion/mutacion.htm

Caractersticas de algunos elementos IS

Elemento

Longitud

IS1
IS2
IS4
IS5

786 pb
1327 pb
1428 pb
1195 pb

Repeticin
terminal
invertida
23 pb
41 pb
18 pb
16 pb

Repeticin directa
de la diana

Seleccin de la diana

9 pb
5 pb
11-12 pb
4 pb

Regional
Zona caliente
AAAX20 .........XTTT
Zona caliente

Caractersticas de algunos Transposones compuestos (Tn)

MDULOS TERMINALES
Elemento

Longitud

Marcador gentico
(resistencia)

Tn 10
Tn 5
Tn 903
Tn 9

9300 pb
5700 pb
3100 pb
2500 pb

Tetraciclina
Kanamicina
Kanamicina
Cloranfenicol

IS

Orientacin

Relacin entre ambos

IS 10
IS 5
IS 903
IS 9

Invertida
Invertida
Invertida
Directa

Divergencia 2.5%
Difieren en 1 pb
Idnticos
Idnticos (?)

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Mutacion/mutacion.htm

Tanto los elementos IS como los transposones (Tn) tienen que estar
integrados en una molcula de DNA, que contenga un origen de
replicacin, ya sea en el cromosoma principal bacteriano o en un
plsmido, nunca se encuentran libres.

Cromosoma de
E. coli
Algunos elementos
pueden estar en varias
copias

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Mutacion/mutacion.htm

Transposones en procariontes
Secuencias de insercin (IS)

Frecuencia global de transposicin: 10-3 10-4

Frecuencia individual de transposicin: 10-5 10-7
Reversin de la transposicin: 10-6 10-10

Transposones
El tamao de los transposones vara entre 103 a 104 pb
dependiendo del tipo de transposn.
La secuencia ntegra del transposn se puede insertar en un sitio
particular del cromosoma.
La transposicin involucra recombinacin entre secuencias no
relacionadas (recombinacin ilegtima) que son los extremos
flanqueantes del transposn y el sitio del cromosoma donde se
insert.

Dos formas de transposicin

Replicativa

Conservativa

Transposasa. Enzima que corta al DNA blanco en sitios al azar y

une los extremos del transposn.

Secuencias repetidas invertidas. Funcionan como el sitio de

reconocimiento de la transposasa. Como las secuencias son
invertidas, son idnticas.

Marcador de seleccin. La insercin del transposn confiere una

ventaja ecolgica a la clula, que puede ser la resistencia a algn
antibitico. KanS
KanR
Tn5: 5,800 pb y regiones flanqueantes de 1,530 pb. Genes de resistencia
a Kan, Bleo, Strp.
Tn7: 14,000 pb y regiones flanqueantes (secuencias repetidas invertidas
de 30 pb). Resistencia a Strp, Spec.
Tn10: 9,300 pb y regiones flanqueantes de 1,300 pb. Genes de
resistencia a Tet.

Mecanismo de transposicin
(recombinacin ilegtima)

Repetidos directos (5-9 pb)

Transposicin conservativa

Unin de la transposasa a la regin flanqueante

Formacin del asa (complejo sinptico). Los
extremos del transposn se acercan.
Corte del DNA y escicin del transposn

Unin del transposn al DNA blanco

La transposasa cataliza la insercin del
transposn al DNA blanco.

Transposicin replicativa
Transposasa

Resolvasa

Transposones de eucariontes
Retrotransposones

Transposones de DNA

Los retrovirus se integran al DNA

provirus

Los transposones pueden causar

reordenamientos y cambios en los genomas

Transposones
Transferencia de DNA
Duplicacin de DNA
Los Virus

Evolucin de genomas

Uso de los transposones para generar una

coleccin de mutantes
1.Para introducir inserciones de Tn5 al azar en el
cromosoma de E. coli, se usa un vector de fago lambda:
Pam int-::Tn5
2.Cuando este fago infecta clulas KanS, el DNA del fago no
se puede replicar ni integrar, as que la nica manera de que
E. coli se vuelva KanR es que el transposn Tn5 se inserte en
algn sitio del cromosoma. Esto va a ocurrir en aprox. 1 de
cada 100,000 clulas infectadas.
3. Si se infectan 2 x 109 clulas, se obtendrn aprox. 2 x 104
colonias KanR. Cada una tendr una insercin de Tn5 en un
sitio distinto del cromosoma. Si en el genoma de E. coli hay
unos 5,000 genes, es probable que se tenga una coleccin
con insercin de Tn5 en casi todos los genes.

La transferencia horizontal de genes entre distintas

especies, e incluso gneros de bacterias

Mecanismos de resistencia a antibiticos y

su transmisin
1. Impermeabilidad y eflujo. Gram+ (peptidoglicano); Gram(capa de LPS). Protenas de eflujo. Los genes responsables
pueden estar en plsmido o en cromosoma.

2. Modificacin e inactivacin del antibitico. -lactamasa,

enzimas modificadoras de aminoglicsidos, cloramfenicol acetil
transferasa.

3. Modificacin del blanco. Dominios de transpeptidasa con

menor afinidad por las -lactamas.

4. Vas alternativas de sntesis. Sntesis de tetrahidrofolato

insensible a sulfonamidas.

1. Cuatro cepas Hfr de E. coli procedentes de la misma cepa F+ transfieren los siguientes
marcadores en el orden:
Cepa 1: M Z X W C
Cepa 2: L A N C W
Cepa 3: A L B R U
Cepa 4: Z M U R B
Cul es el orden de estos marcadores en la cepa F+ original?

2. Se realiza un cruzamiento entre una cepa Hfr arg+ bio+ leu+ y una cepa F arg bio
leu. Experimentos de conjugacin interrumpida demuestran que arg+ entra en el
receptor en ltimo lugar, de modo que se seleccionan recombinantes arg+ para
determinar la presencia de bio+ y leu+ encontrando los siguientes nmeros:
arg+ bio+ leu+ 320
8
arg+ bio+ leu
arg+ bio leu+
0
arg+ bio leu 48
Cul es el orden de estos marcadores?
Cules son las distancias en unidades de mapa?