TR DPP HIV-1/2 Bio-Manguinhos / TR DPP Sfilis

Pedro Paulo Ferreira Ribeiro

TR DPP HIV-1/2 Bio-Manguinhos / TR DPP Sfilis

Diagnstico HIV

ELISA

Teste Rpido

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Diagnstico Sfilis

ELISA

Testes antignicos no treponmicos ou testes lipodicos:

- VDRL (Venereal Disease Research Laboratory)
- RPR (Rapid Plasm Reagin)
Testes treponmicos ou pesquisa de anticorpos verdadeiros:
- FTA-ABS (Fluorescent Treponema Antigen Absorvent)
- MHA-TP (Micro hemo-aglutinao para Treponema pallidum)
- EIA / ELISA (Enzimaimunoensaio para anticorpo anti-Treponema)
-PCR (Polimerase Chain Reaction)

VDRL

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Vantagens do teste rpido
Convenincia e Rentabilidade
Desenho ideal
ideal para utilizao em campo e ambulatrios;
Volume de amostra mnimo - 10L puno digital (sangue total), soro ou plasma;
Armazenamento em temperatura ambiente;
Prazo de validade estendido (24 meses);
No necessita de equipamentos especiais de laboratrio.
Poupa Tempo e Trabalho
Reagentes prontos para uso;
Procedimento simples;
Tempo total do teste de 20 minutos;
No necessita de equipamentos e/ou infraestrutura laboratorial;
Resultados de fcil interpretao.
Resultados Confiveis
Controle interno;
Altamente sensvel e especfico.

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Nova gerao de testes rpidos

DPP (Dual Path Platform)

Platform)
Plataforma de Duplo Percurso
Trata-se de uma inovadora tecnologia de imunoensaio cromatogrfico para testes
Tratade diagnstico rpido, podendo ser aplicada para uma grande variedade de
doenas. Esta tecnologia oferece importantes vantagens sobre os ensaios
convencionais de Lateral Flow (LF).
Dual Path Immunoassay Device
US Patent number: 7,189,522
Issue Date: 03/13/2007
Dual Path Immunoassay Device
(Esfandiari Javan: PCT/US 06099191,
1/17/2006)
Dispositivo De Via Dupla Para Imunoensaio
(Esfandiari Javan: Brazil, PI0600756PI0600756-7 03/1003/102006)

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Vantagens Tcnicas do DPP em relao ao
LF convencional

Destaca-se a ampliao dos nveis de sensibilidade (10 a 50 vezes maior que o LF),
possibilidade de testes multiplex (at 5 linhas de teste por cassete), adaptvel a diferentes tipos
de fluidos corporais (sangue, soro, plasma, saliva, urina, fezes, escarro, etc).

Possibilidades de ensaios multiteste: Ex: HIV-1/2 + Sfilis;

Capaz de fornecer resultados altamente sensveis e especficos usando volumes de amostra

mnimos.

Diversas aplicaes potenciais para a DPP: Diagnsticos mdicos; Diagnsticos veterinrios

e sade animal; Segurana alimentar e triagem de patgenos; Triagem de amostras ambientais;
Bio-terrorismo; Deteco forense; Inmeras outras aplicaes na agricultura e indstria.

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Por dentro do teste DPP
Membrana
do
conjugado
Membrana
do tampo

Membrana
de absoro
residual
Membrana de
nitrocelulose
(Ag + ptnA)

Ponte

Membrana
da amostra

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Por dentro do teste DPP

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PRINCPIO E PROCEDIMENTO DO TESTE DPP

Os TR DPP - Bio
Bio--Manguinhos so testes de triagem de uso nico, para detectar anticorpos
especficos, em amostras de fluido oral, sangue total venoso, de puno digital, soro ou plasma
humano. O teste se baseia na tecnologia de imunocromatografia e utiliza plataforma de duplo
percurso. Resultados reativos so evidncias de exposio ao agente infeccioso e podem ser
usados como suporte ao diagnstico clnico. Os TR DPP Bio
Bio--Manguinhos so indicados para
uso por profissionais de sade de acordo com as instrues fornecidas.

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Apresentao do produto

TR DPP HIVHIV-1/2 - Bio

Bio--Manguinhos SSP (sangue, soro e plasma)
TR DPP Sfilis - Bio
Bio--Manguinhos
MATERIAL FORNECIDO:

Suportes embalados individualmente - 20 suportes

Tampo de corrida - 01 Fr. 6 mL
Lancetas estreis descartveis - 20 lancetas
Curativo Adesivo Estril - 20 adesivos
Manual de Instruo de Uso
Alas coletoras descartveis (10L) - 20 alas
Tampo de eluio - 20 Fr. 1 mL

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Antgeno do teste DPP

1 - gp36 / HIV2
2 - gp 120 / HIV1
3 - gp 41 / HIV1
C - Controle

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Antgeno do teste DPP

T GST p17
C - Controle

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PA

gold PA
PA

gold

PA

PA
PA

PA

PA
gold

PA

PA
PA
gold
PA
PA PA
gold

PA
gold PA
PA
PA

PA

Linha Teste

PA
gold

Gp120
GP41

GP36

PA

PA = Protena A

gold

PA

Ac para HIV

PA

PA gold

GST p17

Fita S1

GST p17
Ac da Amostra

PA
PA

PA
gold
PA
PA
PA

Fita S2

GST p17

PA
PA

Ac no especficos p/ HIV

Princpio do teste

PA

Linha Controle

Ag de HIV-1/2

Conjugado de ouro e ptn A

Linha Teste

DPP

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Caractersticas de desempenho

Sensibilidade ao HIV-1
A capacidade do TR DPP HIV 1/2 Bio-Manguinhos em detectar infeco por HIV-1 foi avaliada
usando 1.996 amostras de indivduos sabidamente infectados com HIV -1 e de indivduos de grupo
de risco de infeco com HIV-1. 1.128 amostras foram identificadas como positivas para infeco
por HIV-1 usando um ensaio imunoenzimtico (EIA) licenciado pelo FDA, Western Blot (WB)
licenciado e/ou um ensaio NAT aprovado pelo FDA. Desses, 1.128 foram reativos com o TR DPP
HIV-1/2 Bio-Manguinhos resultando em uma sensibilidade de 100% (1.128/1.128 = 100% com
95% CI =99.7 100%)
Deteco de anticorpo para HIV-1 em amostras sabidamente infectadas com HIV-1 e de grupo de risco de infeco com HIV-1

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Caractersticas de desempenho:

Sensibilidade ao HIV-1
A capacidade do TR DPP HIV 1/2 Bio-Manguinhos em detectar infeco por HIV-1 foi avaliada
usando 99 amostras de fluido oral de indivduos sabidamente infectados com HIV-1. 97 amostras
foram identificadas como positivas para infeco por HIV-1 usando um ensaio imunoenzimtico
(EIA) licenciado pelo FDA, Western Blot (WB) licenciado. Desses, 97 foram reativos para no TR
DPP HIV-1/2 Bio- Manguinhos e se comparado ao Western Blot (WB) resulta em uma
sensibilidade de 100% (97/97).
Deteco de anticorpos para HIV-1 em amostras de fluido oral sabidamente infectadas com HIV-1

Deteco de anticorpos para HIV-1 em amostras de fluido oral sabidamente infectadas com HIV-1
Duas(2) amostras resultaram em padres indeterminados no Western Blot.essas amostras foram excludas do calculo de sensibilidade.
Uma (1) amostra foi reativa no TR DPP e indeterminada no Western Blot
Para confirmao foi utilizado Western Blot HIV-1 licenciado

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Caractersticas de desempenho

Reatividade frente a Painis de

Soroconverso
O TR DPP HIV-1/2 foi testado
frente a 27 painis de soroconverso.
Cada painel consiste de coletas
seqenciais de um nico individuo que
soroconverteu. As amostras foram
confirmadas usando Western blot e
dois EIA licenciados pela FDA. O TR
DPP HIV-1/2 Bio-Manguinhos
similar aos testes licenciados para
deteco de soroconverso. A tabela
apresenta a passagem dos dias desde
a data da coleta inicial at a primeira
amostra positiva.

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Caractersticas de desempenho

Comparativo do TR DPP HIV-1/2 Bio-Manguinhos a dois TR licenciados e Western blot na

deteco de soroconverso

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Caractersticas de desempenho

Especificidade
A especificidade do TR DPP HIV-1/2 Bio-Manguinhos foi avaliada testando amostras
representativas de populaes de baixo risco e alto risco de infeco com HIV-1. Baseado
nesses estudos, a especificidade do TR DPP HIV-1/2 Bio-Manguinhos pode ser calculada em
99.9% (1506/1507 = 100% com CI =99.6% - 99.9%).

Comparativo entre TR DPP HIV-1/2 Bio-Manguinhos dois EIA e um Western blot para soroconverso

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Caractersticas de desempenho:

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Caractersticas de desempenho

Sensibilidade e Especificidade

Os ndices de sensibilidade e especificidade do TR DPP Sfilis foram determinados

pela avaliao da habilidade do teste em detectar anticorpos para sfilis em amostras

clinicas. Comparando os resultados aos resultados obtidos pelo TPPA o TR DPP Sfilis
obteve sensibilidade de 98.3% (287/292) e especificidade de 98.0% (345/352).

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Caractersticas de desempenho:

Em estudos adicionais de especificidade foram utilizadas amostras

presumidamente negativas provenientes da frica (95) e do Brasil (66). Todas as 95
amostras africanas e 64 das 66 amostras brasileiras apresentaram resultado no
reativo. As amostras brasileiras com resultado positivo no TR DPP Sfilis no foram
confirmadas como negativas. A especificidade do teste neste caso foi de
aproximadamente 98.8% (159/161).

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Caractersticas de desempenho

O TR DPP Sfilis foi testado

frente a 20 membros do painel
sorolgico da Seracare/Boston
Biomedica Inc. (BBI) (PSS202).
O estudo mostrou que o TR
DPP Sfilis similar aos
testes
licenciados
na
deteco dos membros deste
painel.

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Caractersticas de desempenho

Painel sorolgico (CDC)

Para melhor avaliao do TR DPP
Sfilis, um painel do CDC bem
caracterizado para sfilis composto de
espcimes que vo desde no
reativo a reativo fortes foi usado para
verificar o desempenho do teste. Os
resultados indicam que o TR DPP
Sfilis
foi
capaz
de
detectar
anticorpos contra o T. pallidum
semelhantes
aos
ensaios
licenciados.

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Caractersticas de desempenho

REAO CRUZADA E
INTERFERENTES
Para avaliar a influncia de condies
mdicas
no
relacionadas
ou
substncias
interferentes
na
sensibilidade e especificidade do TR
DPP
Sfilis,
160
amostras,
representando condies mdicas no
relacionadas,
e
100
amostras,
representando
substncias
potencialmente interferentes foram
testadas.
As
amostras
foram
misturadas com soluo salina (no
reativo) ou uma amostra de soro
treponmicos positivos a um baixo
nvel de reatividade.

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Caractersticas de desempenho:

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Procedimento para a realizao do teste

IMPORTANTE!

ATENO: Utilizar somente micropipetas automticas ajustadas e

calibradas.

Certifique-se de que a amostra a ser testada esteja temperatura ambiente

(15 a 30C). Caso a amostra tenha sido refrigerada ou congelada, permitir
que a mesma alcance a temperatura ambiente antes de ser utilizada.

Retirar o nmero necessrio de componentes do kit necessrios

execuo do ensaio e coloc-los sobre uma superfcie plana. Certifique-se
de que os componentes do kit estejam temperatura ambiente (15 a
30C) no momento do uso.

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Procedimento para a realizao do teste

Certifique-se de que a amostra a ser testada esteja temperatura ambiente. Caso a

amostra tenha sido refrigerada ou congelada, permitir que a mesma alcance a
temperatura ambiente ( 15 a 25C) antes de ser utilizada.

Retirar o nmero necessrio de componentes do kit TR DPP - Bio-Manguinhos

necessrios execuo do ensaio e coloc-los sobre uma superfcie plana.
Certifique-se de que os componentes do kit estejam temperatura ambiente no
momento do uso.

Retirar o suporte de teste do envelope laminado e identific-lo com o nmero de

registro do paciente ou nmero de identificao da amostra, alm do nmero do lote
do kit de onde o teste foi retirado.
Poo 2 =
TAMPO

Janelas de Teste com

Linhas Azuis e Verde

Poo 1

= AMOSTRA + TAMPO

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Procedimento para a realizao do teste

Antes de coletar a amostra de

sangue, soro ou plasma, identificar o
frasco para eluio com o nome do
indivduo ou nmero de identificao
e desenrosque o dosador (parte
branca) do frasco mantendo a tampa
azul rosqueada no dosador.

Encostar a ala coletora de 10 L na

amostra a ser testada permitindo
que a ala seja preenchida com a
amostra.
OBS: Em caso de coleta de sangue
da ponta do dedo, utilizar as
lancetas (inclusas no kit), de acordo
com as instrues de uso que as
acompanham.

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Procedimento para a realizao do teste

Inserir a ala coletora de 10L com a

amostra no frasco de eluio identificado
de modo que toque no fundo do frasco
(alternativamente podem ser utilizadas
micropipetas calibradas).

Dobre a haste da ala coletora no ponto

de quebra a fim de que a extremidade com
a amostra permanea dentro do frasco de
eluio.

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Procedimento para a realizao do teste

Recolocar o dosador no frasco de eluio

certificando de que tanto o dosador quanto a
tampa azul esto bem fechados e agite
levemente por 10 segundos.

Retirar somente a tampa azul do dosador e

girar o frasco de eluio mantendo na posio
vertical (sem inclinar) sobre o poo 1. Adicionar
duas gotas da soluo, lentamente, ao poo 1.

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Procedimento para a realizao do teste

Aguardar cinco minutos. Aps esse tempo, a

linha azul (TESTE) e verde (CONTROLE) da
janela devem ter desaparecido. Em caso
contrrio, descartar o suporte de teste e
repetir o procedimento desde o incio usando
um novo suporte.

Verter o frasco de tampo de corrida e mantlo na posio vertical (sem inclinar) sobre o
poo 2. Adicionar quatro gotas de tampo,
lentamente, ao poo 2.

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Procedimento para a realizao do teste

Deixar o teste correr por 10 minutos aps a adio do tampo ao poo 2 a

temperatura entre 15 a 25C. Caso no haja migrao aps 3 minutos da adio do
tampo no poo 2, descartar o teste.

IMPORTANTE!!!
No leia os resultados aps 25 minutos contados a partir da adio do tampo de
corrida ao poo 2.

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Linha Controle Sempre presente!

Inv
Inv
lidos
Inv
Inv
lidos
rea Teste

ReagenteReagente
Linha Teste

Linha Controle

rea Controle

No
Reagente
No
Reagente
Ausncia de
linha teste

Presena
Presen
ade
deLinha
Linha
Controle

Leitor de Testes DPP e Acess

Acessrios:

Escala de Avaliao

No Reagente

Reagente

TR DPP HIV-1/2 Bio-Manguinhos / TR DPP Sfilis

- Adaptado para todos os tipos de teste DPP;

- Informaes em portugus;
- Dispensa manuteno e calibrao;
- Uso (leituras) ilimitado;
- Interfaces com cpu, impressora e leitor de cdigo de barras;
- Possibilidade de registro e envio de dados/resultados;
- Pequenas dimenses, quase porttil.

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Precaues

Para reduzir falhas no procedimento do teste, e na interpretao dos resultados, no

realizar mais de 5 testes por vez;

Componentes de kits de lotes diferentes nunca devem ser misturados;

Assegurar-se de que a embalagem dos suportes esteja intacta. Caso contrrio,

separe o kit evitando que seja utilizado e entre em contato com o SAC de BioManguinhos;

No adicionar volumes de amostra superiores ao preconizado;

Utilizar sempre a ala coletora fornecida no kit, segundo as orientaes do manual

de instrues;

Somente abra o envelope laminado contendo o suporte de teste no momento de sua

utilizao;

No utilize kits ou componentes com a data de validade vencida.

 HIV-1/2 Bio-Manguinhos
TR DPP HIV-1/2
Bio-Manguinhos
/ TR DPP/ TR
Sfilis
TR DPP
DPP Sfilis

CIPBR

Obrigado!

pribeiro@bio.fiocruz.br