ESPECTROFOTOMETRIA

Se refiere a la medida de cantidades relativas de luz absorbida por una muestra, en funcion de la
longitud de onda.
Cada componente de la solucion tiene su patron de absorcion de luz caracteristico. Comparando la
longitud de onda y la intensidad del maximo de absorcion de luz de una muestra versus
solucionesstandard, es posible determinar la identidad y la concentracion de componentes
disueltos en la muestra (solucion incognita).
Las ventajas de la espectrofotometria sobre otros metodos analiticos de laboratorio son varias:
es rapida, precisa, versatil, facil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotomentros se han
mejorado en precision y versatilidad en los ultimos aos con los avances de tecnologia, y hoy se
consideran indispensables en un laboratorio de quimica analitica.

Un espectrometro

posee cuatro componentes basicos: una fuente de radiacion que tiene

intensidad constante en el rango de longitud de onda que cubre ( usualmente es lampara de
tungsteno para luz visible,y deuterio para ultravioleta), un compartimiento para la muestra, un
monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del resto del espectro y la
dispersa al compartimiento de la muestra, y un fotodetector, que mide cuantitativamente
la radiacion que pasa por la muestra.
En general, los espectrometros miden en % de transmitancia (T) y absorbancia (A). El porciento
de transmitancia se refiere a la cantidad de radiacion que pasa a traves de la muestra y alcanza el
detector. Una solucion limpida, no absorbente, mostrara una lectura de 100% de transmitancia en
un espectrofotometro calibrado. Las unidades de absorbancia van de 0 a 2. La absorbancia se
relaciona con la transmitancia como
A = log 1/T, (logaritmo decimal).
A= 2 log T%

Tipos de espectrometra
ESPECTROMETRA DE ABSORCIN
ESPECTROMETRA DE FLUORESCENCIA
La espectrometra de fluorescencia usa fotones de energa ms elevada para excitar una muestra,
que emitir entonces fotones de inferior energa. Esta tcnica se ha hecho popular en aplicaciones
bioqumicas y mdicas, y puede ser usada con microscopa confocal, transferencia de energa
entre partculas fluorescentes, y visualizacin de la vida media de fluorescencia.

ESPECTROMETRA DE RAYOS X
La espectrometra de absorcin es una tcnica en la cual la energa de un haz de luz se mide antes y
despus de la interaccin con una muestra. Cuando se realiza con lser de diodo ajustable, se la
conoce como espectroscopia de absorcin con lser de diodo ajustable. Tambin se combina a
menudo con una tcnica de modulacin, como la espectrometra de modulacin de longitud de
onda, y de vez en cuando con la espectrometra de modulacin de frecuencia a fin de reducir el

ruido en el sistema.Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energa) interaccionan con una
sustancia, los electrones de las capas interiores del tomo se excitan a orbitales vacos externos, o
bien son eliminados completamente, ionizndose el tomo. El "agujero" de la capa interior se llena
entonces con electrones de los orbitales externos. La energa disponible en este proceso de
excitacin se emite como radiacin (fluorescencia) o quitar otros electrones menos enlazados del
tomo (efecto Auger). La absorcin o frecuencias de emisin (energas) son caractersticas de cada
tomo especfico. Adems, para un tomo especfico se producen pequeas variaciones de
frecuencia (energa) que son caractersticas del enlace qumico. Con un aparato apropiado pueden
medirse estas frecuencias de rayos X caractersticas o energas de electrones Auger. La absorcin
de rayos X y la espectroscopia de emisin se usan en qumica y ciencias de los materiales para
determinar
la
composicin
elemental
y
el
enlace
qumico.
La cristalografa de rayos X es un proceso de dispersin. Los materiales cristalinos dispersan rayos
X en ngulos bien definidos. Si la longitud de onda de los rayos X incidentes es conocida, se
pueden calcular las distancias entre planos de tomos dentro del cristal. Las intensidades de los
rayos X dispersados dan informacin sobre las posiciones atmicas y permiten calcular la
organizacin de los tomos dentro de la estructura cristalina.

ESPECTROMETRA DE LLAMA
Las muestras de solucin lquidas son aspiradas en un quemador o una combinacin de
nebulizador/quemador, desolvatadas, atomizadas, y a veces excitadas a un estado electrnico de
energa ms alta. El uso de una llama durante el anlisis requiere combustible y oxidante,
tpicamente en forma de gases. Los gases combustibles comunes que se usan son el acetileno
(etino) o el hidrgeno. Los gases de oxidante suelen ser el oxgeno, el aire, o el xido nitroso. Estos
mtodos son a menudo capaces de analizar elementos metlicos en partes por milln, billones, o
posiblemente rangos ms bajos de concentracin. Son necesarios detectores de luz para detectar
la
luz
con
informacin
que
viene
de
la
llama.
* Espectrometra de emisin atmica. Este mtodo usa la excitacin de la llama; los tomos son
excitados por el calor de la llama para emitir luz. Este mtodo suele usar un quemador de consumo
total con una salida de incineracin redonda. Se utiliza una llama de temperatura ms alta que la
usada en la espectrometra de absorcin atmica para producir la excitacin de tomos de analito. Ya
que los tomos de analito estn excitados por el calor de la llama, no es necesaria ninguna lmpara
elemental especial. Puede usarse un policromador de alta resolucin para producir una intensidad
de emisin contra el espectro de longitud de onda por encima de un rango de longitudes de onda
que muestran lneas de excitacin de elementos mltiples. O bien puede usarse un monocromador
en una longitud de onda determinada para concentrarse en el anlisis de un solo elemento en una
cierta lnea de emisin. La espectrometra de emisin de plasma es una versin ms moderna de
este
mtodo.
* Espectrometra de absorcin atmica (a menudo llamada AA). Este mtodo usa un nebulizador
pre-quemador (o cmara de nebulizacin) para crear una niebla de la muestra, y un quemador en
forma de ranura que da una llama de longitud de ruta ms larga. La temperatura de la llama es lo
bastante baja como para no excitar los tomos de la muestra de su estado basal. El nebulizador y
la llama se usan para desolvatar y atomizar la muestra, pero la excitacin de los tomos de analito
se realiza mediante lmparas que brillan a travs de la llama en varias longitudes de onda para
cada tipo de analito. En la absorcin atmica, la cantidad de luz absorbida despus de pasar por la
llama determina la cantidad de analito en la muestra. Suele usarse un horno de grafito para
calentar, desolvatar y atomizar la muestra con el fin de obtener una mayor sensibilidad. El mtodo
del horno de grafito tambin puede analizar algn slido o muestras mezcladas. A causa de su
buena sensibilidad y selectividad, es un mtodo que todava se usa para el anlisis de ciertos

microelementos

en

muestras

acuosas

(y

otros

lquidos).

* Espectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo usa un quemador con una salida de
incineracin redonda. La llama se usa para solvatar y atomizar la muestra, y una lmpara emite luz
a una longitud de onda especfica en la llama para excitar los tomos de analito. Los tomos de
ciertos elementos pueden entonces fluorescer, emitiendo luz en diferentes direcciones. La
intensidad de esta luz fluorescente sirve para cuantificar la cantidad del elemento analizado en la
muestra. Tambin puede usarse un horno de grafito para la espectrometra de fluorescencia atmica.
Este mtodo no es tan comn como el de absorcin atmica o el de emisin de plasma.

ESPECTROMETRA DE EMISIN DE PLASMA

Es

similar

la

emisin

atmica

por

llama,

la

ha

sustituido

en

gran

parte.

* Espectrometra de plasma de corriente contnua (DCP). Un plasma de corriente contnua se crea

por una descarga elctrica entre dos electrodos. Es necesario un gas de apoyo al plasma, y el ms
comn es el argn. Las muestras pueden ser depositadas en uno de los electrodos.
* Espectrometra
* Espectrometra

de
de

emisin
emisin

ptica

por

plasma-atmica

descarga
acoplada

luminiscente (GD-OES)
inductivamente (ICP-AES)

* Espectrometra de ruptura inducida por lser (LIBS), tambin llamada espectrometra de plasma
inducida
por
lser
(LABIOS)
* Espectrometra de plasma inducida por microondas(MIP)

ESPECTROMETRA DE CHISPA O ARCO

Se usa para el anlisis de elementos metlicos en muestras slidas. Para materiales no
conductores, se usa polvo de grafito para hacer conductora la muestra. En los mtodos de
espectroscopia de arco tradicionales se usa una muestra slida que es destruida durante el
anlisis. Un arco elctrico o chispa se pasan por la muestra, calentndola a alta temperatura para
excitar los tomos. Los tomos de analito excitado emiten luz en varias longitudes de onda que
pueden ser detectadas mediante mtodos espectroscpicos comunes. Ya que las condiciones que
producen la emisin por arco no son controladas cuantitativamente, el anlisis de los elementos es
cualitativo. Hoy da, las fuentes de chispa con descargas controladas bajo una atmsfera de argn
permiten que este mtodo pueda ser considerado eminentemente cuantitativo, y su uso est muy
extendido en los laboratorios de control de produccin de fundiciones y aceras.

ESPECTROMETRA VISIBLE
Muchos tomos emiten o absorben la luz visible. A fin de obtener un espectro lineal fino, los tomos
deben estar en fase gaseosa. Esto significa que la sustancia tiene que ser vaporizada. El espectro
se estudia en absorcin o emisin. La espectroscopia de absorcin visible a menudo se combina
con la de absorcin ultravioleta ( espectroscopia UV/Vis). Aunque esta forma pueda ser poco comn
al ser el ojo humano un indicador similar, todava se muestra til para distinguir colores.

ESPECTROMETRA ULTRAVIOLETA
Todos los tomos absorben en la regin ultravioleta (UV) ya que estos fotones son bastante
energticos para excitar a los electrones externos. Si la frecuencia es lo bastante alta, se produce

la fotoionizacin. La espectrometra UV tambin se usa para la cuantificacin de protenas y

concentracin de ADN, as como para la proporcin de protenas y ADN en una solucin. En las
protenas se encuentran generalmente varios aminocidos, como el triptfano, que absorben la luz
en el rango de 280nm. El ADN absorbe la luz en el rango de 260nm. Por esta razn, la proporcin
de absorbancia 260/280nm es un buen indicador general de la pureza relativa de una solucin en
trminos de estas dos macromolculas. Tambin pueden hacerse estimaciones razonables de la
concentracin de ADN o protenas aplicando la ley de Beer.

ESPECTROMETRA INFRARROJA
La espectrometra infrarroja ofrece la posibilidad de medir tipos diferentes de vibraciones en los
enlaces atmicos a frecuencias diferentes. En qumica orgnica, el anlisis de los espectros de
absorcin infrarroja indica qu tipo de enlaces estn presentes en la muestra.

ESPECTROMETRA RAMAN
La espectrometra Raman usa la dispersin inelstica de la luz para analizar modos vibracionales y
rotatorios de las molculas. Las "huellas digitales" que resultan son una ayuda para el anlisis.

ESPECTROMETRA DE RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN)

La espectrometra de resonancia magntica nuclear analiza las propiedades magnticas de ciertos
ncleos atmicos para determinar diferentes ambientes locales electrnicos del hidrgeno,
carbono, u otros tomos en un compuesto orgnico u otro compuesto. Se usa para determinar la
estructura del compuesto.

ESPECTROMETRA DE FOTOEMISIN
La
fotoemisin
puede
referirse
a:
* Emisin de electrones a partir de la materia despus de la absorcin de fotones energticos
(efecto
fotoelctrico).
* Emisin de fotones a partir de los semiconductores y metales cuando los electrones que fluyen en
el material pierden energa mediante deceleracin o recombinacin.

ESPECTROMETRA MSSBAUER
La espectrometra de transmisin o conversin electrnica (CEMS) de Mssbauer prueba las
propiedades de los ncleos de istopos especficos en ambientes atmicos diferentes, analizando
la absorcin resonante de rayos gamma de energa caracterstica, lo que se conoce como efecto
de Mssbauer.

OTROS TIPOS DE ESPECTROMETRA

Fotoacstica. Mide las ondas sonoras producidas por la absorcin de radiacin.
*
Fototermal.
Mide
el
calor
desarrollado
por
la
absorcin
de
radiacin.
*
De
dicroismo
circular.
* De actividad ptica Raman. Usa los efectos de la actividad ptica y la dispersin para revelar
informacin
detallada
sobre
los
centros
quirales
de
las
molculas.
* De terahertzios. Usa longitudes de onda por encima de la espectrometra infrarroja y por debajo
de
las
microondas
o
medidas
de
onda
milimtricas.
* De dispersin inelstica de neutrones, como la espectroscopia Raman pero con neutrones en vez
de
fotones.
* De tnel de electrones inelsticos. Usa los cambios de corriente debidos a la interaccin de
vibraciones electrnicas inelsticas a energas especficas que tambin pueden medir transiciones

pticamente
prohibidas.
* Auger. Se usa para estudiar superficies de materiales a microescala. A menudo se usa en relacin
con
la
microscopa
de
electrones.
*
De
cavidad
en
anillo.
* De transformacin de Fourier. La transformacin Fourier es un mtodo eficiente para tratar datos
de espectros obtenidos usando interfermetros. Casi toda la espectrometra infrarroja (FTIR) y la
resonancia magntica nuclear (RMN) se realizan con la transformacin de Fourier.
* De tiempo resuelto. Se usa en situaciones donde las propiedades cambian con el tiempo.
* Mecnica. Implica interacciones con vibraciones macroscpicas, como los fotones. Un ejemplo es
la
espectrometra
acstica,
que
implica
ondas
sonoras.
*
De
fuerza.
Usa
una
tcnica
analtica
basada
en
AFM.
*
Dielctrica.
* Infrarroja termal. Mide la radiacin termal emitida por materiales y superficies, y se usa para
determinar el tipo de enlaces presentes en una muestra, as como su ambiente reticular. Estas
tcnicas son muy usadas por los qumicos orgnicos, mineralogistas y gelogos.

Transmitancia y absorbancia
La transmitancia se define como la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en determinada cantidad de tiempo.
Existen varios tipos de transmitancia, dependiendo de qu tipo de energa consideremos.

La transmitancia ptica se refiere a la cantidad de luz que atraviesa un cuerpo, en una determinada
longitud de onda. Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte de esa luz es
absorbida por el mismo, y otra fraccin de ese haz de luz atraversar el cuerpo, segn su transmitancia. El
valor de la transmitancia ptica de un objeto se puede determinar segn la siguiente expresin:
I es la cantidad de luz transmitida por la muestra e I0 es la cantidad total de luz incidente.
Muchas veces encontraremos la transmitancia expresada en porcentaje, segn la frmula:

Podemos hablar de transmitancia trmica como la cantidad de energa en forma de calor que atraviesa un
cuerpo, en cierta unidad de tiempo. Si tenemos en cuenta un cuerpo con caras planas y paralelas, y entre
sus caras hay una diferencia trmica, esta diferencia constituye la transmitancia trmica del cuerpo. La
transmitancia trmica es el inverso de la resistencia trmica. Se puede definir segn la siguiente frmula:

En esta expresin tenemos que

U = transmitancia en W/m2. Kelvin
S = superficie del cuerpo en m2.
K = diferencia de temperaturas en grados Kelvin.
El concepto de este tipo de transmitancia es aplicado en los clculos para construir aislamientos trmicos
y para calcular prdidas de energa en forma de calor.

Tambin se toman en cuenta estos conceptos al momento de calefaccionar una habitacin, ya que hay
que calcular qu potencia se necesitar en un determinado perodo, para lograr una cierta temperatura en
la habitacin, teniendo en cuenta la prdida de calor debido a la transmitancia de las paredes de la
habitacin.
Absorbancia
Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte de esta luz es absorbida por el cuerpo,
y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo. A mayor cantidad de luz absorbida, mayor ser la
absorbancia del cuerpo, y menor cantidad de luz ser transmitida por dicho cuerpo. Como se ve, la
absorbancia y la transmitancia son dos aspectos del mismo fenmeno. La absorbancia, a una determinada
longitud de onda lambda, se define como:

Ley de Beer-Lambert

En ptica, la ley de Beer-Lambert, tambin conocida como ley de Beer o ley de Beer-Lambert-Bouguer es
una relacin emprica que relaciona la absorcin de luz con las propiedades del material atravesado.
La ley de Beer fue descubierta independientemente (y de distintas maneras) por Pierre Bouguer en
1729, Johann Heinrich Lambert en 1760 y August Beer en 1852. En forma independiente, Wilhel Beer y Johann
Lambert propusieron que la absorbancia de una muestra a determinada longitud de onda depende de la
cantidad de especie absorbente con la que se encuentra la luz al pasar por la muestra.

DIFERENCIAS ENTRE ESPECTROFOTOMETRIA Y ESPECTROCOPIA

La espectrofotometria es el estudio mas detallado de la absorcion de energia radiante por las especies
quimicas que permite su caracterizacion y cuantificacion. La espectrofotometria requiere de la
espectroscopia ya que esta ultima es la que genera el espectro de las especies quimicas para que luego
se estudie y se detecten grupos funcionales, se identifiquen compuestos y se analizen mezclas.
La espectrofotometria es el estudio mas detallado de la absorcion de energia radiante por las
especies quimicas que permite su caracterizacion y cuantificacion. La espectrofotometria requiere de
la espectroscopia ya que esta ultima es la que genera el espectro de las especies quimicas para que
luego se estudie y se detecten grupos funcionales, se identifiquen compuestos y se analizen
mezclas.

Patron de Referencia: Material o sustancia en la cual uno o ms valores de sus propiedades

son suficientemente homogneos y estn bien definidos para permitir utilizarlos para la calibracin
de un instrumento, la evaluacin de un mtodo de medicin, o la asignacin de valores a los
materiales.NOTA:Un material de referencia puede presentarse bajo la forma de un gas, un lquido o
un slido, puro o compuesto. Ejemplos: el agua para la calibracin de viscosmetros, el zafiro que
permite calibrar la capacidad trmica en calorimetra y las soluciones utilizadas para la calibracin en
los anlisis qumicos.

Curva de calibracion
trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas de una sustancia (por ejemplola albmina
srica bovina que vimos antes) que se utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia(protenas) presente
en una muestra incgnita.En muchas determinaciones se cumple una relacin proporcional entre la magnitud
o intensidad decolor que da una reaccin y la cantidad del reactivo que la provoca. Por ejemplo: si la presencia
de 10ug de protenas en una solucin genera la aparicin de un color azul plido cuando es agregada
a unamezcla reactiva, la presencia de 20 ug de protena dar lugar a que la solucin se torne azul msoscuro y
as sucesivamente.La relacin entre intensidad de color y concentracin de la sustancia (una medida de la
cantidad de esasustancia) es proporcional y as, si se grafica el valor de intensidad de color medido con un
aparatoadecuado (espectrofotmetro o colormetro) en funcin de las concentraciones crecientes de lasustancia
se obtiene una recta. Es decir, a mayor cantidad de protena, mayor cantidad de producto dereaccin y por lo
tanto, mayor intensidad de color