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CAPITUI;O V

BACTERIAS HETEROTROFAS (Continuacin)

3.

Bacterias anaerobias que necesitan hidrgeno combinado.

BACT^RIAS DESTRUCTORAS DE I,A C^I,UI,OSA:


a)
b)

Anaerobias.
Aerobias.
c) Termfilas.
d) Desnitrificantes.

3. Bacterias aaaerobias. - No se conoce ninguna bacteria absolutamente anaerobia, es decir, que slo pueda vivir y desarrollarse en
total ausencia de oxigeno (pg. i3). I,as anaerobias estrictas parecen
estimuladas por la presencia de pequeas cantidades de osgeno libre,
aun cuando pueden vivir en total ausencia de este gas.
I,a primera generacin de una bacteria anaerobia, en cultivo, es
ms sensible a la presencia de oxfgeno que las generaciones siguientes,
y dentro de una generacin, toleran peor el oxgeno en las primeras
edades del cultivo.
McI,eod y Gordon (68) han destacado la incapacidad de producir
catalasa de las bacterias anaerobias. 1~n el desarrollo aerobio de las
bacterias se forma perxido de hidrgeno, que sera perjudicial para
ellas de no existir la catalasa, que desdobla el perxido en agua y oxfgeno inactivo. A1 carecer las bacterias anaerobias de la capacidad de
formar catalasa, cuando se desarrollan en condiciones aerobias estn
sometidas a la accin perjudicial del agua oxigenada. ^1 efecto nocivo
del aire sobre las bacterias anaerobias en estado vegetativo se hace
patente con una exposicin de slo cuarenta minutos, mientras que
en las esporas no se manifiesta al cabo de tres horas (2 y 27).
Las bacterias anaerobias intervienen en el suelo en un nmero considerable de importantes procesos, algunos de los que hemos mencionado ya, y entre los que merecen destacarse: formacin de amonaco
a partir de los proteidos; fijacin del nitrgeno atmosfrico por bacterias libres, ms iutensa, probablemente (77), que la llevada a cabo
por bacterias aerobias, y descomposicin de celulosa, peptinas y
proteidos.
^l solo carcter de anaerobias no sirve para caracterizar bacterias
que difieren tan fundamentalmente en su metabolismo, como las
qne obtienen su energa de la celulosa, las que toman su nitrgeno del
nitrgeno atmosfrico, las que pueden obtener oxgeno de los nitratos
- I -

y sulfatos o las que ocasionan el desprendimiento de olores pestilentes de las prote^nas complejas. Mientras que el anhdrido carbnico es el gas principal producido por las bacterias aerobias, las anaerobias se caracterizan por originar diversos gases, tales como el metano
y el hidrgeno en la descomposicin de los glcidos; el cido sulfhdrico en la reduccin de los sulfatos; xidos de nitrgeno y nitrgeno
libre en la reduccin de los nitratos; determinadas aminas, hidrgeno
sulfurado, nitrgeno y sus gidos y mercaptanes, como resultantes
de la descomposicin de los proteidos. Adems, las bacterias anaerobias
forman cidos actico, butrico, propinico, frmico y lctico, alcoholes etlico y butlico, y en algunos casos, acetona.
De entre los varios sistemas de clasificacin de las bacterias
anaerobias del suelo, reproducimos el siguiente, propuesto por ^^Vaksman (io2):
^
I.-Bacterias que actan prindpalmente sobre hidratos de carbono:
i. - Bacterias que utilizan ampllamente hidratos de carbono sencillos y
almdones como fuentes de energfa, denominadas por varios autores sacarolticas. A este grupo pertenecen las bacterias butricas
clasificadas de ordinario como una sola espede: Bacillus amylobacter A. :lfeyer y Bredemann. $stas bacterias descomponen los
azcares, con formadn de ddo butfrico y Rases.
a)

Bacterias. fijadoras de nitrgeno: Clostridium pastorianum Winogtadsky (Bac, amylobacter van Thieghem, Bac. amylocyme
Perdrix, Bac, butyricus Botkin, Granulobacter saccarobutyricum Befjeriack, Bac. ordhobutilicus Grimbert, Clostridium
americanum Ptiagahefm, Bac. amylobacter A. M. y Bred.), y
formas afines encontradas prcticamente como abundantes
ea casi todos los auelos. Bste organ{smo o grupo ha sido clasificado por Bergey como Cdostridium butyricum Prazmowskyy por Lehmann y Newmann, como Bac. pastorianum Wino,
gradsky.

b)

Bac. wekhii Migula (Bac. aerogenes capsulatus Weleh y Nutall,


Bac. per/ringens Veillon y Zuber, Bac, enteritidis sporogenes
Klen). BastondUos cortos, de 4 a 8 x i a i,s , aslados o
en parejas, inmvilea, que forman esporas ovales, centrales
o escntrcas, encapsulados. Bncontrada repetidas veces en
el suelo y en las aguss residuales.

z. - Bacterias que descomponen los compuestos pcticos.


a)

Grupo del Bac. amylobackr, que ineluye al Clostridium pastorianum


(gual que i, a)). I,as formas que ocasionan el enriado del lino
han sido descrtas con nombtes diveraos, entre ellos el Plectridium de Fribea y Wnogradsky, el Clostridium de Behrens^
el Plectridium pectinovorum de Beijernck y van Delden.

-gz-.

b)

Bac. Jelsineus Carbone. Bastondllos, de o,3 a o,q x 3 a g ,


que se preseatan aislados, en pares y en cadenas, mviiea con
flageloa pertricos. Esporas ovales, terminales, Gram positivos.
No producen ddo butlrIco en el enriado del lino.

3. - Bacterias qne desrnmponen la celulosa.


a)

Bacterias anaerobias que descomponen la celulosa a la temperatura ordinara. Bntre ellas se encuentran las productoras de
hidrgeno y de metano, de Omellansky; el
dissolvans Khouvne, y otras.

b)

Bac. cellulos^

Bacterias termfilas: Clostridium thermocellum Vljcen, Fred y


Peterson.

II.-Bacteriae que ad:an prIndpalmente sobre los prtidos.


i. - Pormas fuertemente proteolticas.
a)

Bac. sporegenes Metdwihoff (Glostridium sporogenes (Metcluiikoff) Bergey y ml). Bacilo mbvil, con flagelos pertricos, Gram
postvo, con extremos redondeados, de 3 a y x o,6 a o,8 .
Una de las bacterias ms fuertemente proteolticas que se conocen. Descompone los prtidos rnn formacidn de gas, ennegredmiento del medio y producdn de an olor marcado. );as
esporas, subterminales, se forman proato. Se encuentra abundantemente en el sudo, estircol, polvo y aguas residuales.

b)

Bac. oadamatis maligni Koch ( Vibrion septique Pasteur, Clostridium oedematis maligni (Koch) Bergey y col.). E;ncoatrado
en el intestino del hombre y en el suelo. Descompoae los prtidos con formaddn abuadante de gas, sin ennegrecer el
medio.

c)

Bac. putrificus Bienstodc (Clostridium puirificus Bergey y col.).


Badlo rnn flagelos pertricos, mvil. F'orma esporas ovales,
graades, termnales. Posee propedades saca.rolticas dbiles
y descompone fuertemente los prtidos, con ennegredmiento
del medio y desprendimiento de olor ftido. La leche es digerida gradualmente, sin coagulaca rpida.

d)

Bac. histolytticus Weimberg y Seguin (Clostridium histolytcum


Bergey y col.). Bad1o de 3 a 5 x o,s a o,^ , mvil con flagelos perftricos, que se presentan aislados o en parejas. Descompone los prtdos ain desprendimiento de gases, ennegrece el medio y posee olor nauseabundo. Este organsmo ha sido
aislado del suelo por Peterson y Hall.

e)

Bac, botultinus van Ermengen (Clostridium botulinum Bergey


y rnl.). Badlos gruesos, con estremos redondeados y esporas
ovales subterminales. Descompone los prtidos con formaddn de gasea y ennegredmiento del medio. >~I habitat natural
de esta espede est eztendido por todo el mundo, tanto en los
suelos vfrgenes y forestales como en loa cultivados.
-83-

s. - Organiemoe dEbilmeate proteolitcoa.


a)

Bac. bifer+westaus Teaier ^ Martelly (Clostridium 6iJermc+^taxs


(Tisaer y Martelly) Bergey y col.). Badlos de 5 a 6 x o,8
a r , inmvilea, preaeatQndade aialadoa o en cadenas wrtaa.
iyaporas ovalea, centralea. I.os baatondllos no engrnesan al
esporular. Produce ddo y gas con loa hidratoa de carbono.
Dearnmpone los prtdoa oon deaprendimeato gaseoao y ennegredmimto dei medio. Arede desarroUarae hasta loa go^.

b)

Bac. t^taxi Nfoolaiet (Closhidium tetani (Neolaiet) Holland).


Badloe mvks, oon flageloa perltricos, de 4 a 8 x o,4 a o.6 ,
incapaces de ntilizar los hidratos de carbono. Eanegrecen el
medio de caltivo. Pasaa al auelo mn el eatircol, habiendo aido
comprobada sn eziatenda m muchas muestraa de auelo.
5e han aislado del ando o de otras fuentes, que pueden indcar un habitat m l, bacterae anaerobfas de eacaso poder proteoltico, pero capacea de atacar a diversoa hidratoa de carbono
con formadn de gas, q tales como Bac. ckauvei Arloing, Cornevla y Thomas (Clostridium cauvei (Arlong, Cornevin y Thomas)
Holland).

III.-Bacterias qne obtienen au ozgeno de sales mineralea.


r. - Bacterias rednctoras de nitratos.
z. - Bacterias reductorss de sulfatos.

I,as bacterias anaerobias pueden llegar a alcanzar en el suelo


cifras muy elevadas, del orden de los io millones por gramo de tierra
de jardn. 1~1 gran nmero de bacterias anaerobias que se encuentran
en los suelos forestales (de 500.00o a 5 millones por gramo de suelo)
merece particular atencin, as como la de las fijadoras de nitrgeno
anaerobias (de ioo a io.ooo por gramo de suelo). I,as bacterias fijadoras de nitrgeno aerobias, o faltan totalmente en los suelos forestales, o estn en nmero muy reducido, lo que prueba (3o y 32) el
papel de las bacterias anaerobias para la fijacin del nitrgeno atmosfrico en estos suelos.
Bacterias destructoras de la celulosa. - Fstas bacterias han sido
objeto de particular atencin a causa de que la celulosa es el material
orgnico ms abundante entre los que recibe el suelo y a que existen
bastantes bacterias que pueden desarrollarse utilizando la celulosa
como material energtico, y algunas son incapaces de emplear otra
f uente de energa.
I,as bacterias destructoras de celulosa pueden dividirse en los
siguientes cuatro grupos: anaerobias, aerobias, termfilas y desni--84-

trificantes, de los que el primero parece ser el de mayor importarrcia (8o y I^3) en los procesos que se llevan a cabo en el suelo.
aJ BACT^RIAS ANAEROBIA5 DE5TRUCTORA5 D^ I.A CEI.UI,OSA. - Al
frente de este grupo deben figurar las bacterias, ya clsicas, aisladas
por Omeliansky (75) a fines del siglo pasado: Bac. methanigenes I,ehmann
y Neumann y Bac. f ossicularum I,ehmann y Neumann, que fueron
las primeras bacterias que se demostraron defintivamente capaces
de descomponer la celulosa en forma de papel de filtro o de algodn.

Ambos organismos se encuentran en aquellas sitios donde, en


condiciones anaerobias, se destruyen tejidos vegetales, por ejemplo,
en el esti^rcol o en el cieno de los pantanos y ros.
Para su aislamiento, Omeliansky empleaba estircol de caballo 0
cieno del ro Neva, inoculados en frascos completamente llenos de
un medio que contena, adems de papel de filtro, los siguientes elementos:
Fosfato btpotsico (KfHPOi) ........ . . .. . . . . . . .

i,o gramos.

Sulfato magnsim (b1gS0^ qH^O) ....... . . . . .. .

o,s

Sulfato amnico (NH^)^ SO^ ..... ... . . . . . . . . . . . .

i,o

r
r

r
Carbanato cldrn (CaCO') ..................... io,o
Indidos.

Ci,oruro sdico (NaCI) ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Agua destilada ...............................

iooo c. c.

El sulfato amnico puede ser reemplazado por una cantidad igual


de fosfato amnico, de peptona o de asparagina.
Los frascos inoculados se incuban a una temperatura de 34^ a 35^.
A1 cabo de unos ocho das empieza el desprendimiento de gases de Ia
fermentacin, que, al principio, consisten en una mezcla de hidrgeno,
metano y anhdrido carbnico; pero que despus de varios resiembros
en medio nuevo, terminan por contener una mezcla de metano y
anhdrido carbnico, en la proporcin de 3 a i cuando los cttltivos son
jvenes.

^n esta fase, cuando el gas desprendido no contiene hidrgeno, el


cultivo es casi puro, pudiendo ser aumentada su pureza mediante pasteurizaciones realizadas antes de los resiembros, siempre que las esporas del fermento metnico estn formadas. Por este medio se destruyen los organismos contaminadores que no formen esporas.
Examinando al microscopio un cultivo obtenido de este modo, se
observa que contiene unos bacilos delgados, de o,4 ^ x 5 , que se
colorean fcilmente y se encuentran en gran nmero depositados
sobre las fibras de celulosa, por lo que muchos de ellos estn curvados
-g5-

y conservan la forma de la seccin de la fibra aun despus de separados de sta rnediante lavados. A medida que el cultivo envejece y
avanza la destruccin de la celulosa, los bacilos se alargan hasta
alcanzar una longitud triple de la primitiva, empezando a percibirse
un engrosamiento en uno de los extremos. que se tie ms intensamente, constituyendo finalmente una espora esfrica de z de dimetro, en cuyo momento el Bac. methanigenes presenta su aspecto
ms caractertstico.
I,a destruccin de la celulosa puede seguirse microscpicamente.
A1 iniciarse el ataque, el papel de filtro toma una coloracin anaranjada o amarilloanaranjada, apareciendo con numerosos agujeros y
los bordes corrodos. Finalmente pierde su estructura fibrosa y se
acumula en el fondo del frasco en forma de un sedimento negrusco
o anaranjado. El proceso de la destruccin es lento y puede durar
varios meses. Durante el perlodo de fermentacin vigorosa, el desprendimiento de gases vara de 3,5 c. c. a i5 c. c. por gramo de celulosa. Aderns de los gases indicados, durante la fermentacin se forman cidos grasos voltiles.
Con el Bac, methanigenes aparece asociado el Bac, f ossicularum, que
desprende hidrgeno durante la fermentacin de la celulosa. Sus esporas germinan mucho ms lentamente que las del primero, hecho que
fu aprovechado por Omeliansky para su separacin. Como hemos
indicado, en el primer cultivo preparado para el aislamiento del Bacillus methanigenes, el gas desprendido contena hidrgeno y metano.
Si dicho cultivo, poco tiempo despus de iniciado el desprendimiento
gaseoso, se calienta durante quince minutos a una temperatura
de 75^, las clulas del bacilo metnico procedentes de la germinacin
de las esporas quedan destrufdas, mientras que las esporas del productor de hidrgeno, que no han germinado todava, permanecen vivas. Repitiendo esta operacin en tres o cuatro generaciones sucesivas se llega a obtener un cultivo que slo desprende hidrgeno y
anhdrido carbr^co, en el que se encuentran bacilos de o,5 X 4 a 8
de longitud en los cultivos jvenes, y en los viejos pueden alcanzar
de io a ^5 de longitud. ^as esporas, esfricas y terminales, son de
mayor dimetro que en el Bac. methanigenes, midiendo i,5 de dimetro. A1 igual que este ltimo, las clulas vegetativas no toman con
el yodo la coloracin azul o prpura caracterfstica del Bac. amylobacter.
I,a fermentacin hidrogenada de la celulosa progresa ms lentamente que la metnica, y a la temperatura ptima (35^) puede continuar ininterrumpidamente durante ms de un ao. El gas, hidr-86-

geno y anhdrido carbnico, se forma con ms lentitud; aproximadamente, 8 c. c. por gramo de celulosa en las veinticuatro horas. Adems de los gases mencionados, durante la fermentacin se forman
cidos actico y butrico, trazas de cido valrico y alcoholes superiores, asf como pigmentos y substancias aromticas, que dan al cultivo
un aroma parecido al del queso.
Ni el Bac. methanigenes ni el Bac, fossicularum han podido obtenerse en cultivos puros en la forma habitual, ya que ninguno de los
dos se desarrollan en los medios slidos ordinarios a base de agar o
gelatina, habiendo fracasado todos los intentos en este sentido.
En iq23, Khouvine (56) describi otro organismo anaerobio destructor de la celulosa aislado del intestino del hombre: el Bac. cellulosae
dissolvens Khouvine. (Clostridium dissolvens (Khouvine) Bergey y colaboradores), interesante porque, adems de otros productos, suministra
alcohol etlico en proporcin de un 8 por ioo de la celulosa fermentada. NTorfolgicamente, el Bac. cellulosae dissolvens se parece mucho al
Bac. fossicularum, del que se diferencia por sus esporas, ovales en
lugar de esfricas y de mayor tamao: 2 x 2,5 . Fste organismo
se desarrolla bien hasta en temperaturas de 57^, y a este respecto,
repre^enta una fase de transicin hacia las bacterias termfilas. Fu
cultivado en un medio lquido conteniendo substancias fecales como
fuente de nitrgeno: las bacterias se adhieren fuertemente a las fibras
celulsicas del papel, lo que permite separarlas de las contaminaciones
que son arrastradas al lavar el papel con la solucin de sales esterilizada.
En la fermentacin de la celulosa, nico hidrato de carbono al que
ataca, adems de hidrgeno y anhdrido carbnico, se forma cido
actico y butrico, alcohol etlico y un pigmento pardoamarillento.
nicamente se recupera, en los productos de la fermentacin aislados,
e155^15 Por Zoo del carbono fermentado. Madame Khouvine cree que el
resto se encuentra en el lquido de fermentacin en forma de hidratos
d e carbono solubles , que son capaces d e ser absorbidos por el
intestino.

Este organismo se ha encontrado tambin distribudo abundantemente en toda clase de suelos.


En el conducto intestinal de las larvas de Potosea cuprea Fabr., aisl
Werner (io6) un organismo anaerobio, Bac. cellulosam fermentans
(Clostridium werneri Bergey y col.), capaz de atacar rpidamente a
la celulosa, ayudando asf al insecto en su proceso digestivo. Otros
investigadores han sealado tambin la naturaleza anaerobia de las
-8^-

bacterias que desrnmponen la celulosa en el aparato digestivo de los


caballos, ganado, termites y larvas de in.sectos.
b^

BACT^RIAS AEROBIAS DESTRUCTORAS DE CEI,ULOSA. -^1 prl-

mer mcroorganismo de este tipo fu descrito por van Iterson (95) ^


bajo el nombre de Bac. ferrugineus (Cellulornonas ferruginea Bergey
y rnl.), como un delgado bacilo, muy movible, no esporgeno, que se
encuentra en el suelo de jardn, en el humus, en las hojas secas, etc.
Puede obtenerse colocando en un plato un trozo de papel de filtro,
que se espolvorea con fosfato amnico magnsico, se cubre con otro
trozo de papel, se humedece rnn una solucin al o,og por ioo de fosfato bipotsico, se inocula con tiena de la indicada anteriormente y
se incuba a 28^.
A los cuatro o cinco das aparecen sobre el papel unas manchas
pardoamarillentas; en ellas, el papel va siendo descompuesto en una
substa.ncia mucilaginosa, en la que, observada al microscopio, se
advierten diversos microorganismos, entre los que predominan dos
tipos: el ya mencionado Bac. ferrugineus y una forma cocoide grande.
Ln una fase m^as avanzada de la descomposicn, los restos de las
fibras aparecen envueltos en una masa mucilaginosa de micrococos.
Van Iterson atribuy la descomposicin de la celulosa al Bac. ferrugineus, y consider la fortna cocoide como un organismo en simbiosis
con aqul, que aun cuando por s solo es incapaz de atacar a la celulosa, ayuda al primero a destruirla.
Durante una investigacin sobxe la descomposicin aerobia de la
celulosa en los suelos de Rothamsted, Hutchinson y Clayton (si), aislaron un microorganismo aerobio S^irochaeta cyto^haga Hutchinson
y Clayton, muy semejante al Bac. ferrugineus, utilizando una solucin de sales minerales inoculada con suelo, en la que estaba introducido parcialmente un trozo de papel de filtro. A1 cabo de cuatro o seis
das de incubacin a 2s^, aparecan en el papel, en la parte no sumergida, pero pr.zima al lquido, unas manchas pardoamarillentas, en las
que el papel iba perdiendo consistencia, y donde se poda observar,
con ayuda del microscopio, que contenfa bacilos delgados y cocos de
tamao grande. Tras de muchas tentativas consiguieron un cultivo
liquido en el que slo se encontraban bacilos; pero los resiembros en
medio nuevo, al cabo de algunos das, presentaron nuevamente la
asociacin de cocos y bacilos, lo que hizo que Hutchinson y Cla.yton
considerasen a las primeros como una fase del ciclo evalutivo del organismo.
_gg-

En los cultivos jvenes de Spirochaeta cyto^haga predomina la


forma de bacilos de o,3 a o,4 por 3 de longitud, afilados en los
extremos y frecuentemente encorvados. Aun cuando no se han podido
observar flagelos, los bacilos presentan un movimiento de rotacin
lento, pero marcado. 5on muy fle^cibles, tomando a menudo formas
de S, de O de U; a medida que el cultivo envejece va siendo ms frecuente la forrna de cocos, o xfase esporoide^. I,os esporoides miden i,5
de dimetro, y se tien mucho ms intensamente que los bacilos. I,os
esporoides no pueden considerarse como esporas, ya que basta para
destruirlos el calentamiento a 60^ durante diez minutos.

Winogradsky (ii3), posteriormente, en un estudio sistemtico de


algunas bacterias aerobias del suelo destructoras de celulosa, estableci los siguientes gneros:

Gnero Cytophaga Winogradsky, ig2g.


Bastoncillos largos, fleguosos, con extremos afilados, conteniendo
grnulos metacromticos. Incapaz de usar como alimento substancias carbonadas, con egcepcin de la celulosa que hidroliza. Su desarrollo sobre los medios de cultivo habituales es lento.
1a especie ttpica es Cytophaga hutchinsoni Winogradsky, que fu
el organismo descrito por Hutchinson y Clayton como S^irochaeta
cito^ihaga.
i. - Cyto^haga hutchinsoni Winogradsky.
Bastoncillos de o,3 a o,4 x 3 a 8 , aislados o en cadena, que se
tien con dificultad, pero presentan grnulos fuertemente teidos.
Gram, negativa. Reproduccin probable por los grnulos temdos
(^ artrsporas? ). I,os cultivos viejos presentan formas cocoides
grandes.
Se desarrolla en gel silceo y ataca la celulosa en este medio, formando grandes colonias mucilaginosas de color naranja.
Aerobia facultativa.
Temperatura ptima: 20^.
Habitat: Suelo. Desintegra las fibras vegetales.

2. - Cyto^haga aurantiaca Winogradsky.


Bastoncillos largos, de i x 6 a 8 , puntiagudos, inmviles. Gram
negativos.
- 89-

5obre gel silceo con celulosa forma colonias de color rosa naranja.

3. - Cytophaga rubra Winogradsky.


Bastoncillos largos, de o,4 x 3 , ligeramente curvados, con un
pequeo grnulo cerca de cada extremo. Movilidad no demostrada.
Gram negativo.
Sobre gel silceo con celulosa forma colonias mucilaginosas rojas.
4. - Cytophaga dutea Winogradsky.
Bastoncillos de o,4 por 3 . Gram negativos. No se ha aislado eu
cultivo puro.
Sobre gel slceo con celulosa forma colonias mucilaginosas, amarillo brillante.
^. - Cytophaga tenuissima Winogradsky.
Ms tenue que las otras especies.

1lorma colonias mucilaginosas color verde oliva sobre el gel silceo


con celulosa.

Gnero Cellvibrio Winogradsky, 1929


Bastoncillos largos, ligeramente curvos, con extremos redondeados.
Muestran grnulos, que se tien fuertemente (^artrsporas?), que parecen relacionados con la reproduccin. Mviles con flagelos polares.
Oxida la celulosa formando oxicelulosa. Sobre medios ordinarios de
cultivo muestra crecimiento dbil.
I,a especie tipo es Cellvibrio ochracea Winogradsky.
i. - Cellvibrio ochracea Winogradsky.
Bastoncillos curvados, rollizos, con extremos redondeados, de
o,^ x 2,5 a 5 , raramente en espiral. Mviles. Gram negativos.
5obre gel silceo con celulosa forma colonias difusas, mucilaginosas, color ocre claro.
2. - Cellr^ibrio flavescens Winogradsky.
Bastoncillos curvados, rollizos, con extremos redondeados, con
grnulos metacromticos. Gram negativos.
Sobre gei silceo con celulosa forma coloni^s difusas, mucilaginosas,
color amarillo claro.
-90-

Gnero Cellfakicula Winogradsky, 1929


Bastoncillos cortos, que no egceden de a , puntiagudos, con grnulos metacromticos. I,os cultivos viejos presentan formas cocoideas.
:Vlviles con un flagelo polar. Osida la celulosa y la transforma en
oYicelulosa.

I,a especie tipo es Cell f akicula viridis Winogradsky.


Z. - Cellfakicula viridis Winogradsky.
Bastoncillos curvos, rollizos, de o,7 X 2 , con extremos ligeramente puntiagudos. Mviles. Gram negativos.
Forma colonias difusas, mucilaginosas, de color verde, sobre gel
silceo con celulosa.
2. - Cell f al.cicula mucosa Winogradsky.
Bastoncillos curvos, rollizos, de o,7 X a , con extremos ligeramente aguzados. Mviles. Gram negativos.
Sobre gel silceo con celulosa forma colonias difusas, mucilaginosas,
color crema.

3. - Cell f alcicula f usca Winogradsky.


Muy parecida a la anterior, presentando autolisis en los cultivos
viejos.
1^1 gel silceo con celulosa empleado por Winogradsky puede prepararse del modo siguiente: Se pone en placas de Petri, en la forma indicada anteriormente, una mezcla de una solucin normal de xCl y
su equivalente de una solucin de silicato potsico. Despus que se
ha formado el gel, se colocan las placas durante veinticuatro horas en
agua corriente, y luego, varias veces, en agua destilada hervida, hasta
que queden libres de cloruros. Cinco gramos de papel de filtro, finamente desmenuzado, se mezclan con ioo c. c. de una solucin que
contenga:
t^a)a HPOa . ... . . . ... .. . . . .. ...... .. . . .. .

g,oo gramos.

Mg SOa ...................................

i,oo

SG ......................................

i,oo

^
r

0,02

FeSOa ....................................
Agua destllada .............................

i.ooo c.c.

De la anterior solucin se egtienden porciones de unos 2 c. c. sobre


el gel de cada placa, espolvoreando con una pequea cantidad de
CaC08. I,as placas se colocan en una estufa a 60^, hasta que la super-91-

ficie del gel quede libre de exceso de lquido. Se colocan entonces pequeas partculas de suelo sobre la placa, que se cubre y se pone a
incubar. A los tres o cuatro das se desarrollan colonias de color anaranjado, arnarillo, etc., que se extienden sobre el medio de cultivo. De estas colonias se pueden hacer trasplantes a matraces que contengan un gramo de papel de filtro y 25 c, c. de la solucin anterior. I,os
organismos empiezan a desarrollarse como pequeos lunares coloreados, sobre el papel, que posteriormente forman una masa mucilaginosa e^tendida por todo ste. Mediante repetidos trasplantes puede
llegar a obtenerse la bacteria en cultivo puro.

Adems de los organismos mencionados anteriormente, Kellerman,


McBeth y otros (54 Y 55)^ as como McBeth y Scales (66), han descrito
numerosas bacterias aerobias que consideran como destructoras de
celulosa. Para el aislamiento de estos organismos, los autores americanos emplearon la siguiente ^olucin:
Fosfato bipot.rirn (K^HPO^) ........ . .. .... ..
Sulfato magnsco (MgSO^ 7H^0) . . . . . . . . . . .

t,o gramos.
r,o
^

Cloruro sdico (NaCI) ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

T,o

Sulfato amnirn (I1H^)^ SQ^ . . . . . . . . . . . . . . . . . .

2,0

>

Carbonato clcico (CaCOs) .. ... . . . . . . . . . . . . . .

zo,o

^r

Agua cozriente ..............................

iooo

c. c.

b;l sulfato amnico puede reemplazarse por peptona.

En matraces de ^rlenmeyer de 20o c. c. se colocan papeles de


filtro de io cm. de dimetro y se aaden ioo c. c. de solucin hasta
que quede cubierto el papel.
I,os matraces preparados se esterilizan y se inoculan con una pequea cantidad de la substancia a examinar, incubndolos a 30^. 1<os
primeros sntomas de fermentacin son un enturbiamiento de la solucin seguida por una apariencia corroda del papel, lo que tiene lugar
de los cinco a los diez das de incubacin. Entonces se toma un trozo
del papel atacado y se introduce en un matraz de control que contenga un trozo de papel estril suspendido en la solucin de sales. Si, por
agitacin del frasco, se rompe antes el papel atacado que el de control,
ha llegado el momento de la inoculacin de otro matraz que contenga
papel de filtro y solucin, con un trozo de papel atacado. Despus de
tres o cuatro trasplantes en el perfodo ms corto posible, el papel atacado se coloca en un matraz con agua esterilizada y se agita vigorosamente hasta que el papel quede desmenuzado. De esta suspensin se
preparan diluciones en la forma acostumbrada para el aislamiento de
cultivos puros en uno de los medios que se indican a continuacin:
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Agar-celulosa. - A un litro de amonaco diludo que contenga diez


partes de amonaco (de o,qoo de p. e.) por tres de agua, se aade un
ligero exceso de carbonato cprico. I,a mezcla se agita vigorosamente
y se deja reposar hasta el dfa siguiente. I,uego se decanta la solucin
de xido de cobre amoniacal, y se disuelven en ella z5 gramos de papel de filtro sin lavar. F^sta solucin se diluye hasta io litros y se precipita la celulosa, acidificando lentamente con cido clorhdrico dilufdo (2o por ioo). El lfquido se diluye nuevamente hasta 20 litros,
se deja sedimentar la celulosa y se decanta el lquido. I,a celulosa precipitada se lava varias veces con agua acidulada con clorhdrico hasta
que el agua de los lavadas no contenga cobre, y luego, con agua destilada hasta arrastrar todo el clorhdrico. La celulosa se deja reposar
varios dias, y finalmente se hace una suspensin a1 z por ioo. A
50o c. c. de esta suspensin se agregan io gramos de agar y goo c. c. de
la solucin de sales antes indicada.
Agar-almid^t. - Diez gramos de almidn de patata se suspenden
en 80o c. c. de agua fra. I,a suspensin se hierve, agitando, hasta que
se reduzca su volumen a goo c. c. A esta solucin se aaden io gramos
de agar y 50o c. c. de solucin de sales.
Agar-patata. - A ioo gramos de patatas machacadas se aaden
80o c. c. de agua corriente. I,a mezcla se lleva al bao de vapor durante
treinta minutos y se filtra a travs de algodn. A 50o c. c. del filtrado
se agregan io gramos de agar y 50o c. c. de solucin de sales.
Agar-dextrosa. - Diez gramos de glucosa y ig gramos de agar se
disuelven en 50o c. c. de agua corriente, y esta solucin se mezcla con
50o c. c. de solucin de sales.
^s caracterfstico de los cultivos de estas bacterias que produzcan
unas zonas transparentes alrededor de las colonias, que no son debidas
a la neutralizacin del carbonato clcico ni a una accin enzimtica
de las bacterias, sino a la invasin del medio por un gran nmero de
bacterias (98). I,os resiembros de las colonias tienen menos marcado el
cerco claro, que desaparece al tercero o cuarto trasplante.
Estas bacterias de Kellerman y sus colaboradores, as como otras
aisladas por Sack (8^), fueron includas por Bergey en el gnero Cellulomonas, caracterizado por bacterias en forma de pequeos bastoncillos
con extremos redondeados, no esporgenos, mviles o inmviles, que
se encuentran en el suelo y tienen la propiedad de digerir la celulosa.
I,a especie tipo e^ Cellulomonas biaxotea (Kellerman) Bergey y col., citando Bergey 33 especies, de las que i8 son mviles con flagelos pertricos, ^ mviles con flagelos polares y 8 inmviles.
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C^ BACTRRIAS TERMPII,AS DESTRUCTORAS DE CEI.UI,OSA. - ESte


grupo de bacterias no est bien estudiado. McFayden y Blaxall (67)
fueron los primeros en observar que las bacterias termfilas que habfan encontrado en el suelo eran capaces de fermentar la celulosa,
necesitando veintin das para descomponer el papel de filtro, o la
viscosa, a la temperatura de 60^. Como productos de esta descomposicin, se formaban cidos actico y butfrico, anhidrido carbnico y
metano. Los organismos productoxes de esta fermentacin no pudieron
aislarse en cultivo puro.

Posteriormente, Kroulik (57) realiz investigaciones con ciertos


organismos termfilos, y aun cuando no pudo aislarlos en cultivo
puro, mediante el estudio microscpico lleg a la conclusin de que la
destruccin de la celulosa era ocasionada por dos formas distintas: el
Bacillus II, i, y el Bacitlus II, 2, producindose en ellas cidos frmico,
actico y butrico, anh{drido carbnico e hidrgeno, este ltimo en
cantidades pequeas. El hidrgeno sulfurado, que se formaba ocasionalmente en cantidades apreciables, fu considerado como producto
de la reaccin del hidrgeno formado con los sulfatos del medio. La
destruccin de celulosa era ms intensa cuando actuaba el Bacillus II, 2, alcanzando al go por ioo, y aun ms, de la celulosa empleada.
En ig23, Langwell y Hind (58) dieron noticias de una bacteria
termfila destructora de celulosa que produca cidos orgnicos voltiles: alcohol etlico, metano, hidrgeno y anhdrido carbnico. Aun
cuando dieron una descripcin del organismo y un balance de las
reacciones, las investigaciones posteriores no han confirmado estos
hechos ni han permitido aislarla.
Finalmente, Viljcen, Fred y Peterson (97), estudiaron la descomposicin de la celulasa por una bacteria termfila, cuya descripcin
morfolgica dieron, y a la que denominaron Clostridium theymocellum,
dudndose de que consiguieran aislarla en cultivo puro, tanto por la
tcnica empleada (go) como por el hecho de que al cultivarla sobre
agar perda la facultad de descomponer la celulosa. Por ello deben
acogerse con reserva las propiedades que se le asignaron.
^n su escrito de tg24 afirmaron que cuando se desarrolla entre
60^ y 65^, el Cl. thermocellum descompone la celulosa rpidamente,
formando un g6,8 por ioo de cida actico y un io por ioo de alcohol
etlico a los once dfas de incubacin; en este perodo desaparece del
6o al 8o por ioo de la celulosa, quedando el resto formando un sedimento amarillento amorfo. En su publicacin de ig26 se hace constar
que el rendimiento en alcohol varfa considerablemente.
-^-

[^J BACTERIAS DFSNITRIFICANTES QU$ ATACAN A I.A CEI,UI,OSA. Algunas bacterias reductoras de nitratos pueden usar la celulosa como
fuente de energa, Un medio que contenga o,25 gramos de KNO,,
0,05 gramos de K,HPO, y 2 gramos de celulosa en forma de papel de
filtro, en ioo c. c. de agua corriente, se coloca llenando completamente
un matraz tapado, que se inocula con cieno y se incuba anaerobiamente a 3g^. 1~1 ataque de la celulosa empieza en una semana, y
viene acompaado de la reduccin del nitrato a nitrito, que a su vez
desaparece en quince das. Renovado el medio, el proceso de reduccin
de nitratos se acelera considerablemente. La celulosa toma color anaranjado amarillo y consistencia mucilaginosa, descomponindose en
fibras, que terminan por desaparecer. I,os gases que se desprenden
son una mezcla de nitrgeno con anhdrido carbnico.

Groenewege (45) considera que el proceso de descomposicin de


la celulosa en presencia de nitratos es llevado a cabo por la accin
simbitica de dos grupos de organismos: uno descompone la celulosa,
mientras que el otro reduce los nitratos usando como fuente de energa
los productos formados en la descomposicin de la celulosa. Por la
accin simbitica de los dos organismos desaparece la celulosa ms
rpidamente que por la accin aislada del organismo espec{fico de Ia
celulosa. I,a formacin de gas se inicia al segundo da, acompaada de
la reduccin del nitrato a nitrito y xido de nitrgeno, con una disolucin gradual del papel. El proceso es sumamente activo cuando la solucin de cultivo se renueva por decantacin.
Groenewege aisl las bacterias que intervienen en eI proceso, encontrando varias estirpes de una bacteria aerobia, Bacterium cellaresolvens, que acta sobre la celulosa, y los productos de la descomposicin de sta (cidos actico, butrico y lctico) sirven de alimento
a los organismos desnitrificantes Bacterium o^ialescens y Bacterium
viscosum.