DOCUMENTOBORRADORDEREFERENCIA

PROTOCOLODEMANEJODECOLECCIONESDEHONGOS
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CONTENIDO
MACROHONGOS...........................................................................................................
............4
Recoleccin...................................................................................................................4
Descripcin...................................................................................................................4
Preservacin.................................................................................................................9
Cultivo........................................................................................................................10
Identificacin...............................................................................................................11
BasesdeDatos...........................................................................................................13
Envodeespecmenes.................................................................................................14
MICROHONGOS.............................................................................................................
...........15
Recoleccin.................................................................................................................15
Aislamiento..................................................................................................................16
MediosdeCultivo........................................................................................................17
Identificacin:..............................................................................................................18
Preservacin...............................................................................................................18
EspecmenesdeHerbario.............................................................................................19
Mantenimientodelacoleccin......................................................................................19
Cultivosvivos..............................................................................................................20
BasedeDatos.............................................................................................................21
Envodematerial.........................................................................................................21
LIQUENES........................................................................................................................
.........22
Recoleccin.................................................................................................................22
Preservacin...............................................................................................................24
Revisin......................................................................................................................24
Identificacin...............................................................................................................25
Mantenimientodelacoleccin......................................................................................26
BasesdeDatos...........................................................................................................27
Envodematerial.........................................................................................................27
APENDICE
I...............................................................................................................................28
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PROTOCOLOPARALARECOLECTA,DESCRIPCION,
IDENTIFICACIONY
MANTENIMIENTODEHONGOS
ElaboradoporlaUnidadEstratgicadeHongos,INBio
MilagroMataH.

LoengrinUmaaT.
JoseLuisChavesC.

YlacolaboracindelMuseoNacionaldeCostaRica
ArmandoRuz
Agosto,2006

EnCostaRicaloshongosconstituyenunreinocasidesconocido,apesardelagran
diversidadqueposeeestepasydelaimportanciaquetienenporlasfuncionesque
desempean
tantoenlosbosquescomoenelentornoengeneral.Ennuestropasseconocen
aproximadamente2,000especies,perosecalculaquepodranencontrarsede60a
70,000
especies.
Tomandoencuentalaimportanciaquetienenloshongos,lquenes,microhongos,
macrohongosprincipalmentedentrodelosecosistemas,yalospocosestudiosquese
han
realizadoennuestropasalrespecto,resultamuyimportanteestablecerlaspautasa
seguir,para
darinicioasuestudioyaslograrunaadecuadacalidadcientficaenlasrecolecciones,
descripciones,preservacin,identificacinycultivodelosespecmenes;ascomoun
adecuado
manejodelascoleccionesqueseconservanenlasdiferentesinstitucionesdelpas.
Importanteresaltarqueexistenmuchasformasderecolectar,procesarydescribirlos
especmenes,principalmenteenelcampo,estodependiendodelosgruposdehongos
conlosque
seesttrabajando;acontinuacinsepresentaunametodologageneralpara
macrohongos,
microhongosylquenes.
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MACROHONGOS
Selesllamamacrohongos,algrupoconstituidoporcuerposfructferosquepuedenser
observadosasimplevista,entreelloslasorejasdepalo,sombrillas,estrellasde
tierra,
hongosgelatinosos,tipocoral,lenguasdetierra,costrassobremadera,etc.
Recoleccin
Resultaindispensablellevaracaboelsiguienteprocedimientoparaquelascolecciones
tenganvalorcientfico:
1.Tomarnotadelsustrato,ycuandoseaposibleanotardatossobrelavegetacinque
rodeaelespcimen.
2.Tomarfotografasdelosespecmenes.
3.Utilizarunacuchillaopualpararemoverelhongo.Esnecesariointroducirla
cuchilla
unoscuantoscentmetroshaciaabajodelabasedelhongoparanocortarelestpitey
lavolva,cuandoesteestpresente.
4.Removerelhongoconunaporcinpequeadesustratoensubase.
5.Recolectarespecmenestantojvenescomomaduros,yenlamayorcantidad
posible.
6.Colocarlosespecmenesremovidossobrepapelaluminio(nuncaenbolsas

plsticas),demaneraquesepuedancerrarlosextremossinproducirdaosala
muestras.
7.Colocarlasrecoleccionesdentrodeunacanastaadecuada(nuncadentrode
mochilas,bolsasplsticasodepapel),parasutrasladoallaboratoriooreade
trabajo.
Descripcin
Ladescripcinmacroscpicadeloshongosdeberealizarseenellaboratoriooreade
trabajolomsprontoposible,yaquelamayoradeellospierdenhumedadenmuypoco
tiempoy
porlotantoseproducencambiosdetamaoycolor,aspectosmuyimportantespara
efectos
taxonmicos.Portalmotivo,esrecomendablehacerlasrecolectasporlamaanay
describirlos
especmenesporlatarde,siguiendolossiguientespasos:
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1.Mapaespricooesporada
Laesporadasehacecolocandoelpleoentero(cuandoexistensuficientesespecmenes)
ounaporcindeste(cuandoexisteunoodosespecmenesnicamente)conelhimenio
(lamelas,poros,dientes,venaciones,etc.)haciaabajosobreunpapelblancoodeotro
color
dependiendodelcolordelhimenio.Elpapelblancoconelpleoseprotegeconpapel
ceraocon
unacajadepetriinvertidaysedejareposarporalgunashorashastaquelasesporassean
depositadas.Seanotaelcolordelasesporasenmasacuandoestnfrescasyluego
cuandola
esporadaestseca.Sielcuerpofructferonoespileado,laesporadasellevaacabo
colocando
lasuperficiefrtildelespcimenencontactosobreunpapelblanco,seprotegecon
papelceray
sedejareposarporalgunosminutosuhoras,hastaquelasesporasseandepositadas.
2.Descripcinmacroscpica
Ladescripcindelascaractersticasmacroscpicassellevaacabonicamenteconlos
especmenesfrescosorecinrecolectados,tambinpuedehacerseconlosespecmenes
secos,
e.g.,losporosenlosPolyporales.Enlasdescripcionessemencionaelcolordeestos
cuando
frescosysecos..Esmuyimportantetambintomar2o3fotografasdelosespecmenes
antes
dedescribirlos,estosinosetomaronfotografasdirectamenteenelcampo.
Muchosdeloscuerposfructferosdeloshongosqueserecolectanpuedenserdivididos
entrespartes(pleo,himenioyestpite);sinembargoalgunadeesaspartespodrano
estar
presente,obientratarsedeuncuerpofructferototalmentediferente,estodependiendo
delgrupo
dehongosquesehayarecolectado.Enestecaso,ladescripcinsehaceanotandotodas
las

caractersticasdelaspartespresentes,obiendescribiendocuidadosamentetodaslas
caractersticasobservablesasimplevistayconlupa.
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Generalmente,elordenpararealizarunadescripcinmacroscpicaeslasiguiente:
2.1.Pleo
Eslapartesuperiorosombrerodeunascocarpoobasidiocarpo.
2.1.a.Tamao:
Semideeldimetrocuandoescircular,olalongitudyanchocuandono
loes,conunareglagraduadaenmmocm.Esrecomendablecortarelespcimen
longitudinalmenteparafacilitarlamedicin.Cuandolacoleccinestformadaporms
dedos
especmenes,seestableceunintervalotomandoencuentadelmspequeoalms
grande.
2.1.b.Forma:
Seanotalaformadelpleotantoencuerposfructferosjvenescomo
maduros.Esrecomendabletomarencuentatodaslasformaspresentesyestablecer
mbitos.
Entreestasformaspodemosencontrar:convexos,campanulados,cnicos,planos,
parablicos,
cncavos,elevados,infundibuliformes,depresados,mamilados,umbonados,
umbilicados,etc.
2.1.c.Color:
Elcolordelpleoseanotatomandoencuentaespecmenesjvenesymaduros,
yaquealgunospuedencambiarconlaedad.Esmuyimportanteanotarelcolordeldisco
ozona
centraldelpleo,ocualquierotraobservacindecolorenotrapartedelpleocuando
stasea
diferente,yademsesimportanteanotarelcolordelmargen.Tambinesimportante
describirs
existealgncambiodecolorcuandoelhongoesmanipulado.Todosloscolores
descritosdeben
irrespaldadosporuncdigostandarddecolores.
2.1.d.Margen:
Elmargendelpleodeunhongopuedevariardependiendodelgradode
expansinquestehayaalcanzado.Esrecomendablecortarlongitudinalmenteelcuerpo
fructfero
paradescribireltipodemargen,elcualpuedeser:incurvado,decurvado,enrrollado,
plano,
elevado,etc.
Sielpleoesobservadodesdearriba,esdecirconunavistasuperiorsinhabersido
cortado,estepuedeser:entero,erodado,rimoso,apendiculado,etc.
Latexturadelmargendelpleoesotracaractersticaquesedebeanotar,lacualpodra
ser,entreotras,estriada,tuberculadaestriada,plicadaestriada,traslcidaestriada,
surcada,etc.
2.1.e.Superficie:
Latexturayornamentacindelasuperficieamenudovaranconlaedad,

conlascondicionesambientales,etc.,porelloesmuyimportantedescribirlasuperficie
delpleo
entodoslosespecmenesqueintegrenunacoleccin,lacualpuedeser,fibrilosa,
escamosa,
escuarrosa,pruinosa,tomentosa,velutinosa,glabraolisa,areolada,pubescente,entre
otras.
2.1.f.Contexto:
Elcontextoeseltejidocarnosointernoyestrilqueformapartedelpleoodel
cuerpofructferoengeneral,paralocualsedebeanotarconsistenciaycolor.
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2.2.HimeniooSuperficiefrtil
Eslasuperficieyasealisa,porosa,lamelada,dentada,verrucosa,reticulada,con
venaciones,etc;quegeneralmenteestacubiertaporestructurasreproductivas
microscpicastales
comoesporangios,ascos,basidios,conidios,loscistidiosylasparfisissonestriles
cistidios,
parfisis,esporas,etc.
Cuandoelhimenioestconstituidoporlamelas,sedebeanotarlosiguiente:
2.2.a.Tipodeunin:
Varaconlaedaddelespecmen,puedeser:libre,
decurrente,subdecurrente,adnadas,anexas,sinuadas,emarginadas,etc.
2.2.b.Color:
Anotarelcoloryloscambiosdecolor,sisonobservados,tantoenespecmenes
jvenescomomaduros.
2.2.c.Espaciamiento:
Serefierealespacioentreunalamelaylasiguiente,lascualespueden
ser:distantes,subdistantes,prximas,apiadas,etc.
2.2.c.Grosor:
Anotarslaslamelassonangostas,anchas,moderadamenteangostasoanchas,
etc.Esimportantemedirelanchodelaslamelasencmomm.
2.2.d.Margen:
Observaryanotarsielmargendelalamelaesliso,conranuras,dentado,erodado,
serrado,
serruladoomarginado(elmargentienecolordiferentealrestodelalamela,enestecaso
sedebe
anotarelcolor).
2.2.e.Lamlulas:
Lamelasmuypequeasquenoalcanzanaunirsealestpiteoalpunto
deuninalsustratoenloscasosenquenohayestpite.Enestecasoseanotaelnmero
de
seriesobservadas.
Sielhimenioestaconstituidoporporos,sedebetomarencuentalosiguiente:sies
redondeado
(conporoscirculares),radialmenteelongado(conporosalargados),daedaloide(con
poros

distribuidosenformadelaberinto),irregular(conporosredondos,radialmente
elongadosa
daedaloides),angular(conporoscuyocontornonoesredondeado,sinoenformade
angulo).
Tambinelnmerodeporospormilmetroyelcolor.
2.3.Estpite
Eselpiequesostieneelpleodeunbasidiocarpo,odeunascocarpo,paralocualse
debeanotar:
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2.3.a.Tamao:
a.Longitud(semideenmmocmdelabasealpice).
b.Ancho(generalmentesemidehaciaelpice,esrecomendable
cortarelespcimenlongitudinalmente).
2.3.b.Forma:
Elestpitepuedeser:igualouniforme,bulboso,abruptamente
bulboso,clavado,subclavado,conformadetapn,radiculado,
etc.
2.3.c.Posicin:
Sedebeanotarselestpitees:central,lateraloexcntrico.
2.3.d.Color:
Anotarcolorycambiosdecolortantoenespecmenesjvenes
comomaduros.
2.3.e.Superficie:
Puedeserhmeda,seca,ovscida.Lasmismascaractersticas
anotadasantesparalasuperficiedelpleosepuedenutilizarpara
lasuperficiedelestpite.
2.3.f.Contexto:
Eltejidointernodelestpitepuedeserslido,semirellenovaco
2.3.g.Otrascaractersticas:
a.Micelioenlabasedelestpite(Anotarcoloryabundancia).
b.Prolongacindelestpiteenelsustrato.
c.Presenciaderizomorfos(semejantesapequeasracesque
correnenelsustrato,sedebeanotarelcolorylaabundancia).
2.4.Anillo
Elanillosonremanentesdeunveloparcialquecubreelhongoenestadostempranos
deldesarrollo.Cuandoesteestpresente,sedebedescribirlaposicin,siesmovible
fijoyel
color.
2.5.Volva
Lavolvasonremanentesdelvelouniversalquerecubretodoelhongoenestadosmuy
tempranosdedesarrollo.Cuandoseencuentrepresente,sedebedescribirsitieneforma
desaco,
uotrasformasdescriptibles.Ademssiesmembranosa,frgil,formandocomoparches
o
zonacionesenlabasedelestpite.

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2.6.Hbitodecrecimiento
Eslaaparienciageneralexternaycaracterstica,omaneradecrecerdeunhongo.
Anotar
sicreceenformasolitaria,esparcido,agrupadoformandoracimos.
2.7.Sustrato
2.8.a.Terrestre:sobresuelo.
2.8.b.Coprfilo:sobreestircol.
2.8.c.Ligncola:sobremadera
2.8.d.Fungcola:sobreotroshongos.
Tambinpuedenencontrarsehongoscreciendodeformaparasticasobreotrosseres
vivos.
2.8.PruebasMacroqumicas
Observaryanotardeacuerdoconlosdiferentesgruposdehongos,elcolorocambiosde
coloralagregarreactivosqumicosenlasuperficiedelpleo,contexto,superficiefrtil,
superficiey
contextodelestpite,obienenlasuperficieocontextodehongosconotrasformasde
cuerpo
fructfero.Observarychequearaproximadamenteentre15y20minutos.Losreactivos
autilizar
puedenserunoovariosdelossiguientes:
Sulfatoferrosoacuosoal10%
HidrxidodeSodioacuosoal10%
HidrxidodeAmonioacuosoal10%
Fenolacuosoal2%
Formaldehdoacuosoal40%
Acidosulfrico,hidroclrico,ntrico,etc.
Preservacin
Losespecmenesfrescossecortanlongitudinalmenteysecolocanenunsecador
(deshidratadordealimentos)atemperaturasentre25y50gradoscentgradosporvarias
horas,el
tiempodesecadodependedelgrosoryconsistenciadelhongo.Elmaterial
completamentesecoy
debidamenteetiquetadosecolocaenbolsasplsticasconunpocodeaire,parasu
posterior
transportealainstitucincorrespondiente.Laetiquetadebeincluiralmenoslasiguiente
informacin:
Fecha:
Sitioderecolecta:
Nmeroderecolector:
Identificacinprovisional(cuandosetiene)
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Cultivo
Enelcasoparticulardelosmacrohongos,serealizandeformaespordicaalgunos

cultivosyaislamientos,especficamentesobreExtractodeMaltayAgar,yalgunas
veces
utilizandoBenomylparaevitarelcrecimientodehongosdiferentesalosmacrohongos.
Elmedio
decultivosepreparacon100mldeaguadestilada,20gdeExtractodeMalta,15gde
Agar,y0.1
gdeBenomylsuspendidosen100mldeaguadestiladayagregadoal0.5%alagarpara
obtener
unaconcentracinfinalde5ppm.
Lostamaosdelascajasdepetriutilizadassonde100x15y60x15mm,en
condicionestotalmenteestriles.
Loscultivospracticadossellevanacaboenelcampooenellaboratorio,utilizando
tejido
delosespecmenes,obienesporadasdirectassobreelmediodecultivo.Tambinse
utilizanlas
esporadasencajasdepetriestriles,delascualessepracticandilucionesyseaplicanal
medio
decultivo,estodirectamenteenelLaboratorio.
Loscultivosserevisanperidicamente,ycuandopresentancontaminacinenalto
grado,
sondescartados.Losqueresultansincontaminacinsemantienenenvialesconmedio
decultivo
atemperaturasde14o16gradoscentgrados,obienenvialesconaguaestrildentrode
un
refrigeradora74gradoscentgrados.
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Identificacin
Laidentificacindelosespecmenesgeneralmentesellevaacaboendospasos;unoes
laidentificacinprovisionalqueseledaalosespecmenesenelcampo,obienenel
laboratorioy
esrevisadamacroscpicamenteporloscuradores.Otraeslaidentificacinqueselleva
acabo
conelestudiodelasestructurasmicroscpicasyelusodeclavestaxonmicas,locual
puede
llevardesdehorashastadas;dependiendodeladisponibilidaddeliteraturayotras
colecciones
disponibles,ademsdelestudiodelmaterialquehacennuestrosexpertostanto
nacionalescomo
internacionales.Tambinporcomparacinconmuestrasdeherbariocuandoelmaterial
esestril.
Elestudiomicroscpicoincluyecorteslongitudinales,radialesytangencialesdelas
diferentespartesdelhongo,ascomolapruebacondiferentesreactivosqumicoscomo
KOHal
3%,Amonio,reactivodeMelzer,entreotros;ydetincionescomoRojoCongo,Azulde
Algodn,

AzuldeCrezil,Floxina,etc.Sedebeestudiarentreotrascosaslashifas(tipo,grosor
color),forma
ytamaodelasesporas.
Mantenimientodelacoleccin
Todoslosespecmenesdemacrohongosqueingresanalascoleccionesdebenestar
debidamentepreservadosyconunaidentificacin,almenosprovisional.Esimportante
aclarar,
queparamacrohongos,unarecoleccinsignifica,unabolsa(cuandovienedelcampo)o
unacaja
(cuandoyaestenelHerbario)quecontienedeunoavariosindividuospertenecientesa
una
mismaespecie,recolectadosenunadeterminadafechaylugar,yconsusrespectivas
notas
descriptivas.Ademsparamacrohongos,cadarecoleccinesuntestigo,condatosde
lugary
descripcintotalmenteaparte.
Cadarecoleccin,dependiendodeltamao,secolocaencajasdecartncontapa,cuyos
tamaossonprincipalmente(largoxaltoxanchoencm)de9x5.5x3;12x9.5x4;15
x9.5x5;
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17.5x11x5;19x14x5;20x15x6.5;23x16.5x5.5;aunqueencasosespeciales,
puede
necesitarseuntamaoadicionalmsgrande.
Lasrecoleccionessepuedencolocardirectamentesobrelacaja,envueltasenpapellibre
decido(AFTISSUEPAPERUNBUFF),obienpasarlasabolsasconcierrey
colocarlosdentro
delascajas.Lostamaosdelasbolsasconcierre(largoxanchoencm)son3x4;3x5;
4x6;5
x8;yde(largoxanchoenmm)165x155;170x200;y270x285.
Cuandolosdatosdelosespecmenesseencuentrenenlabasededatos,seobtienenlas
etiquetastantopequeas(quesecolocandentrodelacaja)comolasgrandes(quese
pegan
sobrelatapadelacaja).LasetiquetasgrandesdebenserhechassobrepapelPERMA
DUR
FOLDERSTOCK.007ycon56cmdealtoy910cmdeancho;coninformacinde
fecha,sitio
derecolecta,recolector,nmerodecolector,personaqueidentifica,especie,
identificacin
(preferiblementequeincluyahastaelniveldeorden),coordenadas,altitud,ycdigode
barras
nmeroconsecutivodeherbario.Sedebeutilizartintaindeleble.
Lasetiquetaspequeassernhechassobreelmismomaterialytintaquelasetiquetas
grandes,yconuntamaoaproximadode1.52cmdealtox2.53cmdeancho;
dondese
incluyeelniveltaxonmico,fechaysitioderecolectaynmeroderecolector.

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Losespecmenes,porelmomento,secolocanclasificadosporrdenesyrotuladosenla
parteexternadelosanaqueles,lasfamiliasestnanotadasenlaparteinternadelas
puertas,yen
cadaespaciointernoestnlosgnerosylasrespectivasespecies(cuandolashay).Los
gabinetes
sondemetal,de253cmdealto,54.5cmdeanchoy110cmdefondo.
Losespecmenessonrevisadosperidicamente,paraevitarproblemasdeabsorcinde
humedad,ascomoproblemasdecontaminacinporotroshongos,porcaros,etc.
Ademsse
realizanalmenos4procesosdefumigacinporao,dependiendodeltipodesustancia
utilizada,
puedensermenosalao.
BasesdeDatos
Lasdescripcionesmorfolgicasdelosespecmenesrealizadasenelcampo,son
ingresadasenuncapturadordedatosEstosdatosingresadosalcapturador,sernms
adelante
accesadospormediodelabasededatosinstitucional,lacualbrindainformacinsobre
las
identificacionesydatosdesitios.Lasidentificacionesydatosdesitiosyfechasde
recolectason
ingresadasporeltcnicoalabasededatosinstitucional,lacualgeneraetiquetas,que
luegoson
colocadassobrelascajasdecartnquecontienenlosespecmenes.
Lasimgenestomadasenelcampoenellaboratorio,sonseleccionadassegn
enfoque,nitidezyrepresentatividad,paraingresarlasalaBasedeDatosdeImgenes
institucional.
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Envodeespecmenes
Lasalidadelmaterial,dependedelaaprobacindelospermisosdeexportacinde
exportacin,segnlasnecesidadesyposibleusodelascolecciones.
a.Prstamodeespecmenes
Losespecmenespodrnserenviadosencalidaddeprstamodonacinparafinesde
identificacinualgnotrotipodeestudiotaxonmico.Elnmerodecoleccionesque
salgandela
institucintendrqueseraprobadaporelencargado,demaneraquenosedaela
coleccin,
peroquetampocolimiteeltrabajodelespecialista.
Elperododetiempoqueelespecialistaretendrlosespecmenes,esdeseismeseso
resultardeunacuerdoentreelencargadoyelespecialista,sinembargoencasode
vencimiento
delprstamo,elespecialistapodrsolicitarunaextensindelmismo,medianteunanota
escritao
comunicacindirectaconelencargado.
b.Donacindeespecmenes

Estradicionalentrealgunostaxnomos,quesutrabajodeidentificacinsea
recompensadoconladonacindealgunosespecmenesdeintersparaellos.Ennuestro
caso,
esposible,queaunqueeltaxnomonoloindique,podamosdonarlealgunos
especmenes,
retribuyendoyreconociendodealgunamaneralaayudabrindada.Porlotanto,ser
criteriodel
encargado,lacantidadycalidaddeespecmenesqueserndonados,demaneraqueno
sedaen
lascoleccionesdelainstitucin.
Elespecialistaoinstitucinquerecibeladonacin,deberdevolverlafrmulade
donacindeespecmenesalainstitucin,directamentealaCuradora,especificandoel
estado
generaldedichosespecmenesyconlafirmadelapersonaquerecibeladonacin.
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MICROHONGOS
Losmicrohongosformanpartedelgrupodehongosquegeneralmentenoson
observablesasimplevista,sinoquedebenusarselentesdeaumentopararecolectarlose
identificarlos.DentrodeestegruposeencuentranlosOomycetesquesonhongos
acuticos,
terrestresyparsitosdeplantas;lasRoyas,llamadasasdebidoalcolorrojizodesus
esporas,los
Carbones,queformanmasaspulverulentasdeesporasnegras,estosdosestosdos
ltimos
pertenecenalosBasidiomycetes,otroslosencontramosenlosAscomycetes(la
mayora)yenlos
hongosimperfectos.
Recoleccin
Debidoaqueexisteunagrandiversidaddemicrohongos,estoslospodemosencontrar
en
muchoshbitats,porloquenohayunmtodonicoderecolecta.
Unfactorimportanteenlarecolectademicrohongosesdndebuscarlos.Debe
tomarse
encuentaque,lamayoravivenenhbitatshmedos.
Ensumayoraloscuerposfructferosdelosmicrohongossondevidacorta,obien
crecen
enpocasdefinidas.Debidoaestascaractersticas,unamayorfrecuenciadelosviajes
derecolecta,enlamismarea,podranproveerlasmejoresoportunidadespara
encontrarlos.
Algunosmicrohongosvivenenhbitatsespecficos:folcolas(sobrehojas),otrosse
encuetransobreinsectos,hipgeos(bajosuelo),yotrosconhuspedesespecficos.
Cuandoserecolectamicrohongos,esindispensableunalupa10X,tantopara
encontrarlos,comoparaobservardetallesdeloscuerposfructferos.Ademssedebede
disponerderecipientesadecuadosparatransportarlascoleccionesallaboratoriocomo:
bolsasdepapeldevariostamaos,algunosrecipientescontapaquepodrantambinser

tilesparaespecmenesdelicados,lalupa,unacortadora,unformn,mazopequeo,
una
cuchillayunserruchorabozorro,sernsuficientes.
Registrarlosdatosderecolectaesunaspectomuyimportante:localizacin
geogrfica,
nombredelrecolector,sustrato(identificarcuandoesposible),yfecha.
Losespecmenesdebenserexaminadoslomsprontoposible.Apuntessobrela
forma,
colorytexturapuedencambiarcuandoelespcimenseseca.Enalgunosgruposde
microhongossilarevisindebeserpostergada,losespecmenesdebernmantenerse
frescosenunacmarahmeda,queconsisteenunrecipientelimpioquepuedesercajas
depetriocajasplsticascontapa,conpapeltoallahmedaenelfondodelmismo,al
menospormenosde24horas,yaquelosespecmenespuedendescomponerse.
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Aislamiento
Existeunaampliavariedaddetcnicasquepuedenserutilizadasparaaislarlos
diferentes
gruposdemicrohongos.Algunosgrupos,talescomolosparsitos,nopuedencreceren
medio
artificial.Muchasespeciesdemicrohongosnuncacrecenencultivos,ysilohacenno
forman
cuerposfructferos.
Antesdecomenzaraaislarloshongos,sedebeesterilizartodoelmaterialquevaa
utilizarse;cajasdepetri,tubosdeensayo,etc,medianteautoclaveeinstrumentoscomo
escarpelos,pinzasyagujasdebensumergirseenalcoholde95%yflamearse,sin
olvidarsede
limpiarelreadetrabajoconcloro(hipocloritodesodioal5%oalcohol).
Algunasdelastcnicasmscomunesparaaislarmicrohongosson:
+Aislamientodirecto:Algunasespeciesconcuerposfructferosuperficiales,comolos
peritecios,
puedensertransferidosdirectamenteaunmedioconagar.
+Cultivodetejido:Algunospuedenseraislados,colocandounaporcindelcuerpo
fructferoen
unmediodecultivo.Eltejidopuedeserdesinfectadoyremovrseleunacapaexterna
conuna
cuchillaestril.
+Descargadeesporas:Enestecasoelcuerpofructferoounaseccin,seadhierecon
vaselina
alatapadelacajadepetri,demaneraquelasesporasseandepositadassobrelaotra
tapa
(queposeeelmedioconagar)delacajadepetri,sesellatotalmentedichacajacon
Parafilm.
Cuandolasesporassondepositadas,latapaquetienelaseccindelhongoadheridaes
reemplazadaporotratapatotalmenteestril,ylacajajuntoconeldepsitodeesporas
se
sellaconParafilm.

+Transferenciadeesporas:staspuedenrecogerseconunaagujaestril,(previamente
introducidaenagarparaunamejoradhesin)ytransferirlasdirectamentealagar.
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+Hongosinternos(endfitos):Semillas,hojasytallossonbuenasfuentesparatales
hongos,
dondesetomapartedelsustratocomodelhongoysontransferidosalmediodecultivo.
MediosdeCultivo
Losmediosdecultivocaendentrodedoscategoras:naturalysintticos.
1.Losmediosdecultivonaturalesincluyensustratoscomotrozosdemadera,hierba,
semillas,
hojas,harinademaz,harinadeavena,ygermendetrigo.
2.Losmediossintticossondeseablesdondelacomposicindelmediopuedeser
conocida,
stossonimportantesenestudiosfisiolgicos
Paralapreparacindelosmediosdecultivosedebenllevaracabovarios
requerimientos:
Esterilizacindematerialdecristalera,queincluyecajasdepetri,tubosdeensayo,
pipetas,etc.,mediantecalorseco(de150a160Cduranteunahora)oautoclave.
Esnecesarioqueelvaciadodelmediodecultivoencajasdepetri,tubosdeensayo,etc.,
selleveacabolomsaspticamenteposible,yaseaenunasaladecultivoapartadaoen
unlugar
limpioylibredecorrientesdeaireypolvo.Lamesadetrabajodebelimpiarseconuna
solucinde
cloro,lasmanosdelapersonadebenestarlimpiasyelmaterialdelaboratorio,para
impedirla
introduccindemicroorganismoscontaminantes.
Losdiferentesmediosdecultivo(verapndiceI),previamenteyapesadosymezclados
en
aguaestril,sepreparanenerlenmeyersqueposteriormentesetapanconalgodny
papelde
aluminio,secolocanenunaautoclavea120Cya15librasdepresindurante25
minutos.Los
mediosdecultivoesterilizadossedejanenfriarduranteciertotiempoyposteriormente
sevierten
enlascajasdepetri.Encasodequealmedioseleaadaagar,sedeberdejarqueeste
ltimo
sesolidifiqueparaqueelmediodecultivopuedaentoncesserutilizadoparacultivar.
Paraqueno
secontamineconbacteriasseleagregaalmediodecultivounasolucinantibitica,
(verapndice
I).
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Paraprepararlosviales,elmediodecultivoesagregadoaltubodeensayoenuna

cantidadapropiadaysoncerradoscontapndealgodnounatapa.Lostubosnodeben
deestar
msdelamitadllenos.Siseusantapasconroscaestasdebenestarflojasparapermitir
el
intercambiodegasesduranteelautoclavado.Unavezsacadosdelaautoclavelostubos
son
colocadossobreunatablaconlapartesuperiorligeramenteelevada.Estodacomo
resultadoun
agarextendidoqueproveeunamayorsuperficiedecrecimientoparaelhongo.Cuando
estafro,
lostubospuedenestarenformavertical.
Identificacin:
Seharunaidentificacinprovisionaldelosespecmenes,basndoseenladescripcin
realizadaporelrecolector.Posteriormenteparadarcertezadequelaidentificacines
llevadaa
caboenformacorrectaydetalladadelosespecmenes,stossernobservadosal
microscopioy
seutilizarnclavestaxonmicasparasuidentificacin.Elestudiodeestructuras
microscpicas
incluyeelusodereactivosqumicoscomoelHidrxidodePotasioal3%,Reactivode
Melzery
tincionescomoelCottonBlue(VerApndiceI).Setomarnimgenesdeloscuerpos
fructferos
ascomodeloscaracteresmicroscpicos(ascas,esporas,parfisis,etc),para
documentarla
recolecta.
LaidentificacinpuedeserllevadaacaboporelCurador,obienporlosexpertos
internacionalesquevisitanlainstitucin,omedianteelenvodeespecmenesasus
respectivos
museos,universidades,jardinesbotnicos,etc.
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Preservacin
Variosmtodoshansidoutilizadosparapreservarloshongos,peronoexisteunnico
procedimiento.Elfactorprincipalenlaseleccindeunmtododepreservacinessilos
especmenessonmantenidoscomomaterialsecoenunherbarioocomocultivosvivos.
EspecmenesdeHerbario
Elmtodomscomnparapreservarhongosessecadoalaire.
Losespecmenesdebenestarcompletamentesecos,yaquesipermanecenhmedos
permitiranelcrecimientodeotroshongosybacterias,ademsdecarosquepodran
destruirel
espcimen.
Lospatgenosdeplantasyotroshongosqueseencuentransobrehospederosvivosson
preservadosdeigualmaneradecomosepreservansushospederos.Porejemplolas
especies
folcolas,sonpreservadas,prensandoysecandolashojasenelsecadordeplantas,
mientrasque

loshongossobreinsectossonpreservados,montandolosinsectos.
Mantenimientodelacoleccin
ElalmacenajedeloshongosesusualmentehechoensobresGlassine,stasalavezse
colocarnensobresdepapelbondycolocadasencajasdemaderaqueasuvezse
colocanen
gabinetesbiencerrados,ordenadosgeneralmenteporClase,Orden,Familia,Gneroy
Especie.
Cuandolainformacindelosespecmenesseencuentreenlabasededatos,seobtienen
lasetiquetastantopequeas(quesecolocandentrodelossobresGlassine)ylasgrandes
(quese
peganalsobredepapel).stascontienenlasiguienteinformacin:defecha,sitiode
recolecta,,
nmeroderecolector,personaqueidentifica,identificacin,coordenadas,altitud,
sustratoycdigo
debarrasnmerodeherbario.
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LossobresGlassinetienenlossiguientestamaos:(altoxanchoencentmetros)4.4x
4.3,5.9x9.2,8.9x8.9,7.9x12.9.Lascajastienenlasiguientedimensin(altoxancho
xlargo
encentmetros)10x33.5x47.5.
Lasetiquetasgrandestendrnunadimensinde8.0x4.5cmylaspequeasde5.0x3.0
cm.AmbostamaosdeetiquetasdebenserhechasenpapelPERMADURFOLDER
STOCK.007,
yeltipodecintaesribbon.nonbleedalcoholresistant.
Losgabinetes,tinta,etiquetasytamaosdeestas,sondelmismotipoutilizadoen
macrohongos.
Sinimportarelmtodoutilizado,losespecmenesdebenseralmacenadosengabinetes
biencerradosyquepuedanserfumigados.Unaamenazaparalosespecmenesde
herbarioesla
humedad.Amenosqueseanmantenidossecos,ellosseencuentransusceptiblesal
ataquede
otroshongos,ycarosloscualespuedendestruirlos.
Cultivosvivos
Loscultivosdemicrohongosquesehayanpodidoobtener,soncolocadosprimero
sobrecajas
depetri(100x15mm.)conteniendoelmedioapropiado(verApndiceI).
Decadacajaseobtienenrplicas,oseasepasauntrocitodecultivodelhongoaotra
caja,y
assucesivamenteparairobteniendovariasrplicas(unas5)delmismohongo.
Lasrplicassemantienenencajasdepetriporunperododetiempo(1a2meses),
luegose
transfierenaviales(9ml.)conmediodecultivo.
Lostubosunavezinoculadosconloshongos,puedenseralmacenadosenuna
incubadoraa
unatemperaturade+25C.
Unavezquehayancrecidoloshongos,estospuedensermantenidosa15C

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Tambinsepuedehacertransferenciaderplicasatubosconteniendoaguadestilada.
Los
cambiosdecultivo,sepuedenrealizarcada6a8meses.
Otromtodoutilizadoesmantenerloscultivosenuncongeladora70C
ParaladeterminacindecontaminantesseutilizarTripticasadesoya(verApndice
I)
Tantolascajasdepetricomolostubosdebenestarbienidentificadosparaevitar
confusin.
Indicandodedondefuetomadalamuestra,ascomomediodecultivoutilizado,fecha
de
inoculacin,usandoetiquetasomarcadoscontintaindeleble.
BasedeDatos
Losdatosdelasrecolectasserningresadosalabasededatosinstitucional.Las
identificacionesydatosdesitiosyfechasdecolectasoningresadasporeltcnicoala
basede
datosinstitucional,lacualgeneraetiquetas(delmismotamaoyformaquelasusadas
para
macrohongosylquenes),queluegosoncolocadassobrelossobresdepapelque
contienenlos
especmenes.
Lasimgenestomadasenellaboratorio,medianteelusodelSistemaDigitaldeCaptura
deImgenes,sonseleccionadassegnenfoque,nitidezyrepresentatividad,para
ingresarlasala
BasedeDatosdeImgenesinstitucional.
Envodematerial
Elsistemadeenvodematerial,comodonacinprstamo,rigedelamismamanera
que
laespecificadaparaelgrupodemacrohongos.
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LIQUENES
Loslquenessonunaasociacinsimbiticaentreunhongo(micobionte)yunooms
organismosauttrofosfotosintticos(fotobionte)quepuedeserunalgaverdeouna
cianobacteria;
deestauninresultauntalomorfolgicamentediferenteacadaunodesuscomponentes
osea
unaentidadtotalmentenueva.Elhongodeterminalanaturalezayformadelamayora
delos
lquenesyproducelasestructurasreproductivas.
Recoleccin
Resultaindispensablellevaracaboelsiguienteprocedimientoparaquelascolecciones
tenganvalorcientfico:
1.Recolectadeespecmenessobreunaampliavariedaddesustratos(rboles,troncos

cados,rocas,musgo,suelo,hojas,etc.);staactividadsellevaacaboconunacuchilla
opual,
loscualesayudanaretirarunfragmentodelsustratojuntoconelespecmen,
especialmentelos
quevivensobrecortezaosuelo(crustceos).
2.Pararecolectarlosquevivensobrerocassenecesitauncincelyunmazo,mientras
que
unapodadoraestilparacortarramaspequeas.Unalupa10xesesencialparaobservar
algunas
delascaractersticasmorfolgicasmsimportantes.
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3.Cuandosetratadelquenesfolcolas(sobrehojas),sedebentomarlashojasenterasy
someterlasalprocesamientohabitualquesesigueparaestosrganosvegetales
4.Registramoslosdatosecolgicosbsicosparacadaespcimen,talcomotipodel
sustrato,especiedelhospedero(sisabemoselnombrecientficoovulgardelaplanta
donde
recolectamoselliquen),yexposicinondicedeluz(encincocategoras:siel
especmenes
recolectadoenunlugartotalmentesombreadoleasignamos1;siestsemiexpuestole
asignamos3ysiloencontramosenunsitiocompletamenteexpuestoalaluzle
asignamos5).
5.Tomarfotografasdelosespecmenes.
6.Lasmuestrasrecolectadassealmacenanenbolsasdepapel(nuncadeplstico!).
7.Durantelarecolectasedebentomarademslossiguientesdatos:
Localidad:pas,provincia,cantn,readeconservacin,reaprotegida,reaprivada
sendero,
coordenadasgeogrficas.
Hbitat:Descripcinbrevedeltipodebosque,orillasdecamino,reasdepastoreo,
iluminacin.
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Sustrato:suelo,roca,corteza(enloposibleelnombrecientficoy/ovulgardelrbol),
hojas(enlo
posibleelnombrecientficoy/ovulgardelrbol,arbusto,hierba,liana,etc.).
Altitud:Sobreelniveldelmar.
Fecha:Cuandoserealizlacoleccin;especificarda,mesyao.
Recolectorynmerodecoleccin:Nombreyapellidodelrecolectororecolectores,yel
nmerode
coleccin.
Preservacin
Losespecmenesrecolectadossedebensecaralairelibreoconundeshidratadorde
alimentosatemperaturasnomayoresde40gradoscentgrados.
Loslquenescrustceosdebenserprensadosenunaprensadelasmismasquese
utilizanparaplantasvasculares
Acadaespecmenesrecomendablehacerleunadescripcinbreve(color,tamao,

presenciadeestructurasmorfolgicas,forma,etc.)juntoconlosdatosdecampo.
Seguardacadaespecmenenunsobredeperidicoysemarcaconelnmerode
coleccincorrespondientealrecolector
Revisin
Losespecmenestradosdelcamposerevisanparaversiestnbiensecosysino
tienen
ningnniveldecontaminacin
Cadaespecmenesguardadoenunsobredepapelbonddeaproximadamente16cm
de
largox11cmdeanchoyestossobresllevandentrounacartulinabarnizablenmero16
de14.3cmdelargox9.5cmdeancho
Loslquenescrustceossonpegadosconcolablancasobreestacartulinayse
mantienenfuerahastaqueelespecmenpeguebienyluegosonguardadosnuevamente
dentrodelsobre.
Todoslossobresdebentenerporfueralainformacincorrespondientealrecolector,
nmerodecolecta,sustratoendicedeluz,asignadoacadaespecmen.
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Identificacin
Aligualqueenelgrupodelosmacrohongos,laidentificacindelosespecmenes
generalmentesellevaacaboendospasos;unoeslaidentificacinprovisionalquesele
daalos
especmenesenelcampo,obiencuandollegaalainstitucinrespectivayesrevisada
porel
Curadorenelestereoscopio,observandolasestructurasmacroscpicas(colordeltalo,
tamao,
forma,cuerposfructferos,presenciaoausenciadesoredioseisidios,colordela
superficieinferior
ysuperior,presenciaoausenciadecilios,rizinas,cifelas,seudocifelas,mculas,etc.).
Otraesla
identificacinfinalquesellevaacaboconelestudiodelasestructurasmicroscpicasy
elusode
clavestaxonmicas.Elestudiomicroscpicoincluyecortesverticalesdeltaloydelos
cuerpos
fructferos,loscualespuedenserteidosconLactofenolAzuloAzuldeAlgodnpara
observar
mejorsuscomponentes.Elestudiomicroscpicotambinesllevadoacaboporlos
expertos
internacionalesquevisitanlainstitucin.
Loslquenesposeenunaseriedecomponentesqumicosquenosayudanadeterminar
gruposcomplejosdeespecies.Estasseestudiansistemticamenteutilizandomtodos
sencilloso
complejosquepermitendetectarlaseneltejidocorticaldeltalooenlasparedes
celulares.
Laquimiotaxonomaenlquenessehaenfocadoenelusotaxonmicodelosdatosde
metabolitosaniveldeespecie.Dentrodeloscompuestosseencuentranlosllamados
cidos

liqunicosyotrostiposdesustancias.Lassustanciasliqunicasnuncaocurrenen
grandes
cantidades,porlocualsudeteccineidentificacininvolucrantcnicasespeciales,
comoloson:
Testsdecoloracin:orientadoexclusivamenteadetectarmacroscpicamentela
presenciadegruposdecompuestosqumicos,evidenciandocambiosdecolor(eneltalo,
corteza
ymdula).Loscambiosdecoloracinseconsideranpositivoseindicanlapresenciade
ungrupo
decompuestosdeterminados;seconsideranegativosinohaycambiodecolor.
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TestC:seempleacomoreactivounasolucinacuosasaturadadehipocloritodecalcio.
Comosustitutoseusaunblanqueadorlquidocomercialconcloroactivo.
TestK:seusacomoreactivounasolucinacuosadehidrxidodepotasio.Esta
solucin
sepreparaal1025%yesmsestablequeeltestC
TestKC:esunamezcladehipocloritodecalcioconhidrxidodepotasio.Primerose
aplicaKeinmediatamenteC.
Mantenimientodelacoleccin
Todoslosespecmenesqueingresanalacoleccindebenestardebidamente
preservados,montadosenlossobresdepapelbondyconunaidentificacin,almenos
provisional,secolocanenuncongeladora4gradoscentgradosporunasemana,como
partede
lacuarentena.Luegodeestopasanaformarpartedelacoleccingeneral.Aqusern
guardados
enanaquelesde1mcon58.5cmdelargox69cmdeancho.
Losespecmenesenlacoleccinestnordenadosporordenalfabtico.
Cuandolosdatosdelosespecmenesseencuentrenenlabasededatos,seobtienenlas
etiquetasgrandes(VerMantenimientodelaColeccin.Macrohongos).
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BasesdeDatos
Elingresodelosdatosdelasrecolectaseimgenesdelquenessiguelosmismos
parmetrosqueloanotadoparaMacrohongos(VerBasededatosdeMacrohongos.)
Envodematerial
Elsistemadeenvodematerial,comodonacinprstamo,rigedelamismamanera
que
laespecificadaparaelgrupodemacrohongos.
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APENDICEI
MediosdeCultivo
HarinadeMazAgar(CMA)
HarinadeMaz

20gr.
Peptona
20gr.
Dextrosa
20gr.
Agar
15gr.
AguaDestilada
1l
ExtractodeMaltaAgar(MEA)
ExtractodeMalta
20gr.
Peptona
1gr.
Dextrosa
20gr.
Agar
20gr.
AguaDestilada
1.l
Lapeptonayladextrosapuedenvariarsuproporcinoseromitidasenteramente.
PapaDextrosaAgar(PDA)
Papaspeladasytroceadas
200gr.
Dextrosa
20gr.
Agar
15gr.
AguaDestilada
1.l
JuegodeVegetalesconAgar(V8)
JugoV8
180ml.
CarbonatodeCalcio
2gr.
Agar
20gr.
AguaDestilada
1l
Determinacindecontaminantes
Tripticasadesoya(TSA)
TSA
40gr.
Aguadestiliada
1l.
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Solucinantibitica
Streptomicina
0.51.0gr
Chlorotetraciclina
0.51.0gr
Aguaesteril
50ml
Soluciones
Lactofenol:
Fenol
20ml.
Acidolctico
20ml
Glicerina
40ml
AguaDestilada20ml
ReactivodeMelzer
Cristalesdeiodo
0.5gm.
IodurodePotasio
1.5gm.
Chloralhydrate
20gm.
AguaDestilada
20ml.
HidroxidodePotasioal23%
Tinciones
Cottonblue(azuldealgodn)yFloxina,ambasal0.5%ensolucinacuosa
Otrosmtodosdepreservacin:
Refrigeracin
AlmacenajeenNitrgenolquido
Liofilizacin