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Determinacin de Bilirrubina Directa e Indirecta en Sangre

I.

Introduccin
La hemoglobina de eritrocitos envejecidos o daados se convierte,
por una serie de reacciones en el pigmento biliar bilirrubina. La vida
del eritrocito es de 100 das y diariamente se libera un total de 6gr
aproximadamente.
La hemoglobina procedente de la desintegracin de clulas
envejecidas, las clulas del sistema retculo endotelial, en especial el
bazo, hgado y mdula sea, primero fagocitan a los eritrocitos y
luego se convierten en bilirrubina la hemoglobina liberada. La
bilirrubina atraviesa los micros vellosidades sinusoides y pasa a la
clula heptica. La protena se separa del complejo y la bilirrubina se
convierte a una forma ms soluble mediante reacciones de
conjugacin, proceso que tiene lugar en el retculo endoplasmtico
liso, catalizado por la UDP-glucuroniltransferasa.
Normalmente en la bilis de mamferos se encuentra como
diglucoronido y monoglucoronida de bilirrubina, predominando el
primero.
La conjugacin con el cido glucornido es un pre-requisito para la
eliminacin de bilirrubina en la bilis, en el intestino sufre la accin
reductora de enzimas bacterianas, los productos de reduccin,
colectivamente se designan como urobilingenos, en el ileon
terminal y en el colon una parte de urobilingeno, es reabsorbida y
excretada por el hgado constituyendo un ciclo entero heptico.
Normalmente la mayor parte de este pigmento formado es oxidado a
urobilina, compuesto de color pardo anaranjado, las urobilinas son
excretadas por las heces.
Normalmente no se excreta bilirrubina por la orina y las cantidades
de urobilingeno que se elimina por orina es de alrededor de 0.4 mg
por 24 horas.

Bilirrubina

Es un producto de la descomposicin o de desecho de la


hemoglobina. Por lo general, se mide la bilirrubina total y la directa
para explorar o monitorear una disfuncin del hgado o la vescula
biliar.
El metabolismo de la bilirrubina comienza con la descomposicin de
los glbulos rojos por los fagocitos. Los glbulos rojos contienen
hemoglobina, la cual se descompone en Hem y globina; el Hem se

convertido en bilirrubina y es transportado por la albmina en la


sangre hasta el hgado, donde la mayor parte de la bilirrubina se
conjuga (liga qumicamente) con un glucurnido antes de excretarse
en la bilis. La bilirrubina conjugada se denomina bilirrubina
directa, mientras que la no conjugada se llama bilirrubina
indirecta, y la suma de las dos conforma la bilirrubina srica total.
La bilirrubina conjugada es excretada en la bilis por el hgado y
almacenada en la vescula biliar o transferida directamente al
intestino delgado. La bilirrubina sigue su proceso de metabolizacin
por bacterias en los intestinos y se convierte en urobilinas, las cuales
contribuyen al color de las heces. Un pequeo porcentaje de estos
compuestos se reabsorbe y aparece finalmente en la orina, donde se
conoce como urobilingeno.
VALORES NORMALES
Bilirrubina total es de 0,25 a 1 mg /dl %
Bilirrubina directa es de 0,1 a 0,4 mg /dl %.
Bilirrubina indirecta: 0,3 a 1,9 mg/dl
Los valores normales pueden variar levemente entre laboratorios.
La bilirrubina se secreta en la Bilis. La secrecin en la bilis de la
bilirrubina conjugada tiene lugar mediante un mecanismo de
transporte activo, que puede ser el limitante de la velocidad de todo
el proceso del metabolismo heptico de la bilirrubina. El transporte
heptico de la bilirrubina conjugada hacia la bilis es inducible por los
mismos frmacos capaces de inducir la conjugacin de la bilirrubina.
Por tanto, los sistemas de conjugacin y de excrecin se comportan
como una unidad funcional coordinada.
En condiciones fisiolgicas, bsicamente la totalidad de la bilirrubina
secretada a la bilis se encuentra conjugada. Slo despus de la
fototeraputica es posible encontrar en la bilis cantidades
importantes de bilirrubina no conjugada.
En el hgado existen sistemas para la secrecin a la bilis de
compuestos naturales y farmacuticos, una vez que stos se
metabolizan. Algunos de estos sistemas secretores son compartidos
con el
diglucurnido
de bilirrubina,
pero
otros
operan
independientemente.

Estructura de la bilirrubina
1. Objetivos
La presente prctica tiene como finalidad:

Determinar la bilirrubina total, directa e indirecta de la


suero sanguneo.

II. Materiales y Reactivos


A. Materiales
Materiales:

Reactivos:

Pipetas Graduadas - Alcohol metlico

Gradilla

- Bilirrubina total

Tubos de Ensayo
Micropipetas

- Bilirrubina indirecta
Suero sanguneo

Equipos:
Centrfuga
Bao Mara
Espectrofotmetro

Otros:
Alcohol
Algodn
_
agujas N21

III. Mtodo-procedimiento
1. BILIRRUBINA TOTAL
MTODO DE AUDIT DIAGNOSTIC
Preparar el siguiente sistema de tubos de ensayo:

Reactivo 1
Reactivo 2
Muestra

I
(Blanco)
1.5ml
100ul

II
(Muestra)
1.5ml
50ul
100ul
3

Mezclar, leer la densidad ptica despus de 5 minutos de


incubacin.
Leer la absorbancia de los Blancos de Muestra a 555 nm frente a
agua destilada.

NOTA: La estndar es de 0.014


2. BILIRRUBINA DIRECTA
MTODO DE AUDIT DIAGNOSTIC
Preparar el siguiente sistema de tubos de ensayo:
Reactivo 1
Reactivo 2
Muestra

Blanco Muestra
1.5ml
100 ul

Muestra
1.5ml
50ul
100ul

Mezclar, leer la densidad ptica despus de 5 minutos de


incubacin.
Leer la absorbancia contra el blanco de la muestra a 555 nm.

NOTA: La estndar es de 0.014

VII. Clculos y Resultados


Para poder analizar cuanto de Bilirrubina hay en la sangre se debe
realizar la siguiente frmula:

Bilirrubina

mg

dl

DODes

x factor
DOSt

DETERMINAMOS LA BILIRRUBINA TOTAL

Absorbancia = 0.006
Absorbancia estndar = 0.014

BILIRRUBINA TOTAL mg/dl = (D.O. muestra / D.O. estndar) x 2


mg/dl
BILIRRUBINA TOTAL mg/dl = (0.006 / 0.014) x 2 mg/dl
BILIRRUBINA TOTAL mg/dl = 0,857mg/dl

DETERMINAMOS LA BILIRRUBINA DIRECTA

Absorbancia = 0.026
Absorbancia estndar = 0.014

BILIRRUBINA DIRECTA mg/dl = (D.O. muestra / D.O. estndar) x 2


mg/dl
BILIRRUBINA DIRECTA mg/dl = (0.026 / 0.014) x 2 mg/dl
BILIRRUBINA DIRECTA mg/dl = 3,714mg/dl
DETERMINAMOS LA BILIRRUBINA INDIRECTA
BILIRRUBINA INDIRECTA mg/dl = BILIRRUBINA TOTAL - BILIRRUBINA
DIRECTA

BILIRRUBINA INDIRECTA mg/dl = 0,857mg/dl 3,714mg/dl


BILIRRUBINA INDIRECTA mg/dl = -2,857mg/dl

VIII. Resumen y Conclusiones


El metabolismo de la bilirrubina comienza con la descomposicin de
los hemates en el sistema reticuloendotelial. La hemoglobina es
liberada desde los hemates y descompuesta en las molculas heme
y globina. El heme es catabolizado despus para formar biliverdina,
que se transforma en bilirrubina. Esta forma de bilirrubina se
denomina no conjugada (indirecta). En el hgado, la bilirrubina
indirecta es conjugada con glucurnido para producir bilirrubina
conjugada o directa. La bilirrubina conjugada se excreta despus
por las clulas hepticas hacia los canalculos intrahepticos, que
acaban conducindola a los conductos hepticos, el conducto biliar
comn y el intestino. La mayor parte de la bilirrubina de la bilis que
alcanza el intestino est conjugada. La bilirrubina conjugada no es
apreciablemente absorbida por el intestino. La accin de las
bacterias intestinales sobre la bilirrubina da por resultado la
desconjugacin y la oxidacin o reduccin, con formacin de
compuestos que colectivamente se denominan urobilingeno. Estos
compuestos estn no conjugados, lo que permite su absorcin. La
mayor parte del urobilingeno absorbido es excretado por el hgado,
aunque pueden aparecer pequeas cantidades normalmente en la
orina. Cantidades mayores se encuentran en la orina cuando la
excrecin de bilirrubina por la bilis est aumentada, como en la
hemlisis. O cuando el hgado enfermo no puede segregar
fcilmente urobilingeno absorbido por el intestino.
La ictericia es una coloracin amarillenta de piel y mucosas causada
por niveles sanguneos de bilirrubina anormalmente altos. El color
amarillo se aprecia cuando la bilirrubina srica total es superior a
1,6 mg por 100 ml en los casos de origen heptico o biliar,
requirindose cifras mayores para que se manifieste en ictericia
una hiperbilirrubinemia de origen hemoltico.
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IX. Referencias Bibliogrficas


MURRAY R,K. GRANNER D.K. MAYES, P.A. y RODWELL V,W. 2001.
Bioqumica de Harper. 16a Ed. Edit El Manual Moderno. Mxico.
PLUMMER P,T 1981. Bioqumica Prctica. 13a Ed. Edit. El Manual
Moderno S.A. De C.V. Mxico D.F.
RONDONI, P. Compendio de Bioqumica con Aplicacin a la
Patologa y al Diagnstico. 4ta Edicin. Editorial LABOR S.A. Madrid
Espaa.
Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005. 1993-2004
Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Ao de las Cumbres Mundiales en el Per


Universidad Nacional de la Amazona Peruana
Facultad de Farmacia y Bioqumica
PRACTICA DEL LABORATORIO # 16
Grupo: jueves (11 a 1pm)

Titulo

Determinacin de la Bilirrubina Total, Directa


e Indirecta en Suero Sanguneo.

Asignatura

Docentes :

Q.F. Wilfredo O. Gutirrez Alvarado


Q.F. Henry Delgado Wong

Alumna

Fecha de
Ejecutacion

Fecha de
Presentacin

Bioqumica

Vsquez Rodrguez Gnesis Del Rosario

jueves 17 de abril

jueves 24 de abril

Iquitos-0-Per
2008