AISLAMIENTO DE POLIOVIRUS: TRATAMIENTO DE LA

MUESTRA
I.

INTRODUCCIN
Los enterovirus pertenecen a la familia Picornaviridae, con ms de 100
serotipos y representan en muchos pases la causa principal de infecciones
agudas del Sistema Nervioso Central cuyos porcentajes varan entre 24 y el
95% segn el rea geogrfica.
La poliomielitis es la enfermedad infecto-contagiosa que afecta a nios
menores de 5 aos y est causada por poliovirus (PV) 1, PV-2 o PV-3 (gnero
Enterovirus C), de los cuales el tipo 1 es el que se asla con mayor frecuencia
en los casos de paralticos siendo el hombre el nico reservorio conocido.
El virus ingres a travs de la cavidad oral y la multiplicacin primaria tiene
lugar en la bucofaringe o en el intestino, y posteriormente hace viremia corta y
llega al sistema nervioso central.
El diagnstico se confirma al aislar e identificar el poliovirus en muestras
biolgicas como heces, LCR, etc., as como detectar anticuerpos en la sangre.
Los poliovirus se aslan en cultivos de clulas renales de rin de mono (VERO)
o fibroblastos a partir de muestras farngeas durante los primeros das de la
enfermedad y de las heces por varias semanas.

II. OBJETIVOS
Adiestrar al estudiante en la toma de muestra de heces y tratamiento de la
muestra para el aislamiento de poliovirus en cultivo celular y su identificacin.
III. MATERIAL Y MTODOS
III.1

MATERIAL

Heces
PBS 1x o Hanks 1x con antibiticos
Frascos de vidrio de boca ancha 50 mL
Cloroformo
Perlas de vidrio
Tubos con tapa rosca de 10x150 mm
Tubos de centrfuga
Pipetas de 5 y 10 mL
Viales
Bagueta
Centrfuga


III.2

Balanza
PROCEDIMIENTO

III.2.1Toma de muestra
Recolectar de 4 a 8 gramos de heces en recipiente con tapa hermtica,
o hisopado rectal que se coloca en medio de transporte.
Guardar a -20C hasta el momento de su procesamiento.
III.2.2Tratamiento de la materia fecal
Colocar 15 mL de PBS 1x o Hanks 1X con antibiticos al recipiente de
boca ancha.
Aadir al frasco las perlas de vidrio.
Colocar aproximadamente 1 gramo de heces con ayuda de una
bagueta de vidrio al frasco y disgregar las heces.
Colocar el frasco con un vibrador durante 10 minutos.
Transferir el contenido sin las perlas a un tubo de centrifuga.
Centrifugar a 7000 o 10000 rpm durante 10 minutos.
Separar el sobrenadante y distribuirlo en volmenes iguales en dos
tubos con tapa rosca de 10 x 150 mm.
A cada uno de los sobrenadantes, agregar igual volumen de cloroformo
y agitar manualmente durante 2 a 3 minutos.
Colocar los tubos con refrigeracin a -5C durante 15 horas.
Centrifugar los tubos a 2000 rpm durante 30 a 40 minutos.
Separar el sobrenadante y distribuirlo en viales estriles debidamente
rotulados.
Conservar a -4C hasta su aislamiento en lneas celulares.
IV. RESULTADO

15 mL de PBS +
1gr de heces

Sobrenadante obtenido para prxima inoculaci

V. COMENTARIO
El aislamiento y la identificacin del poliovirus de las heces es uno de los
mejores mtodos para confirmar un diagnstico de poliomielitis. Las muestras
de heces de casos sospechosos de esta enfermedad deben conseguir tan
pronto como sea posible, preferiblemente dentro de los 7 primeros das o al
menos durante los primeros 14 das despus de la aparicin de la enfermedad.
La colecta del sobrenadante estril de las muestras tratadas, segn el
protocolo, se puede usar para inocular en tubos de cultivos celulares. Estos
son revisados durante 5 das para observar una posible aparicin del virus bajo
el aspecto citopatognico.
VI. REFERENCIAS

http://www.scielosp.org/pdf/resp/v87n5/03_colaboracion_especial2.pdf

DIAGNOSTICO DE RABIA: INOCULACIN EN RATONES

LACTANTES

I.

INTRODUCCIN
La rabia es una zoonosis importante para la cual se han estandarizado
internacionalmente las tcnicas de diagnstico. Como en la rabia no existen
lesiones patognomnicas visibles, el diagnstico solo se puede hacer en el
laboratorio. Las tcnicas de laboratorio se realizan preferiblemente con tejido
del sistema nervioso central (SNC) extrado a travs del crneo. Se debe
probar un conjunto de muestras del SNC, y el tallo cerebral es el componente
ms importante de las muestras.
La rabia est causada por un virus neurotrpico del gnero Lyssavirus de la
familia Rhabdoviridae y se transmite a todos los mamferos. Como tambin se
transmite a los humanos por inoculacin o por inhalacin del virus infeccioso,
todo el material sospechoso de infeccin debe ser manejado bajo condiciones
apropiadas de seguridad especificadas por la Organizacin Mundial de la Salud
(OMS)

II. OBJETIVOS
II.1 Familiarizar al alumno con las tcnicas de aislamiento e identificacin del
virus Rabia.
III. MATERIAL Y MTODOS
III.1

Materiales
-

Asta de Ammon de perro que se presume con Rabia.

Mortero

SSF + antibiticos (100ppm de estreptomicina y 1000 UI/m L de

penicilina).

Tubo de ensayo.

Ratones lactantes

Centrfuga

III.2

Mtodos
-

Extraer el asta de Ammon de perro que se presume con rabia.

Pesar 0,3 g de la muestra de asta de Ammon, colocarlo en un mortero

y triturar.

Agregar 1,2 m L de SSF + antibiticos (100ppm de estreptomicina y

1000 UI/m L de penicilina), homogenizar y obtener una suspensin.

Transferir la suspensin a un tubo y dejar reposar en refrigeracin por 1

hora.

Centrifugar a 2000rpm por 10 minutos.

Separar el sobrenadante.

Inocular por va intracerebral 0,03 m L el sobrenadante a cada ratn

lactante.

IV. COMENTARIOS
El virus de la rabia aparentemente se multiplica dentro del msculo
estriado del sitio de inoculacin.
Luego penetra al sistema nervioso perifricos en las uniones neuromusculares
(las glicoproteinas G de la membrana se unen a los receptores nicotnicos de la
acetilcolina) y se propaga a lo largo de los nervios hasta el sistema nervioso
central. Ah se multiplica casi exclusivamente en la sustancia gris y puede
entonces propagarse por nervios autonmicos hasta las glndulas salivales y
otros tejidos como la piel, medula suprarrenal, hgado, msculo estriado,
corazn y pulmn.
V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/Publications_
%26_Documentation/docs/pdf/2.2.05_Rabia.pdf

http://publicaciones.ops.org.ar/publicaciones/publicaciones
%20virtuales/cdmanualRabia/vigilancialaboratoriodiagnostico.html