INTRODUCCION
IIOBJETIVOS
Se realiz dos actividades bien diferentes de mosto de carambola y
camu Cam.
Comprende la fase de la fermentacin alcohlica.
Sacar mediciones del grado brix, pH.
1. METODOLOGA
El anlisis de flujos metablicos MFA se basa tanto en el uso de herramientas
matemticas y computacionales, como en tcnicas de anlisis qumico, como
espectrometra de masas requiere el uso de birreactores operados en continuo, para
tener condiciones de cultivo totalmente definidas y aproximarse a condiciones
relevantes para la vinificacin.
Ello tambin permite estudiar de manera independiente el efecto de diferentes
parmetros ambientales sobre el metabolismo o la fisiologa celular (concentracin de
sustrato (fuente de carbono o de nitrgeno), disponibilidad de oxgeno, velocidad de
crecimiento, presencia de inhibidores, pH, etc). A partir de estos cultivos en estado
estacionario se llevar a cabo el anlisis, mediante mtodos analticos convencionales
(HPLC, GC, analizadores de CO2/O2, anlisis elemental, mtodos colorimtricos,
etc) de los productos de la fermentacin (incluyendo el CO2), el consumo de
sustratos (incluyendo O2), biomasa y su composicin.
Todos estos datos sern integrados en un modelo metablico para el anlisis de flujos,
con herramientas desarrolladas, con el fin de construir un modelo que comprenda
todas las fases de la fermentacin alcohlica.
Control del metabolismo del nitrgeno
En un primer paso se determinar la cantidad mnima de nitrgeno para asegurar la
obtencin mxima de poblacin en las primeras 24-48 horas de fermentacin. Para
ello se utilizarn diferentes cantidades y tipos de fuente de nitrgeno (amonio,
arginina, glutamina), con diferentes propiedades y abundancia en mostos naturales.
Se determinarn la cintica de produccin de biomasa, as como vitalidad celular,
marcadores bioqumicos y moleculares, as como metabolitos intracelulares. Para
establecer las necesidades de nitrgeno en la fase de no-proliferacin se seguir una
estrategia similar en cuanto a combinaciones de abundancia y tipo de fuentes de
nitrgeno, y se estudiarn en dicha fase parmetros de actividad fermentativa,
marcadores y metabolitos. Con una metodologa similar se estudiar el efecto del
momento y tipo de adicin de nutrientes en fermentaciones con nitrgeno asimilable
insuficiente en el momento inicial. Todos estos experimentos se analizarn tambin
desde el punto de vista de la influencia de las fuentes de nitrgeno y su manejo sobre
la calidad sensorial del vino (formacin de compuestos aromticos o del flavor). Todo
ello se completar con el desarrollo y puesta a punto de mtodos de fcil
implementacin en bodega para determinacin del componente nitrogenado de
mostos y vinos y el estado nutricional de las levaduras; as como el establecimiento de
modelos predictivos de la cintica fermentativa con respecto al metabolismo
nitrogenado de las levaduras para la deteccin precoz de problemas de fermentacin.
Control del metabolismo del nitrgeno
Efecto de diferentes tipos y abundancia de fuentes de nitrgeno sobre la formacin de
Biomasa, en trminos cinticos y de rendimiento.
Para alcanzar este objetivo se han realizado una serie de ensayos en los que,
trabajando con la cepa S. cerevisaie, se han empleado distintas fuentes de nitrgeno
(amonio, glutamina, y arginina) a distintas concentraciones.
En primer lugar se realiz un estudio que pretenda determinar la cantidad y el tipo de
nitrgeno necesarios para conseguir la mxima velocidad de crecimiento y la mxima
produccin de biomasa. Como resumen de este primer ensayo podemos decir que la
cepa presenta una tasa de crecimiento mxima (max) en las condiciones ensayadas
de 0,17 h-1. Esta velocidad la consigue a partir de una concentracin mnima de unos
40 mg/L de amonio. Para los otras fuentes, esta velocidad de crecimiento (max) es
un poco menor (0,15 y 0,16 h-1 para arginina y glutamina respectivamente), siendo
estas diferencias no significativas desde el punto de vista estadstico. En cuanto a la
concentracin de N necesaria para obtener la mxima biomasa es de 140 mg/L para
2. MATERIALES Y METODOS
Materia prima
Equipos e instrumentos
Muestras de frutas
Soporte universal
Agua destilada
REACTIVOS:
NaOH 0.1 N
Solucin de fenolftalena
Solucin buffer de pH conocido (para calibrar el potencimetro
3. METODOLOGIA:
Determinaciones fsicas
Anlisis sensorial
Diseo experimental
4. CLCULOS Y RESULTADOS:
CALCULOS:
CARAMBOLA
= 1800 gr
CAMU CAMU
800gr
1800gr
221.04 gr de semilla
X
1578.96 gr x
3157.92 -
3157.92 -
2
mosto
1580.7
X
1580.18 ml
de H2O
CALCULO DE AZUCAR:
Mosto =
3157.92 gr
1%
=
31.5792 gr
(X + 31.5792) = 0.24 (3157.92 +
X)
(X + 31.5792) = 757,9 + 0.24X
0.76 X = 726.32
X = 726.32
0.76
955.7 gr de azcar
CALCULO DE LEVADURA:
Dato terico:
0.002 %
Mosto:
3157.92 gr
Azcar:
955.7 gr
Dato total =
Dato total =
mosto + azcar
4113.62 gr
Levadura = 8.23 gr
800gr
161 gr de semilla
639 x 4 gr x 4
2556 - mosto
2556 - 1707
849 ml de H 2O
CALCULO DE AZUCAR:
Mosto =
1%
2556 gr
25.56 gr
= 387.88
0.76
X =
773.58 gr de azcar
CALCULO DE LEVADURA
Dato terico:
Mosto:
Azcar:
0.002
2556 gr
773.58 gr
RESULTADO
3329.58 gr
levadura =
FECHA
1
CAMU CAMU
pH
Brix
CARAMBOLA
Ph
Brix
2.73
25
2.37
26
2.70
3.50
21
20
2.25
2.21
24
23
18
2.75
22.5
3.4
4.18
4.15
3.60
22
19
17
18
2
3
MIERCOLES
14/05/14
JUEVES 15/05/14
VIERNES 16/05/14
LUNES 19/05/14
5
6
7
8
MARTES 20/05/14
MIERCOLES 21/05/14
JUEVES 22/05/14
VIERNES 23/05/14
3.92
4.2
4.1
3.28
17
17
16
15
LUNES 26/05/14
4.40
15
10
11
12
13
MARTES 27/05/14
MIERCOLES 28/05/14
JUEVES 29/05/14
VIERNES 30/05/14
3.40
4.68
3.16
4.05
15
15
15.5
14
4.91
4.32
4.31
17
15
16
14
LUNES 02/06/14
4.17
14
4.38
16
15
16
17
18
MARTES 03/06/14
MIERCOLES 04/06/14
JUEVES 05/06/14
VIRENES 06/06/14
4.17
3.22
4.00
3.90
14
14
14
14
3.47
4.31
4.19
4.17
16.5
16
17
16
19
LUNES 09/06/14
4.09
13.5
4.21
17
20
21
22
23
MARTES 10/06/14
MIERCOLES 11/06/14
JUEVES 12/06/14
VIERNES 13 /06/14
4.13
3.89
3.78
3.50
3.78
14
13.5
15
15
14
4.33
4.07
3.96
3.93
3.93
15
14
17
16
16
24
LUNES 16/06/14
3.85
3.85
15
16.5
3.97
3.97
15
14
25
26
MARTES 17/06/14
MIERCOLES
18/06/14
3.90
15
10
5
0
dias
3
2
1
0
dias
15
10
5
0
dias
ANTES
% acides
96.1
40.8
DESPUS
% acides
43
38
96.1
100
80
60
43
40
20
0 1
1
acides
40.8
41
40
% 39
38
38
37
36
1
2
acides
120
100
80
60
40
Camu
camu
caramb
ola
20
0
5. CONCLUSIN
Las dos actividades bien diferenciadas, pero con interacciones importantes
entre s; el
Anlisis de flujos metablicos aplicado a las condiciones de fermentacin
alcohlica de mosto
7. BIBLIOGRAFA
AMERINE, M.A.; KUNKEE, R.E. 1968. MICROBIOLOGY OF
WINEMAKING. ANN. REV. MICROBIOL. 22: 323-358.
AON, M.A.; CORTASSA, S. 1998. CATABOLITE REPRESSION MUTANTS
OF SACCHAROMYCES CEREVISIAE SHOW ALTERED FERMENTATIVE
METABOLISM AS WELL AS CELL CYCLE BEHAVIOR IN GLUCOSELIMITED CHEMOSTAT CULTURES. BIOTECHNOL. BIOENG. 59: 203-213.
BELTRAN, G.; ESTEVE-ZARZOSO, B.; ROZES, N.; MAS, A.; G