HORMONA
ANTIDIURTICA y
ACUAPORINAS
Integrantes:
Carolina Bonti
Luccianna Bruschi
Emiliano Buscarons
Matilde Cabral
Agustn Cabrera
Beatriz Camacho
Esteban Cantero
Stefana Castelnovo
Juan Ignacio Luna
Sofa Marta
Camila Prez
Valentina Snchez
ARTCULO CIENTFICO:
Efectos del antagonista del
receptor V2 de ADH en la expresin
de acuaporinas y su distribucin
subcelular en el rin.
Generalidades
Etimologa: Acua=agua. Porina=poro.
Conformacin: Protena transmembrana con 6 alfahlice.
Tipos:
- Acuaporinas: slo agua (AQP 0-8).
- Acuagliceroprotenas: Agua-Urea-Glicerol (AQP 910)
- Sin clasificacin: AQP 11 y 12.
Localizacin de AQP2: Membrana apical y vesculas
de clulas del tbulo colector.
Descubrimiento
Receptor V2
Receptor para vasopresina/ADH.
Tiene un solo sitio en el extracelular amino-terminal
a diferencia del resto.
AMPc/Adenilato ciclasa/PKA.
La va activa la fusin de vesculas.
Expresin del ARNm de la AQP2.
Inhibido por OPC-31260 (principal uso en esta
investigacin).
Mecanismos de regulacin de la
reabsorcin de agua por ADH:
ADH:
A corto plazo
A largo plazo
RELEVANCIA::
RELEVANCIA
Reabsorbe 99% del filtrado.
Por da:
IMPORTANCIA CLNICA
CLNICA::
Falta de AQP2: Se excreta gran cantidad de agua
- Severa diabetes inspida nefrognica
primaria o central.
Exceso de AQP2: Expansin del fluido extracelular
- Insuficiencias cardacas congestivas
- Cirrosis heptica
INTRODUCCIN AL ARTCULO
Objetivo:
Demostrar la participacin del receptor V2 en la
regulacin de la expresin de AQP2.
Estrategias:
Observar los cambios de localizacin de AQP2
luego del tratamiento con OPC.
Observar si el tratamiento con OPC sobre el
receptor V2 disminuye los niveles de ARNm de la
AQP2.
MATERIALES Y MTODOS
Protocolo 1 (48 horas)
-Sin agua (sedientas).
-Sobrecargadas con agua usando 300 mM de sacarosa
en el agua.
- Libre acceso al agua (control).
Protocolo 5 (6 das)
- Ratas con dieta normal durante 5 das y luego se suministr
OPC a la comida por 24 horas.
- Ratas con dieta estndar durante todo el estudio (control).
RESULTADOS
1) Efectos a corto plazo del tratamiento con antagonista
del receptor V2 sobre la distribucin celular de AQP2 en la
clulas principales del tbulo colector.
2) Expresin del ARNm y de la protena de AQP2 en la
mdula interna del rin de ratas sedientas y ratas con
sobreingesta de agua.
3) Expresin del ARNm de AQP2 en mdula interna del
rin de ratas tratadas con el antagonista del receptor V2,
OPC-31260.
Resultado esperado
Resultado esperado
Protocolos utilizados: 2, 3 y 4
Localizacin de AQP2:
Situacin control
A: ratas control tratadas con 0,2 mL de
solucin salina intravenosa.
Localizacin de AQP2
Luego de 15 min de
tratamiento con OPC: se
sugiere internalizacin
de AQP2 desde la
membrana apical hacia
las vesculas
citoplasmticas.
Cabezas de flechas
pequeas: vesculas.
Luego de 30 min de
tratamiento con OPC: vemos
las AQP2 internalizadas en las
vesculas citoplasmticas y
conformando cuerpos
multivesiculares (B y C).
Northern blot
Anlisis de densidad
AQP2
glicosiladas
AQP2 no
glicosiladas
Ratas con
sobreingesta de agua
Ratas con
sed
Protocolos utilizados: 2, 3, 4 y 5.
Anlisis de densidad
Anlisis de densidad
protena glicosilada
protena sin
glicosilar
Se mantiene reduccin.
DISCUSIN Y CONCLUSIONES
La inmunofluorescencia y la microscopa inmunoelectrnica demostraron que el
tratamiento in vivo con antagonista del receptor V2 de la vasopresina caus una rpida
recuperacin de AQP2 de la membrana plasmtica apical en las vesculas y cuerpos
multivesiculares.
Tratamiento con OPC induce una reduccin de los niveles de ARNm de AQP2.
El balance del agua corporal est regulado por la vasopresina, la cual incrementa la
permeabilidad al agua del tbulo colector.
No toda la AQP2
intracelular est
disponible para el
reciclaje.
Todas son
internalizadas en
respuesta al
tratamiento con
OPC.
La mayora van a las
vesculas para luego
ser reutilizadas.
Externalizacin
Fosforilacin
Internalizacin
Se da por endocitosis, puede
requerir una desfosforilacin.
Ratas Brattleboro
No tienen ADH. Pero igual
reabsorben agua.
Sugiere la existencia de
mecanismos independientes de
ADH.
En suma:
El receptor V2 est crticamente involucrado en la va de
sealizacin (a corto plazo) que regula la expresin de ARNm
de AQP2.
A pesar de la participacin del receptor V2 en la regulacin
a largo plazo (24 horas) en la expresin de ARNm de AQP2, la
ausencia de una mayor reduccin de ste mas all de las 24
horas, es consistente con la existencia de mecanismos de
modulacin a largo plazo independientes del receptor V2.
Y cules son esos mecanismos?
GRACIAS!!