PnncncA

Absorcin

T.-",

de

No. e

glucov m el intestino dclgado derata

de estudio

Estrucrura y tuncin de ra pared inrestinal.

m.
-r

(v r

Mecanismos generales de transporte de sustancias desde la luz intestinal

hacia las clulas intestinales y de stas al lquido extracelular.

Mecanismo de transporte de glucosa a travs del intestino

Factores que influyen en el transporte a travs del intestino delgado.

ddl.Tl.

Introduccin

El apa.rato digestivo tiene conro principal tuncin proporcionar al organismo

a6ua, elec0olitos y sustancias nutritivas, dichos alimentos son transportados
a travs del tubo digestivo a una velocidad tal, que permite su digestin y
absorcin. Antes que los nutrientes (carbohidratos, protenas y grasas) puedan
ser utilizados por el cuerpo, son degradados por hidrlisis enzimtica, proceso
cqrocido como digestin, hasta llegar a ser compuestos lo suficientemente
pequeos para poder pasar al interior de las clulas'del tubo digestivo y de
all llegar a la circulacin. A este proceso se le conoce como absorcin
intestina I .

Durante la digestin los alimentos son sometidos a la accin de secreciones

producidas por glndulas digestivas.
El intestino delgado se divide iuncionalment en tres partes, pero la estructura
bsica de estas regiones es muy similar; el duodeno, que es la primera y ms

ancha porcin del intestino delgado, recibe el quimo del extremo pilrico
del estmago y es el sitio donde culmina la mayor parte de los procesos
digestivos. En las otras dos regiones restantes, llamadas veyuno e leon
respectivamente es en donde fundamentalmente tiene lugar la absorcin de
los alimentos digeridos.

Las clulas del epitelio intestinal se caracterzan por su borde en cepillo

tbrmado por microvellosidades. La superficie de absorcin de la mucosa
intestinal est cubierta por vellosidades y tambin la constituyen una Sran

cantidad de pliegues llamados pliegues de Kerckring; todas estas

caractersticas de la mucosa intestinal en conjunto le confieren un rea de
absorcin muy grande.
La absorcin en et aparato digestivo implica muchos procesos, que inciuyen

a la difusin simple, la difusin acilitada, el transporte activo y en algunos

casos especiales, la pinocitosis.
El transporte activo es el

principal mecanismo de absorcin de nutrientes en

el intestino delgado. Las clulas involucradas en este proceso transPortan

elementos nutritivos desde la luz del intestino hacia la sangre, incluso. si la
concentracin de dichos elementos es mayor en la sangre que e la luz
intestinal.
Un grupo de nutrientes importantes para el organismo que se absorbe en el

intestino delgado es el de los carbohidratos. Por lo general, todos los

carbohidratos se absorben en forma de monosacidos y su transporte a travs
de la rnembrana puede producirse en contra del gradiente de concentraqin
y, por lo tanto. requiere de un aporte de energa metablica.
:;
En la membrana plasmtica de las clulas intestinales existe un cotransporte
sodio-glucosa que aumenta la concentracin intracelular de glucosa, por lo
que sta atraviesa la membrana basolateral de la clula epitelial hacia el
lquido extracelular.

Obi*ivos
1. Verificar el transporte de glucosa

travs del intestino delgado de rata.

2. Demostrar de qu manera influyen la oxigenacin y la temperatura en la

absorcin intestinal de glucosa.

3. Determinar el etecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de

glucosa.

Materidymtodo
Material biolgico
Una rata en ayuno de 12 horas.

Cristalera, instrumcntal y cquipo

Estuche de diseccin

I
I

varilla de vidrio.

caja de Petri.
1 recipiente de vidrio con cubierta acrlica, para las cmaras de organos
aislados.
3 cmaras para rganos aislados con tapones de hule horadados.
1 termmetro.
resistencia etctrica-

I pipetas Pasteur.
2 bulbos.
5 pipetas de 1 ml.
3 vasos de precipitados de 300 ml.
1 bomba de acuario con mangueras.
1 cnula.
4 jeringa de 1 ml.

Material de consumo y soluciones

Solucin Tyrode para mamtero * (sin glucosa)
Solucin Tyrode-glucosa al 2o/o
Solucin Tyrode-glucosa al2o/o y 2-4 dinitrofenol 0.001 M
*Consultar anexo D

Hielo.
Algodn.
Eter.

carrete de hilo.

Tiras reactivas comerciales para la deteccin de glucosa.

Preparacin de secos intestinales

Sacrifique la rata por medio de anestesia ligera con ter seguida de traseccirr

de la mdula espinal. Abra el abdomen mediante una incisin en la,,lnea

media abdominal. Ya localizado el intestino delgado extrigalo luego de
cortar sus uniones ploro-duodenal e leo-cecal y colquelo en una caja de
Petri que contenga solucin de Tyrode fra y aeracin. Corte tramos de intestino

con 2 a 3 cm de longitud, inserte una cnula en la luz del segmento'intestinal

y, por medio de una jeringa que contenga solucin de Tyrode. lave los
segmentos intestinales. Es importante exanrinar la presencia de pertoraciones
ya que puede haber escape de la solucin durante el experimenr: ,,1
I, ,,
Siga los pasos que se mencionan para llevar a cabo la inversin de los segnrengos

intestinales. Anude con un hilo uno de los extremos del segmento de manera
que quede ocluido completamente; con ayuda de una varilla de vidrio impulse
el extremo ocluido hacia el extremo abierto, deslizndolo por la var:ltl'Fira
1). De esta manera la superticie mucosa del intestino queda por fuera y los
cabos de hilo del extremo atado quedan por dentro del saco inveftido. Sostenga
con unas pinzas el saco intestinal e introduzca por su extremo abierto l 'tubo
de vidrio de la cmara de rganos aislados hasta que sobrepase unos 5 mm, se
amarra cuidadosamente este extremo a la varilla (Figura 2).

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Fig. 1
lnversin del saco intestinal

Fig. 2
Atadura del intestino al sistema

Coloque el saco intestinal en la cmara de rganos aislados para h.rcer los

experimentos con las diferentes soluciones:

A. Experimento control
Coloque el saco intestinal dentro de la cmara y llnelo con solucin de
Tyrode que se encuentre a 37"C utilizando una cnula acoplada a una ieringa
o una pipeta Pasteur, despus de verificar que el saco no preserrta tugas,
sumrjalo en una solucin de Tyrode con glucosa al 2o/o, tambin a 37'C. Se
debe tener cuidado que tanto la solucin interior como la exterior rro

sobrepasen el borde superior del saco atado a la varilla. lnmediatanrente

acople el sistema de aeracin que consiste en una bomba de aire para Pecera;

la preparacin debe estar en bao de mara para mantener constante la

temperatura (Figura 3).
Toma de muestra

Tome una muestra, tiempo cero, tanto de la solucin exterior como de la

interior del saco intestinal, utilice una cnula conectada a una jeringa o una
pipeta Pasteur. Utilizando las tiras reactivas determine la concentracin de
glucosa en las muestras; deje pasar 'l 5 minutos y mida nuevamente la
concentracin de glucosa, slo de una muestra del interior del saco. Haga
determinaciones cada I5 minutos hasta completar 5; en el tiempo de la
ltima determinacin mida nuevamente la concentracin de glucosa en el
exterior del saco, Es importante verificar que las condiciones de aeracin y
temperatura se mantengan constantes durante todo el experimento.
B.- Efecto de la oxigenacin en el paso de glucosa a travs
de la mucosa intestinal
Coloque un saco intestinal invertido dentro de la cmara y llnelo con solucin
de Tyrode sin glucosa a 37"C, verificando que no presente fugas, sumrjalo
en una solucin de Tyrode con glucosa al 2%, a 37"C, tape el conducto de
aeracin, para evitar la oxigenacin de la preparacin. Repita lo realizado
en la seccin de toma de muestra.

C. Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinalde glucosa

Coloque un saco intestinal en una cmara de rganos aislados en la manera
descrita anteriormente, llene el saco intestinal con una solucin de Tyrode
sin glucosa a 31"C, en este caso coloque el saco en una solucin de Tyrode
con glucosa al 2% y con 2-4 dinitrofnol. Mida la concentracin de'glucosa
en el tiempo cero, dentro y fuera del saco intestinal, y al igual que en los
experimentos anteriores, realice 5 determinaciones, una cada 15 minutos.
Veriiique que las condiciones de aeracin y de temperatura se mantengan
constantes durante todo el expermento.

Aire
..:

.::::,

=:

Aire

i.7'C

Boo de

*uot oo'"

Fig. 3
Cdocacin de slucin de Tyroe sin glucon

dentro de

la acos intep,thu,lcs invstklos

^ #;:TI"::

,", cmara conreniendo sotucin de Tyrocle

con gtucosa at

B' sumergir en una cmara

conteniendo solu.cin de Tyrode
con grucosa ar
2o/", a 37"C. Evitando l,
Julr",

l,

"nirrJ"

flTr:rfl;i I;#:'a

cmara.

con solucin de rvrode con

srucos a at 2,/, y 2,4-

Los tres sistemas se colocan

en un bao de agua a 40"C.

Experimentos opcionales

ffecto de la temperatura en
ta absotcin intestinal de
gtucosa
Coloque un saco

int

t;c ffi,#i:

:: n:: ;, ::,I::,

n s r cosa,
:"
contener solucin de Tyrode
.on
si

l;:[:

:i:::i:

:;
gl;-* ,l Z% pr.rirrnente mantenida
"lrJ:l:
,..0,e et sistema ;-r;;*,?r.
en
]T","q*,t" .;;;;;..n in u"no a"
:,,,,,

Realice determinaciones
de grucosa de ras soruciones
y exterior,
1;;;d:;o se describiinterior
anreriormente.
Efbcto de ra ausencia de
sodio en ra absorcin intestinar
de grucosa.
haga determinaciones cada

Para realizar este exr

,v-1"

..,,';ffiJfr ff":?",f:::i'"fio**

manteniendo"ta ormolaridad
de

l, *lr.ionldio

una cantidad de sorucin

sea sustituido por colina.

:,:'::,T,T:T::[,!:[:.::?: en su interior sorucin de ryrode

;:::ll:ff :;'i'ffi :*#1*,r#i:1":;:|#.H::"1IT:i;,l,'"'i:
Haga determinaciones
de glucosa de la solucin
interior y rle la exterior
del
as determ i nr.on",
ui' mtsma forma y en los
:T:-.y. lr"ti8a .con
descritos
anteriormente.
tiempos
I

i,

Determinacin de glucosa por medio de tiras reactivas

Obtenga una o dos gotas de la solucin problema, ya sea la del interior del
saco intestinal o de la solucin exterior, por medio de una cnula limpia
conectada a una jeringa. Coloque una gota de la solucin problema en la
zona reactiva de la tira, elimine el exceso de muestra y deje reaccionar durante
dos minutos. El cambio de color se ef'ectuar de acuerdo con la concentracin
de glucosa presente en la muestra y comprelo con la escala cromtica
proporcionada, la lectura debe efectuarse bajo buenas condiciones de luz.
Los resultados que aparecen despus de 3 minutos o slo en los bordes de la

zona de prueba no tienen significado confiable. Este mtodo es

semicuantitativo y est basado en la reaccin enzimtica de la glucosa
oxidasa-peroxidasa especfica para glucosa, la que se manifiesta con una
reaccin colorida en la tira reactiva.

Resukados
Experimento control
Elabore una tabla con los valores oheni&s de concentracin de glucma en los
diferentes tiempos en que se tornaron las nuesas. Al final del experimento se observan
cambios en las concertraciones e)fiema e irfrema. Cnro peden interpretarse los
resultados obtenidos? Haga una grfica en donde se obrerven los cambios en la
concentracin de glucosa, dentro del saco intesinal, con respecto al tiernpo.

Efecto de la ausencia de oxgeno

Elabore una tabla con los valores obtenidos de concentracin de glucosa en

los diferentes tiempos y compare los resultados con los obtenidos en el

experimento control. Explique cul es el et-ecto de la falta de oxigenacin
sobre el transporte de glucosa. Haga una grfica con los resultados.
Efecto del 2-4 dinitrofenol
Elabore una tabla con los valores obtenidos de concentracin de glucosa en los
dierentes tiempos y compare los resultados con los obtenidos en el experimento

control. Explique el mecanismo de accin del 2-4 dinitrofenol que afecta al

transporte de glucosa en el intestino. Haga una grfica con los resultados.

Efecto de la temperatura
Elabore una tabla con los valores obtenidos de concentracin de glucosa en
los dit'erentes tiernpos y compare los resultados con los obtenidos en el
experimento control. Explique la causa de las dit'erencias. Haga una grfica
con los resultados.
Efecto de la ausencia de sodio
Elabore una tabla con los valores obtenidos de concentracin de glurcosa

er.r

los dit'erentes tiempos y compare los resultados con los obtenidos en el

experimento control. Explique cul es el eecto de la falta de soclio en la
solucin de Tyrode con 2o/" de glucosa, sobre el transporte de glucosa. Haga
una grfica con los resultados.

Cuestionario
1. En qu sitio del intestino delgado se realiza la mayor alsorcin

cle

nutrientes?

2. De qu manera son transfbrmados los azcares para su absorcin en el

intestino delgado?
3. Mencione diferentes causas que puedan afectar la absorcin intestinal en

un individuo.

4. Mencione alguna otra variable que podra incluirse en el desarrollo de

esta prctica y explica cul sera el eiecto esperado. Considera ia
preparacin que se utiliz y las posibilidades del laboratorio.