Clula procariota
Clula eucariota
access.mmhs.ca
Productos biotecnolgicos
Productos de ADN recombinante
Ejemplos.
Vector
DNA pequeo (proveniente de virus,
bacterias, levaduras) que puede ser
introducido y mantenido en una clula
(procariota o eucariota) y en el que se
puede injertar un fragmento de DNA con
el fin de ser clonado.
Clulas anfitrionas:
Eucariotas, procariotas
Tipos de Vectores
Plsmidos
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/K30001
Plsmidos Recombinantes
http://www.freepatentsonline.com/6803225-0-large.jpg
Tipos de Vectores
Virus, bacterifagos
Csmidos
PAC
Plsmido P1
Produccin de Vector
Recombinante
1. Aislamiento gen
de inters
2. Secuenciamiento
3.
Recombinacin
Clonacin
1) Aislamiento y purificacin del DNA de inters
2) Escogencia de la clula hospedera y del vector
de clonacin.
3) Obtencin del vector recombinante
4) Trasformacin, transfeccin del vector
recombinante en clula hospedera
5) Seleccin de clulas que contienen DNA
recombinante
6) Deteccin de los clones que contienen el DNA de
inters
5. Crecimiento celular,
expancin clonal
4.Transformacin/transfecci
n
Clonacin
Clulas Anfitrionas
Bacterias
Escherichia coli (E. coli)
Eucariotas
Levaduras
Saccharomyces cerevisiae(S. cerevisiae), Pichia
pastoris (P. pastoris)
Clulas de insectos
Lneas celulares mamferas
Clulas derivadas de ovario de hmster chino
(CHO)
Traduccin
Introduccin de
secuencias que permitan
el reconocimiento del
mRNA por los ribosomas
Optimizacin de la
traduccin
(Utilizacin preferencial
de codones)
Introduccin de seales
que garanticen
estabilidad de la
protena
http://palaeos.info/bacteria/glossary/glossary1.html
Introduccin de seales
que garanticen la
secrecin de la protena
Sistemas de Expresin
Procariotes
E. coli
Cuerpos de inclusin
Eucariotes
Levaduras
S. cerevisiae
P. pastoris
Clulas de insectos
Secretan
17
Glargina
Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile
1
10
Cys
11
Ser
Leu
12
13
Tyr
14
Gln
15
Leu
16
Glu
Asn
Tyr
17
18
19
Cys Asn
20
21
Gly
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His
1
Phe
24
Phe
25
Leu
Val
10
11
12
Arg
Arg
Tyr
Thr
Pro
Lys
Ala
26
27
28
29
30
Glu
13
Ala
Leu
Tyr
Leu
Val
Cys
Gly
Glu
Arg
14
15
16
17
18
19
20
21
22
Gly
23
Insulin biosimilars
Preproinsulin
S
Insulin S
S
9. Enzymatic cleavage
S
S
S
Typical
operations for
inclusion body
processes
Folding
conditions
influence
by-product
pattern
Cleavage
enzyme:
specificity &
selectivity
Cortesa sanofi
Insulin biosimilars
11.
12.
Ion-exchange
chromatography
Reversed-phase
chromatography
13.
Crystallisation
and lyophilisation Insulin
14.
Blending / filling
Chromatography
defines purity
S
S
Fibrillation
tendency
Cortesa sanofi
Traduccin en Eucariotes
Atractivos
1)
2)
3)
4)
5)
Rpido crecimiento
Altas densidades
Puede crecer en medios simples
Crece en metanol
Tiene promotores inducibles activados por
metanol y reprimidos por glucosa
6) Modifica protenas
Puentes disulfuro, proteolisis
1) Secreta protenas
2) Altos rendimientos