Anda di halaman 1dari 6

Tanggal Praktikum

Praktikum
Tujuan Praktikum

Kamis, 20 Maret 2014


Perhitungan Angka Kapang dan Khamir
Dapat mengetahui angka kapang dan khamir pada media PDA
dengan sampel susu kedelai

Kelompok
Nama Anggota

4
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Ade Muchlas
Dewi Kartika Sari
Neni Maulina
Petrisia Putri Romadhon
Risa Anggraini
Yohana Rafiqah

A. Dasar Teori
Kapang adalah mikroorganisme yang termaksud dalam anggota Kingdom Fungi yang
membentuk hifa. Kapang bukan merupakan kelompok taksonomi yang resmi, sehingga
anggota-anggota dari kapang tersebar ke dalam filum Glomeromycota, Ascomycota, dan
Basidiomycota.
Kapang (Inggris: mold) merupakan anggota regnum Fungi ("Kerajaan" Jamur) yang
biasanya tumbuh pada permukaan makanan yang sudah basi atau terlalu lama tidak diolah.
Sebagian besar kapang merupakan anggota dari kelas Ascomycetes. Kapang bereproduksi
dengan menggunakan spora. Spora kapang terdiri dari dua jenis, yaitu spora seksual dan
spora aseksual. Spora aseksual dihasilkan lebih cepat dan dalam jumlah yang lebih banyak
dibandingkan spora seksual. Spora aseksual memiliki ukuran yang kecil (diameter 1-10 m)
dan ringan, sehingga penyebarannya umumnya secara pasif menggunakan aliran udara.
Apabila spora tersebut terhirup oleh manusia dalam jumlah tertentu akan mengakibatkan
gangguan kesehatan.
Kapang adalah mikroba yang memiliki lebih dari satu sel berupa benang benang
halus yang disebut hifa, kumpulan hifa disebut miselium, dan berkembang biak dengan spora.
Khamir adalah mikroba bersel tunggal berbentuk bulat lonjong dan memperbanyak diri
dengan cara membentuk tunas (askospora), tetapi tidak membentuk miselum
Kapang merupakan multiseluler yang bersifat aktif karena merupakan organisme
saprofit dan mampu memecah bahan bahan organic kompleks menjadi bahan yang lebih
sederhana. Di bawah mikroskop dapat dilihat bahwa kapang terdiri dari benang yang disebut
hifa, kumpulan hifa ini dikenal sebagai miselium.

Kapang Monascus purpureus sudah digunakan sebagai bumbu masakan oriental sejak
berabad silam. Kapang ini menjadi sumber berbagai senyawa penting, seperti pigmen biotek,
toksin dan penghambat enzim. Kapang Monascus purpureus ini dapat berfungsi sebagai
pewarna alami dan penghambat aktivitas biologi. Terdapat 14 senyawa monacolin yang
terdapat dalam kapang merah ini, antara lain Monacolin K,J,L,M,X dan bentuk asam
hidroksinya.
Prinsip uji angka Kapang pada makanan dan minuman sesuai metode analisis
mikrobiologi (MA PPOM 62/MIK/06) yaitu pertumbuhan kapang/khamir setelah cuplikan
diinokulasikan pada media yang sesuai dan diinkubasi pada suhu 20-25C. Pada uji ini
digunakan Pepton Dilution Fluid (PDF) dan Air Suling Agar 0,05 % (ASA) sebagai larutan
pengencer, Potato Dextrose Agar (PDA) yang ditambahkan kloramfenikol (100 mg/l)
(0,01%) sebagai media pertumbuhannya.
Prosedur pengujian angka Kapang pada makanan dan minuman sesuai metode analisis
mikrobiologi (MA PPOM 62/MIK/06) yaitu dengan cara aseptik ditimbang 25 g atau dipipet
25 ml sampel ke dalam kantong plastic stomacher steril. Ditambahkan 225 ml PDF,
dihomogenkan dengan stomacher selama 30 detik sehingga diperoleh suspense dengan
pengenceran 10-1 sesuai Disiapkan 3 buah tabung yang masing-masing telah diisi 9 ml ASA.
Dari hasil homogenisasi pada penyiapan sampel yang merupakan pengenceran 10-1, dipipet 1
ml ke dalam tabung ASA pertama, dikocok homogen hingga diperoleh pengenceran 10-2.
Dibuat pengenceran selanjutnya hingga 10-3. Dari masing-masing pengenceran dipipet 0,5
ml, dituangkan pada permukaan PDA yang sudah ditambahkan kloramfenikol segera
digoyang sambil diputar hingga suspense tersebar merata dan dibuat duplo. Untuk
mengetahui sterilitas media dan pengencer, dilakukan uji blangko. Pada satu lempeng PDA
yang sudah ditambahkan kloramfenikol diteteskan 0,5 ml pengencer dan disebaratakan dan
untuk uji media digunakan satu lempeng PDA + kloramfenikol. Seluruh cawan petri
diinkubasi pada suhu 20-25 C dan diamati pada hari ke tiga sampai ke lima.
Koloni kapang seperti kapas atau bulat dengan berbagai warna, permukaan kasar dan
koloni khamir memiliki bentuk bulat kecil putih, hampir menyerupai bakteri. Jumlah koloni
yang tumbuh diamati dan dihitung. Hasil pengamatan dan perhitungan yang diperoleh
dinyatakan sesuai persyaratan berikut, dipilih cawan petri dari salah satu pengenceran yang
menunjukkan jumlah koloni antara 50-150. Jumlah koloni dari kedua cawan dihitung lalu
dikalikan dengan faktor pengencerannya. Bila pada cawan petri dari dua tingkat pengenceran
yang berurutan menunjukkan jumlah antara 50 - 150, maka dihitung jumlah koloni dan
dikalikan faktor pengencerannya, kemudian diambil rata-rata.

Hasil dinyatakan sebagai angka kapang.dalam tiap gram atau tiap ml sampel. Untuk
beberapa kemungkinan lain yang berbeda dari pernyataan diatas, maka diikuti petunjuk
sebagai berikut :
a) Bila hanya salah satu diantara kedua cawan petri dari pengenceran yang sama
menunjukkan jumlah antara 10-150 koloni dihitung dari jumlah koloni dari kedua
cawan dan dikalikan dengan faktor pengencerannya.
b) Bila dari dua tingkat pengenceran yang lebih tinggi didapat jumlah koloni lebih besar
dari dua kali jumlah koloni pada pengenceran dibawahnya, maka dipilih tingkat
pengenceran terendah . Bila pada pengenceran yang lebih tinggi didapat jumlah
koloni kurang dari dua kali jumlah koloni pengenceran dibawahnya, maka diambi
langka rata-rata dari jumlah koloni dari kedua pengenceran tersebut. Hasil dinyatakan
sebagai angka kapang dalam tiap gram sampel
c) Bila dari seluruh cawan petri tidak ada satupun yang menunjukkan jumlah antara 10150 koloni, maka dicatat angka sebenarnya dari tingkat pengenceran terendah dan
dihitung sebagai angka kapang perkiraan.
d) Bila tidak ada pertumbuhan pada semua cawan dan bukan disebabkan karena faktor
inhibitor, maka angka kapang dilaporkan sebagai kurang dari satu dikalikan dengan
faktor pengenceran terendah ( < 1 x factor pengenceran terendah) (BBPOM RI,2006).
Beberapa kapang dapat langsung bersifat patogenik dan menyebabkan penyakit pada
manusia dan tanaman. Beberapa kapang merupakan penyebab berbagai infeksi pernafasan
dan kulit pada manusia. Beberapa jenis lain selama proses pembusukan pangan atau
pertumbuhannya dalam bahan pangan dapat memproduksi racun yang dikenal sebagai
mikotoksin. Sebagai suatu kelompok zat, mikotoksin dapat menyebabkan gangguan hati,
ginjal dan susunan syaraf pusat dari manusia maupun hewan ( Winarno, 1980 ).
Kapang adalah multiseluler, terdiri dari berbagai sel yang bergabung jadi satu. Di
bawah mikroskop dapat dilihat bahwa kapang terdiri dari benang yang disebut hifa,
kumpulan hifa ini dikenal sebagai miselium. Kapang tumbuh dengan cara memperpanjang
hifa pada ujungnya, dikenal sebagai pertumbuhan apical atau pada bagian tengah hifa yang
disebut pertumbuhan iterkalar. Hifa pada beberapa kapang mempunyai penyekat melintang
atau septa dan adanya septa ini dipergunakan untuk identifikasi. Hifa tersebut memanjang di
atas atau tembus melalui medium di mana kapang itu tumbuh (Soekarto, 2008).
Dalam laboratorium, sterilisasi media menggunakan otoklaf yang menggunakan
tekanan yang disebabkan uap air, sehngga suhunya mencapai 1210C. Sterilisasi terlaksana
bila mencapai tekanan 15 lbs dan suhu 1210C selama 15 menit.

Secara kimiawi, media biakan dipilah menjadi media sintetik dan media non sintetik.
Pada media sintetik, kandungan dan isi bahan yang ditambahkan diketahui secara terperinci.
Media sintetik sering digunakan untuk mempelajari sifat faali dan genetika mikroba. Media
nonsintetik menggunakan bahan yang terdapat dari alam; bahan-bahan ini biasanya tidak
diketahui kandungan kimiawinya secara rinci. Media nonsintetik sering digunakan dalam
laboratorium mikrobiologi karena mudah disiapkan dan harganya lebih murah dibanding
media sintetik. Selain itu media ini dapat digunakan untuk membiakan berbagai macam
mikroba.
B. Uraian Mikroba
Klasifikasi Mikroba
Klasifikasi adalah suatu istilah yang berkaitan dan seringkali digunakan atau
dipertukarkan dengan taksonomi. Taksonomi adalah ilmu mengenai klasifikasi atau penataan
sistematik organisme kedalam kelompok atau kategori yang disebut taksa (tunggal : takson).
Tetapi penyusunan tasonomi mikroorganisme mensyaratkan diidentifikasi sebagaimana
mestinya dan diberi nama. Kegiatan secara keseluruhan, yakni tentang pengklasifikasian,
penamaan dan pengidentifikasian mikroorganisme, disebut sebagai sistematika mikroba.
Setelah Leeuwehoek menyelami dunia mikroorganisme, sarjana zooloi seperti Muller
(1773) dan Ehenberg (1838) menggoongkan bakteri pada protozoa. Pada tahun 1872, Cohn
sarjana botani bangsa jerman, mengetahui adanya cirri-ciri yang menyebabkan ia lebih
condong menggolongkan bakteri (salah satu mikroorganisme) kepada tumbuhan. Klasifikasi
bakteri secara agak lengkap pada tahun 1875, dan sejak itu diadakan penyempurnaan secara
berangsur-angsur sampai sekarang.
Criteria dalam klasifikasi berbeda dengan mengklasifikasikan tumbuhan tingkat
tinggi dan hewan tingkat tinggi, yang didasarkan utama pada sifat-sifat morfologinya.
Klasifikasi Kapang
Berdasarkan bentuk kapang yang memiliki lebih dari satu sel berupa benang benang
halus yang disebut hifa, kumpulan hifa disebut miselium, dan berkembang biak dengan spora.
Khamir adalah mikroba bersel tunggal berbentuk bulat lonjong dan memperbanyak diri
dengan cara membentuk tunas (askospora), tetapi tidak membentuk miselum. Adapun
klasifikasi dari kapang adalah sebagai berikut :
Klasifikasi Kapang, Fungi tergolong Eumycetes, terdiri dari 4 kelas :
1)

Phycomycetes

2)

Ascomycetes

3)

Basidiomycetes

4)

Deuteromycetes (Rahmawan, 2010).


Morfologi Kapang
Kapang Fungi multiseluler mempunyai miselium atau filament, dan pertumbuhannya

dalam bahan makanan mudah sekali dilihat, yakni seperti kapas. Pertumbuhan fungi mulamula berwarna putih, tetapi bila telah momproduksi spsra maka akan terbentuk berbagai
warna tergantung dari jenis kapang. Sifat-sifat kapang baik penampakan mikroskopik
ataupun makroskopik digunakan untuk identifikasi dan klasifikasi kapang.
Kapang dapat dibedakan menjadi dua kelompok berdasarkan struktur hifa, yaitu hifa
tidak bersekat atau nonseptat dan hifa bersekat atau septet yang membagi hifa dalam manganmangan, dimana setiap mangan mempunyai inti satu atau lebih,.dinding penyekat pada
kapang disebut dengan septum yang tidak bertutup rapat sehingga sitoplasma masih dapat
bebas bergerak dari satu ruang keruang lainnya.
Kapang

tidak

berseptat

intinya

tersebar

disepanjang

septa.

Koloni kapang seperti kapas atau bulat dengan berbagai warna, permukaan kasar dan koloni
khamir memiliki bentuk bulat kecil putih, hampir menyerupai bakterimemiliki lebih dari satu
sel berupa benang benang halus yang disebut hifa, kumpulan hifa disebut miselium, dan
berkembang biak dengan spora. Khamir adalah mikroba bersel tunggal berbentuk bulat
lonjong dan memperbanyak diri dengan cara membentuk tunas (askospora), tetapi tidak
membentuk miselum
C. Prosedur
Alat :
Cawan petri
Pipet ukur 1 mL
Thermometer
Inkubator
Neraca analitik
Spatula

Mikropipet Tip
Botol sample
Autoclave
Pembakar spirtus
Magnet stirer
Beaker glass

Bahan :
Aqudes
PDA
Prosedur Kerja :

Homogenasi dan Pengenceran


1. Timbang contoh secara aseptik sebanyak 25 g kemudian masukkan ke dalam
plastik stomacher
2. Tambahkan larutan BFP sebanyak 225 ml. Homogenat ini merupakan larutan
pengenceran 10-1.
3. Dengan menggunakan pipet steril, ambil 1 ml homogenat diatas dan masukkan
ke dalam 9 ml larutan BFP untuk mendapatkan pengenceran 10-2.
4. Siapkan pengenceran selanjutnya (10-3) dengan mengambil 1 ml contoh dari
pengenceran 10-2 ke dalam 9 ml larutan BFP
5. Pada setiap pengenceran dilakukan pengocokan minimal 25 kali. Selanjutnya
lakukan hal yang sama untuk pengenceran 10-4, 10-5 dan seterusnya sesuai

kondisi contoh.
Metode Cawan Agar Tuang (pour plate method)
1. Pipet 1 ml dari setiap pengenceran 10-1, 10-2, dst dan masukkan ke dalam cawan
petri steril. Lakukan secara duplo untuk tiap pengenceran.
2. Tambahkan 15 ml 20 ml PDA yang sudah didinginkan dalam waterbath hingga
mencapai suhu (451) oC ke dalam masing-masing cawan yang sudah berisi
contoh. Supaya contoh dan media PDA tercampur sempurna lakukan pemutaran
cawan ke depan ke belakang dan ke kiri ke kanan.
3. Setelah agar menjadi padat, untuk penentuan mikroorganisme aerob inkubasi
cawan-cawan tersebut dalam posisi terbalik dalam inkubator pada suhu 22C
25C, selama 5 hari.
4. Lakukan kontrol tanpa contoh dengan mencampur larutan pengencer dengan
media PDA.
Perhitungan Koloni
1. Hitung cawan yang mengandung jumlah 10 koloni-150 koloni dan catat
pengenceran yang digunakan.
N=

C
[( 1 X n1 ) + ( 0,1 x n2 )] x ( d )

Dengan :
N
: Jumlah koloni produk, dinyatakan dalam koloni per ml atau koloni per g.
C : Jumlah koloni pada semua cawan yang dihitung
n1 : Jumlah cawan pada pengenceran pertama yang di hitung
n2 : Jumlah cawan pada pengenceran kedua yang di hitung
d
: Pengenceran pertama yang di hitung.