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Articulo Corto Carlos Andres Clavijo Abello

Determinacin de estndares para la siembra in-vitro y


posterior adaptacin de Pitahaya amarilla (Hylocereus
megalanthus) Colegio Manuelita Saenz
Carlos Andres Clavijo Abello
Aprendiz - Servicio Nacional de Aprendizaje SENA
Articulacin Colegio IED Manuelita Senz

Resumen
El presente trabajo se encuentra orientado a buscar la concentracin del medio utilizado
Murashige y Skoog para la Pitahaya amarilla, la dosis de hormonas as como la
concentracin de sacarosa, para permitir una obtencin de plantas in vitro para una
produccin en masa y para luego poder llegar al proceso de adaptacin. En la siembra se
usaron semillas certificadas, se desarroll el medio con una giberelina (GA3) en una
concentracin de 0,3 (mg/L). Este artculo menciona cada una de las etapas por las cuales la
Pitahaya ha transcurrido hasta su adaptacin en turba. En su proceso la Pitahaya demuestra
gran capacidad para adaptarse de in vitro al ambiente. Se ha notado gran crecimiento de
cada una de las plntulas desde su siembra in vitro. Para el sostenimiento de la plantas se
elabor una casa malla para sostener la temperatura adecuada de la Pitahaya que es entre 14
C a 26 C.

Abstract
The present work is oriented to find the concentration of the medium used Murashige and Skoog
for yellow pitahaya, the dose of hormones and sucrose concentration to allow for obtaining in
vitro plants for mass production and then to reach the adaptation process. At planting certified
seeds were used, the medium was developed with a gibberellin (GA3) in a concentration of 0.3
(mg / L). This article mentions each of the stages that has elapsed until the Pitahayas peat
adaptation. In the process a Pitaya shows great ability to adapt to the environment in vitro. There
has been tremendous growth of each of the seedlings from seed in vitro. For the maintenance of
the house plants mesh was developed to support the proper temperature Pitaya is between 14 C
to 26 C.

Palabras clave:
In vitro, Biotecnologa vegetal, Pitahaya, Acido Giberlico, GA3, Murashige y Skoog,
adaptacin, Semillas, Cactus.

Articulo Corto Carlos Andres Clavijo Abello

Keywords:
In vitro, Plant Biotechnology, Pitaya, gibberellic acid, GA3, Murashige and Skoog,
adaptation, Seeds, Cactus.

Introduccin
La Pitahaya (Fig. 1) tiene como nombre cientfico Hylocereus megalanthus y pertenece a la
familia de las Cactceas o Cactaceae. Un cactus epifito, nativo de la parte Nrdica de
Amrica del Sur, con retoos largos que producen una gigantes flores blancas, tal vez las
ms grandes de todos los cactus, seguidas por frutos amarillos, del tamao de las peras con
una carne blanca y acuosa. Los frutos son conocidos y comercializados bajo el nombre de
Pitahaya amarilla y son populares principalmente gracias a su color y forma poco comn.
Los tallos pueden estar por el suelo, subir o colgar. Estos a menudo tienen un grosor de tan
slo 1,5 cm, la produccin de races, espinas de 2-3 mm de largo, de color amarillento;
varios pelos en crecimiento joven, epidermis verde.
Se cultiva en zonas tropicales y tropicales altas, La planta es un cactus trepador de largos
tallos triangulares. Su flor posee una espectacular belleza. La fruta es ovoide, de color
verde al comienzo y amarilla en la madurez, su pulpa es blanca con mltiples y pequeas
semillas. La pitahaya es casi una porcin de agua deliciosamente azucarada, posee adems
fsforo, calcio y vitamina C. Su sabor es exquisito y con un tenue gusto dulce. Se suele
consumir al natural.
Considerando lo anterior la Pitahaya amarilla fue de gran importancia en el mercado de
Colombia hasta el cierre del mercado Japons, es importante tener en cuenta que se deben
realizar medios de cultivo de acuerdo a estndares nutricionales y otros factores de
crecimiento segn la planta y la tcnica trabajada como hormonas y vitaminas.
En esta ocasin la Pitahaya necesita de la germinacin de la semilla y elongacin del tallo,
para esto se utiliza el cido Giberlico (GA3) para inhibir la dormancia de la semilla, para
la adaptacin fue utilizado Murashi , Azobact, Fosforhiz, Controlador Biolgico,
Trhicoderma, EM y una Mezcla de ellos.
Figura 1

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Materiales y Mtodos
Fase 1:
Preparacin del medio de cultivo:
Se realiz un medio de cultivo, previamente establecido, bajo indicaciones de los
respectivos docente e instructor. Bajo la siguiente formulacin:
Medio de cultivo:
Se realiz solo un medio de cultivo,
de acuerdo a las siguientes formulaciones.
Embriognesis Cigtica
Soluciones MS (A- completo
H)
GA3
0,3 mg/L
Sacarosa
30 g/L
Agar
7g/L
Inositol
100mg/L
pH
5,8

Medio de Cultivo MS
Macronutrientes
Sustancia
mg/L
(NH4 )NO3
1650
MgSO4.7H2O
370
KNO3
1900
KH2PO4
170
CaCl2.2H2O
440
Micronutrientes
Sustancia
mg/L
FeSO4.7H2O
27,8
Na2EDTA
37,3
H3BO3
6,2
MnSO4.4H2O
22,3
ZnSO4.7H2O
8,6
Na2MoO4.2H2O 0,25
CuSO4.5H2O
0,025
CoCl2.6H2O
0,025
KI
0,83
Vitaminas
Sustancia
mg/L
myo- Inositol
100
Tiamina
0,1
Acido nicotnico
0,5
Glicina
2, 0
Piridoxina
0,5

En la preparacin del medio de cultivo se utilizaron algunos materiales y equipos como:


Frascos: Para su esterilizacin fueron lavados y desinfectados para luego ser
esterilizados, en la desinfeccin se utiliz Jabn para su previo lavado, despus
dejar en una solucin de NaClO al 2% para luego hacer un enjuague con agua
destilada, se dej secar y luego fue cubierto con papel craft y cinta adhesiva, por
ltimo es esterilizada en el Autoclave para eliminar por completo todo
microorganismo vivo presente en el frasco.

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Pipetas: Estas pasan por el mismo proceso de los frascos, son desinfectadas y luego
esterilizadas.
Vaso de precipitado (Fig. 2): Solo se hace un proceso de desinfeccin.
Papel aluminio: Solo se esteriliza.
Vinipel.
Agitador: Solo se desinfecta.
Autocalve.
PHmetro.
Figura 2

Luego ya de tener el material estril es utilizado, se preparan las soluciones MS para


agregar en el frasco, luego de preparadas se aaden una por una con pipeta y pipeteador
segn la concentracin necesaria, se aaden al Vaso de precipitado, despus se adiciona la
Sacarosa en la concentracin necesaria y se disuelve con el agitador, se mide el pH con el
pHmetro, despus se adiciona en frio el Agar en la concentracin necesaria, posteriormente
es calentado el Vaso de precipitado en una estufa hasta que el medio de cultivo llegue al
punto de ebullicin y seguidamente se sirve en los frascos estriles y se cubren con papel
aluminio y con vinipel, se rotula y almacena.
Seleccin De Material Vegetal:
Como principal objetivo para la siembra de Pitahaya in vitro, se compraron semillas de
dicha planta certificadas (Fig. 3), para la adaptacin de las plantas ya sembradas se
observaron algunas caractersticas de las plantas in vitro, como fue la altura del tallo y la
longitud de la raz, el tallo con una altura de entre 1 a 2 cm y la raz con una longitud de 1 a
1,5 cm con una cantidad de 3 races.
Desinfeccin del material vegetal:
Para la desinfeccin de semillas se realiz un protocolo: Solucin Jabonosa al 2% durante
20 minutos. Enjuagar con agua destilada estril tres veces. Transferir a hipoclorito de sodio
NaClO 2% durante 15 minutos. Enjuagar con agua destilada estril tres veces. Transferir a
etanol 70% durante 5 minutos y enjuagar con agua destilada estril tres veces.
Materiales de germinacin de semillas

Cajas Petri estriles


Toallas Scott
Jabn al 2%
Hipoclorito al 2%
Marcador Sharpie
Papel Aluminio estril
Papel vinipel estril
Vaso estril con alcohol

Figura 3

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Pinzas estriles
Jabn para Manos
Elementos de proteccin personal, Guantes de ltex, Polainas, Bata, Tapa bocas y
Gorro
Mecheros (2)
Fsforos
Atomizador con alcohol antisptico
Semillas de pitahaya

Fase 2:
Se observa un buen crecimiento de las plantas sembradas, el tiempo para inhibir la
dormancia de la semilla fue extenso, al salir la planta de la semilla se nota un gran
crecimiento de la misma.

Tiempo
Semana 1
Semana 2
Semana 3
Semana 4
Semana 5
Semana 6
Semana 7
Semana 8
Semana 9
Semana 10
Semana 11

Tallo

Raz
0
0
0
0,5
0,5
1
1
1,5
1,5
2
2

0
0
0
0
0
0
1
1
1
1,5
2

Fase 4:
Sustrato empleado:
La adaptacin de explantes da comienzo con la esterilizacin de la turba y la adicin de esta
en cada vaso. Se hicieron agujeros en los vasos en la parte inferior y superior para poder
mantener un riego constante sin tener que entrar en la necesidad de quitar el vaso que esta
por encima de la plantaPara adaptar las plantas provenientes de la siembra in vitro se utiliz
turba, la turba es un material orgnico, de color pardo oscuro y rico en carbono. Est
formado por una masa esponjosa y ligera en la que an se aprecian los componentes
vegetales que la originaron. Se emplea como combustible y en la obtencin de abonos
orgnicos.

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En las plantas se agregaron algunos Bioinsumos para su fertilizacin de dos veces por
semana, empezando por:
Planta 1 Agua de grifo
Planta 2 Murashi
Planta 3 Azobact
Planta 4 Fosforhiz
Planta 5 Metarhizium
Planta 6 Trcichoderma
Planta 7 EM
Planta 8 Mezcla de 3 y 4
Planta 9 Mezcla de 4,5
Planta 10 Mezcla de 3 y 6
Materiales para la adaptacin de plntulas de pitahaya

Cajas Petri estriles


Turba estril
Vasos desechables de 12 onzas
Toallas Scott y papel aluminio estriles
Marcador Sharpie
Pinzas estriles
Jabn para Manos
Elementos de proteccin personal, Guantes de ltex, Polainas, Bata, Tapa bocas y
Gorro
Mecheros (2)
Fsforos
Frasco lavador
Atomizador con alcohol anticeptico.
Plntulas de Pitahaya.
Cinta de enmascarar.

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Resultados
Fase 1:
La eleccin del material vegetal fue favorable debido a que estaba en ptimas
condiciones interna y externamente en este caso las semillas. La realizacin del
medio fue favorable debido a que no hubo contaminacin alguna, adems la
hormona que se utiliz funciono adecuadamente, en este caso fue Acido Giberlico
(GA3) el cual permiti romper la dormancia y aumentar el crecimiento de los tallos,
ayudando as a la germinacin de la semilla en un mes. En el momento de la
siembra todo fue favorable debido a la previa esterilizacin de los materiales
utilizados, evitando as problemas en la introduccin de las semillas al medio.
Algunas de las plantas pasaron a la fase de adaptacin gracias a que soportaron las
condiciones de su entorno evitando as su marchitamiento dando al final un
favorable resultado.

Fase 2:
12
10

N Sembradas

N de plantas
contaminadas

4
2

N de plantas
adaptadas

Plantas sembradas 1

2,5
2
1,5
1
0,5
0

Tallo
Raiz

Semana 1
Semana 2
Semana 3
Semana 4
Semana 5
Semana 6
Semana 7
Semana 8
Semana 9
Semana 10
Semana 11

2,5
2
1,5
1
0,5
0

Tabla 1

Toma de registro de la siembra de semillas,


el resultado es de una sola planta in vitro.

Articulo Corto Carlos Andres Clavijo Abello

El crecimiento de las plantas sembradas tuvo un notable crecimiento, Algunas de las


plantas pasaron a la fase de adaptacin gracias a que soportaron las condiciones de su
entorno evitando as su marchitamiento dando al final un favorable resultado.

Fecha de la siembra del material: 25/5/2015


Fecha aproximada de germinacin: 25 de Julio 05 de Agosto

Fase 4:
El traslado de las plantas desde el medio de germinacin hacia la turba (previamente
esterilizada) dio resultados favorables gracias a que los encargados de este proceso no se
encontraban contaminados por algn agente qumico, resaltando as el cmo las plantas
posean caractersticas necesarias para su adaptacin, como una buena raz y un tallo
estable. El agua destilada y esterilizada cumpli adecuadamente su funcin cada vez que las
plantas lo requeran. El resultado obtenido en las plntulas de pitahaya fue positivo gracias
a que se realiz una casa malla que permiti un control de humedad, aireacin, riego y en
especial un adecuado dominio de la temperatura necesaria. (14 C a 26 C).
Fecha de adaptacin del material: 12 de septiembre del 2014
Se observa un crecimiento en la adaptacin entre 2 a 4 cm de longitud (Tab. 2) y un
crecimiento de hojas bastante notorio con algunos Bioinsumos (Tab. 3), como el caso del
EM y la mezcla del Fosforhiz y el Metarhizium. El riego fue realizado dos veces por
semana.

Tallo
5
4
3
2
1
0

Hoja

Tallo

Se representa el crecimiento del Tabla 2


tallo de una planta en adaptacin.

2,5
2
1,5
1
0,5
0

Se representa la consistencia
de las hojas en adaptacin.

Hoja

Tabla 3

Articulo Corto Carlos Andres Clavijo Abello

Comparacin de crecimiento del tallo con los diferentes Bioinsumos

Ttulo del grfico

Tallo

4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0

Semana
1

Semana
2

Semana
3

Semana
4

Semana
5

Semana
6

Semana
7

Planta 1

2,5

2,8

Planta 2

1,5

1,5

2,5

Planta 4

1,5

1,5

Planta 6

2,5

2,5

Planta 7

2,5

2,5

Planta 9

1,5

Planta 10

1,5

1,5

Seguimiento de humedad y temperatura en la casa malla

Humedad (%)
80
60
40
Humedad (%)

20
22-oct

20-oct

18-oct

16-oct

14-oct

12-oct

10-oct

08-oct

06-oct

04-oct

02-oct

30-sep

28-sep

26-sep

24-sep

22-sep

20-sep

18-sep

16-sep

14-sep

12-sep

Articulo Corto Carlos Andres Clavijo Abello

Temperatura (C)
30
20

10

Temperatura (C)

22-oct

20-oct

18-oct

16-oct

14-oct

12-oct

10-oct

08-oct

06-oct

04-oct

02-oct

30-sep

28-sep

26-sep

24-sep

22-sep

20-sep

18-sep

16-sep

14-sep

12-sep

Control de temperatura y humedad dentro de la casa malla construida

Da
12/sep
15/sep
16/sep
17/sep
18/sep
19/sep
22/sep
23/sep
24/sep
25/sep
26/sep
29/sep
30/sep
1/Oct
2/Oct
3/Oct
6/Oct
13/Oct
15/Oct
16/Oct
20/Oct
23/Oct

Temperatura
22,8 C
22,0 C
23,6 C
22,0 C
26,3 C
23,5 C
24,7 C
24,8 C
26,4 C
25,9 C
26,6C
25,4C
24,6 C
23,4 C
22,6 C
23,1 C
24,6 C
23,7C
25,5C
24,9C
23,5C
22,0C

Humedad
75%
67%
73%
62%
61%
58%
55%
70%
74%
73%
73%
65%
66%
67%
59%
62%
52%
70%
71%
65%
63%
61%

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Discusin
Uno de los problemas que presenta el sembrar in vitro es la no germinacin de las semillas,
generalmente se da a lugar a las concentraciones de hormonas en grandes cantidades, en
esta ocasin la Pitahaya no requiere de estas concentraciones tan por encima de lo normal,
la poca concentracin denoto un gran crecimiento y germinacin. Como dijo el Seor
Castaeda Diaz en su artculo realizado en el ao 2013, establece que la concentracin del
cido Giberlico (GA3) es de 0,1 mg/L y aade Acido Naftalenacetico (ANA) la
concentracin es de 0,1 mg/l , segn esto apoya la idea de que menores concentraciones
ayudan en la germinacin de las semillas en un tiempo considerablemente corto. Otra
problemtica es la contaminacin en grandes masas, la contaminacin es algo que se puede
controlar, para esta ocasin fue el buen manejo de las semillas a sembrar y el
establecimiento de un protocolo para la desinfeccin y esterilizacin de los materiales a
utilizar.

Conclusiones
1. Se infiere que el medio del cultivo es funcional para la germinacin de semillas de
Pitahaya, siendo la concentracin de la hormona Acido Giberlico (GA3) de 0,1
mg/L.
2. Se deduce que la temperatura de la casa malla est dentro de los entandares de la
Pitahaya que es de 14 C a 26 C, con un promedio de 24,17 C.
3. Se concluye que estableciendo un protocolo para desinfeccin y esterilizacin los
medios de cultivos tienen poca probabilidad de contaminacin.
4. Se difiere que en la adaptacin hay un mayor crecimiento del testigo en la
elongacin del tallo y un mayor desarrollo de hojas en los tratamientos 7 y 9.

Agradecimientos
El autor de este articulo expresa agradecimientos al Servicio Nacional De Aprendizaje
SENA en articulacin con el colegio IED Manuelita Senz, por la orientacin y formacin
que permitieron realizar esta investigacin.
Profesor Carlos Alberto Delgado por el acompaamiento y orientacin en las actividades de
laboratorio.
Instructora Liceth Alejandra Cabrejo, por su colaboracin en la formulacin de los medios
de cultivo.

Linkografia
Castaeda Omar, Aprendiz Sena-Manuelita Senz, 2013.

http://www.redalyc.org/pdf/609/60921383001.pdf
http://www.bdigital.unal.edu.co/4471/1/7207004.2011.pdf

Articulo Corto Carlos Andres Clavijo Abello

http://huitoto.udea.edu.co/FrutasTropicales/pitahayad.html
http://www.pasturasdeamerica.com/articulos-interes/notas-tecnicas/inhibirdormancia-semillas-plantas-forrajeras/inhibir-dormancia-semillas-plantasforrajeras.pdf