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Assuntos Gerais

Quim. Nova, Vol. 30, No. 3, 740-744, 2007


TERMINOLOGIA PARA AS TCNICAS ANALTICAS DE ELETROMIGRAO EM CAPILARES#
Jos Alberto Fracassi da Silva*
Instituto de Qumica, Universidade Estadual de Campinas, CP 6154, 13083-970 Campinas SP, Brasil
Wendell Karlos Tomazelli Coltro e Emanuel Carrilho
Instituto de Qumica de So Carlos, Universidade de So Paulo, CP 780, 13560-970 So Carlos SP, Brasil
Marina Franco Maggi Tavares
Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, CP 26077, 05513-970 So Paulo SP, Brasil
Recebido em 4/7/06; publicado na web em 19/1/07

This is a contribution that presents a translation of the work Terminology for Analytical Capillary Electromigration Techniques by
Riekkola and collaborators (Pure Appl. Chem., Vol. 76, No. 2, 443-451, 2004) from IUPAC for the Portuguese Language. Additional
terms that had not been defined in native Portuguese were included for the benefit of the local community. Additional notes were also
included to clarify some important concepts and to highlight the differences between techniques.

INTRODUO
Tcnicas que empregam eletromigrao em capilares tm se
tornado populares e crescido em importncia na qumica analtica,
especialmente no campo da bioanlise. Parte dos termos empregados pode ser encontrada em um artigo sobre a terminologia de
eletroforese em qumica clnica1, mas em muitos casos estes no
podem ser aplicados a tcnicas capilares e no levam completamente em conta as definies sugeridas pela IUPAC2. Em 1994,
Knox publicou um artigo sobre a terminologia a ser empregada em
tcnicas de eletrosseparao3, embora este no esteja em concordncia com a nomenclatura da IUPAC para cromatografia4. O presente artigo discute e define os termos relevantes utilizados na prtica laboratorial, incluindo os nomes das vrias tcnicas baseadas
nos princpios da eletromigrao. Deve ser notado que diversas aplicaes prticas podem se situar em casos limites, no que diz respeito ao nome de uma destas tcnicas em particular.
As separaes efetuadas com tcnicas de eletromigrao em capilar utilizam capilares de dimetro interno reduzido e empregam
campos eltricos elevados, sendo baseadas em diferentes princpios
de separao que, em alguns casos, podem se sobrepor. Estas incluem as tcnicas eletroforticas capilares e as tcnicas cromatogrficas
capilares que utilizam campo eltrico para bombeamento dos fluidos. Tcnicas de eletromigrao em capilares tm se mostrado altamente eficientes na separao de ons pequenos, tanto orgnicos como
inorgnicos, frmacos, explosivos, corantes, polmeros, protenas e
peptdeos, DNA e RNA, clulas, partculas, etc.5-10.
A presena do fluxo eletrosmtico (EOF, electroosmotic flow)
pode contribuir para a separao, mesmo quando no necessria
(por ex., em focalizao isoeltrica), ou pode ser completamente
indesejvel. O EOF tem sua origem na atuao de um campo eltrico sobre as espcies carregadas na regio difusa da dupla camada
eltrica, formada devido carga da parede interna do capilar. Como
exemplo, para um capilar de slica fundida em contato com uma
#
Artigo traduzido de Terminology for analytical capillary electromigration
techniques, publicado em Pure Appl. Chem. 2004, 76, 443, por M. L. Riekkola,
J. A. Jnsson e R. M. Smith. Publicao aprovada pelo Comit Brasileiro para
Assuntos de Qumica junto IUPAC.
*
e-mail: fracassi@iqm.unicamp.br

soluo com valor de pH acima de 2, os grupos silanol da superfcie


apresentam-se desprotonados e proporcionam carga negativa parede. Para contrabalancear as cargas da parede h, na regio prxima
parede, o excesso de cargas positivas, provenientes dos ctions da
soluo. A aplicao do campo eltrico ao longo do capilar causa a
movimentao dos ons positivamente carregados, presentes na camada difusa, no sentido do ctodo. Para distncias maiores que a
definida pelo plano de cisalhamento, no qual a velocidade
eletrosmtica zero, encontra-se que esta velocidade aumenta rapidamente, at que para distncias maiores que a espessura da camada
difusa (comprimento de Debye) assume um valor constante. Para
experimentos de eletromigrao em capilares, a espessura da camada difusa muito menor que o raio do capilar, de modo que o perfil
de velocidade radial aparece como linear. Como conseqncia, o
EOF permite altas eficincias nas separaes, em comparao s
tcnicas que empregam presso para bombeamento dos fluidos, cujo
perfil de velocidade radial parablico.
Algumas das vantagens destas tcnicas de eletromigrao incluem eficincias de separao extremamente altas, tempo de anlise relativamente curto, pequenas quantidades de amostra e baixo
custo de anlise. Alm disso, instrumentos comerciais automatizados
permitem operao confivel em anlises de rotina.
Tipicamente so utilizados capilares com dimetro interno de
20-100 m e comprimento de 20-100 cm. Na separao de molculas pequenas, capilares de slica fundida sem recobrimento da superfcie interna so comumente empregados. Para prevenir a adsoro
de analitos ou componentes da matriz e para eliminar ou controlar o
EOF, o recobrimento ou a modificao qumica dos grupos silanol
presentes na superfcie pode ser necessria. Recobrimentos neutros
e carregados tm sido usados com sucesso em grande variedade de
aplicaes.
A injeo da amostra no capilar pode ser feita hidrodinamicamente,
atravs da criao de um gradiente de presso entre os reservatrios
da amostra e do eletrlito de corrida, enquanto as extremidades do
capilar esto mergulhadas nestes reservatrios. Utilizando a injeo
eletrocintica, um determinado valor de potencial aplicado entre os
reservatrios da amostra e eletrlito durante um intervalo de tempo
definido, enquanto a extremidade apropriada do capilar inserida no
reservatrio da amostra, ao passo que a outra extremidade colocada
no reservatrio do eletrlito de corrida.

Vol. 30, No. 3

Terminologia para as tcnicas analticas de eletromigrao em capilares

Idealmente, efeitos de disperso da zona durante a separao


so devidos apenas difuso longitudinal. Entretanto, eletrodisperso
(causada pelas diferenas de condutividade entre as zonas do eletrlito
e da amostra), bem como os gradientes de temperatura no interior
do capilar podem causar efeitos adicionais de alargamento das bandas. O tipo de tcnica de introduo de amostra, volume injetado em
excesso, tipo de matriz e fenmeno de adsoro na parede do capilar
podem vir a ser fontes adicionais de alargamento das bandas. O controle da temperatura do capilar de separao, a escolha apropriada
do tampo de corrida, as tcnicas de tratamento da superfcie do
capilar, o tipo de amostra e o modo como injetada podem ser cruciais
para o sucesso de uma separao particular.
Aditivos, como solventes orgnicos, ciclodextrinas ou polmeros,
podem ser usados para controlar a migrao e o formato dos picos
dos solutos. Ciclodextrinas podem tambm ser utilizadas como parte do recobrimento da parede do capilar, em gis rgidos e em fases
dispersas micelares. Capilares preenchidos com gis contendo ligaes cruzadas, como por ex. a poliacrilamida, podem ser utilizados
como meio na separao baseada no tamanho de biomolculas de
alta massa molar. A incorporao de diferentes seletores quirais ao
tampo ou eletrlito de corrida tem sido utilizada com sucesso na
separao de compostos quirais de baixa massa molar. Polmeros
lineares emaranhados so freqentemente utilizados na separao
de biomolculas.
Em eletrocromatografia capilar11,12, as separaes so efetuadas
em colunas capilares contendo recheio particulado, como em
cromatografia lquida de alta eficincia, ou material monoltico.
Capilares sem recheio e contendo apenas a parede recoberta, como
os capilares utilizados em cromatografia gasosa capilar, tambm
tm sido empregados.
No futuro, microcanais contidos em estruturas baseadas em
microdispositivos tendero a ser utilizados com maior freqncia
em tcnicas de eletromigrao capilar, aps maiores desenvolvimentos no campo da nanotecnologia.
H disponvel em Lngua Portuguesa alguns artigos de reviso
que envolvem fundamentos das tcnicas eletroforticas de separao13-16 e aspectos relacionados17-19.

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mente) com os analitos so adicionadas ao eletrlito de corrida.


Nota: A mesma tcnica conhecida por ACE (affinity capillary
electrophoresis).
Eletroforese Capilar de Peneiramento (CSE, capillary
sieving electrophoresis)
Tcnica de separao eletrofortica em capilar contendo um meio
peneirador (por ex., rede de polmeros lineares emaranhados) no
eletrlito de corrida. A separao baseada nas diferenas de forma e tamanho entre os analitos carregados.
Eletroforese Capilar em Gel (CGE, capillary gel
electrophoresis)
Caso especial de eletroforese capilar de peneiramento, no qual
o capilar preenchido com gel contendo ligaes cruzadas.
Focalizao Isoeltrica Capilar (CIEF, capillary isoelectric
focusing)
Tcnica eletrofortica para separao de analitos anfteros de
acordo com seu ponto isoeltrico, atravs da aplicao de um campo eltrico ao longo de um gradiente de pH gerado no capilar.
Isotacoforese Capilar (CITP, capillary isotachophoresis)
Tcnica de separao eletrofortica efetuada em um sistema
descontnuo de eletrlitos, no qual os analitos migram de acordo com
suas mobilidades eletroforticas, formando uma cadeia de zonas adjacentes que se movem com igual velocidade entre duas solues, os
eletrlitos lder e terminador. As condies que devem ser satisfeitas
para que os analitos migrem em zonas adjacentes so que as mobilidades dos ons do eletrlito lder e terminador sejam maior e menor,
respectivamente, que as mobilidades dos ons na amostra.
Cromatografia Eletrocintica (EKC, electrokinetic
chromatography)

TCNICAS DE ELETROMIGRAO EM CAPILARES


Eletroforese Capilar (CE, capillary electrophoresis)
a tcnica de separao efetuada em capilares e baseada somente nas diferenas entre as mobilidades de espcies carregadas
(analitos), em eletrlitos que podem ser aquosos ou orgnicos. Estes podem conter aditivos, como ciclodextrinas, complexantes ou
ligantes, que interagem com os analitos e alteram suas mobilidades
eletroforticas.
Notas: 1. Esta tcnica tambm conhecida por eletroforese capilar de zona (CZE, capillary zone electrophoresis) ou em soluo livre (FSCE, free solution capillary electrophoresis). 2. O
uso do termo eletroforese capilar (CE) como um termo coletivo para
todas as tcnicas de eletromigrao no recomendado, pois muitas destas tcnicas envolvem outros mecanismos de separao que
no o descrito acima. 3. Alguns autores tm se referido utilizao
de ciclodextrinas carregadas no eletrlito como cromatografia
eletrocintica.

Tcnica de separao baseada na combinao de eletroforese e


interaes dos analitos com aditivos (por ex., tensoativos), de modo
a formar uma fase dispersa que se mova com velocidade diferente
do analito. De maneira a promover a separao, os analitos ou a
fase dispersa devem possuir carga.
Notas: 1. Esta definio no totalmente compatvel com a definio de cromatografia. 2. A mesma tcnica tambm conhecida
por cromatografia capilar eletrocintica (ECC, electrokinetic
capillary chromatography).
Cromatografia Eletrocintica Micelar (MEKC, micellar
electrokinetic chromatography)
Caso especial da cromatografia eletrocintica, em que a fase
dispersa no capilar micelar.
Nota: A mesma tcnica conhecida por cromatografia capilar
eletrocintica micelar (MECC, micellar electrokinetic capillary
chromatography).

Eletroforese Capilar de Afinidade (CAE, capillary affinity


electrophoresis)

Cromatografia Eletrocintica em Microemulso (MEEKC,


microemulsion electrokinetic chromatography)

uma tcnica eletrofortica de separao em capilares na qual substncias capazes de interagir especificamente (muitas vezes bio-especifica-

Caso especial da cromatografia eletrocintica, no qual uma


microemulso empregada como fase dispersa.

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da Silva et al.

Nota: A mesma tcnica tambm chamada de cromatografia


capilar eletrocintica em microemulso (MEECC, microemulsion
electrokinetic capillary chromatography).

Quim. Nova

(1)
Potencial Eletrocintico,

Eletrocromatografia Capilar (CEC, capillary


electrochromatography)
Caso especial da cromatografia lquida capilar, no qual a movimentao da fase mvel atravs de um capilar preenchido ou
recoberto com a fase estacionria promovida pelo fluxo
eletrosmtico (que pode ser assistido por presso). O tempo de reteno determinado pela combinao da migrao eletrofortica e
da reteno cromatogrfica.
TERMOS RELACIONADOS S TCNICAS DE
ELETROMIGRAO EM CAPILARES
Eletrosmose
o movimento de um lquido atravs de uma membrana (ou
capilar) como conseqncia da aplicao de um campo eltrico.
Nota: A velocidade linear do fluxo dividida pelo campo eltrico aplicado chamada de mobilidade eletrosmtica (u ou eo).

o potencial no plano de cisalhamento que se encontra na


camada difusa e est associado ao fenmeno da eletrosmose.
negativo quando os vetores de campo eltrico (E) e velocidade do
fluxo (eo) esto na mesma direo e sentido. No clculo do potencial eletrocintico a partir dos fenmenos eletrocinticos, assume-se que o plano de cisalhamento divide a camada difusa em
duas regies distintas: uma imvel e outra mvel. Como no esto disponveis dados confiveis a respeito da permitividade e
viscosidade na regio da dupla camada eltrica prxima
interface, o clculo do potencial eletrocintico est sujeito a crticas. Torna-se, portanto, essencial indicar em todos os casos quais
equaes foram utilizadas para clculo do . Entretanto, para as
mesmas suposies sobre permitividade e viscosidade, todos os
fenmenos eletrocinticos devem fornecer o mesmo valor para o
potencial eletrocintico2.
Notas: 1. Se as condies referidas acima forem seguidas, o
potencial eletrocintico pode ser relacionado mobilidade do fluxo
eletrosmtico, eo, pela Equao de Smoluchowski:

Fluxo Eletrosmtico em Volume


o fluxo em volume dividido pelo campo eltrico aplicado sobre o plug total ou capilar. Corrigido da ref. 2.
Tempo de Migrao Eletrosmtico, teo
o tempo requerido para que o lquido percorra o comprimento
efetivo do capilar, Lef, devido eletrosmose. Este tempo comumente
medido como o tempo de migrao de um marcador neutro, conhecido como marcador do fluxo eletrosmtico e cuja mobilidade
assumida desprezvel com relao ao analito.
Velocidade Eletrosmtica, eo
Veja eletrosmose2.
Nota: Em tcnicas de eletromigrao capilar, esta velocidade
positiva, por conveno, no sentido da extremidade de injeo de
amostra para a extremidade de deteco do capilar, caso contrrio
ela assume valor negativo. A velocidade eletrosmtica pode ser calculada como eo = Lef / teo, o comprimento efetivo do capilar dividido pelo tempo de migrao eletrosmtico.

(2)
onde r a permitividade da soluo (usualmente tomada como a
permitividade do solvente puro), 0 a permitividade do vcuo e
a viscosidade dinmica da soluo, na qual se assume que a razo
entre a permitividade e a viscosidade independente do campo eltrico na dupla camada eltrica. 2. O potencial eletrocintico tambm conhecido por potencial zeta.
Tempo de Migrao, tm
o tempo requerido para que o analito percorra o caminho efetivo do capilar, Lef, que a distncia entre os pontos de injeo e
deteco.
Taxa de Migrao (em eletroforese),
a distncia de migrao dividida pelo tempo, s vezes chamada de velocidade de migrao. O smbolo tambm usado para
velocidade2.
Velocidade Eletrofortica, ep

Campo Eltrico, E
a fora que atua sobre uma partcula carregada dividida pela
sua carga eltrica.
Nota: Em tcnicas de eletromigrao capilar, esta tomada como
a componente axial do campo, que a diferena de potencial aplicada nas extremidades do capilar dividida pelo comprimento total
do capilar, Ltot. Existe tambm um campo eltrico radial proveniente da dupla camada eltrica formada nas proximidades da parede
do capilar, que est envolvida no fenmeno da eletrosmose. O comprimento total do capilar tipicamente maior que o comprimento
efetivo, Lef. Veja tambm tempo de migrao.
Mobilidade Eletrosmtica, u ou eo
Velocidade eletrosmtica dividida pelo campo eltrico.

a velocidade que um analito carregado adquire sob ao de


um campo eltrico, em relao ao eletrlito de corrida. Tambm
chamada de taxa de migrao (em eletroforese).
Mobilidade Eletrofortica, ou ep
a taxa de migrao observada (em eletroforese), , ou a velocidade eletrofortica, ep, dividida pela magnitude do campo eltrico aplicado, E, em um dado meio.
Notas: 1. Mobilidades podem ser expressas com sinal negativo,
pois a migrao de solutos ou partculas pode ocorrer no sentido
contrrio quele do campo eltrico (que tomado como referncia).
2. Em um meio de suporte slido, apenas valores aparentes podem
ser determinados. (Modificado da ref. 2). 3. A mobilidade
eletrofortica de um on dada por:

Vol. 30, No. 3

Terminologia para as tcnicas analticas de eletromigrao em capilares

743

(3)
(8)
Nesta equao, f o coeficiente de atrito, z o nmero de cargas elementares do on e e a carga elementar. O coeficiente de
atrito aumenta com o tamanho do on e com a viscosidade do
eletrlito suporte. Para ons esfricos rgidos, de raio r, movendose em um meio de viscosidade , o coeficiente de atrito pode ser
estimado utilizando-se a Lei de Stokes:
(4)
Coeficientes de atrito para partculas de outros formatos, como
elipsides, podem ser estimados utilizando-se equaes mais complexas.

2. kMEKC no deve ser confundido com o fator de reteno k (em


cromatografia de coluna). Entretanto, anlogo razo de distribuio de massas (em cromatografia).
RAZO DE DISTRIBUIO DE MASSAS (EM
CROMATOGRAFIA ELETROCINTICA EM
MICROEMULSO), kMEEKC
Definido de forma anloga razo de distribuio de massas
em MEKC, kMEKC, substituindo-se os termos para as micelas pelos
termos correspondentes para a microemulso.

Mobilidade Eletrofortica Efetiva, ef


LISTA DE ACRNIMOS
A mobilidade eletrofortica efetiva de um analito dada pela
somatria das mobilidades eletroforticas (j) de todas as n espcies relacionadas entre si por equilbrios qumicos, multiplicadas
pela distribuio destas espcies (j):

(5)
Velocidade Total do Analito (em eletroforese capilar), tot
a soma da velocidade eletrofortica, ep, com a velocidade
eletrosmtica, eo.
(6)
Esta quantidade pode ser medida experimentalmente dividindo-se o comprimento efetivo do capilar pelo tempo de migrao
(Lef / tm).
Notas: 1. Dependendo dos sinais e magnitudes relativas destas
velocidades, a velocidade total de um analito pode possuir o mesmo
sentido da velocidade eletrosmtica ou o sentido contrrio. 2. A velocidade total a velocidade do on medida como o seu deslocamento
em relao parede do capilar dividida pelo tempo. 3. O termo velocidade aparente tambm denomina a velocidade total do analito.
Tempo de Migrao das Micelas, tmc
determinado experimentalmente pelo tempo de migrao de
um composto que completamente retido na fase micelar.
RAZO DE DISTRIBUIO DE MASSAS (EM
CROMATOGRAFIA ELETROCINTICA MICELAR),
kMEKC
definida como:
(7)
onde nmc e naq so os nmeros de moles de analito nas fases micelar
e aquosa, respectivamente, K a constante de distribuio e Vmc e
Vaq so os volumes correspondentes das fases.
Notas: 1. Para o caso de analitos eletricamente neutros, kMEKC
pode ser diretamente calculado a partir dos tempos de migrao:

ACE
CAE
CE
CEC
CGE
CIEF
CITP
CZE
CSE
EKC
MECC
MEECC
MEEKC
MEKC

Eletroforese Capilar de Afinidade


Eletroforese Capilar de Afinidade
Eletroforese Capilar
Eletrocromatografia Capilar
Eletroforese Capilar em Gel
Focalizao Isoeltrica Capilar
Isotacoforese Capilar
Eletroforese Capilar de Zona
Eletroforese Capilar de Peneiramento
Cromatografia Eletrocintica
Cromatografia Capilar Eletrocintica Micelar
Cromatografia Capilar Eletrocintica em Microemulso
Cromatografia Eletrocintica em Microemulso
Cromatografia Eletrocintica Micelar

SMBOLOS
e
E
f
K
kMEEKC
kMEKC
Lef
Ltot
naq
nmc
r
teo
tm
tmc
Vaq
Vmc
z
r
0

ef
eo
ep

eo

Carga elementar
Campo eltrico
Coeficiente de atrito
Constante de distribuio
Razo de distribuio de massas em MEEKC
Razo de distribuio de massas em MEKC
Comprimento efetivo do capilar
Comprimento total do capilar
Nmero de moles de analito na fase aquosa
Nmero de moles de analito na fase micelar
Raio de Stokes
Tempo de migrao eletrosmtica
Tempo de migrao do analito
Tempo de migrao das micelas
Volume da fase aquosa
Volume da fase micelar
Nmero de cargas elementares
Permitividade da soluo
Permitividade do vcuo
Potencial eletrocintico (ou zeta)
Viscosidade dinmica
Mobilidade eletrofortica
Mobilidade efetiva
Mobilidade eletrosmtica
Mobilidade eletrofortica
Taxa de migrao
Velocidade eletrosmtica

744

ep
tot
u

da Silva et al.

Velocidade eletrofortica
Velocidade total do analito
Mobilidade eletrosmtica

REFERNCIAS
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2. McNaught, A. D.; Wilkinson, A.; Compendium of Chemical Terminology
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3. Knox, J. H.; J. Chromatogr., A 1994, 680, 3.
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13. Tavares, M. F. M.; Quim. Nova 1996, 19, 173.
14. Tavares, M. F. M.; Quim. Nova 1997, 20, 493.
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16. Jager, A. V.; Tavares, M. F. M.; Quim. Nova 2001, 24, 363.
17. Silva, J. A. F. da; Quim. Nova 2003, 26, 56.
18. Gervasio, A. P. G.; Lavorante, A. F.; Moraes, M. C. B.; Gin, M. F.; Miranda,
C. E. S.; Carrilho, E.; Quim. Nova 2003, 26, 65.
19. Miranda, C. E. S.; Carrilho, E.; Gervasio, A. P.; Gin, M. F.; Quim. Nova
2002, 25, 412.