Metabolismo do nitrogenio - continuao

A redutase do nitrato regulada em funo de fatores ambientais e em funo

da fotossntese (quanto maior a taxa fotossinttica, mais nitrato produzido, para ser
incorporado ao esqueleto carbonado, se as condies so desfavorveis fotossntese,
a reduo do nitrato precisa ser diminuda para evitar o acmulo de nitrito).
- Modelo do dmero da redutase do nitrato, indicando os trs domnios de
ligao, cujas sequencias so similares nos eucariotos:

O NADH encontra-se como um dmero, e tem como constituintes de uma PTN,

grupos prostticos, que aqui so 3: Flavina adenina, HEME (anel tetrapilorico, que no
interior tem um tomo de ferro, no o magnsio como na clorofila), e um complexo
molibdnio.
O NADH liga-se ao domnio de ligao do FAD de cada subunidade e indica a
transferncia de 2 eltrons a partir do grupo carboxila terminal (C), at o grupo amino
terminal (N). O nitrato reduzido no complexo molibdnio prximo regio amino
terminal, formando gua e nitrito.
A atividade da redutase do nitrato envolve redues em sequencia (como uma
CTE) at que os eltrons sejam utilizados para reduzir nitrato a nitrito.
*NADPH Tb pd ser utilizado, depende da clula onde o nitrato est sendo reduzido.
Modelos para a estrutura da redutase do nitrato (NO3-)

Funciona como um dmero. Cada monmero tem trs domnios principais, que
ligam um cofator de molibdnio, um heme e um FAD. Os domnios esto
apresentados com a mesma cor, nos dois esquemas, sendo que o grupo FAD
est representado em azul, o grupo heme em roxo, o e o cofator de
molibdnio em preto.

Existe o acoplamento da PTN 1433, envolvida com a degradao (enderea

uma PTN degradao) qd ela se associa a um dos anis a redutase do nitrato
encaminhada degradao.
Condies que desfavorecem a assimilao do nitrognio levam a degradao dessa
PTN.

- -Modelo da estrutura da redutase do nitrito (NO2-)

(monmero com dois grupos prostticos: um centro de 4Fe-4S e um
siroheme):

No uma enzima de regulao, a regulao sobre a redutase do nitrato, a

redutase do nitrito tem expresso constitutiva. No h produo de nitrito se no
houver nitrato. Havendo mais nitrato, h mais produo de nitrito, havendo menos
nitrato, h menos produo de nitrito.
Possui 2 dominios, 1 contm um sitio de ligao a ferredoxina reduzida, e outro
que contm 4 atomos de enxofre associados a 4 atomos de Fe, e Tb ao Siro heme. O
Ferro o elemento chave no transporte de eltrons.

Modelo do acoplamento do transporte

fotossinttico de eltrons, via ferredoxina,
para a reduo do nitrito, pela redutase do
nitrito.

A reduo do nitrito ocorre dentro do cloroplasto, a enzima se beneficia em ter a

luz como forma de energia, para oxidar a molcula de gua, formar um poder redutor
(ferredoxina reduzida, produto do FSI). medida que tem luz, mais ferredoxina
reduzida, e mais transporte de eltrons convertendo o nitrito em amonio (NH4+). * no
esquema esta errado amnio.

A cinase da redutase do nitrato ativada por alguns fatores que levam a

alteraes na quantidade de clcio no citosol, qd algum estresse ocorre a fosforilao
da redutase do nitrato ativada, fazendo com que um dos anis seja fosforilado,
permitindo que a PTN 14-3-3 seja ativada.
Msm fosforilada a redutase do nitrato ativa, mas nesse estado ela se torna alvo
da PTN 14-3-3, que a torna inativa, e pd ser destinada a degradao. Esse acoplamento
reversvel. Ctions bivalentes pdm alterar a associao c a ptn 14-3-3.
Estresses que limitam a fotossntese fazem com q a PTN seja fosforilada e
posteriormente degrada, situaes inversas estimulam o desacoplamento da PTN 1433.
Luz inibe a cinase da redutase do nitrato. O que estimula a fotossntese, estimula
a redutase do nitrato.
O ambiente influencia a reduo do nitrato, e a expresso da redutase do nitrato.
Fatores que alteram a fotossntese esto relacionados com aumento ou reduo da
expresso de genes relacionados com a redutase do nitrato.

Excesso de glutamina: indica que a clula tem quantidades suficientes de N.

Deficincia de N: Falta substrato.
Ritmo circadiano: Durante a noite a transcrio alta, e durante o dia ela cai,
garantindo que durante o dia hajam mts transcritos para manter a atividade da
redutase do nitrato.
Citocinina: Maior crescimento, maior demanda por N.
Sacarose: Mt sacarose indica que h alta atividade fotossinttica.
Alto CO2: MT fotossntese, MT esqueleto carbnico.
Baixo CO2: MT amnio fotorrespiratorio.
Oxigenio: Fotorrespirao.
Anoxia: HIPTESE: Em ausncia de oxignio ocorre acumulo de poder redutor, com isso
aumenta a atividade da enzima, que utiliza NADH.

O nitrognio absorvido como nitrato ou amnio.

- Amonio: absorvido por transportadores, e rapidamente convertido em aminocido
(planta praticamente no transporta amnio pelo xilema, mas trasporta nitrato).
- Nitrato: pd ser armazenado no vacolo. Pd ser convertido a nitrito (pela redutase do
nitrato), que - importado p o plastdio, e convertido em amnio (redutase do nitrito)
que pd ser incorporado em aminocidos, no plastdio (glutamina p ex.), ou no citosol.
Pd ser transportado para a parte area, onde vai ocorrer basicamente o msm, mas a
fonte de eletrons a ferredoxina reduzida. No plastideo de uma raiz a fonte de eletrons
a oxidao da glicose-6-fosfato desidrogenase pela via oxidativa das pentoses
fosfatadas.

Amonio no pd acumular dentro da clula, pq desfaz o gradiente eletroqumico de

prtons:

Ocorre perda na capacidade de produzir ATP pq desfaz o gradiente eletroquimico da

clula.
Assimilao do amnio:

Incorporao do N em um esqueleto carbnico.

Complexo GS/GOGAT (sintetase da glutamina/ sintase do glutamato): Primeira enzima
que atua na incorporao do amnio:
amnio + glutamato = glutamina, reao catalisada pela GS, h gasto de ATP.
glutamina + 2- oxoglutarato so metabolizados pela GOGAT formando 2 glutamatos,
utilizando NADH.
*Funo da GS no citosol: auxilia na incorporao do amnio fotorrespiratorio, e do
proveniente da degradao de ptns.
Processos de produo do amnio: Fotorrespirao, reduo do nitrato, degradao de
ptns.
*GOGAT: encontrado basicamente em plastdios.

Possvel atuao da desidrogenase

do glutamato na assimilao do
amnio

Incorpora o amnio ao 2-oxoglutarato, utilizando o poder redutor na forma de NADPH.

Atua na assimilao do amnio, provavelmente relacionado com a fotorrespirao, para
auxiliar no sistema GS/GOGAT, e Tb pd degradar o glutamato (sentido inverso),
gerando 2-oxoglutarato que pd ser utilizado no CAC.

Exemplo de transferncia de grupo

amino envolvendo diferentes
aminocidos

(2N/5C)

(1N/4C)

(2N/4C)

(1N/5C)

Glutamina e Asparagina, elementoschave no transporte e no

armazenamento do nitrognio. Unem
metabolismo do C e do N
Em plantas com baixa taxa fotossinttica, o aminocido produzido o aspartato,
que gasta menos carbono por nitrognio, em situaes de alta taxa fotossinttica, o
metabolismo pd gastar mais C para cada N.
A sintetase da asparagina utiliza glutamina + aspartato, com gasto de ATP,
produzindo asparagina + glutamato.
A forma mais econmica de guardar N na forma de asparagina, pq a relao
C/N baixa. Ocorre durante noite, pois h menos gasto de C/N.

A assimilao do NH4+ em
aminocidos regulada
pela luz

Esses genes so predominantemente expressos, e as ptns tem maior atividade

durante o dia, produzindo glutamina (gasta mais C/N), e durante a noite, ocorre
aumento da expressao a sintetase da asparagina (ASN1) converte, que converte
glutamina e glutamato em asparagina (forma mais econmica de C/N), sendo uma
forma de armazenamento de N (forma inerte de aminocido).
Durante a noite a GDH (glutamato desidrogenase) est envolvida no catabolismo
do glutamato, envolvida na produo do amnio e de alfa-cetoglutarato (ciclo de krebs,
que mais alta durante a noite). Durante o dia a GDH atua no sentido contrario, auxilia
na assimilao do amnio, formando glutamato.

Regulao de genes
envolvidos na reduo e
assimilao de N

A sacarose, atua da msm forma que a luz, aumenta a expresso da redutase do

nitrato e do nitrito, e do gene que codifica para a GS, e diminui a expresso de genes

que codificam para a asparagina. Pq durante o dia h fotossntese, e mais favorvel

produzir a glutamina que possui maior C/N.
Se houver acumulo do glutamato ou glutamina, h inibio da GS e aumento na
expresso da sintetase da asparagina, pq se esta acumulando glutamato ou glutamina,
significando que os processos que utiilizam glutamato e glutamina esto mais lentos
que sua produo, sinalizando que o metabolismo deve armazenar N, e uma forma de
armazenamento a produo de aminocido inerte (asparagina).
Pq uma planta deficiente em GOGAT tem problemas para sobreviver em ambiente
natural?
Baixo CO2: alta taxa respiratria, alta produo de amnio, mas sem a GOGAT o
amnio acumula, e toxico, elas tem dificuldades para incorporar o amnio
fotorrespiratorio, com alto CO2, h inibio de fotorrespirao, produo baixa de
amnio, e no ocorrem problemas causados pelo amnio.

Importncia da fotossntese como

fornecedora de esqueletos de
carbono para a sntese de diferentes
tipos de aminocidos

Precursores dos aminocidos: piruvato, alfa-cetoglutarato, oxaloacetato, eritrose 4- P,

ribose- 5P e fosfoglicolato (fotorrespirao).
A partir dos aminocidos formados, so produzidas ptns, cidos nucleicos, produo de
energia (catabolismo de aminocidos), etc..
Principais aminocidos formados, a partir da fixao inicial: Glutamina, glutamato,
asparagina e aspartato.
Influencia do ambiente na reduo e assimilao do nitrognio.