Benemrita Universidad Autnoma de Puebla

Facultad de Ciencias Qumicas

Lic. Qumico Farmacobilogo
Laboratorio de serologa
Prctica
Morfologa celular (leucocitos)
Alumnos:
Diego Armando Fras Vzquez
Verano 2015

Objetivo Identificar la morfologa celular de un frotis sanguneo de sangre

periferia especficamente de la lnea leucoide

Esquema de trabajo

Fundamento
Para estudiar la sangre se utilizan frotis o extensiones sanguneas: sobre un
portaobjetos de vidrio se coloca una gota de sangre que es extendida con otro
portaobjetos. Despus de secarse al aire la extensin sangunea se la tie con
algn colorante ya sea por mtodo de wrigth o por tincin con hemocolorantes.

Introduccin
La sangre es un tejido lquido, al que puede considerarse como una variedad
de tejido conectivo, que circula por el aparato cardiovascular gracias al impulso
que le proporciona el corazn. La sangre est compuesta por dos fracciones
bien diferenciables:
clulas sanguneas o elementos formes de la sangre El conjunto de las
clulas sanguneas suponen el 45% del volumen sanguneo. Hay diversos tipos
de elementos formes en la sangre:
eritrocitos (de 4.106 a 5.106/mm3 de sangre)
plaquetas (de 200.000 a 400.000/mm3)

 leucocitos (de 6000-9000/mm3)

granulocitos
neutrfilos (55-60% de los leucocitos)
eosinfilos (2-5%)
basfilos (0-1%)
agranulocitos
linfocitos (30-35%)
monocitos (3-7%)
plasma sanguneo: es la sustancia intercelular lquida en la que nadan las
clulas y que puede asimilarse a la matriz extracelular en otros tipos de tejido
conectivo. El plasma sanguneo supone el 55% del volumen sanguneo y est
compuesto por:
agua
electrolitos
protenas (albmina, fibringeno, globulinas...)
nutrientes (glucosa, lpidos, aminocidos)
sustancias nitrogenadas no proteicas (urea, creatinina,...)
sustancias reguladoras (hormonas, vitaminas)
hay diferencias importantes entre la matriz extracelular del tejido conectivo y
el plasma sanguneo que justifican el que la sangre sea considerada como un
tipo de tejido diferente al tejido conectivo. Estas diferencias estriban en:
el tipo de compuestos qumicos que forman parte del plasma son muy
diferentes a los que componen la matriz del tejido conectivo
los compuestos qumicos que forman parte del plasma no son sintetizados
por las propias clulas sanguneas, al contrario de lo que sucede con los
principales componentes del tejido conectivo que s son sintetizados por las
clulas propias del tejido (fibroblastos, osteoblastos, condrocitos)
el hecho de que buena parte de los componentes del plasma (agua,
electrolitos, molculas de pequeo peso molecular) puedan atravesar la pared
de los vasos e incorporarse al espacio intercelular conectivo con facilidad y
viceversa (ante cambios de presin osmtica, por ejemplo) permite considerar
al plasma como la "matriz extracelular" de la sangre.

FUNCIONES DE LA SANGRE
transportar oxgeno y nutrientes a las clulas
transportar anhdrido carbnico y otros residuos del metabolismo celular
transportar hormonas
transportar productos (anticuerpos) y clulas (leucocitos) involucrados en
labores defensivas del organismo
LEUCOCITO NEUTRFILO
Los leucocitos granulocitos neutrfilos son clulas incoloras, como el resto de
los leucocitos, que permanecen en la sangre solamente unas horas (6 h)
hasta que alcanzan el tejido conectivo donde tienen una vida media de 2-5 das
en condiciones normales. Los neutrfilos, al igual que los otros leucocitos,
llegan al tejido conectivo atravesando la pared de las vnulas postcapilares
(donde previamente han quedado "marginados") por diapdesis a travs de las
clulas endoteliales.
1.- Estructura
en sangre circulante son clulas esfricas con 7 m dim. pero en los frotis
sanguneos se aplanan y tienen un dimetro de 10-12 m
ncleo caracterstico:
compuesto por 2-5 lbulos unidos por pequeos puentes de material nuclear:
la lobulacin es mayor cuanto ms maduro es el neutrfilo (las clulas jvenes
son neutrfilos en banda, con el ncleo solo hendido, y las clulas maduras
tienen ncleos polilobulados). El ncleo polilobulado hace parecer que la clula
tiene varios ncleos, por eso se les llama impropiamente leucocitos
polinucleares, en realidad son leucocitos polimorfonucleares.
las cromatina est muy condensada en grumos y en algunos neutrfilos de
las mujeres aparece un apndice nuclear caracterstico (corpsculo de Barr)
que corresponde al cromosoma X
no se ve nuclolo
citoplasma:
grnulos azurfilos o primarios: se tien con el azul de metileno pero son
escasos en los leucocitos adultos y apenas se pueden distinguir en las
preparaciones de rutina
grnulos especficos o secundarios: tienen poco afinidad por los colorantes
(apenas se tien con la eosina) y son pequeos por lo que no se ven en las

preparaciones rutinarias, aunque son los responsables del ligero color rosa con
que se tie el citoplasma.
2.- Ultraestructura
membrana algo irregular
ncleo segmentado con grumos densos de cromatina
citoplasma
halo perifrico con abundante actina y miosina
ap. Golgi, REG y mitocondrias en pequea cantidad
grnulos de glucgeno grnulos azurfilos o primarios: son lisosomas con
un tamao ( 0.5 m) y electrondensidad apreciables. Estos grnulos
contienen enzimas hidrolticas (fosfatasa cida, -galactosidasa, glucurunidasa, esterasa, 5'-nucleotidasa,...) y peroxidasa
grnulos especficos o secundarios: son ms abundantes (el doble) y ms
pequeos (0'1-0'2 m) que los azurfilos y tienen forma, tamao y
electrondensidad variable. Contienen productos (fosfatasa alcalina, lisozima,
colagenasa, protenas con actividad antibacteriana -fagocitinas- ...) que se
liberan al medio extracelular y que actan como mediadores de la inflamacin
3.- Funcin
Los neutrfilos forman parte del sistema defensivo y su papel es la fagocitosis
de bacterias o clulas muertas que se encuentran en el tejido conectivo.
LEUCOCITO EOSINFILO
Los eosinfilos son clulas que solo estn 3-8 h en sangre. Las cifras de
eosinfilos en sangre muestran una variacin diurna: son mximas por la
maana y mnimas por la tarde. Una vez que alcanzan el tejido conectivo,
sobre todo de la piel, del aparato respiratorio y del tubo digestivo, tienen una
vida media de 8-12 das.
1.- Estructura
en la sangre circulante tienen 9 m de dim. pero en las extensiones
sanguneas alcanzan 12-17 m de dim.
ncleo
bilobulado habitualmente y su cromatina nuclear es menos densa que la del
neutrfilo
citoplasma
grnulos especficos: se tien de rosa con la eosina y son bastante gruesos
grnulos azurfilos: son ms escasos y difciles de ver

2.- Ultraestructura
ncleo con cromatina densa
citoplasma
escasas vesculas de REG, ap. de Golgi y mitocondrias
grnulos especficos: son grandes, tienen una forma ovoide y contienen en su
interior un cristaloide central electrondenso rodeado por una matriz menos
electrondensa. Estos grnulos contienen los siguientes productos:
protena bsica principal: tiene accin destructora sobre los parsitos y
activa plaquetas
protena eosinfila catinica: destruye parsitos y neutraliza la accin de la
heparina
neurotoxina derivada de eosinfilos: tiene un potente efecto neurotxico y
destruye parsitos diversos enzimas lisosomiales, entre ellos histaminasa,
fosfatasa cida, glucurunidasa, arilsulfatasa y peroxidasa
grnulos azurfilos: son pequeos y contienen fosfatasa cida y arilsulfatasa
y otras enzimas hidrolticas propias de los lisosomas
3.- Funcin
Los eosinfilos son tambin clulas fagocitarias pero que parecen mostrar
preferencia por la fagocitosis de complejos Ag-AC. Tambin parecen estar
involucrados en la destruccin de parsitos:
Los eosinfilos tienen tambin algn papel en los procesos alrgicos ya que
su nmero aparece aumentado en estos procesos patolgicos.
LEUCOCITO BASFILO
Los basfilos son los menos numerosos de los leucocitos sanguneos y cuando
se incorporan al tejido conectivo tienen una funcin similar a la de las clulas
cebadas.
1.- Estructura
tamao similar al resto de los leucocitos granulocitos
ncleo
es bilobulado o presenta una simple hendidura nuclear
cromatina condensada
citoplasma
grnulos especficos: no son muy numerosos pero son muy grandes y
dispersos por el citoplasma y llegan a "oscurecer" al ncleo ya que se tien con

el azul de metileno del Giemsa. Estos grnulos son metacromticos cuando se

tien con azul de toluidina o de tionina.
grnulos azurfilos o inespecficos: son lisosomas que se tien con el azul de
metileno y que apenas se pueden distinguir de los grnulos especficos
2.- Ultraestructura
membrana irregular con receptores para la fraccin Fc de la IgE e IgE
asociada a ellos
ncleo con cromatina heterognea
citoplasma
escasos orgnulos (REG, REL, ap. Golgi, mitocondrias, grnulos de
glucgeno...)
grnulos especficos: son grandes (hasta ms de 1 m), de forma variable y
bastante electrondensos pero homogneos (no se ven los cristales que se ven
en los grnulos de las clulas cebadas).
Estos grnulos contienen:
histamina (aumenta la permeabilidad vascular y contrae el m. liso)
heparina (anticoagulante) y condroitn sulfato
ATP
serotonina (contrae el m. liso)
factor quimiotctico de eosinfilos y neutrfilos
proteinasas
enzimas de degradacin de los glicosaminoglicanos
grnulos azurfilos o inespecficos: son lisosomas de 0.5 m y que
contienen enzimas hidrolticas similares a las de los grnulos azurfilos de los
neutrfilos
en el momento de la degranulacin se produce la liberacin de fosfolipasa A
que hace que se sinteticen en ese momento, a expensas de fosfolpidos de la
membrana, productos que no estn contenidos en grnulos secretorios pero
que tambin son secretados al espacio extracelular:
leucotrieno C (aumenta la permeabilidad vascular y contrae el m. liso)
prostaglandinas
productos del metabolismo del oxgeno (producen dao tisular y tienen poder
microbicida: perxido de hidrgeno, radicales superxido, radicales hidroxilo)
3.- Funcin

Similar a la de las clulas cebadas

LINFOCITO
Los linfocitos son ms numerosos en los nios jvenes que cualquier otro de los
leucocitos pero en los nios mayores y en los adultos estn en una proporcin
inferior a los leucocitos neutrfilos. Los linfocitos se producen en la mdula
sea y se vierten a la sangre en forma de linfocitos inmaduros. Estos linfocitos
inmaduros maduran en puntos determinados del sistema inmunitario que
reciben el nombre de rganos linfoides primarios (timo y mdula sea). Los
linfocitos maduros recirculan por la sangre para ir a localizarse en lugares
determinados de los rganos linfoides secundarios (ganglios linfticos, bazo,
tejido linfoide asociado a mucosas) o de otros tejidos. En estas zonas los
linfocitos maduros pueden entrar en contacto con un Ag (un Ag concreto para
cada tipo de linfocito) y convertirse en un linfocito activo. Los linfocitos son las
clulas principales del sistema inmunitario. Estas clulas tienen una vida media
variable entre varios das y varios meses.

1.- Estructura
linfocitos pequeos
son la mayora de los linfocitos circulantes en sangre y parecen ser los
linfocitos inmaduros que circulan desde la mdula sea a los lugares de
maduracin
tienen de 6-9 m de dim. en los frotis sanguneos
ncleo: ocupa casi toda la clula y presenta cromatina densa
citoplasma: es un estrecho anillo ligeramente basfilo con algn grnulo
azurfilo
linfocitos grandes
son solo el 3% de los linfocitos circulantes y parecen ser los linfocitos
maduros/activos que circulan desde los lugares donde maduraron [mdula
sea o timo] o se activaron [rganos linfoides secundarios] hasta los tejidos
tienen de 9-15 m de dim. en los frotis
ncleo ovoideo o reniforme y cromatina densa
citoplasma escaso basfilo con algn grnulo azurfilo 2.- Ultraestructura
membrana con pequeas proyecciones citoplasmticas (microvellosidades
cortas). El M.E. de barrido permite distinguir dos tipos de linfocitos:
linfocitos con pocas microvellosidades (linfocitos T)
linfocitos con abundantes microvellosidades (linfocitos B)
ncleo con cromatina condensada

 citoplasma: escaso y contiene alguna mitocondria, algunos ribosomas libres,

algn lisosoma y ocasionales agregados de glucgeno
3.- Tipos de linfocitos
En los frotis sanguneos teidos de rutina y en las micrografas electrnicas de
transmisin no hay diferencias estructurales apreciables entre los linfocitos. Sin
embargo hay tipos diferentes de linfocitos circulantes:
linfocitos B (15%)
son clulas que se producen en la mdula sea y adquieren sus atributos
caractersticos (marcadores de membrana) madurando en la propia mdula
sea. Como en las aves esta maduracin se produce en una estructura que se
llama bolsa de Fabrizio, a este tipo de linfocitos se le denomina linfocito B
los linfocitos B "maduros" recirculan por la sangre hasta alcanzar los tejidos y
zonas especficas de los rganos linfoides secundarios donde se pondrn en
contacto con los antgenos correspondientes
linfocitos T (80%)
son clulas que se producen en la mdula sea pero adquieren sus atributos
especiales (marcadores de membrana) madurando en el timo, por eso se les
llama linfocitos T
los linfocitos T "maduros" recirculan por la sangre hasta alcanzar los tejidos y
zonas especficas de los rganos linfoides secundarios
clulas nk (5%)
entre estas clulas se encuentran clulas madre hematopoyticas circulantes
(pluri-, multi- y/o unipotenciales) y clulas o linfocitos NK (de natural killer)
los linfocitos NK son linfocitos que tienen funciones similares a los linfocitos
TK (o TC) pero actan de forma inespecfica (no maduran en el timo y no le son
presentados los antgenos por medio de las molculas del HMC)
4.- Diferenciar linfocitos B de linfocitos T
Aunque en las preparaciones de rutina no pueden distinguirse los linfocitos B
de los linfocitos T, hay tcnicas que permiten diferenciarlos:
con el microscopio electrnico de barrido los linfocitos B tienen una superficie
irregular con muchas microvellosidades mientras que los linfocitos T tienen una
superficie casi lisa
con tcnicas inmunocitoqumicas:
los linfocitos B tienen en su superficie inmunoglobulinas: con tcnicas
inmunocitoqumicas que emplean AC especficos contra esas inmunoglobulinas
(Ac-antiAC) se puede detectar la presencia de estas inmunoglobulinas en la
superficie celular

 los linfocitos T tienen en su superficie receptores de clulas T: con tcnicas

inmunocitoqumicas que emplean AC especficos contra esos receptores (ACantirreceptores de clulas T) se puede detectar su presencia en la superficie
celular. Todos los linfocitos T expresan en su superficie una protena Thy-1 que
puede ser detectada inmunocitoqumicamente.
los linfocitos expresan protenas de membrana que reciben el nombre de
molculas CD (de "cluster of differentiation"). Los diversos tipos de linfocitos se
pueden distinguir con tcnicas inmunocitoqumicas que usan AC especficos
para poner de manifiesto los diversos tipos de molculas CD:
los linfocitos B expresan molculas CD22
los linfocitos T jvenes expresan molculas CD2
todos los linfocitos T expresan molculas CD3
los linfocitos TH expresan molculas CD4
los linfocitos TC y TS expresan molculas CD8

MONOCITO
Los monocitos son las clulas sanguneas que, cuando emigran al tejido
concectivo, se convierten en los macrfagos, en los diversos tipos celulares del
sistema fagoctico mononuclear.
1.- Estructura
son las clulas ms grandes de una extensin sangunea: 12-15 m de
dim.
tienen un ncleo grande ligeramente hendido (reniforme) con cromatina
bastante condensada
el citoplasma contiene bastantes grnulos azurfilos (lisosomas)
2.- Ultraestructura ncleo excntrico reniforme
lisosomas
RE escaso
alguna inclusin citoplasmtica
superficie celular bastante lisa
Localizacin
Los monocitos pasan slo unos das en la sangre antes de migrar a los tejidos,
donde se diferencian hasta convertirse en macrfagos. Los macrfagos
sobreviven desde varios meses hasta aos en el tejido conjuntivo.
Funcin

Los monocitos forman el sistema reticuloendotelial, que participa sobre todo en

la fagocitosis. Destruyen clulas muertas e ingieren material extrao. Los
antgenos se procesan y pueden presentarse a los linfocitos para iniciar una
respuesta inmunitaria adaptativa. Los macrfagos tambin tienen una funcin
proinflamatoria, con la liberacin de diversas citocinas.

Realizacin de las extensiones de sangre perifrica

La extensin sangunea es de gran importancia en algunas enfermedades
hematolgicas, ya que su diagnstico puede realizarse o sospecharse slo con
observar la morfologa de las clulas de la sangre.

Uno de los mtodos ms empleados para la realizacin del frotis sanguneo es

el mtodo de los dos portaobjetos. Consiste en la extensin de una gota de
sangre sobre un portaobjetos mediante otro portaobjetos. La tcnica es la
siguiente:
1. Depositar una
portaobjetos.

pequea

gota

de

sangre

en

el

extremo

de

un

2. Con el borde de otro portaobjetos a 45 grados, tocar la gota, esperar a

que la sangre se distribuya por capilaridad y despus deslizar
suavemente un portaobjetos sobre el otro en sentido longitudinal hasta
que la gota quede bien extendida sobre la superficie del primar
poirtaobjetos.
3. Dejar secar el frotis.
Cuando la extensin se realiza por este procedimiento, el frotis presenta tres
zonasdiferenciadas, en las que la morfologa eritrocitaria puede variar y la
distribucin de leucocitos puede ser diferente.
La zona en que inicialmente se deposit la gota (cabeza) es excesivamente
gruesa y no puede ser valorada adecuadamente. A continuacin se extiende
el cuerpo de la extensin, que corresponde a la regin intermedia del frotis y
en ella existe un reparto equilibrado de las clulas; es la zona ideal para la
observacin microscpica. Por ltimo, al final de la extensin, se encuentran
las barbas o la cola, es una zona fina dnde las clulas adoptan una
disposicin de cordones.
Observacin al microscopio de las extensiones de sangre perifrica:
Las extensiones una vez teidas y secadas pueden ser observadas al
microcopio ptico.
Inicialmente se puede observar la extensin con objetivos de aumento bajo o
intermedio (x20, x40). Con ellos se puede visualizar reas suficientemente
extensas para hacernos una idea global del aspecto del frotis. Con una barrido
de diferentes zonas del cuerpo de la extensin observaremos los hemates (el
elemento ms abundante) y entre ellos los leucocitos (los nicos elementos
nucleados en condiciones normales en sangre perifrica) y sus diferentes tipos,
y por ltimo comprobaremos las presencia de las plaquetas. En esta primera
aproximacin podemos comprobar el adecuado tamao, forma y coloracin de
los hemates, as como su uniformidad en estos tres aspectos. Tambin
podremos observar la presencia dispersa entre los hemates de los leucocitos,
entre los que visualizaremos diferentes tipos (heterogeneidad) como son en
orden de abundancia: los neutrfilos, linfocitos, monocitos, eosinfilos y
basfilos. Por ltimo no hay que descuidar la observacin de los elementos ms
pequeos de la sangre perifrica: las plaquetas.
La correcta apreciacin de los detalles morfolgicos de las clulas de la sangre
se realiza con el objetivo de inmersin en aceite (x100). El campo de
visualizacin es ms reducido, pero se ven mucho mejor los detalles

morfolgicos celulares, con lo que podremos reconocer fcilmente los

diferentes leucocitos (y realizar la frmula leucocitaria), los hemates y las
plaquetas.
La correcta forma de observar el frotis es realizando un barrido sobre el mismo,
de forma que evitemos (salvo que expresamente deseemos lo contrario) pasar
dos veces por la misma zona.
Valores aproximados de frotis sanguneo en un conteo de 100 celulas
Neutrfilos segmentados..50-70
Neutrofilos en banda.0-5
Linfocitos..20-40
Monocitos ..3-11
Eosinofilos0-5
Basfilos0-1

Preguntas
Menciona los diferentes leucocitos presentes en sangre ?
En sangre perifrica normal podremos encontrar segn por nmero de clulas
encontradas en un barrido normal: neutrfilos segmentados, neutrfilos en
banda, linfocitos, monocitos, eosinofilos y basfilos.(la observacin de la
tcnica de barrido es por tincin de Wright o tincin rpida con
hemocolorantes, estos nos permiten una observacin preliminar pero no muy
especfica de detalles acerca de detalles por alguna patologa) a veces se
pueden hacer visualizaciones de algunas clulas inmaduras pero depender de
la patologa.
Menciona el porcentaje normal de una diferencial y su funcin de cada
uno en el sistema inmune?
Valores aproximados de frotis sanguneo en un conteo de 100 clulas

Neutrfilos segmentados..50-70%
Neutrfilos en banda.0-5%
Linfocitos..20-40%
Monocitos..3-11%
Eosinofilos0-5%
Basfilos0-1%
Los neutrfilos forman parte del sistema defensivo y su papel es la fagocitosis
de bacterias o clulas muertas que se encuentran en el tejido conectivo.
Los eosinofilos son tambin clulas fagocitarias pero que parecen mostrar
preferencia por la fagocitosis de complejos Ag-AC. Tambin parecen estar
involucrados en la destruccin de parsitos:
Los eosinofilos tienen tambin algn papel en los procesos alrgicos ya que su
nmero aparece aumentado en estos procesos patolgicos.
La funcin de los basfilos es Similar a la de las clulas cebadas
La funcin de los linfocitos depender del tipo ya sea T o B en caso de los T son
los encargados generalmente de la activacin de los macrfagos, activacin de
los B y activacin de replicacin, control de la replicacin y en estos son ms
relacionados con la respuesta inmune celular; mientas que los linfocitos tipo B
son encargados de la respuesta inmune humoral y estos son encargados de la
creacin de anticuerpos, citosinas, etc. para la respuesta inmune especifica.
Los monocitos forman el sistema reticuloendotelial, que participa sobre todo
en la fagocitosis. Destruyen clulas muertas e ingieren material extrao. Los
antgenos se procesan y pueden presentarse a los linfocitos para iniciar una
respuesta inmunitaria adaptativa. Los macrfagos tambin tienen una funcin
proinflamatoria, con la liberacin de diversas citocinas.

Como se distinguen las clulas leucoides en el microscopio?

Bibliografa

Inmunologa celular y molecular 6ta edicin ABBAS editorial

elsevier
Hematologa, la sangre y sus enfermedades 2da edicin J.
PEREZ/ GOMEZ ALMAGUER editorial mc Graw Hill
Hematologa e inmunologa 4ta edicin GARGANI editorial mosby
Inmunologa bsica y clnica 10 edicin PARSLOW editorial
manual moderno
Introduccin a la inmunologa humana 6ta edicin GEFFNER
editorial panamericana