UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

INSTITUTO DE CINCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA
Curso de Especializao em Microbiologia

FUNGOS ENDOFTICOS: FONTES PROMISSORAS DE NOVAS

SUBSTNCIAS COM ATIVIDADES ANTIOXIDANTE E ANTIVIRAL

Monique Sula Silva

Belo Horizonte
2009

Monique Sula Silva

FUNGOS ENDOFTICOS: FONTES PROMISSORAS DE NOVAS

SUBSTNCIAS COM ATIVIDADES ANTIOXIDANTE E ANTIVIRAL

Monografia apresentada ao Departamento de

Microbiologia do Instituto de Cincias Biolgicas
da Universidade Federal de Minas Gerais como
requisito parcial para obteno do ttulo de
Especialista em Microbiologia.
Orientador: Carlos Augusto Rosa
Laboratrio de Ecologia e Biotecnologia de
Leveduras ICB/UFMG
Co-orientadora: Mariana de Lourdes Almeida
Vieira
Laboratrio de Ecologia e Biotecnologia de
Leveduras ICB/UFMG

Belo Horizonte
2009

No o mais forte da espcie que sobrevive,

nem mesmo o mais inteligente,
mas sim aquele que responder
melhor s mudanas.
Darwin

AGRADECIMENTOS
A Deus pelos ensinamentos.
coordenao da ps-graduao em Microbiologia ICB/UFMG.
Ao professor e orientador Carlos Augusto Rosa pela oportunidade e incentivo
construo deste trabalho.
Mariana, minha co-orientadora, pela pacincia e dedicao em me ensinar a
melhor forma, o melhor caminho, para a construo de um trabalho.
Mariana, pelo excelente convvio!
Aos meus pais, Marclia e Lzaro, pelo apoio e confiana nas minhas decises,
pelo exemplo de vida, companheirismo, amizade e respeito.
minha irm Magali, por todo amor e carinho, pelas palavras reconfortantes, por
todos os momentos que passamos juntas.
Ao Antnio Otvio, pelos momentos de descontrao e alegria, imprescindveis
para repor as energias.
Ao Daniel, por todos os momentos felizes, fora e companheirismo; e, claro, pelas
ajudinhas com o computador!
Juliana e ao Saulo pelo convvio, amparo e amizade.
A todos os meus amigos e familiares por tornarem a minha vida mais feliz!

SUMRIO
Lista de figuras ................................................................................................................V
Lista de tabelas................................................................................................................VI
Resumo............................................................................................................................07
Lista de siglas e smbolos................................................................................................08
1 INTRODUO .............................................................................................................09
2 OBJETIVOS ................................................................................................................11
2.1 OBJETIVO GERAL ...................................................................................................11
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ....................................................................................11
3 METODOLOGIA ..........................................................................................................12
4 REVISO BIBLIOGRFICA .......................................................................................13
4.1 DIVERSIDADE DE FUNGOS ...................................................................................13
4.2 MICRORGANISMOS ENDOFTICOS.......................................................................14
4.2.1 Fungos Endofticos.................................................................................................19
4.2.2 Relao endoftico-planta hospedeira....................................................................21
4.3 FUNGOS ENDOFTICOS COMO FONTES DE METABLITOS SECUNDRIOS22
4.4 METABLITOS SECUNDRIOS COM ATIVIDADE ANTIOXIDANTE...................28
4.4.1 Conceito de radicais livres.....................................................................................28
4.4.2 O estresse oxidativo e as doenas relacionadas..................................................32
4.4.3 As defesas antioxidantes contra o estresse oxidativo..........................................34
4.4.4 atividade antioxidante dos metablitos secundrios produzidos por fungos
endofticos........................................................................................................................35
4.5 METABLITOS SECUNDRIOS COM ATIVIDADES ANTIVIRAIS........................43
4.5.1 Antivirais .................................................................................................................43
4.5.2 Metablitos secundrios com atividade antiviral produzidos por fungos
endofticos........................................................................................................................44
5 CONCLUSO...........................................................................................................52
6 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS...........................................................................53

LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Antagonismo balanceado entre fungo endoftico e planta hospedeira........23
Figura 2: Estrutura qumica do taxol..............................................................................24
Figura 3: Estrutura qumica da criptocandina A.............................................................26
Figura 4: Estrutura qumica do cido ambuico..............................................................26
Figura 5: Estrutura qumica do paclitaxel.....................................................................27
Figura 6: Estrutura molecular da substncia grafislactona A isolada do fungo
Cephalosporium sp. IFB-E001.......................................................................................38
Figura 7: Estrutura qumica trolox,6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil croman-2-cido
carboxlico........................................................................................................................40
Figura 8: Estrutura qumica da citrinina..........................................................................40
Figura 9: Estrutura qumica do para tautomero (Ia) e orto tautomero (Ib)......................40
Figura 10: Estrutura molecular da substncia pestacina................................................41
Figura 11: Estrutura molecular da substncia

isopestacina.......................................41

Figura 12: Estrutura qumica do tirosol............................................................................43

Figura 13: Estrutura qumica da Polularina A, B, C e D..................................................45
Figura 14: Estrutura qumica de brefeldine A..................................................................46
Figura 15: Derivados antraquinona produzidos pelo fungo Phoma sorghina.................47
Figura 16: Estruturas das substncias isoladas do KLR 5, numerados de 1-5...........47
Figura 17: Estrutura da asperamida A (R=H) e asperamida B (R= -D
glucopiranosdeo).........................................................................................................48
Figura 18: Estruturas da fomoeuforbinas A, B, C e D..................................................50

LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Substncias bioativas produzidas por microrganismos endofticos...................16
Tabela 2: Principais radicais livres provenientes do metabolismo do oxignio e principais
caractersticas tpicas de cada ROS...................................................................................32
Tabela 3: Principais doenas relacionadas ao estresse oxidativo.....................................33
Tabela 4: Principais antioxidantes, suas propriedades protetoras no organismo e os
alimentos que os contm....................................................................................................36

RESUMO
Os fungos so organismos hiperdiversos, encontrados em todos os habitats do planeta.
Os fungos endofticos, em especial, so microrganismos que vivem nos tecidos internos
das plantas e dispem de uma riqueza bioqumica ainda no muito bem explorada. Os
metablitos secundrios ou produtos naturais so compostos de baixo peso molecular
produzidos por fungos endofticos em resposta s condies ambientais. Esses
compostos

apresentam

potencial

aplicao

como

antibiticos,

antimicrobianos,

antioxidantes, antivirais, antitumorais, antimalrico, inseticidas e como agentes de

controle biolgico. A interao dos endofticos com suas plantas hospedeiras e destes
com o ecossistema, explicam a versatilidade e exclusividade de seus compostos
bioativos. Este um fato importante a ser considerado, uma vez que as florestas tropicais
e temperadas representam as regies mais ricas em biodiversidade, entretanto, ainda
pouco exploradas. Os metablitos secundrios produzidos pelos fungos endofticos com
atividades antioxidante e antiviral, mostram-se promissoras. Entretanto, poucas
pesquisas sobre essas substncias naturais tm sido realizadas.

Palavras-chave: antioxidantes, antivirais, compostos bioativos, fungos endofticos,

metablitos secundrios.

LISTA DE SIGLAS E SMBOLOS

AIDS

sndrome da imunodeficincia adquirida

DKPs

Diquetopiperazinas

FOR

formas oxignio reativas

GSH

Glutationa

GSSG

glutationa redutase

Hcmv

citomegalovirus humano

HIV

sndrome da imunodeficincia humana

HSV

herpes-simples vrus

H1N1

vrus da influenza tipo A

LDL

lipdeos de baixa densidade

MCV

poxvrus Molluscum contagiosum

NADPH

nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato reduzido

RNS

espcies nitrognio reativa

ROS

espcies oxignio reativas

UV

Ultravioleta

INTRODUO
O crescente nmero de microrganismos resistentes s drogas e a existncia de
doenas para as quais ainda no existe um tratamento ameaam pessoas do mundo
inteiro e tem instigado os pesquisadores a buscarem por novas opes teraputicas
para combat-las (STROBEL & DAISY, 2003). Segundo Guo et al. (2008), o surgimento
de doenas antes inexistentes e de microrganismos multiresistentes geralmente vm
acompanhados pelo aumento da degradao ambiental, perda de biodiversidade e
contaminao de terras e guas, desequilbrios causados, diretamente, por aes
antrpicas.
Os microrganismos, em especial os fungos, vm sendo fontes promissoras de
substncias naturais bioativas de uso teraputico (STONE et al., 2000). Inmeros
medicamentos comercializados e utilizados atualmente na prtica clnica so derivados
de metablitos secundrios produzidos por fungos ou por processos fermentativos
realizados pelos mesmos (ARNOLD et al., 2000; TAN & ZOU, 2001; STROBEL, 2003;
FERRARA, 2006). Os fungos endofticos, que colonizam os tecidos internos de vrias
espcies vegetais, e que apresentam uma importante interao com seus hospedeiros,
podem, a princpio, produzir uma gama de molculas bioativas com enorme potencial de
serem exploradas quanto s suas aes farmacolgicas (TAN & ZOU, 2001; STROBEL
& DAISY, 2003; FERRARA, 2006). Alm dos fungos, so encontrados tambm bactrias,
protozorios e, provavelmente, alguns nematdeos vivendo como organismos endofticos
(GAMBOA & BAYMAN, 2001). Considerando-se os microrganismos endofticos, os
fungos so os mais freqentemente isolados.
Quase todas as espcies de plantas superiores apresentam colonizao
endoftica. Estes microrganismos j foram tambm encontrados em algas marinhas,
brifitas e pteridfitas (TAN & ZOU, 2001). Estima-se que existam cerca de 300.000
espcies de plantas em todo o planeta, e acredita-se que cada uma possa abrigar uma
ou mais espcies de fungos endofticos (GUO et al., 2008).
Os fungos endofticos recebem proteo e abrigo, ao passo que contribuem para
as defesas da planta hospedeira, conferindo-lhe resistncia por meio da produo de
substncias fungicidas, herbicidas e antibacterianas (SCHULZ et al., 1999). Estas

10

substncias melhoram as habilidades competitivas da planta e aumentam a resistncia a

herbvoros, patgenos e a vrios estresses abiticos (SAIKKONEN, 1998).
Diferentes estratgias podem ser adotadas para a escolha do grupo vegetal a ser
utilizado no isolamento de fungos endofticos produtores de substncias bioativas. Dentre
elas, estudos envolvendo espcies vegetais endmicas, com histrico etnobotnico e
presentes em ambientes com elevada diversidade so bastante promissores.
O trabalho em questo justifica-se pelo potencial de uso biotecnolgico dos
compostos bioativos produzidos por fungos endofticos, bem como pela importncia de
pesquisas por novas opes teraputicas, em destaque, para aquelas substncias com
atividades antioxidante e antiviral. Esta constitui uma rea relativamente inexplorada,
existindo cerca de um milho de diferentes espcies de endofticos dos quais poucos
foram descritos (GUO et al., 2008). Esses dados so relevantes, uma vez que seis dos
20 medicamentos mais prescritos hoje so de origem fngica (SCHULZ & BOYLE, 2005).
Desse modo, considerando-se a importncia da preservao dos ecossistemas, em
destaque para as regies ricas em biodiversidade, os fungos endofticos so fontes
promissoras de substncias naturais que merecem ser estudados devido ao seu
potencial de utilizao na indstria e na medicina. Entre os diversos tipos de atividades
biolgicas j relatadas em estudos envolvendo metablitos produzidos por endofticos,
pode-se mencionar: ao antibacteriana, antifngica, antioxidante, antidiabtica, antiviral,
antiparasitria e imunossupressora, entre outras (TAN & ZOU, 2001; STROBEL, 2003;
STROBEL & DAISY, 2003; FERRARA, 2006). Metablitos com ao antioxidante e
antiviral constituem importantes opes no tratamento de inmeras doenas como a
doena de Parkinson, Alzheimer, cncer, doenas causadas por herpesvrus e a
sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS), entre outras, para as quais inexiste ainda
um tratamento eficaz e satisfatrio.

11

2 OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GERAL

Realizar um levantamento bibliogrfico sobre a utilizao de fungos endofticos
como fontes de metablitos secundrios com atividades antioxidante e antiviral

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

- Abordar a diversidade dos fungos, em especial, fungos endofticos;
- Discorrer sobre a importncia dos fungos endofticos como fontes de substncias
bioativas;
- Esclarecer o papel ecolgico dos fungos endofticos em sua planta hospedeira;
- Discorrer sobre os metablitos secundrios produzidos por fungos endofticos com
atividades antioxidante e antiviral, bem como suas possveis aplicaes biotecnolgicas.

12

3 METODOLOGIA
A metodologia deste trabalho consistiu da realizao de um levantamento
bibliogrfico em livros e em bancos de dados eletrnicos, tais como Bireme, Lilac SciElo,
PubMed, Medline, Science Direct, Web of Science e portal de peridicos CAPES, dentre
outros. Foram pesquisados artigos cientficos no perodo de junho de 2008 a maro de
2009, e os seguintes termos foram utilizados como palavras-chaves: anticancer,
antimicrobial activity, antioxidantes, antioxidant activity, antitumorais, antiviral, antiviral
compounds from endophytic fungi, antiviral drugs, aryl tetralin lignans, bioactive products,
Cephalosporium, citrinin compounds from endophytes, endophyte-host interaction,
endophytes, endophytic fungi, endophytic fungi from medicinal plants, endophytic fungus
Cytonaema sp., endophytic microorganisms, estresse oxidativo, flavonoids, free radical,
free radical-scavenging substance, fungal endophytes, fungos endofticos, Fusarium,
graphislactone A, isopestacin, metablitos secundrios, microbial endophytes, Nerium
oleander L, oxidative stress, pestacin, Pestalotiopsis microspora, phenolic acids, phenolic
compounds, Pseudomassaria sp., radicais livres, rainforest endophytic fungi, secondary
metabolites, substncias bioativas, Xylaria sp.. Foram encontradas cerca de 4125
citaes relacionadas a estes termos, sendo selecionados os artigos de maior interesse
para esta reviso bibliogrfica, indexados em revistas com fator de impacto significativo.

13

4 REVISO BIBLIOGRFICA
4.1 DIVERSIDADE DE FUNGOS
Os fungos constituem um vasto grupo de organismos hiperdiversos, podendo ser
encontrados em todos os nichos ecolgicos, como o solo, a gua, os vegetais, os
animais, o homem e em diversos detritos (ALEXOPOULOS et al., 1996). De acordo com
Hawksworth (2001) o reino Fungi considerado um reino anlogo aos insetos em termos
de riqueza de espcies, estimando-se a existncia de aproximadamente 1,5 milhes de
fungos.
Os fungos desempenham papel importante na manuteno do equilbrio dos
ecossistemas atravs da decomposio de matria orgnica, da ciclagem e do transporte
de nutrientes (ALEXOPOULOS et al., 1996; CARLILE & WATKINSON, 1997;
HAWKSWORTH, 2002; MUELLER et al., 2004). Algumas espcies so importantes
patgenos de plantas, de animais e do homem, outras so capazes de estabelecer uma
relao mutualstica com seu hospedeiro, seja ele planta, alga, cianobactria ou animal
(ALEXOPOULOS et al., 1996; HAWKSWORTH, 2002; MUELLER et al., 2004). Uma
importante associao mutualstica ocorre entre as razes de plantas leguminosas com
fungos micorrzicos arbusculares, onde o fungo fornece planta hospedeira proteo e
aumento da absoro de nutrientes (ALEXOPOULOS et al., 1996; HAWKSWORTH,
2002).
Os fungos apresentam, ainda, grande importncia econmica para as indstrias
alimentcia, farmacutica e para a agricultura (DEMAIN, 1981; ALEXOPOULOS et al.,
1996; CARLILE & WATKINSON, 1997; HAWKSWORTH, 2002; MUELLER et al., 2004).
Estes microrganismos podem ser utilizados em processos fermentativos para a produo
de pes e bebidas alcolicas, queijos e outros produtos alimentcios (DEMAIN, 1981;
ALEXOPOULOS et al., 1996; CARLILE & WATKINSON, 1997; HAWKSWORTH, 2002;
MUELLER et al., 2004). Os metablitos secundrios sintetizados pelos fungos so de
grande interesse farmacolgico, a exemplo dos antibiticos, esterides, e inmeras
outras substncias bioativas que apresentam diversas aplicaes biotecnolgicas. Os
fungos so, ainda, produtores de fitohormnios e constituem promissores agentes de

14

controle biolgico de insetos e nematdeos (ALEXOPOULOS et al., 1996; CARLILE &

WATKINSON, 1997; HAWKSWORTH, 2002; MUELLER et al., 2004).
O

reino

Fungi

compreende

organismos

eucariotos,

macroscpicos

ou

microscpicos, aerbicos ou anaerbicos facultativos, multinucleados ou uninucleados

(ALEXOPOULOS et al., 1996; CARLILE & WATKINSON, 1997; MUELLER et al., 2004).
Apresentam-se sob a forma unicelular, filamentosa ou carnudo (cogumelos), alimentamse por absoro, sendo classificados como quimio-heterotrficos (ALEXOPOULOS et al.,
1996; CARLILE & WATKINSON, 1997; MUELLER et al., 2004). Algumas caractersticas
apresentadas pelos fungos assemelham esse grupo aos animais, como a presena de
substncias quitinosas na parede celular e o armazenamento de energia na forma de
glicognio (TRABULSI, 1998).
De acordo Alexopoulos et al. (1996), o reino Fungi, quando baseado em uma
classificao monofiltica, compreende os reinos, Stramenopila e Protista. Embora os
indivduos desses grupos no compartilhem um ancestral comum, eles apresentam
algumas semelhanas quanto morfologia, ao modo de nutrio e ecologia, que os
permitem ser considerados juntamente ao reino Fungi (HAWKSWORTH et al., 1995;
ALEXOPOULOS et al., 1996; MUELLER et al., 2004). Desse modo, o reino Fungi, deve
ser entendido como um grupo com 3 reinos e 11 filos relacionados: o Reino Fungi com os
filos Chytridiomycota, Zygomycota, Ascomycota e Basidiomycota; o Reino Stramenopila
com os filos Oomycota, Hyphochytriomycota e Labyrinthulomycota e o Reino Protista
com os filos Plamodiophoromycota, Dictyosteliomycota, Acrasiomycota e Mycxomycota
(HAWKSWORTH et al., 1995; ALEXOPOULOS et al., 1996; MUELLER et al., 2004).

4.2 MICRORGANISMOS ENDOFTICOS

O termo endoftico vem sendo frequentemente utilizado para descrever a
microbiota interna das plantas vivas (STONE, 2000). Microrganismos endofticos so
organismos endossimbiontes, que no produzem sintomas de doenas visveis em seus
hospedeiros (HAWKSWORTH et al., 1995; CARLILE & WATKINSON, 1997; GAMBOA &
BAYME, 2001; GUNATILAKA, 2006). So descritos, ainda, como microrganismos que

15

podem passar parte ou todo o ciclo de vida colonizando assintomaticamente os tecidos

internos de plantas vivas (SAIKKONEN et al., 1998; CAO et al., 2002),
Na relao planta-endossimbionte, saprfitas e patgenos latentes podem viver
dentro do tecido hospedeiro em estado assintomtico (GAMBOA & BAYMAN, 2001).
Uma definio mais estrita do termo endoftico diz respeito ao microrganismo somente no
momento da sua deteco, sem considerar o status futuro da relao (SCHULZ &
BOYLE, 2006).
H registros de fungos, bactrias, protozorios e nematdeos vivendo como
organismos endofticos (GAMBOA & BAYMAN, 2001). Entre os microrganismos
endofticos, os fungos so os mais comumente isolados (GUNATILAKA, 2006).
Quase todas as espcies de plantas vasculares apresentam colonizao
endoftica (TAN & ZOU, 2001). J foram encontrados, inclusive, em algas marinhas,
brifitas e pteridfitas (TAN & ZOU, 2001). Todas as partes de uma planta em contato
com o ar e a gua esto sujeitas penetrao e infeco microbiana (CARLILE &
WATKINSON, 1997). Esses microrganismos so ubquos, tendo sido isolados de plantas
de florestas tropicais, temperadas, boreais e at mesmo de ambientes rticos e
desrticos (STONE, 2000).
Os microrganismos endofticos constituem um grupo ainda pouco estudado de
organismos produtores de metablitos secundrios com potencial para serem
empregados na medicina, na agricultura e na indstria (STROBEL & DAISY, 2003; GUO
et al., 2008). Os produtos naturais produzidos por esses microrganismos esto sendo
avaliados para atender crescente necessidade por novas drogas, agentes
quimoterpicos e agroindustriais que sejam, ao mesmo tempo, mais efetivos, menos
txicos e que apresentem menor impacto ambiental (STROBEL et al., 2004). A tabela 1
apresenta algumas substncias bioativas produzidas por microrganismos endofticos e
suas possveis aplicaes biotecnolgicas.

16

Tabela 1: Substncias bioativas produzidas por microrganismos endofticos.

MICRORGANISMO

PLANTA

METABLITO

ATIVIDADE BIOLGICA

REFERNCIAS

Phoma
Medicaginis

Medicago sativa
Medicago
lupulina

Brefeldina A

Atividade antibitica,
inibio de apoptose de
clulas cancergenas

Weber et al.,
2004

Phomopsis
phaseoli,
Melanconium
Betulinum

Betula pendula
Betula
pubescens
folhas de uma
rvore tropical

cido
hidroxipropinico-3

Atividade nematocida
contra Meloidogyne
incognita, Caenorhabditis
elegans

Schwarz et al.,
2004

Phomopsis spp.

Erythrina
cristagalli

Phomol

Atividade citotxica,
antifngica, antibacteriana
e antinamatria

Weber et al.,
2004

Phomopsis spp.

Erythrina
cristagalli

cido mevinico

Atividade
antiflamatria

Weber et al.,
2004

Pestalotiopsis
microspora
Monochaetia sp.

Torreya taxifolia

cido ambuico

Agente antifngico

Li et al., 2001

Pestalotiopsis
Microspora

Torreya taxifolia

cido
Torreianico

Atividade seletivamente
citotxica

Li et al., 2001

Petalotiopsis
jesteri

Fragraea
bodenii

Jesterona,
Hidroxijesterona

Atividade antimictica
contra fungos omycetos

Li & Strobel,
2001

Pestalotiopsis
Microspora

Terminalia
morobensis

Pestacina,
Isopestacina

Efeito antimicrobiano
e antioxidante

Harper et al.,
2003, Strobel et
al., 2002

Streptomyces
NRRl 30566

Grevillea
pteridifolia

Kakadumicina
A
(quimicamente
relacionado
equinomicina )

Amplo espectro de
Atividade antibitica,
Especialmente contra
bactrias Gram-positivas

Castillo et al.,
2003

Streptomyces sp.
Is9131

Maytenus
hookeri

Dinactina
dimrica,
nonactina
dimrica, cido
ciclohomononatico
cido
ciclononatico

Forte atividade
antineoplastica
e atividade
antibacteriana

Zhao et al.,
2005

FONTE: FIRKOV et al., 2007.

17

Tabela 1: Continuao
MICRORGANISMO

PLANTA

METABLITO

ATIVIDADE BIOLGICA

REFERNCIAS

Streptomyces
sp.

Monstera sp

Coronamicina

Atividade contra fungos

Pythiaceous e o patgeno
humano Cryptococcus
neoformans, ativo contra o
protozorio causador da
malria Plasmodium
falciparum.

Ezra et al., 2004

Streptomyces
NRRL 30562

Kennedia
nigriscans

Munumbicinas
A, B, C e D

Efetivo contra linhagens de

Staphylococcus aureus
resistentes meticilina,
Bacillus anthracis,
Mycobacterium
tuberculosis, Plasmodium
falciparum

Castillo et al.,
2002

Aspergillus
fumigatus
CY 018

Cynodon
dactylon

Asperfumoide,
asperfumina

Inibio do crescimento de
Candida albicans

Liu et al., 2004

Aspergillus
niger
IBF-E003

Cynodon
dactylon

Rubrofusarina
B,
aurasperona A

Co-inibidores fortes sobre

xantina oxidase, clulas
cancerosas do clon e
alguns patgenos
microbianos

Song et al., 2004

Penicillium sp.

Melia
azedarach

Preaustinoide
A, B

Moderado efeito
bacteriosttico sobre
Escherichia coli,
Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa,
Bacillus sp.

Dos Santos &

Rodrigues-Fo,
2003

Fusidilactonas

Atividade antifngica

Krohn et al., 2002

Citosquirinas

Atividade antibacteriana,
potencial agente
antitumoral

Brady et al.,
2000,
Jadulco et al.,
2002

Fusidium sp.
Curvularia
Lunata

Niphates
olemda

FONTE: FIRKOV et al., 2007.

18

Tabela 1: Continuao
MICRORGANISMO

PLANTA

METABLITO

ATIVIDADE BIOLGICA

REFERNCIAS

Curvularial
Lunata

Niphates
olemda

Lunatina

Atividade contra Bacillus

subtilis,
Staphylococcus aureus,
Escherichia coli,
Cladosporium herbarum

Jadulco et al.,
2002

Cephalosporium
sp. IFB-E001
Microsphaeropsis
Olivacea

Trachelospermum
jasminoides
Pilgerodendro
uviferum

Grafislactona A

Efeito antioxidante

Hormazabal et
al., 2005, Song
et al., 2005

Xylaria sp. F0010

Abies
holophylla

Griseofulvina
declorogriseofulVina

Antibitico antifngico

Park et al., 2005

Rhizoctonia sp.

Cynodon
dactylon

cido rizotnico

Atividade antiHelicobacter pylori

Ma et al., 2004

Cytospora sp.
Diaporthe sp.

Espcies
vegetais de
Guanacaste,
rea de
conservao
da Costa Rica

Citosporona

Atividade antibacteriana

Brady et al.,
2004; Ohzeki &
Mori, 2003

Apiospora
montagnei

Polysiphonia
violacea

Epiepoxidona

Citotoxicidade
significativa contra
linhagem celular
cancerosa

Klemke et al.,
2004

Eupenicillium spp.

Murrayao
paniculata

Alantrifenona,
Alantripinena,
Alantrileinona

Inseticida

Fbio et al.,
2005

Pseudomassaria sp.

Folhas
cletadas
prximas ao
Kinshasa,
Repblica
Democrtica
do Congo

Demetilasterriquinona b-1

Composto que mimetiza

insulina

Salituro et al.,
2001; Strobel,
2002

Trametes hirsuta

Podophyllum
hexandrum

Podofilotoxina,
aril tetralina
lignanas

Atividade antitumoral

Puri et al., 2006

Fungo endoftico
isolado de

Nothapodytes
Foetidafrom

Camptotecina

Atividade antitumoral

Puri et al., 2006

FONTE: FIRKOV et al., 2007.

19

4.2.1 Fungos endofticos

Desde a descoberta dos fungos endofticos em Darnel na Alemanha, em 1904,
diversos pesquisadores vm estabelecendo definies para o termo fungo endoftico
(STROBEL & DAISY, 2003). Um considervel desacordo existe sobre o que caracteriza
um fungo endoftico (SAIKKONEN et al., 1998), mas conforme Strobel e Daisy (2003)
esse conceito varia em funo de como estes microrganismos so isolados e estudados.
Todas as partes de uma planta expostas ao ar, em contato com chuva ou orvalho,
como caules, folhas, flores e frutos, esto sujeitos infeco fngica, incluindo as razes
(CARLILE & WATKINSON, 1997 CAO et al., 2002). Os fungos endofticos pertencem, em
sua maioria, ao filo Ascomycota e ao grupo dos fungos conidiais, existindo tambm,
representantes dos filos Zigomycota, Chytridiomycota, Basiodiomycota e Glomeromycota
(SCHULZ et al., 1999).
Segundo Putzke e Putzke (2002), assim como os fungos micorrzicos (simbiose
entre a raiz da planta e o miclio fngico), os fungos endofticos de razes podem
promover o crescimento da planta hospedeira, fato associado ao aumento da
incorporao de elementos minerais pela planta. No entanto, estes ltimos diferem dos
fungos micorrzicos por no produzirem estruturas caractersticas como vesculas e
arbsculos (AZEVEDO, 2000; PUTZKE & PUTZKE, 2002).
Os fungos endofticos so tambm distinguidos dos fungos patognicos por no
causarem doena planta hospedeira, e dos epifticos, que habitam a superfcie dos
vegetais (AZEVEDO, 1999). Acredita-se que os fungos endofticos tenham surgido de
fungos patognicos ou parasitas que, em sua ntima relao com a planta hospedeira,
teriam desenvolvido uma extenso dos perodos de latncia e reduo da virulncia
(SAIKKONEN et al., 1998).
A colonizao dos tecidos ocorre j no primeiro ano de vida da planta e se acentua
com o passar do tempo (PUTZKE & PUTZKE, 2002). Alguns ficam confinados a regies
especficas, enquanto outros tm distribuio mais generalizada (PUTZKE & PUTZKE,
2002). A colonizao endoftica pode ser intracelular ou intercelular, localizada ou
sistmica (STONE et al., 2004).

20

Na infeco sistmica, a exemplo das gramneas, praticamente, todos os tecidos

so colonizados, at mesmo, as sementes, em associaes muito prximas com o
embrio (STONE et al., 2004). As infeces no sistmicas ocorrem na maioria das
outras plantas, e so geralmente, restritas a uma regio especfica do vegetal
(SAIKKONEN et al., 1998; STONE et al., 2004).
Existem modelos de colonizao por endofticos diferenciados para cada parte da
planta. Estruturas areas, por exemplo, frequentemente apresentam infeco local
(SCHULZ & BOYLE, 2005).

J os brotos apresentam colonizao intracelular ou

intercelular, ambas ocorrendo de forma localizada (SCHULZ & BOYLE, 2005). Por outro
lado, a colonizao das razes por endofticos usualmente sistmica, podendo ser
tambm inter ou intracelular (SCHULZ & BOYLE, 2005). Os fatores que podem estar
envolvidos nos diferentes modelos de colonizao referem-se s diferenas anatmicas,
s diferenas de permeabilidade e de demanda de nutrientes pela planta e pelo
microrganismo (SCHULZ & BOYLE, 2005).
Segundo Carlile e Watkinson (1997), o sucesso da colonizao das partes areas
de uma planta depender da efetividade do mecanismo fngico para a produo,
liberao e disperso de esporos no ar, alm da capacidade de reinfeco. As razes, por
outro lado, esto sempre em contato com microrganismos e animais do solo, no qual
encontram ambiente propcio para se desenvolverem, e por isso, esto mais sujeitas
infeco por patgenos, saprfitas e mutualistas (CARLILE & WATKINSON, 1997).
O modo de transmisso de fungos endofticos pode ser por meio da disperso de
esporos de planta a planta (horizontalmente) ou pelo crescimento do fungo em
sementes (verticalmente) (SAIKKONEN et al., 1998). Acredita-se que o modo de
reproduo e o modo de transmisso dos fungos endofticos estejam intimamente
relacionados com sua agressividade e virulncia (SAIKKONEN et al., 1998).

Da

mesma forma, foi observado que o modo de transmisso pode diminuir a ao de

antagonismo e mutualismo dos endofticos de gramneas (SAIKKONEN et al., 1998).
Outro dado importante o fato de que a composio das comunidades de
endofticos e a freqncia de infeco podem variar de acordo com a espcie
hospedeira, as caractersticas do local, o tipo de vegetao associada, a idade e o
tecido infectado (STONE, 2004). Portanto, de se esperar que em reas tropicais haja

21

uma maior diversidade fngica, favorecida pelas condies ambientais nas quais a
planta est crescendo (TAN & ZOU, 2001; HAWKSWORTH, 2001) e devido s foras
seletivas serem maiores do que em outros ecossistemas (STROBEL, et al., 2005).

4.2.2 Relao endoftico-planta hospedeira

O conhecimento dos mecanismos fisiolgicos da interao entre fungo endoftico e
planta hospedeira um pr-requisito para a compreenso de como estes microrganismos
so hbeis para crescer no interior de plantas sem causar sintomas de doena visveis
(SCHULZ et al., 1999). Segundo Saikkonen et al. (1998), a relao de simbiose
estabelecida entre o fungo e a planta hospedeira pode variar de comensalismo a
mutualismo, e mesmo, parasitismo, de acordo com o balano entre as respostas de
defesa da planta e a demanda de nutrientes do endoftico (KOGEL et al., 2006). As
plantas podem responder a um contato fngico atravs de manifestao de doena,
atravs de uma simbiose mtua, como tambm, podem apresentar resistncia ou no
ter qualquer reao de defesa (CARLILE & WATKINSON, 1997).
O fungo endoftico, ao colonizar uma planta, sintetiza inicialmente metablitos
para competir com os fungos epifticos, e em seguida, contra patgenos (SCHULZ et
al., 2002). Posteriormente, tem-se a regulao do metabolismo do hospedeiro para uma
associao equilibrada (SCHULZ et al., 2002). Esses metablitos so hidrolases,
enzimas envolvidas no mecanismo de resistncia que impedem a adeso s clulas do
hospedeiro por patgenos, evitando, dessa maneira, o desvio de nutrientes da planta
(STROBEL, 2002; TAN & ZOU, 2002; FIRKOV et al., 2007).
De acordo com Stone (2000), as diferenas na durao do perodo de latncia do
endoftico e a diminuio das injrias durante o crescimento ativo do fungo, separam um
fungo considerado endoftico daquele considerado patgeno latente. Entretanto, da
mesma forma que um fungo endoftico pode se tornar um patgeno, o contrrio tambm
pode acontecer (KOGEL, 2006).
O conceito mais aceito para a relao fungo endoftico-planta hospedeira o de
um mutualismo-antagonismo, onde ambos, fungo e planta, liberam metablitos txicos

22

aos seus parceiros (SCHULZ et al., 1999) e, ao mesmo tempo, se beneficiam dessa
associao (KOGEL et al., 2006). Conforme Saikkonen et al. (1998), essa interao pode
variar em funo das diferenas existentes entre as espcies de microrganismos
envolvidas, dos aspectos abiticos e das interaes com outras espcies.
O endoftico proporciona planta resistncia a herbivoria, a patgenos e a outros
estresses abiticos, ou ainda, pode melhorar sua capacidade competitiva pela produo
de determinados metablitos, alm da produo de hormnios de crescimento; enquanto
os endofticos recebem proteo e alimentos (STROBEL, 2003). Tan e Zou (2001),
tambm concordam que o papel ecolgico do endoftico no hospedeiro o de promover o
crescimento da planta atravs da produo de fitohormnios devido melhora na
disposio de elementos nutricionais como nitrognio e fsforo. Essa relao de
antagonismo mtuo reforada pela confirmao da produo, em elevada
concentrao, de metablitos fenlicos, que esto envolvidos na reao de defesa da
planta, enquanto o fungo libera metablitos herbicidas (SHULZ et al., 1999; SCHULZ &
BOYLE, 2005).
A figura 1 ilustra a hiptese de um mutualismo-antagonismo, atravs da liberao
de metablitos txicos produzidos pelos fungos contra a planta hospedeira e desta contra
o fungo. Se existir um equilbrio na interao endoftico-hospedeiro, o antagonismo se
mantm balanceado, sem o desenvolvimento de doena, porm se este equilbrio
quebrado a favor do fungo, o mesmo se torna um patgeno (SCHULZ et al., 1999).

4.3 FUNGOS ENDOFTICOS COMO FONTES DE METABLITOS SECUNDRIOS

Os metablitos secundrios ou produtos naturais so compostos de baixo peso
molecular produzidos pelo microrganismo em resposta s condies ambientais (VIEIRA,
2008). Acredita-se que esses metablitos no sejam essenciais ao crescimento do
microrganismo, mas que estejam envolvidos em processos de comunicao entre
microrganismo e planta hospedeira (VIEIRA, 2008). So compostos extremamente
diversos, com bioqumica nica (BRDY, 2005).

23

Antagonismo
balanceado
Virulncia
fngica

Interao
endoftica

Defesas da
planta

Interao patognica
Figura 1: Antagonismo balanceado entre fungo endoftico e planta hospedeira (SCHULZ
et al., 2002).

Estas substncias so comumente produzidas em resposta s adaptaes para

uma funo especfica na natureza (STROBEL, 2003; STROBEL et al., 2005). Interaes
ambientais, contato com diversos hospedeiros e com outros fungos, sejam eles
patognicos ou no, resultam em uma enorme plasticidade fenotpica capaz de
impulsionar o processo evolutivo dos fungos endofticos (SCHULZ & BOYLE, 2005). A
plasticidade fenotpica destes fungos favorecida em bitopos como as florestas
chuvosas de regies tropicais. Nesses locais existem no somente diversidade biolgica,
mas tambm diversidade de substncias qumicas (AZEVEDO et al., 2000;
HAWKSWORTH, 2001; STROBEL et al., 2004).
Da mesma forma, os metablitos secundrios produzidos pelos fungos endofticos
podem sofrer alteraes quando cultivados em laboratrio (STONE, 2000; STROBEL et
al., 2004). Alguns fatores tais como temperatura, composio do meio de cultura e
aerao, podem interferir na quantidade e no tipo de compostos que so produzidos
(STONE, 2000; STROBEL et al., 2004). Em culturas puras, a produo dos metablitos
secundrios ocorre durante a fase estacionria, quando os nutrientes so exauridos e a
taxa de crescimento do fungo declina (CARLILE & WATKINSON, 1997).

24

Na natureza, algumas plantas contm microrganismos que mimetizam a qumica

de sua planta hospedeira, sendo capazes de produzirem o mesmo produto natural da
planta (STROBEL, 2003). O fato de o endoftico produzir metablitos tpicos de seu
hospedeiro leva a crer que ocorra uma recombinao gentica entre o fungo e a planta
(STROBEL, 2003).
Conforme Saikkonen et al. (1998), do ponto de vista evolucionrio, alguns
endofticos realizam hibridizao com suas plantas hospedeiras propiciando o aumento
da diversidade gentica e, conseqentemente, a formao de novos compostos
bioativos. Esse fato observado no fungo endoftico Pestalotiopsis microspora
(STROBEL, 2002). Essa a espcie de fungo mais frequentemente encontrada em
plantas de florestas chuvosas, e est relacionado com a produo de taxol (figura 2), um
composto antitumoral encontrado em rvores de lento crescimento (STIERLE &
STROBEL, 1995). O gnero Pestalotiopsis apresenta enorme diversidade biolgica e
gentica, e essa diversidade, segundo Strobel (2002), deve ter surgido por mutao,
cruzamento gentico ou como resultado de troca gentica com seus hospedeiros, uma
vez que, somente esses fatos explicariam a capacidade desses microrganismos de
sintetizarem taxol assim como sua planta hospedeira.

Figura 2: Estrutura qumica do taxol (STROBEL, 2003).

Os metablitos secundrios j isolados de extratos de fungos endofticos

pertencem a diversos grupos estruturais, sendo os principais: esterides, xantonas,

25

fenis,

isocumarinas,

derivados

perilenos,

quinonas,

furandionas,

terpenides,

depsipeptdeos e citocalasinas (SCHULZ & BOYLE, 2005). Dentre as funes biolgicas

de alguns desses compostos pode-se destacar as aes antibacteriana, antiviral,
antioxidante, antifngica, anti-helmntica, antitumoral, antimalrico, antiinflamatrio,
antituberculose, laxativo, antidiabtica e imunossupressora, entre outras (STROBEL &
DAISY, 2003). Alguns metablitos podem, ainda, serem utilizados como controles
biolgicos e biorremediadores (GUO et al., 2008).
De acordo com Strobel et al. (2003), determinadas plantas que apresentam
caractersticas como histrico etnobotnico, longevidade ou uma interessante localizao
endmica, provavelmente, podem ser colonizadas por novos microrganismos endofticos.
A vantagem em se descobrir novas drogas baseadas em produtos naturais se deve
diversidade qumica desses compostos ainda no explorados (KNIGHTN et al., 2003).
Estas substncias podem, inclusive, ser utilizadas como prottipos para o
desenvolvimento de novas drogas sintticas (VIEIRA, 2008). Entretanto, a falta de
explorao sistemtica dos ecossistemas, a falta de esforos em cultivar fungos de difcil
cultivo, o difcil processo de caracterizao e isolamento dos extratos, a produo de
quantidades insuficientes dos compostos, entre outros fatores, contribuem para uma
diminuio na descoberta de novas drogas (KNIGHTN et al., 2003).
Apesar disso, evidente o potencial para utilizao destas substncias nas reas
da indstria, medicina e agricultura. Os exemplos mais amplamente difundidos de
utilizao so os antibiticos. Produtos naturais orgnicos de baixo peso molecular,
sintetizado por microrganismos e ativos em baixas concentraes contra outros
microrganismos (STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al., 2005; GUO et al., 2008).
Podem inibir ou matar diversos microrganismos patognicos como bactrias, fungos,
vrus e protozorios, inclusive fitopatgenos (STROBEL & DAISY, 2003). Diversas
classes de antibiticos tm sua origem a partir de metablitos fngicos (STROBEL &
DAISY, 2003; STROBEL et al., 2005; GUO et al., 2008).
O cido colettrico um exemplo de antibitico produzido pelo fungo endoftico
Colleotrichum gloeosporioides isolado da planta Artemisia annua (STROBEL & DAISY,
2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005; GUO et al., 2008). Essa substncia
ativa contra diversos fungos e bactrias patognicas do homem (STROBEL & DAISY,

26

2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005; GUO et al., 2008). Os antibiticos
munumicinas derivados do fungo Streptomyces sp. e kakadumicina A produzido por um
estreptomicete isolado de Grevillea pteridifolia, so ativos contra bactrias Grampositivas (STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005).
O composto criptocandina (figura 3) isolado de Cryptosporiopsis quercina, (planta
Tripterigeum wilfordii), atualmente, muito usado para micoses de pele e unha, alm de
mostrar excelente ao contra Candida albicans e Tricophyton spp (STROBEL & DAISY,
2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005). O cido ambuico (figura 4), isolado
de Pestalotiopsiss microspora, um endoftico comum de florestas chuvosas, e as
substncias jesterona e hidrxi-jesterona, isoladas de Pestalotiopsis jesteri, so exemplos
de excelentes antibiticos contra fungos patognicos de plantas (STROBEL & DAISY,
2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005).

Figura 3: Estrutura qumica da

criptocandina A (STROBEL et al., 1999).

Figura 4: Estrutura qumica do cido

ambuico (STROBEL, 2003).

Os fungos endofticos tambm produzem potentes substncias com ao antiviral.

Os cidos citotnicos A e B, isolados do fungo Cytonaema sp. so um exemplo
(STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005). As estruturas
qumicas de muitas substncias antivirais j so conhecidas e bem elucidadas, assim
como o princpio ativo e o modo de ao (STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al.,

27

2004; STROBEL et al., 2005). Embora recente, a pesquisa por antivirais tem se mostrado
muito promissora.
Os fungos endofticos so ainda fontes importantes de substncias antitumorais. O
paclitaxel (figura 5) age impedindo as molculas de tubulina de se despolimeralizar
durante o processo de diviso celular (STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al., 2004;
STROBEL et al., 2005). Esse composto j foi obtido de Taxus andrenae isolado da planta
Taxus brevifolia, de Pestalotiopsis guepini de Wollemia nobilis, Seimatoantlerium
tepuiense de Maguirothamnus speciosus, Sporomia minima e Triclhothecium sp. de
Taxus wallichaiana, e tambm dos fungos Pericornia sp. e Seimatoantlerium nepalense
(STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005). Outras
substncias com atividade antitumoral so os alcalides, compostos comumente
encontrados em extratos obtidos a partir de fungos endofticos (STROBEL & DAISY,
2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005). Alcalides bem conhecidos so as
citocalasinas, produzidas por fungos dos gneros Xylaria, Phoma, Hupoxylon, Chalara e
Rhinocladiella sp., com atividades antitumoral e antibitica (STROBEL et al., 2004). Estas
substncias, no entanto, apresentam toxicidade celular e por isso ainda no foram
desenvolvidos frmacos a partir dessas molculas (STROBEL & DAISY, 2003;
STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005).

Figura 5: Estrutura qumica do paclitaxel (STROBEL & DAISY, 2003).

28

As substncias produzidas pelos endofticos tambm apresentam propriedades

antidiabticas. Essas substncias isoladas de Pseudomassaria sp mimetizam a insulina
quanto ao modo de ao e no so destrudas pelo sistema digestrio (STROBEL &
DAISY, 2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005). Testes in vivo mostraram
significativa diminuio dos nveis de glicose no sangue de animais, criando novas
alternativas para o tratamento da diabetes (STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al.,
2004; STROBEL et al., 2005).
Outra atividade importante a ao imunossupressora; essas substncias
impedem a rejeio de rgos e representam perspectivas de utilizao para o
tratamento de doenas auto-imunes (STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al., 2004;
STROBEL et al., 2005). Alguns exemplos de fungos que produzem substncias
imunossupressoras so Fusarium subglutinans isolado de Tripterygium wilfordii, que
produz subglutinol A e B; e Tolypocladium inflatum, produtor de ciclosporinas. (STROBEL
& DAISY, 2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005). Diversos fungos exibem,
ainda, atividade inseticida, a exemplo de Nodulisporium spp. e Muscodor vitigenus que
sintetizam o cido nodulisprico e

naftalenos (AZEVEDO et al., 2000; STROBEL &

DAISY, 2003; STROBEL et al., 2004; STROBEL et al., 2005).

Diante da versatilidade da utilizao desses metablitos, sero abordados, neste
trabalho, apenas aqueles que apresentarem atividades antioxidante e antiviral. Essas
substncias representam fontes promissoras de drogas a serem utilizadas no tratamento
de doenas, tais como a doena de Parkinson, Alzheimer, cncer, doenas causadas por
herpesvrus e a sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS), entre outras.

4.4 METABLITOS SECUNDRIOS COM ATIVIDADE ANTIOXIDANTE

4.4.1 Conceito de radicais livres
Os radicais livres apresentam papel importante no processo evolutivo das formas
de vida aerbias (FANG et al., 2002). Uma vez que a concentrao de oxignio (O 2) na
atmosfera terrestre primitiva era muito baixa, as primeiras formas de vida que surgiram

29

foram organismos anaerbios (HALLIWELL, 1996). A partir do aparecimento de seres

fotossintticos, esses nveis de O2 aumentaram e os organismos existentes precisaram
desenvolver sistemas de defesa contra a toxicidade do O2 e, ao mesmo tempo, us-lo
como fonte de energia para transformaes metablicas (HALLIWELL, 1996). Os
componentes que permitiram a utilizao do O2 atmosfrico pelas clulas foram as
mitocndrias, e como sistemas de defesa contra os metablitos gerados, surgiram as
substncias antioxidantes, que impedem a formao desses radicais livres ou os
convertem a radicais menos txicos ao organismo (FANG et al., 2002).
Os radicais livres so molculas orgnicas e inorgnicas provenientes da ao
cataltica de enzimas durante os processos de transferncia de eltrons que ocorrem no
metabolismo celular, processo este que resulta na formao de elementos com eltrons
no pareados em sua ltima camada eletrnica (FERREIRA & MATSUBARA, 1997;
FINKEL & HOLBROOK, 2000; FANG et al., 2002). justamente esse nmero mpar de
eltrons na ltima camada, variando entre um ou mais eltrons, que confere enorme
instabilidade e reatividade aos radicais livres e uma meia vida muito curta (BIANCHI &
ANTUNES, 1999).
Podem ser gerados nas mitocndrias, nos lisossomos, nos peroxissomos, na
membrana celular, no retculo endoplasmtico, no ncleo e em todas as regies do
citosol (MACHILIN & BENDICH, 1987). Atuam sobre protenas, lipdeos, carboidratos ou
DNA, em funo do local onde so formados (BIANCHI; ANTUNES, 1999).
A maioria destes radicais livres proveniente do metabolismo do oxignio, sendo
classificados por alguns autores, como espcies oxignio reativas (ROS) ou formas
oxignio reativas (FOR) para designar esses tomos derivados do O 2 que nem sempre
apresentam eltrons desemparelhados na ltima camada, mas que so potenciais
agentes reativos patognicos (HALLIWELL, 1996; FERREIRA & MATSUBARA, 1997;
FINKEL & HOLBROOK, 2000; RUBIN et al., 2006). Todavia, existem tambm espcies
nitrognio reativa (RNS) e espcies cloreto reativa, que possuem as mesmas
propriedades das espcies oxignio reativa produzidas em animais e humanos sob
certas condies fisiolgicas e patolgicas, porm, em menores quantidades
(HALLIWELL, 1996; FANG et al., 2002).

30

O oxignio o aceptor final na cadeia de transporte de eltrons que permite aos

organismos aerbios utilizarem a energia contida nos alimentos (RUBIN et al., 2006).
Esse processo catablico pode gerar espcies oxignio reativa provenientes de formas
parcialmente reduzidas, intermedirias entre oxignio molecular (O2) e gua (H2O)
(MADISON, 1999; RUBIN et al., 2006).
O extravasamento no transporte mitocondrial de eltrons , portanto, a principal
forma de produo de trs ROS, o superxido (O2-), o perxido de hidrognio (H2O2) e o
radical hidroxila (OH) (HALLIWELL, 1996; FERREIRA & MATSUBARA, 1997; MADISON,
1999; FINKEL & HOLBROOK, 2000; RUBIN et al., 2006). Contudo, outras formas de
ROS so conhecidas, as principais so perxinitrito (ONOO*), radicais perxido lipdicos
(RCOO*) e cido hipocloroso (HOCl) (SIES, 1993; HALLIWELL, 1996; FERREIRA &
MATSUBARA, 1997; MADISON, 1999; FINKEL; & HOLBROOK, 2000; RUBIN et al.,
2006).
Alm da respirao aerbia, existem outras condies endgenas que alteram as
concentraes de radicais livres, tais como, inflamaes, peroxissomos, lipoxissomos,
oxidase nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato reduzido (NADPH) e enzimas do
citocromo P450 (FINKEL & HOLBROOK, 2000). Os oxidantes ou radicais livres podem
tambm originar-se de fontes exgenas, provenientes da radiao ultravioleta (UV), raiosX, radiaes de microondas (SIES, 1993), tabaco, poluentes ambientais, solventes
orgnicos, ambientes com elevada concentrao de oxignio, pesticidas, uso de
medicamentos (MACHLIN & BENDICH 1987), consumo de quantidades elevadas de
ferro e cobre, e compostos fenlicos de plantas (AMES et al., 1993).
Os radicais livres apresentam algumas funes importantes na manuteno da
sade do corpo humano, como por exemplo, na destruio de microrganismos durante o
processo de fagocitose e atravs da atuao como fatores de transcrio na sinalizao
intracelular, induzindo a apoptose (FINKEL & HOLBROOK, 2000; RUBIN et al., 2006). A
tabela 2 mostra as principais ROS provenientes do metabolismo do oxignio, bem como
a sua origem de formao, seus malefcios e alguns benefcios clula.

31

Tabela 2: Principais radicais livres provenientes do metabolismo do oxignio e principais

caractersticas tpicas de cada ROS.
ATRIBUTOS
MOLCULA
No considerado um verdadeiro radical livre devido ausncia de
eltrons livres na ltima camada (HALLIWELL et al., 1995). Entretanto por
Perxido de

ser hidrosolvel e penetrar facilmente nas clulas, age como precursor de

hidrognio (H2O2)

ROS (HALLIWELL et al., 1995). O H2O2 no lesivo, sendo metabolizado

em grande parte at H2O nos peroxissomos citoplasmticos, no citosol e
nas mitocndrias (RUBIN et al., 2006). Porm, quando em excesso,
convertido em *OH altamente reativo (HALLIWELL et al., 1995).
O O2- formado em todas as clulas aerbias, aps a reduo de O 2

nion superxido

(FERREIRA & MATSUBARA, 1997). Proveniente do extravasamento da

(O2-)

cadeia de transporte de eltrons ou em resposta inflamatria produz outras

formas de ROS e no se difunde para longe de sua origem (RUBIN et al.,
2006).
Esse radical formado pela radilise da gua, reao de H2O2 com ferro
ferroso (reao de Fenton) e reao de O 2- com H2O2 (reao de Haber-

Radical hidroxila

Weiss) (RUBIN et al., 2006). ROS mais reativa, principal radical

(*OH)

relacionado agresso a macromolculas (LEITE & SARNI, 2003). Essas

agresses podem ocorrer por meio da peroxidao lipdica, na qual a
integridade da membrana citoplasmtica comprometida, por alteraes
na integridade das protenas e da cadeia de aminocidos ou por leso ao
DNA, provocando diversas alteraes estruturais, mutaes e apoptose
(RUBIN et al., 2006).

Radicais perxido

Produzidos durante a peroxidao lipdica acarreta alteraes nas

lipdicos (RCOO*)

membranas celulares culminando em morte celular (RUBIN et al., 2006).

Entretanto, essas ROS tambm esto envolvidas na resposta inflamatria
(FERREIRA & MATSUBARA, 1997).

cido hipoclo-

Produzido por macrfagos e neutrfilos durante fagocitose, libera o radical

roso (HOCl)

hipoclorito (OCl -) ao dissociar-se (RUBIN et al., 2006).

32

4.4.2 O estresse oxidativo e as doenas relacionadas

A formao de radicais livres in vivo ocorre durante o metabolismo celular e pela
exposio fatores exgenos (BIANCHI & ANTUNES, 1999). Entretanto, esses
oxidantes ou pr-oxidantes podem aumentar sua concentrao no organismo como
conseqncia da respirao aerbia normal ou devido deficincia no processamento
destas espcies oxignio reativa (AMES et al., 1993).
Diante de condies normais estabelecido um contnuo processamento, pelo
sistema de defesa, para a inativao destas ROS (SIES, 1993). Contudo, pode ocorrer
um excesso na liberao desses agentes oxidantes e/ou deficincia desse sistema
protetor e ocasionar um desequilbrio desses radicais, o que caracteriza um estresse
oxidativo (SIES, 1993; HALLIWELL, 1996; BIANCHI; FERREIRA; MATSUBARA, 1997;
BIANCHI & ANTUNES, 1999; FINKEL & HOLBROOK 2000; RUBIN et al., 2006). O
estresse oxidativo capaz de lesar as estruturas dos sistemas biolgicos por meio de
alteraes nas protenas, nos lipdeos e no DNA (FINKEL & HOLBROOK, 2000). Vrias
doenas tm suas etiologias provenientes desses danos oxidativos (JACOB, 1995;
HALLIWELL, 1996; FERREIRA & MATSUBARA, 1997; BIANCHI & ANTUNES, 1999;
FINKEL & HOLBROOK 2000; DALLE-DONE et al., 2006; KARADAG et al., 2009).
As ROS liberadas no organismo apresentam enorme evidncia de envolvimento
em doenas degenerativas, como a doena de Parkinson, Alzheimer, diabetes, doenas
pulmonares e outras associadas ao corao, bem como daquelas relacionadas ao
envelhecimento e provenientes de leses ao DNA - carcinognese e mutagnese
(JACOB, 1995; HALLIWELL, 1996; FINKEL & HOLBROOK, 2000).
A oxidao est envolvida em danos s protenas do cristalino resultando em
catarata, em leses aos lipdeos de baixa densidade (LDL) nas paredes de vasos
sanguneos, importantes fatores patolgicos no processo de aterosclerose e na oxidao
da bainha de mielina nos neurnios, responsvel por diversas doenas neuronais
(JACOB, 1995; HALLIWELL, 1996; FINKEL & HOLBROOK, 2000). A tabela 3 apresenta
alguns exemplos de doenas humanas que foram encontradas associadas ao estresse
oxidativo, quer seja direta ou indiretamente, obtidas atravs de anlises com
biomarcadores de danos oxidativos.

33

Tabela 3: Principais doenas relacionadas ao estresse oxidativo

Aceluroplasminemia

Envelhecimento

Injrias ao intestino

Amiloidose sistmica

Esclerose mltipla

Isquemia

Angina instvel

Esclerose sistmica

Leishmania cutnia

Asma

Esferocitose

Lupus eritematoso

Artrite

Falncia renal crnica

sistmico

Artrite reumatide

Fibrose cstica

Meningite

Aterosclerose

Fibrose idioptica

Miocardite autoimune

Cncer

pulmonar

aguda

Cncer do intestino

Hepatite C crnica

Obesidade

Carcinoma renal

Hipercolesterolemia

Osteoartrite

Cardiopatias

Hiperhomocisteinemia

Osteoporose

Catarata

Hiperlipidemia

Pacientes HIV positivos

Cirrose heptica

Hipertenso pulmonar

Pancreatite

Cirrose biliar primria

Infarto do miocardio

Preeclampsia

Diabetes(tipos 1,2)

Infeces HIV

Progeria

Diabetes melitus

Inflamaes crnicas

Retinopatia da

Disfuno cerebral

Inflamaes do miocardio

prematuridade

Displasia broncopulmonar

Hipercolesterolemia

Sarcoidose

severa em neonatos

Hiperhomocisteinemia

Sepse

Doena de Creutzfeldt-

Hiperlipidemia

Sndrome da fadiga crnica

Jacob

Hipertenso pulmonar

Sndrome de Down

Doena de Alzheimer

Infarto do miocardio

Sndrome de Werner

Doena de Crohn

Infeces HIV

Sndrome de Zellweger

Doena de Huntington

Inflamaes crnicas

Sndromes respiratrias

Doena de Parkinson

Inflamaes do miocardio

Sinucleinopatia

Doena renal crnica

Inflamaes e infeces

Uremia (associada com

Doenas cardiovasculares

por Helicobacter pylori

hemodilise ou dilise

Doenas do sistema imune

Injrias ao cordo

peritoneal)

Enfisema

espinhal

Fonte: DALLE-DONNE et al., 2006.

34

4.4.3 As defesas antioxidantes contra o estresse oxidativo

Uma ampla definio de antioxidantes qualquer substncia que, presente em
baixas concentraes quando comparada do substrato oxidvel, capaz de atrasar ou
prevenir a oxidao desse substrato (SIES, 1993; BIANCHI & ANTUNES, 1999;
HALLIWELL et al., 1995). Entende-se como substrato oxidvel qualquer substncia
proveniente dos alimentos ou dos tecidos vivos que possam ser convertidos em outros
elementos (HALLIWELL et al., 1995).
Os antioxidantes podem ser classificados em dois grupos: antioxidantes
enzimticos e antioxidantes no-enzimticos; podem ainda, ser divididos em preventivos
e interceptivos quanto ao modo como protegem o organismo desses oxidantes (AMES et
al., 1993; SIES, 1993; BIANCHI & ANTUNES, 1999; HALLIWELL et al., 1995; FERREIRA
& MATSUBARA, 1997). Na primeira linha de defesa, os antioxidantes agem de forma a
impedir a formao dos oxidantes, principalmente pela inibio das reaes em cadeia;
enquanto na outra forma de defesa, interceptam esses radicais livres impedindo-os de
agir sobre os substratos (SIES, 1993). Os antioxidantes envolvidos no processo de
defesa biolgica do organismo contra radicais livres de origem endgena ou exgena
podem ser no enzimticos e enzimticos. Dentre os no-enzimticos destacam-se: tocoferol (vitamina E), -caroteno (precursor da vitamina A), licopeno, ubiquinol-10,
ascorbato (vitamina C), glutationa (GSH), urato, bilirubina, flavonides e protenas
plasmticas. J os enzimticos so superxido dismutase, glutationa peroxidase,
catalase, enzimas de conjugao, NADPH-quinona, oxidoredutase, GSSG redutase,
suprimento de NADPH, sistema de transporte e sistema de reparo (SIES, 1993).
Os antioxidantes podem ser produzidos no prprio organismo ou podem ser
obtidos atravs do consumo de alimentos como frutas, verduras, legumes, gros e ervas
(AMES et al., 1993). Os antioxidantes sintetizados no corpo humano so superxido
dismutase, catalases, glutationa peroxidase e glutationa reduzida (HALLIWELL, 1996),
enquanto os outros so obtidos dos alimentos.
As plantas contm uma variedade de compostos com ao antioxidante que
podem ser usados na medicina, tais como os compostos fenlicos (cidos fenlicos,
flvonides, quinonas, cumarinas, lignanas, ligninas, estilbenes e taninas), os compostos

35

nitrogenados (alcalides, aminas e betalainas), as vitaminas e os terpenides (incluindo

carotenides), dentre outros com excelente ao sobre os radicais livres (KHKNEN et
al., 1999; ZENG & WANG, 2001; HUANG, 2007; CAI et al., 2003). A tabela 4 apresenta
os principais antioxidantes encontrados nos alimentos e suas principais propriedades.
A capacidade antioxidante das substncias pode ser avaliada por mtodos que
diferem entre si quanto ao mecanismo de reao, as espcies oxidantes alvo, as
condies de reao e a expresso dos resultados (KARADAG et al., 2009). A atividade
antioxidante est, portanto, relacionada com a capacidade desses compostos de
protegerem um sistema biolgico contra o efeito potencialmente nocivo de reaes ou
processos envolvendo espcies oxignio reativa e espcies nitrognio reativas
(KARADAG et al., 2009).

4.4.4 Atividade antioxidante dos metablitos secundrios produzidos por fungos

endofticos
Diante dos danos advindos da oxidao de tecidos e rgos pela liberao de
radicais livres gerados por processos bioqumicos e metablicos, os fungos endofticos
constituem uma fonte alternativa de substncias que podem amenizar ou combater essas
injrias. Muitos compostos antioxidantes apresentam atividade antiinflamatria, antiviral,
antibacteriana,

antitumoral,

antimutagnica,

contra

aterosclerose

contra

envelhecimento, entre outras (HUANG et al., 2007).

A maior parte dos estudos sobre substncias bioativas produzidas por fungos
endofticos com atividade antioxidante refere-se a fungos associados s plantas
medicinais, principalmente plantas utilizadas na medicina tradicional chinesa para o
tratamento e preveno do cncer (CAI et al., 2004; SONG et al., 2005; HUANG et al.,
2007; LIU et al., 2007). Estudos realizados com extratos obtidos de plantas com ao
antioxidante mostram que esta atividade pode ser atribuda aos elevados nveis de fenis
encontrados em seus extratos, sendo estes os maiores responsveis por esta atividade
(CAI et al., 2004).

36

Tabela 4: Principais antioxidantes, suas propriedades protetoras no organismo e

alimentos que os contm.
ANTIOXIDANTE

PROPRIEDADES E ALIMENTO DE ORIGEM

-tocoferol

Inibe peroxidao lipdica, encontrado em leos vegetais (MACHLIN &

(vitamina E)

BENDICH, 1987; HALLIWELL, 1996). Evidncias sugerem sua ao

benfica em minimizar ou impedir oxidao associada doenas como
cncer, artrite, catarata e envelhecimento (BIANCHI & ANTUNES, 1999).

-caroteno

O -caroteno importante na diferenciao celular, apresenta ao

(precursor da

preventiva no desenvolvimento de tumores de bexiga, mama, estmago e

vitamina A)

pele (estudos animais) (BIANCHI & ANTUNES, 1999).

Relacionado funcionalidade das enzimas dependentes de ons para a

Minerais

converso de oxidantes, que esto intimamente envolvidas nos processos

antagnicos carcinognese (MACHLIN & BENDICH, 1987; BIANCHI &
ANTUNES, 1999).
A maioria dos flavonides inibe a peroxidao lipdica (HALLIWELL, 1996;
BIANCHI & ANTUNES, 1999) como os cidos cafeoqumico, cafico,
clorognico e ferlico demonstraram ao em experimentos in vitro

Flavonides

(BIANCHI & ANTUNES, 1999; SOARES, 2002), o cido glico e a

(fenlicos de

curcumina (corante natural de alimentos) tambm so bons exemplos

plantas)

(BIANCHI & ANTUNES, 1999). cido elgico encontrado em uva, morango

e nozes tem ao preventiva no desenvolvimento de cnceres
provenientes do consumo de cigarro (BIANCHI & ANTUNES, 1999). A
quercetina encontrada nos vegetais, frutas e vinho tinto, a miricetina, e
rutina inibem danos oxidativos pelo H2O2 no DNA de linfcitos humanos
(BIANCHI & ANTUNES, 1999). Epicatequina e epigalocatequina presentes
em ch verde e preto apresentam funo de anticarcinognese (RICEEVANS et al., 1995; BIANCHI & ANTUNES, 1999).

37

Diversos estudos comprovam a correlao existente entre a presena de

compostos fenlicos encontrados nos extratos de plantas com a atividade antioxidante
(CAI et al., 2004; SONG et al., 2005; HUANG et al., 2007; LIU et al., 2007). Entretanto,
poucas pesquisas foram realizadas com o objetivo de estudar os metablitos secundrios
com ao antioxidante produzidos por seus fungos endofticos (HUANG et al., 2007).
Huang et al. (2006) isolaram 292 fungos endofticos com ao antioxidante de
folhas, caules, flores, frutos e razes de 29 espcies diferentes de plantas utilizadas na
medicina tradicional chinesa, sendo treze pertencentes famlia Apocynaceae, sete
Asclepiadaceae, quatro Polygonaceae, trs Asteraceae, uma Lamiaceae e uma
Solanaceae. Entre os fungos endofticos obtidos, dez foram capazes de produzir
substncias antioxidantes em concordncia com suas plantas hospedeiras, que tambm
produziam estes metablitos em elevadas concentraes. No se sabe, entretanto, se
esses compostos so produzidos in vivo somente pelo fungo endoftico ou por ambos,
endoftico e planta hospedeira (HUANG et al., 2007). Em outros estudos realizados por
Huang et al. (2007), a planta Nerium oleandes L. (Apocynaceae), foi coletada e analisada
com o intuito de isolar novas substncias antioxidantes e antimicrobianas, produzidas por
fungos endofticos associados a essa planta.

Nerium oleandes L. apresenta

propriedades cardiotnica, antibacteriana, antiinflamatria, anticncer, antiplaquetria,

inseticida, citotxica e depressor do sistema nervoso central (HUANG et al., 2007). Foram
isoladas 42 espcies de fungos endofticos pertencentes a 14 txons diferentes
distribudos entre os seguintes gneros Ascomycetes, Chaetomium, Cladosporium,
Colletotrichum, Hyphomycete, Mycelia sterilia, Phoma e Torula (HUANG et al., 2007). Os
compostos bioativos predominantes encontrados nos extratos desta planta e nos extratos
fngicos foram os cidos fenlicos e seus derivados, como por exemplo, flavonides,
terpenides fenlicos, constituintes volteis e compostos alifticos (HUANG et al., 2007).
Os derivados do cido fenlico possuem, alm de ao antioxidante, ao
antimutagnica, imunomoduladora e antiviral (HUANG et al., 2007). J os compostos
orgnicos volteis esto envolvidos nas interaes entre os organismos, sendo
constituintes importantes no sabor e aroma, alm de possurem ao pesticida (HUANG,
et al., 2007). Estes compostos so, inclusive, muito utilizados na indstria de perfumes
(HUANG, et al., 2007). Os compostos alifticos, por sua vez, so txicos aos fungos,

38

bactrias, nematelmintos e clulas de mamferos, podendo ser neurotxicos e apresentar

atividades antiinflamatria e antiplaquetria (NOGUEIRA et al., 1996; HUANG et al.,
2007).
Muitos extratos obtidos de fungos endofticos isolados dessa planta apresentam
atividade antioxidante e uma ampla ao antimicrobiana, sendo o extrato obtido a partir
de Chaetonium sp. o de maior reatividade antioxidante. Alm disso, tanto os extratos
brutos de folhas e caules de N. oleandes L., quanto do fungo Chaetonium sp.,
apresentam atividade inibitria sobre a enzima xantina oxidase, uma enzima envolvida na
oxidao de hipoxantina ou xantina cido rico (HUANG et al., 2007). Esses
compostos, contudo, precisam ser analisados quanto toxicidade celular, de forma a
serem utilizados ou no como antioxidantes.
Uma espcie de fungo endoftico pertencente ao gnero Cephalosporium foi
isolada

das

razes

da

planta

Trachelospermum

jasminoides

(Apocynaceae),

tradicionalmente utilizada na medicina chinesa para o tratamento de artralgia, dores nas

articulaes e injrias traumticas (SONG et al., 2005). A partir dos extratos desses
fungos foi possvel isolar a substncia grafislactona A (Figura 6), um metablito fenlico
com forte atividade antioxidante e de converso dos radicais livres (SONG et al., 2005).

OH

O
O

OH

H3CO
H3C

OCH3

Figura 6: Estrutura molecular da substncia

grafislactona
A
isolada
do
fungo
Cephalosporium sp. IFB-E001 (SONG et al.,
2005).

A grafislactona A foi a substncia que apresentou maior capacidade de converso

dos radicais 1,1-difenil-2-picrilhidrazil (DPPH) quando comparada com o controle positivo

39

hidrxitolueno butilato (BHT), utilizado neste experimento (SONG et al., 2005). Os

radicais DPPH e hidroxil so considerados potentes oxidantes, reagindo com todas as
biomolculas funcionais em clulas vivas (SONG et al., 2005). Quando analisada a
capacidade desta substncia em retardar a peroxidao do cido linolico, grafislactona
A mostrou, num perodo de 12 horas, uma atividade antioxidante similar do cido
ascrbico, substncia controle (SONG et al., 2005). Grafislactona A pode, ainda, atenuar
o processo de formao de radical hidroxil dependente de ons metal e, dessa forma,
reduzir as injrias celulares induzidas por esses radicais no organismo (SONG et al.,
2005). Esses estudos comprovaram que os metablitos fenlicos obtidos de fungos
endofticos, em especial grafislactona A, podem ser potentes agentes para prevenir a
oxidao de lipdeos de baixa densidade (LDL) in vivo e no manejo de aterosclerose,
visto que a oxidao das LDLs esto associadas ao desenvolvimento desta doena
(SONG et al., 2005).
O extrato do fungo endoftico Xylaria sp., isolado de Ginkgo biloba, foi avaliado
com relao atividade antioxidante, composio qumica e quantidade de compostos
flavonides e fenlicos totais (LIU et al., 2007). Ginkgo biloba comumente usada por
suas propriedades antioxidantes (LIU et al., 2007). Contudo, os extratos metanlicos do
fungo endoftico YX-28 apresentaram elevadas quantidades de compostos fenlicos e
flavonides, superiores aos da prpria planta (LIU et al., 2007). Esse fato sugere que a
propriedade de converso de radicais livres pela planta , na verdade, mais
eficientemente realizada pelo fungo, j que os compostos fenlicos contribuem
significativamente para a ao antioxidante. Entretanto, quando se compara a atividade
antioxidante com os compostos fenlicos totais, preciso considerar que a atividade
antioxidante do extrato varia em funo da sua concentrao, assim como tambm da
sua estrutura qumica e da interao existente entre diferentes compostos (LIU et al.,
2007). Os resultados obtidos por Liu et al. (2007) foram promissores e o fungo endoftico
Xylaria sp. constitui uma potencial fonte de antioxidantes naturais, embora a toxicidade
desses extratos devam ainda ser testadas para confirmar seu uso como aditivo alimentar
(LIU et al., 2007).
Penicillium citrinum, um fungo endoftico isolado de Ginkgo biloba, capaz de
produzir tautmeros de citrinina, um produto conhecido e isolado em 1931 por Heider et

40

al., (2006). Estudos recentes tm mostrado que a citrinina apresenta forte atividade
antibitica e antioxidante, 1,24 vezes maior do que a do Trolox, substncia controle
(HEIDER et al., 2006). Entretanto, esta substncia citotxica para as clulas renais,
sendo capaz de inibir a sntese de DNA, estando envolvida em processos carcinognicos
(HEIDER et al., 2006).

CH3

OH

HO
O

H3C
CH3

OH
CH3

Figura 7: Estrutura qumica trolox,

6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil croman2-cido carboxlico (FREIRE, 2008).

OH

H3C

O
CH3

CH3

Figura 8: Estrutura qumica da citrinina

(FREIRE et al., 2007).

A substncia citrinina existe em duas formas para-tautmero (figura 9-a) e ortotautmero (figura 9-b), ambas so antioxidantes e agem dissociando as ligaes OH
(HEIDER et al., 2006). Entretanto, esses compostos so txicos ao organismo (HEIDER
et al., 2006). Por meio do conhecimento do stio especfico da reao na forma ativa,
possvel construir derivados sintticos que apresentem melhor biocompatibilidade
(HEIDER et al., 2006).

CH3

CH3

O
O

HOOC
OH

CH3 CH
3

CH3
HO

CH3
O

HOOC
O

a
b
Figura 9: Estrutura qumica do para tautomero (a) e orto tautomero (b) (HEIDER
et al., 2006).

41

Pestalotiopsis microspora est entre as espcies de fungos endofticos mais

comumente encontradas associadas a plantas de florestas tropicais (STROBEL et al,
2002). Duas substncias, pestacina e isopestacina, isoladas de extratos obtidos deste
fungo apresentaram atividade antioxidante (STROBEL et al., 2005). As figuras 10 e 11
ilustram a estrutura qumica da pestacina e isopestacina, respectivamente.

OH

HO
OH

H
O OH

OH
HO

Figura 10: Estrutura molecular da

substncia pestacina (HARPER et al.,
2003).

Figura 11: Estrutura molecular da

substncia isopestacina (HARPER et al.,
2003).

A isopestacina mostrou ao pela converso de radicais livres como superxido e

hidroxil (STROBEL et al., 2005), demonstrando ser to efetiva quanto o cido ascrbico.
Outra propriedade observada foi a atividade antifngica apresentada contra certos fungos
patognicos de plantas tais como Pytlhium ultimum (Oomycete), Sclerotinia sclerotiorum
(Ascomycete) e Rhizoctonia solani (Basidiomycete) (STROBEL et al., 2002). A pestacina,
por sua vez, mostrou ser capaz de clivar radicais livres reativos, como as ligaes C-H e
O-H (STROBEL & DAISY, 2003; STROBEL et al., 2005). Em menor grau, esta substncia
apresentou ao antifngica contra a espcie Pythium ultimum, um patgeno de raiz,
alm de ao antitumoral e antibitica (HARPER et al., 2003).
Extratos dos fungos endofticos associados a plantas do gnero Garcinia,
encontradas no sul da Tailndia, apresentaram atividade antimicobacteriana, antimalrica
(contra Plasmodium falciparum), antiviral, antioxidante e antitumoral (PHONGPAICHIT et
al., 2007). Foram obtidos 51 fungos endofticos, dos quais 15 apresentaram atividade
biolgica (PHONGPAICHIT et al., 2007). Estes fungos pertenciam aos gneros
Aspergillus, Botryosphaeria, Curvularia, Fusicoccum, Guignardia, Muscodor, Penicillium e

42

Pestlotiopsis, entre outros (PHONGPAICHIT et al., 2007). Entre os extratos produzidos a

partir destes fungos, 14 apresentaram atividade antioxidante, sendo capazes de
converter radicais hidroxil e o nion superxido, com ao comparvel ao Trolox,
substncia padro (PHONGPAICHIT et al., 2007).
Extratos do rizoma de plantas do gnero Podophyllum (Berberidiaceae) foram
tambm estudadas com relao capacidade de produzir metablitos secundrios com
ao antioxidante. Estas plantas possuem grande utilizao na produo de aril tetralina
lignanas, mundialmente utilizadas para a sntese de inibidores da topoisomerase semisintticos (PURI et al., 2006). Vrias substncias j foram isoladas a partir de extratos
vegetais desta planta, como, por exemplo, as podofilotoxinas, 4-demetilpodofilotoxina,
glicosdeo podofilotoxina e outros compostos polifenlicos que tm inmeras aplicaes
devido suas atividades antitumoral, antiviral, antibacteriana, imunoestimuladora, antireumtica e antioxidante (PURI et al., 2006; PURI et al., 2006). O fungo endoftico
Trametes hirsuta isolado da espcie Podophyllum hexandrum, capaz de produzir
substncias bioativas como as podofilotoxinas e alguns glicosdeos que apresentam
propriedades antioxidante e radioprotetora (PURI et al., 2006).

Um fungo endoftico

isolado do rizoma desta planta tambm apresentou capacidade de produzir o composto

aril tetralina lignana, biologicamente ativo, com potente ao antioxidante, antitumoral e
radioprotetora (PURI et al., 2006). Esses extratos fngicos mostraram significativa
capacidade de quelao de ons metal e atividade de converso dos radicais livres,
principalmente anti-peroxidao lipdica, habilidades tpicas conferidas pelo composto aril
tetralina lignana (PURI et al., 2006).
O tirosol (figura 12) outro exemplo de substncia antioxidante derivada de
compostos fenlicos que apresenta grande capacidade de converso de radicais livres
provenientes do metabolismo do oxignio e do nitrognio, estando presente em vinhos e
no leo de oliva (GUIMARES et al., 2009). O tirosol j foi obtido de diversas espcies de
fungos endofticos isolados de plantas da famlia Asteraceae, especialmente a partir de
extratos do fungo Glomerella cingulata, isolado de Viguiera arenaria (GUIMARES et al.,
2009). Estudos recentes in vivo mostraram sua elevada capacidade de utilizao no
tratamento de derrames, devido ao seu efeito neuroprotetor (GUIMARES et al., 2009).

43

Esta substncia vem mostrando, tambm, atividade autoreguladora nos processos de

crescimento e morfognese em Candida albicans (GUIMARES et al., 2009).

OH
HO
Figura 12: Estrutura qumica do tirosol (GUIMARES et al., 2009).

Os antioxidantes representam uma nova opo de tratamento para muitas

doenas provocadas pelo estresse oxidativo, e tambm, de utilizao como conservante
natural de alimentos. Muitos antioxidantes sintticos usados nos alimentos, apresentam
ao tumoral. Dessa forma os produtos naturais produzidos pelos fungos endofticos so
uma alternativa a estes antioxidantes citotxicos.

4.5 METABLITOS SECUNDRIOS COM ATIVIDADES ANTIVIRAIS

4.5.1 Antivirais
Estima-se que aproximadamente 60% das doenas infecciosas que acometem a
populao das regies desenvolvidas do mundo sejam de origem viral, e apenas 15% de
origem bacteriana (WIGG, 2002). Em 2003, cerca de 38 milhes de pessoas em todo o
mundo era portadora da sndrome da imunodeficincia humana (HIV) e essa epidemia
continua a se expandir rapidamente, principalmente em regies da sia, frica e Europa
(BHADURY et al., 2006).
A primeira droga antiviral sintetizada atuava diretamente na sntese do DNA viral,
mas tambm, na sntese do DNA celular (WIGG, 2002). Esse o problema enfrentado
pelas drogas antivirais, a falta de alvos que possam ser usados para inibir eventos
especficos nos vrus sem interferir com o metabolismo normal das clulas (WIGG, 2002).

44

Outro fator negativo para a terapia com antivirais refere-se demora na manifestao de
sintomas clnicos pelo paciente (WIYAKRUTTA et al., 2004). Geralmente, quando ocorre
as primeiras manifestaes da doena, a multiplicao viral j se encontra em fase final
(WIYAKRUTTA et al., 2004).
Embora difceis, existem alguns alvos potenciais para ao das drogas antivirais.
Essas drogas podem agir inativando diretamente as partculas virais, interferindo com a
adsoro ou bloqueando os receptores necessrios ligao dos vrus s clulas,
inibindo o desnudamento e a liberao do material gentico viral, interferindo com o
processamento de protenas virais ou inibindo o brotamento (WIGG, 2002).
Drogas com atividade antiviral passam por inmeros testes pr-clnicos e clnicos
antes de serem liberadas para uso da populao. Portanto, entre a descoberta de uma
substncia at a sua chegada no mercado, so necessrios mais de 14 anos de estudos.
As pesquisas por metablitos secundrios produzidos por fungos endofticos com ao
antiviral representam uma origem potencial de substncias teraputicas para o
tratamento de doenas virais.

4.5.2 Metablitos secundrios com atividade antiviral produzidos por fungos endofticos
Existem poucos estudos sobre substncias bioativas produzidas por fungos
endofticos com atividade antiviral. Um fato que contribui para isso a ausncia de
sistemas de investigao antiviral na maioria dos programas de descoberta de novas
drogas (STROBEL et al., 2005; STROBEL et al., 2004). Contudo, as pesquisas existentes
at o momento mostram-se promissoras.
Duas substncias antivirais, o cido citnico A e B, obtidas a partir de crescimento
em meio slido do fungo Cytonaema sp., apresentam capacidade de inibir proteases do
citomegalovrus humano (Hcmv)

(STROBEL et al., 2005; STROBEL et al., 2004).

Estudos realizados com 81 espcies de plantas medicinais coletadas na Tailndia

permitiram o isolamento de 582 fungos endofticos que foram testados quanto atividade
biolgica (WIYAKRUTTA et al., 2004). Desses extratos, 92 inibiram Mycobacterium
tuberculosis, 60 foram ativos contra carcinoma epidermide oral humano, 48 contra

45

cncer de mama e 40, dos 110 extratos bioativos, mostraram forte atividade antiviral
contra o vrus Herpes simples tipo 1 (HSV-1) (WIYAKRUTTA et al., 2004). Contudo, 74
destes isolados mostraram citotoxicidade para clulas Vero (WIYAKRUTTA et al., 2004).
Em outros estudos, o fungo endoftico Pullularia sp. foi capaz de inibir a
multiplicao do vrus Herpes simples tipo 1, apresentando baixa toxicidade contra
clulas Vero (ISAKA et al., 2007). Extratos do fungo Pullularia sp., isolados das folhas de
Culophyllum sp., mostraram, alm de atividade antiviral, atividade antitumoral e
antimalrica (ISAKA et al., 2007). Foram isoladas desses extratos as substncias
pulularinas A, B, C e D (ISAKA et al., 2007). A figura 13 mostra a estrutura qumica
dessas substncias.
H
N

N
O
O

CH3

O
O
N

N
R1

O
O

R3

A: R1 = H, R2 = CH3,R3 = OH
B: R1 = CH3, R2 = CH3, R3= OH
C: R1 = H, R2 = H, R3 = OH
D: R1 = H, R2 = CH3, R3 = H

R2

CH3
O

Figura 13: Estrutura qumica da Polularina A, B, C e D (ISAKA et al., 2007).

pulularina

exibiu

atividade

antimalrica,

antiviral,

contra

HSV-1,

antituberculose, antitumoral e fraca citotoxicidade, sugerindo sua possvel utilizao em

ensaios pr-clnicos e clnicos (ISAKA et al., 2007). Os compostos B e C no
apresentaram atividade para o que foram testadas e o composto D ainda no foi
analisado (ISAKA et al., 2007).
A substncia brefeldine A uma substncia pertencente ao grupo dos antibiticos
macroldeos, isolados de numerosos fungos dos gneros Alternaria, Ascochyta,
Aspergillusclavatus, Penicillium, Curvularia, Cercospora, Phyllosticta e Paecilomyces sp.

46

(MEIJUAN et al., 2006). Extratos obtidos de fungos isolados da casca de Cephalotaxus

fortunei foram testados e apresentaram atividade antibitica, antiviral, citosttica,
antimittica e antitumoral (MEIJUAN et al., 2006). A figura 14 ilustra a estrutura qumica
dessa substncia.

OH

CH3

HO

H
H
Figura 14: Estrutura qumica de brefeldine A (MEIJUAN et al., 2006).

O fungo endoftico Phoma sorghina foi isolado de folhas da espcie Tithonia

diversifolia (Asteraceae), conhecida como girassol mexicano (BORGES & PUPO, 2006).
Essa planta muito utilizada para o tratamento da malria, diarria, febre, hepatite e
ferimentos em geral (BORGES & PUPO, 2006). Os extratos dessa planta apresentam
ao antiinflamatria, amoebicida, antiespasmdico, antifngica, antibacteriana e antiviral
(BORGES & PUPO, 2006). A substncia antraquinona e seus derivados foram isolados
dos extratos do fungo Phoma sorghina (figura 15) e tiveram suas estruturas qumicas
elucidadas, sendo que as substncias 4, 5 e 6 eram substncias at ento
desconhecidas (BORGES & PUPO, 2006). Estudos com essas substncias mostraramse promissores, uma vez que j foi possvel o isolamento de uma antraquinona com
atividades antimicrobiana e antitumoral a partir de extratos do fungo Penicilium
janthinellum (BORGES & PUPO, 2006).
Fragmentos de caules aparentemente saudveis foram coletados da planta
medicinal Knema laurina para isolamento de fungos endofticos (CHINWORRUNGSEE
et al., 2008). Entre os isolados obtidos, o fungo KLR 5 provavelmente uma espcie
nova (CHINWORRUNGSEE et al., 2008). A partir dos extratos desse fungo foram
isoladas as substncias brefeldina A (substncia 1, figura 16), 8-deoxi-tricotecina (2),
tricotecolone

(3),

7-hidroxitricodermol

(4)

7-hidroxicirpeno

(5)

(CHINWORRUNGSEE et al., 2008). Essas substncias mostraram atividade contra

47

linhagens de cncer de mama, carcinoma epidermide humano e cncer de intestino, e

somente a brefeldina A apresentou atividade antiviral (CHINWORRUNGSEE et al.,
2008).

OH

OH

OH

HO

HO
O

OH

HO

OH

OH

OH OH
H

HO

OH

OH

HO

6
5
Figura 15: Derivados antraquinona produzidos pelo fungo Phoma sorghina
(BORGES & PUPO, 2006).

OH

H3C

O
CH3

1
H

CH3

CH3

O
CH3

CH3

2
H3C

H3C

O
O

CH3

HO

H3C

OH

CH
OH 3 CH3

H
O

OH

CH
OH 3 CH3

4
5
3
Figura 16: Estruturas das substncias isoladas do KLR 5, numerados de 1-5
(CHINWORRUNGSEE et al., 2008).

48

As diquetopiperazinas (DKPs) so dipeptdeos com ampla atividade biolgica,

possuindo ao antibitica, antifngica, antihipertensiva, antiviral e antitumoral, sendo
tambm utilizada como vacinas sintticas e na quimioterapia do cncer (MUSETTI et
al., 2007). Alm disso, essas substncias so importantes herbicidas e promotoras do
crescimento em sementes de arroz sob condies de estresse (MUSETTI et al., 2007).
As DKPs representam uma classe de substncias ubquas, encontradas em bactrias
marinhas, esponjas, lquens e fungos basidiomicetos, ascomicetos e deuteromicetos
(MUSETTI et al., 2007).
Estudos realizados com extratos do fungo Alternaria alternata conduziram ao
isolamento de trs dipeptdeos testados contra Plasmopara viticola, um fungo
patognico de plantas (MUSETTI et al., 2007). Os resultados mostraram potente
atividade dessas substncias em inibir a esporulao do fungo P. viticola (MUSETTI et
al., 2007).

Estes extratos, embora no testados para outras atividades biolgicas,

apresentam elevadas concentraes de DKPs, sendo portanto alvos para estudos.

Outro metablito secundrio com atividade antiviral a asperamida (figura 17)
(ZHANG et al., 2007). Estudos realizados por Zhang (2007) mostraram que as
asperamidas A e B, isoladas dos extratos do fungo Aspergillus niger obtido de algas
marinhas (Colpomenia sinuosa), apresentam significativa atividade antiviral e moderada
atividade contra Candida albicans (ZHANG et al., 2007).

OH

O
NH
RO
OH
Figura 17: Estrutura da asperamida A (R=H) e asperamida B (R= -D glucopiranosdeo)
(ZHANG et al., 2007).

49

As asperamidas so esfingolipdeos que apresentam tambm atividade

antiepatotxica, antitumoral, antifngica, antiviral e imunomoduladora (ZHANG et al.,
2007). So comumente encontrados em bactrias e na maioria dos organismos
eucariticos e, diante de suas propriedades, so alvos interessantes de pesquisas.
Diversos estudos comprovam o potencial de aplicao de muitos metablitos de
fungos marinhos com atividades antiviral, antitumoral, antimicrobiano, antiplasmodial e
antiinflamatrio (BHADURY et al., 2006). A versatilidade desses compostos,
provavelmente, se deve s presses exercidas por esses ambientes nicos e extremos
habitados pelos fungos endofticos (BHADURY et al., 2006).
A pesquisa por compostos produzidos por fungos endofticos marinhos, embora
diminuta, mostra-se muito promissora (BHADURY et al., 2006). Os compostos
equisetina e fomasetina apresentaram atividades anti-HIV in vitro (BHADURY et al.,
2006). Outra substncia antiviral a sansalvamida A, isolada do fungo Fusarium sp
(BHADURY et al., 2006). Extratos desse fungo mostraram capacidade de inibir a
topoisomerase do poxvrus Molluscum contagiosum (MCV) por meio do impedimento do
relaxamento do DNA catalisado pela topoisomerase (BHADURY et al., 2006). Os
peptdeos Halovir A, B, C, D e E, isolados de Scytidium sp., mostraram potente ao
antiviral contra HSV 1 e 2 (BHADURY et al., 2006). Apesar do mecanismo de ao
ainda no ter sido elucidado, acredita-se que estas substncias interfiram na
estabilidade da membrana (BHADURY et al., 2006). A estaquiflina um novo
terpenide isolado de Stachybotrys sp. que apresenta atividade antiviral in vitro contra o
vrus influenza tipo A (H1N1) (BHADURY et al., 2006). Os resultados desse estudo
mostraram-se melhores do que aqueles apresentados pelas drogas antivirais
amantadina e zanamivir utilizadas como substncias controle (BHADURY et al., 2006).
O fungo endoftico Phomopsis euphorbiae obtido da planta Trewia nudiflora,
mostrou atividade contra o vrus HIV (YU et al., 2008). Quatro substncias novas foram
isoladas desses extratos, as fomoeuforbinas A, B, C e D (figura 18) (YU et al., 2008).
Entretanto, estudos in vitro com estas substncias mostraram fraca atividade anti-HIV,
sendo que as formoeuforbinas A e C foram as que apresentaram menor ndice de ao
(YU et al., 2008). Por se tratar de substncias novas, esses so resultados ainda
preliminares, sendo necessrios novos estudos.

50

HO

HO
O

H3C
H

OH

COOH

H
A

OH

CH3

H
B

O
HO

HO

H3C
H

H3C

OH

OH

H3C
H

CH3
OH

OH

OH
CH3
OH

D
C
Figura 18: Estruturas da fomoeuforbinas A, B, C e D (YU et al., 2008).

Foram

isolados

ainda

51

fungos

endofticos

da

planta

Garcinia

sp.

(PHONGPAICHIT et al., 2007). Estes fungos mostraram atividade antimicobacteriana,

antimalrica, antiviral, antioxidante e antitumoral (PHONGPAICHIT et al., 2007). Os
fungos que apresentaram atividade biolgica pertenciam aos gneros Aspergillus,
Botryosphaeria,
Pestalotiopsis,

Curvularia,
e

Phomopsis

Fusicoccum,
spp.

Guignardia,

uma

espcie

Muscodor,

Penicillium,

ainda

identificada

no

(PHONGPAICHIT et al., 2007). Apenas quatro dos 24 extratos fngicos selecionados

apresentaram atividade contra HSV (PHONGPAICHIT et al., 2007).
O levantamento bibliogrfico sobre estas substncias naturais, permitiu a anlise
da situao das drogas antivirais, atualmente pesquisadas, derivadas de metablitos
secundrios de fungos endofticos. Dentre as substncias relatadas, aquelas que no
apresentaram toxicidade celular, como cido citnico A e B e as pulularinas A, B, C, e
D, constituem drogas potenciais para o tratamento de algumas doenas virais. Muitas
substncias apresentaram atividade antiviral, sendo que algumas foram consideradas
como molculas novas, e outras, ainda no identificadas. No entanto, apesar da
atividade dessas substncias, as mesmas no foram analisadas quanto toxicidade
celular sugerindo estudos mais detalhados. Outras, ainda que citotxicas, a exemplo de

51

Asperamida, brefeldine A, diquetopiperazinas, antraquinonas, sansalvamida A,

fomoeuforbinas A, B, C e D constituem importantes fontes de atividades, no somente
antiviral, como tambm antitumoral. Desse modo, diante da escassez de drogas para o
tratamento de doenas virais, esses estudos, embora, iniciais, representam uma fonte
promissora para a descoberta de novas opes teraputicas.

52

5 CONCLUSO
Microrganismos endofticos constituem fontes promissoras de produtos bioativos
com potencial para serem utilizados na indstria, na agricultural e na medicina. Entre os
microrganismos endofticos, os fungos so os mais frequentemente isolados, podendo
colonizar os diversos tecidos de sua planta hospedeira. Sua aplicao biotecnolgica
vem crescendo, entretanto, ainda constitui uma rea muito pouco explorada. Diante dos
resultados encontrados nessa reviso bibliogrfica para fungos endofticos capazes de
produzir metablitos com atividades antioxidante e antiviral, tem-se uma enorme
expectativa de utilizao dessas substncias para o tratamento de inmeras doenas
virais e para aquelas provocadas pelos radicais livres. Diante desses fatos, de grande
importncia valorizar a preservao dos ecossistemas, uma vez que estes abrigam
inmeras espcies de plantas ainda no pesquisadas quanto aos seus microrganismos
endofticos.

53

6 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ALEXOPOULOS, C.J; MIMS,C.W.; BLACKWELL,M. Introductory Mycology. 4ed.
New York: John Wiley & Sons, 1996.
AMES, B.N.; SHIGENAGA, M.K.; HAGEN, T.M. Oxidants, antioxidants, and degenerative
diseases of aging. v. 90, p. 7915-7922, 1993.
ARNOLD, A.E.; MAYANARD, Z.; GILBERT, G.S.; COLEY, P.D.; KURSAR, T.A. Are
tropical fungal endophytes hyperdiverse? Ecology Letters, v. 3, p. 267-274, 2000.
AZEVEDO, J.L. Botnica: uma cincia bsica ou aplicada? Revista Brasileira de
Botnica, v.22, p. 225-229, 1999.
AZEVEDO, J.L.; MACCHERONI, W.J.; PEREIRA, J.O.; ARAJO, W.L. Endophytic
microorganisms: a review on insect control and recent advances on tropical plants. EJB
Eletronic Journal of Biotechnology, v. 3, p. 40-64, 2000.
BHADURY, P.; MOHAMMAD, T.B.; WRIGHT, P.C. The current status of natural
products from marine fungi and their potential as anti-infective agents. Microbiol
Biotechnol, v. 33, p. 325-337, 2006.
BRDY, J. Bioactive microbial metabolites. The Journal of Antibiotics, v. 58, p. 1-26.
2005.
BIANCHI, M.L.P.; ANTUNES, L.M.G. Radicais livres e os principais antioxidantes da
dieta. Revista de Nutrio, v. 12, p. 123-130, 1990.
BORGES, W.S.; PUPO, M.T. Novel athraquinone derivatives produces by Phoma
sorghina, an endophyte found in association with the medicinal plant Tithonia diversifolia
(Asteraceae). Sociedade Brasileira de Qumica, v. 17, p. 929-934, 2006.
BRADY,S.F.;
WAGENAAR,M.M.; SINGH, M.P.; JANSO, J.E.; CLARDY, J. The
Cytosporones, New Octaketide Antibiotics Isolated from an Endophytic Fungus. Organic
Letters, v. 2, p. 443-446, 2000.
CAI, Y.; LUO, Q.; SUN, M.; CORKE, H. Antioxidant activity and phenoliccompounds of
112 traditional Chinese medicinal plants associated with anticancer. Life Sciences, v. 74,
p. 2157-2184, 2004.
CAO, S.X.; YOU, J.L.; ZHOU, S.N. Endophytic fungi from Musa acuminata leaves and
roots en South China. Word Journal of Microbiology & Biotechnology, p. 169-171, 2002.
CARLILE, M.J. WATKINSON S.C. The Fungi. Academic Press, New York, p. 482,
1997.

54

CASTILLO, U.; HARPER, J.K.; STROBEL, G.A.; SEARS, J.; ALESI, K.; FORD, E.; LIN,
J.; HUNTER, M.; MARANTA, M.; GE, H.; YAVER, D.; JENSEN, J.B.; PORTER, H.;
ROBISON, R.; MILLAR, D.; HESS, W.M.; CONDRON, M.; TEPLOW, D. Kakadumycins,
novel antibiotics from Streptomyces sp. NRRL 30566, an endophyte of Grevillea
pteridifolia. Microbiology Letters, 2003.
CASTILLO, U.F.; STROBEL, G.A.; FORD, E.J.; HESS, W.M.; PORTER, W.; JENSEN,
J.B.; ALBERT, H.; ROBISON, R.; CONDRON, M.A.M.; TEPLOW, D.B.; STEVENS, D.;
YAVER, D. Munumbicins, wide-spectrum antibiotics produced by Streptomyces NRRL
30562,endophytic on Kennedia nigriscans. Microbiology, v. 148, p. 2675-2685, 2002.
CHINWORRUNGSEE,M.; WIYAKRUTTA, S.; SRIUBOLMAS, N.; CHUAILUA, N.;
SUKSAMRARN, A. Cytotoxic activities of trichothecenes isolated from an endophytic
fungus belonging to order hypocreales. Archives of Pharmacal Research, v. 31, p. 611616, 2008.
DALLE-DONNE, I.; ROSSI, R.; COLOMBO, R.; GIUSTARINI, D.; MILZANI, A.
Biomarkers of oxidative damage in human disease. Clinical Chemistry, p. 601-623,
2006.
EZRA, D.; CASTILLO, U.F.; STROBEL, G.A.; HESS, W.M.; PORTER, H.; JENSEN,J.B.;
CONDRON, M.A.M.; TEPLOW, D.B.; SEARS, J.; MARANTA, M.; HUNTER, M.; WEBER,
B.; YAVER, D. Coronamycins, peptide antibiotics produced by a verticillate Streptomyces
sp. (MSU-2110) endophytic on Monstera sp. Microbiology, v. 150, p. 785-793, 2004.
FANG, Y-Z.; YANG, S., WU, G. Free Radicals, Antioxidants, and Nutrition. Nutrition, v.
18, p. 872 879, 2002.
FERRARA, M.A. Fungos Endofticos. Potencial para a Produo de Substncias
Bioativas. Revista Fitos, Rio de Janeiro, v.2, n.1, p.73-79, jun, 2006.
FERREIRA, A.L.A.; MATSUBARA, L.S. Radicais livres: conceitos, doenas relacionadas,
sistema de defesa e estresse oxidativo. Revista da Associao Medica Brasileira, v. 43,
p. 61-68, 1997.
FINKEL, T.; HOLBROOK, N.J. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing.
Nature, v. 408, p. 239-247, 2000.
FIRKOV, S.; STURDKOV, M.; MCKOV, M. Bioactive secondary metabolites
produces by microorganisms associated with plants. Biologia Bratislava. p.251-257, 2007.
FREIRE, F.C.C.O.; VIEIRA, I.G.P.; GUEDES, M.I.F.; MENDES, F.N.P.; Micotoxinas:
importncia na alimentao e na sade humana e animal. Embrapa Agroindstria
Tropical, p. 1-48, 2007.
GAMBOA, M.A.; BAYMAN, P. Communities of endophyric fungi in leaves of a tropical
timber tree (Guarea guidonia: Meliaceae). Biotropica. p. 352-360, 2001.

55

GUIMARES, D.O.; BORGES, K.B.; BONATO, P.S.; PUPO, M.T. A simple method for
the quantitative analysis of tyrosol by HPLC in liquid Czapek cultures from endophytic
fungi. Journal Brazilian of Chemistry Society, v.20, p. 188-194, 2009.
GUNATILAKA, A.A.L. Natural products from plant-associated microorganisms:
distribution, structural diversity, bioactivity, and implications of their occurrence. Journal
of Natural Products, v. 69, p. 509-526, 2006.
GUO, B.; WANG, Y.; SUN, X.; TANG, K. Bioactive Natural Products from Endophytes: A
Review. Applied Biochemistry and Microbiology. v. 44, No. 2, p. 136142, 2008.
KHKNEN, M.P.; HOPIA, A.I.; VUORELA, H.J.; RAUHA, J-P.; PIHLAJA, K.;
KUJALA, T.S.; HEINONE, M. Antioxidant Activity of Plant Extracts Containing Phenol
Compounds. Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 47, p. 39543962, 1999.
HALLIWELL, B. Antioxidants in human health and disease. Annual Reviews of Nutrition,
v. 16, p. 33-50, 1996.
HALLIWELL, B.; AESCHBACH, R.; LLIGER, J.; ARUOMA, O.I. The characterization of
antioxidants. fd , v. 33, p. 601-617, 1995.
HARPER, J.K.; ARIF, A.M.; FORD, E.J.; STROBEL, G.A.; PORCO, J.A.; TOMER,
J.D.P.; ONEILL, K.L.; HEIDER, E.M.; GRANT, D.M. Pestacin: a 1,3-dihydro
isobenzofuran from Pestalotiopsis microspora possessing antioxidant and antimycotic
activities. Tetrahedron, v. 59, p. 2471-2476, 2003.
HAWKSWORTH, D. L. The magnitude of fungal diversity: the 1.5 million species estimate
revisited. The British Mycological Society, p.1422-1432, 2001.
HEIDER, E.M.; HARPER, J.K.; GRANT, D.M.; HOFFMAN, A.; DUNGAN, F.; TOMER,
D.P.; NEILL, K.L. Exploring unusual antioxidant activity in a benzoic acid derivative: a
proposed mechanism for citrinin. Tetrahedron, v. 62, p. 1199-1208, 2006.
HUANG, W-Y.; CAI, Y-Z.; HYDE, K.D.; CORKE, H.; SUN, M. Endophytic fungi from
Nerium oleander L (Apocynaceae): main constituents and antioxidant activity. World
Journal Microbiology Biotechnology, v. 23, p. 1253-1263, 2007.
HUANG, W-Y.; CAI, Y-Z.; XING, J.; CORKE, H. A potential antioxidant resource:
endophytic fungi from medicinal plants. Economic Botany, v. 61, p. 14-30, 2006.
ISAKA, M.; BERKAEW, P.; INTEREYA, K.; KOMWIJIT, S.; SATHITKUNANON, T.
Antiplasmodial and antiviral cyclohezadepsipeptides from the endophytic fungus Pullularia
sp. BCC 8613. Tetrahedron, v. 63, p. 6855-6860, 2007.
JACOB, R.A. The integrated antioxidant system. Nutrition Research, v. 15, p. 755-71,
1995.

56

JADULCO, R.; BRAUERS, G.; EDRADA, R.A.; EBEL, R.; WRAY, V.; SUDARSONO;
PROKSCH, P. New Metabolites from Sponge-Derived Fungi Curvularia lunata and
Cladosporium herbarum. Journal of Natual Products, v. 65, p. 730-733, 2002.
KARADAG, A.; OZCELIK, B.; SANER, S. Review of methods to determine antioxidant
capacities. Food Anal. Methods, v. 2, p. 41-60, 2009.
KLEMKE, C.; KEHRAUS, S.; WRIGHT, A.D.; KNIG, G.M. New Secondary Metabolites
from the Marine Endophytic Fungus Apiospora montagnei. Journal of Natual Products, v.
67, p. 1058-1063, 2004.
KNIGHT, V.; SANGLIER, J.J.; DITULIO, D.; BRACCILI, S.; BONNER, P.; WATERS, P.;
HUGHES, D.; ZHANG, L. Diversifying microbial natural products for drug discovery.
Applied Microbiol Biotechnol, v. 62, p. 446-458, 2003.
KOGEL, K-H.; FRANKEN, P.; HCKELHOVEN, R. Endophyte or parasite what
decides? Current Opinion in Plant Biology, v. 9, p. 358-363, 2006.
KROHN, K.; BIELE, C.; DROGIES, K-H.; STEINGRVER, K.; AUST, H-J.; DRAEGER,
S.; SCHULZ, B. Fusidilactones, a New Group of Polycyclic Lactones from an Endophyte,
Fusidium sp . European Journal of Organic Chemistry, v. 2002, p. 2331-2336, 2002.
LI, J.L.; HARPER, J.K.; GRANT, D.M.; TOMBE, B.O.; BASHYAL, B.; HESS, W.M.;
STROBEL, G.A. Ambuic acid, a highly functionalized cyclohexenone with antifungal
activity from Pestalotiopsis spp. and Monochaetia sp. Phytochemistry, v. 56, p. 463-468,
2001.
LI, J.Y.; STROBEL, G.A. Jesterone and hydroxy-jesterone antioomycete cyclohexenone
epoxides from the endophytic fungus Pestalotiopsis jesteri. Phytochemistry, v. 57, p.
261-265, 2001.
LIU, X.; DONG, M.; CHEN, X.; JIANG, M.; LV, X.; YAN, G. Antioxidant activity and
phenolics of an endophytic Xylaria sp. from Ginkgo biloba. Food Chemistry, v. 105, p.
548-554, 2007.
LIU, J.Y.; SONGA, Y.C.; ZHANGA, Z.; WANGA, L.; GUOB, Z.J.; ZOUA, W.X.; TANA,
R.X. Aspergillus fumigatus CY018, an endophytic fungus in Cynodon dactylon as a
versatile producer of new and bioactive metabolites. Journal of Biotechnology, v. 114, p.
279287, 2004.
MACHLIN, M.J.; BENDICH, A. Free radical tissue damage: protective role of antioxidant
nutrients. Symposium presented by the American Institute of Nutrition at the 71 st Annual
Meeting of the Federation of American Societies for Experimental Biology, p. 441-445,
1987.

57

MADISON, W. Antioxidants and oxidative stress in exercise. Society for Experimental

Biology and Medicine, p. 283-292, 1999.
MEIJUAN, F.; JIANFENG, W.; YAOJIAN, H.; YUFEN, Z. Rapid screening and
identification of Brefeldin A in endophytic fungi using HPLC-MS/MS. fron.
MUELLER, G.M.; BILLS, G.F.; FOSTER, M.S. Bodiversity of Fungi Inventory and
monitoring methods. In: STONE, J.K.; POLISHOOK, J.D.; WHITE, J.F.J. Endofitic Fungi.
Elsevier Academic Press, p. 241-270, 2004.
MUSETTI, R.; POLIZZOTTO, R.; VECCHIONE, A.; BORSELLI, S.; ZULINI, L.;
DAMBROSIO, M.; SANITA` DI TOPPI, L.; PERTOT, I. Antifungal activity of
diketopiperazines extracted from Alternaria alternata against Plasmopara viticola: An
ultrastructural study. Mcron, v. 38, p. 643-650, 2007.
OHZEKI, T.; MORI, K. Synthetic racemate and enantiomers of Cytosporone E, a
metabolite of an endophytic fungus, show indistinguishably weak antimicrobial activity.
Bioscience Biotechnology Biochemistry, v. 12, p. 2584-2590, 2003.
PAHARI, P.; SENAPATI, B.; MAL, D. Regiospecific synthesis of isopestacin, a naturally
occuring isobenzofuranone antioxidant. Tetrahedron Letters, v. 45, p. 5109-5112, 2004.
PARK; JOONG-HYEOP; CHOI, J.A; LEE, H.B.; KIM, K.M.; JUNG, H.S.; LEE, S-W.;
JANG, K.S.; CHO, K.Y.; KIM, J-C. Griseofulvin from Xylaria sp. strain f0010, an
endophytic fungus of Abies holophylla and its antifungal activity against plant pathogenic
fungi. Journal of Microbiology and Biotechnology, v. 15, p. 112-117, 2005.
PELEZ, F. The historical delivery of antibiotics from microbial natural productsCan
history repeat? Biochemical Pharmacology, v. 71, p. 981-990, 2005.
PHONGPAICHIT, S.; NIKOM, J.; RUNGJINDAMAI, N.; SAKAYAROJ, J.; HUTADILOKTOWATANA, N.; RUKACHAISIRIKUL, V.; KIRTIKARA, K. Biological activities of extracts
from endophytic fungi isolated from Garcinia plants. Immunology Medical Microbiol, v. 51,
p. 517-525, 2007.
PURI, S.C.; NAZIR, A.; CHAWLA, R.; ARORA, R.; RIYAZ-UL-HASAN, S.; AMNA, T.;
AHMED, B.; VERMA, V.; SINGH, S.; SAGAR, R.; SHARMA, A.; KUMAR, R.; SHARMA,
R.K.; QAZI, G.N. The endophytic fungus Trametes hirsuta as a novel alternative source of
podophyllotoxin and related aryl tetralin lignans. Journal of Biotechonology, v. 122, p. 494510, 2006.
PUTZKE, J.; PUTZKE, M.T.L. Os Reinos dos Fungos. Editora EDUNISC, Rio Grande
do Sul, v.2, p. 617-829, 2002.
RICE-EVANS, C.; MILLER, N.; PAGANGA, G. Antioxidant properties of phenolic
compounds. Trends in Plant Science, v. 2, p. 152-159, 1997.

58

RODRIGUES, K.F.; COSTA, G.L.; CARVALHO, M.P.; EPIFANIO, R.A. Evaluation of

extracts produced by some tropical fungi as potential cholinesterase inhibitors. Word
Journal of Microbiology & Biotechnology, v. 21, p. 1617-1621, 2005.
RUBIN, E.; GORSTEIN, F.; RUBIN, R.; SCHWARTING, R.; STRAYER, D. Rubin
Patologia: Bases clinicipatolgicas da Medicina. In: RUBIN & STRAYER. Leso
cellular. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, p. 3-39, 2006.
SAIKKONEN, K.; FAETH, S.H.; HELANDER, M.; SULLIVAN, T.J. Fungal endophytes:
continuum of interactions with host plants. Annual Review of Ecology and Systematics, p.
319-343, 1998.
SANTOS, N.S.O.; ROMANOS, M.T.V.; WIGG, M.D. Introduo virologia. In: WIGG.
Antivirais. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, p. 47-58, 2002.
SANTOS, R.M.G.; RODRIGUES-FO, E.; ROCHA, W.C.;TEIXEIRA, M.F.S. Endophytic
fungi from Melia azedarach. World Journal of Microbiology & Biotechnology, v. 19, p.
767770, 2003.
SCHULZ, B.; BOYLE, C. The endophytic continuum. Mycology Research. p. 661-686,
2005.
SCHULZ, B.; BOYLE, C.; DRAEGER, S.; RMMERT, A.; KROHN, K. Endophytic fungi: a
source of novel biologically active secondary metabolites. Mycology Research. p. 9961004, 2002.
SCHULZ, B.; RMMERT, A-K.; DAMMANN, U.; AUST, H-J.; STRACK, D. The
endophyte-host interaction: a balanced antagonism? Mycology Research, v. 10, p.12751283, 1999.
SCHWARZ, M.; KPCKE, B.; WEBER, R.W.S.; STERNER, O.; ANKE, H. 3Hydroxypropionic acid as a nematicidal principle in endophytic fungi. Phytochemistry, v.
65, p. 22392245, 2004.
SIES, H. Strategies of antioxidant defense. European Journal of Biochemistry, v. 213, p.
213-219, 1993.
SOARES, S.E. cidos fenlicos como antioxidantes. Revista de Nutrio, v. 15, p. 71-81,
2002.
SONG, Y.C.; HUANG, W.Y.; SUN, C.; WANG, F.W.; TAN, R.X. Characterization of
graphislactone A as the antioxidant and free radical-scavenging substance from the
culture of Cephalosporium sp. IFB-E001, an endophytic fungus in Trachelospermum
jasminoides. Biological & Pharmaceutical Bulletin, v. 28, p. 506-509, 2005.

59

SONG, Y.C.; LI, H.; YE , Y.H.; SHAN, C.Y.; YANG, Y.M.; TAN, R.X. Endophytic
naphthopyrone metabolites are co-inhibitors of xanthine oxidase, SW1116 cell and some
microbial growths. Microbiology Letters, v. 241, p. 67-72, 2004.
STIERLE, A.; STROBEL, G. The search for a taxol-producing microorganism among the
endophytic fungi of the pacific yew, taxus Brevifolia. Journal of Natural Products, v. 58, p.
1315-1324, sep. 1995.
STONE, J.K., BACON, C.W. & WHITE, J.F. An overview of endophytic microbes:
endophytism defined. In: C.W. BACON & J.F. WHITE (Ed.) Microbial Endophytes.
New York: Marcel Dekker.pp. 3-30, 2000.
STROBEL, G.A. Endophytes as sources of bioactive products. Microbes and Infection.
v.5, p.535-544, 2003.
STROBEL, G.A., Microbial gifts from rain forests. Symposium contribution. Canadian
Journal of Plant Pathology, v. 24, p. 14-20, 2002.
STROBEL, G.A.; DAISY, B. Bioprospecting for microbial endophytes and their natural
products. Microbiolgy and Molecular Biology Reviews, p. 491-502, 2003.
STROBEL. G.A.; DAISY, B.; CASTILLO, U. The biological promise of microbial
endophytes and natural products. Plant Pathology Journal. p.161-176, 2005.
STROBEL, G.A.;DAISY, B.; CASTILLO, U.; HARPER, J. Natural products from
endophytic microorganisms. Journal of Natural Products, v. 67, p. 257-268, 2004.
STROBEL, G.A.; FORD, E.; WORAPONG, J.; HARPER, J.K.; ARIF, A.M.; GRANT, D.M.;
FUNG, P.C.W.; CHAU, R.M.W. Isopestacin, an isobenzofuranone from Pestalotiopsis
microspora, possessing antifungal and antioxidant activites. Phytochemistry, v. 60, p. 179183, 2002.
SUN, J.; GUO, L.; ZANG, W.; PING, W.; CHI, D. Diversity and ecological distribution of
endophytic fungi associated with medicinal plants. Science in China Series C: Life
Sciences, v. 51, p. 751-759, 2008.
TAN, R.X.; ZOU, W.X. Endophytes: a rich source of functional metabolites. The Royal
Society of Chemistry. p.448-459, 2001.
VIEIRA, M.L.A. Bioprospeco da atividade antimicrobiana de fungos endofticos
associados a Solanum cernuum vell. (solanaceae). Dissertao de mestrado. UFMG,
2008, 117p.
VINING, L.C. Functions of secondary metabolites. Annual Revews Microbiology, p.395427, 1990.

60

WEBER, R.W.S.; STENGER, E.; MEFFERT, A.; HAHN, M. Brefeldin A production by

Phoma medicaginis in dead pre-colonized plant tissue: a strategy for habitat conquest?
Mycological Research, p. 662-671, 2004.
WIYAKRUTTA, S.; SRIUBOLMAS, N.; PANPHUT, W.; THONGON, N.;
ANWISETKANJANA, K.; RUANGRUNGSI, N.; MEEVOOTISOM, V. Endophytic fungi
with anti-microbial, anti-cancer and anti-malarial activities isolated from Thai medicinal
plants. World Journal of Microbiology & Biotechnology, v. 20, p. 265-272, 2004.
YU, B-Z.; ZHANG, G-H.; DU, Z-Z.; ZHENG, Y-T.; XU, J-C.; LUO, X-D.
Phomoeuphorbins AD, azaphilones from the fungus Phomopsis euphorbiae.
Phytochemistry, v. 69, p. 25232526, 2008.
ZHENG, W.; WANG, S.Y. Antioxidant Activity and Phenolic Compounds in Selected
Herbs. Journal of Agricultural and Food Chemistry, p. 5165-5170, 2001.
ZHANG, Y.; WANG, S.; LI, X-M.; CUI, C-M.; FENG, C.; WANG, B-G. New Sphingolipids
with a Previously Unreported 9-Methyl-C20-sphingosine Moiety from a Marine Algous
Endophytic Fungus Aspergillus niger EN-13. Lipids, v. 42, p. 759764, 2007.
ZHAO, P-J.; FAN, L-M.; LI, G-H.; ZHU,N.; SHEN, Y-M. Antibacterial and antitumor
macrolides from Streptomyces sp. is9131. Archives of Pharmacal Research, v. 28, p.
1228-1232, 2005.