Replicacin de ADN

Replicacin de ADN. La doble hlice es desenrrollada y cada hebra hace de plantilla para la sntesis de
la nueva cadena. El ADN polimerasa aade los nucletidos complementarios a los de la cadena original.

El proceso de replicacin de ADN es el mecanismo que permite al ADN duplicarse (es decir,
sintetizar una copia idntica). De esta manera de una molcula de ADN nica, se obtienen dos
o ms "rplicas" de la primera. Esta duplicacin del material gentico se produce de acuerdo
con un mecanismo semiconservador, lo que indica que las dos cadenas complementarias
del ADN original, al separarse, sirven de molde cada una para la sntesis de una nueva
cadena complementaria de la cadena molde, de forma que cada nueva doble hlice contiene
una de las cadenas del ADN original. Gracias a la complementacin entre las bases que
forman la secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante propiedad de
reproducirse idnticamente, lo que permite que la informacin gentica se transmita de
una clulamadre a las clulas hijas y es la base de la herencia del material gentico.
La molcula de ADN se abre como una cremallera por ruptura de los puentes de
hidrgeno entre las bases complementarias puntos determinados: los orgenes de replicacin.
Las protenas iniciadoras reconocen secuencias de nucletidos especficas en esos puntos y
facilitan la fijacin de otras protenas que permitirn la separacin de las dos hebras de ADN
formndose una horquilla de replicacin. Un gran nmero de enzimas y protenas intervienen

en el mecanismo molecular de la replicacin, formando el llamado complejo de replicacin

o replisoma. Estas protenas y enzimas son homlogas en eucariotas y arqueas, pero difieren
en bacterias.
ndice
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1 Caractersticas generales del ADN

2 Semiconservadora

3 Secuencial y bidireccional desde puntos fijos

o

3.1 El origen de replicacin

3.2 Secuencialidad

3.3 La replicacin avanza en forma de horquilla

3.4 Bidireccionalidad

4 Semidiscontinua

5 ADN Polimerasas

6 Modo de operacin

7 Proceso general
o

7.1 Iniciacin

7.2 Elongacin

7.3 Terminacin (de los genomas lineales)

8 Vase tambin

9 Notas

10 Referencias

11 Bibliografa

12 Enlaces externos

Caractersticas generales del ADN[editar]

Es una cadena molecular, quiere decir que es una sustancia constituida por distintos
tipos de molculas sencillas ligadas entre s para as ir formando cadenas.

Es bastante largo y extremadamente delgado. Si aumentramos cien veces el tamao

del ncleo celular alcanzara el tamao de la punta de un alfiler, mientras que el ADN
plegado en ese mismo ncleo alcanzara la longitud de un campo de ftbol.

Hay cuatro tipos de eslabones, esos son las molculas denominadas nucletidos en la
cadena. Sus nombres son: cido adenlico (adenina), cido guanlico (guanina), cido
citidlico (citosina) y cido timidlico (timina) y las abreviaturas, A, G, C, T, para cada una.

Semiconservadora[editar]

Tres posibles modelos de replicacin. a) Conservadora, b) Dispersora, c) Semiconservadora

(mecanismo real).

En cada una de las molculas hijas se conserva una de las cadenas originales, y por eso se
dice que la replicacin del ADNes semi conservadora. Hasta que finalmente se pudo
demostrar que la replicacin es semiconservadora, se consideraron tres posibles modelos
para el mecanismo de la replicacin:

Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las molculas hijas se conserva

una de las cadenas originales.

Conservadora. Se sintetiza una molcula totalmente nueva, copia de la original.

Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de fragmentos de la cadena

antigua y fragmentos de la nueva.

Experimento de Meselson y Stahl.

El experimento de Meselson y Stahl en 1958 permiti demostrar que el mecanismo real se

ajusta a la hiptesis de replicacin semiconservadora. Para ello se hicieron crecer clulas
de Escherichia coli en presencia de nitrgeno-15, unistopo del nitrgeno ms pesado de lo
habitual. En consecuencia, el istopo se incorpor a las cadenas de ADN que se iban
sintetizando, hacindolas ms pesadas.
Una vez conseguido el primer objetivo, las clulas fueron transferidas a un medio que
contena nitrgeno-14, es decir, un medio ms ligero, donde continuaron su crecimiento
(divisin celular, que requiere la replicacin del ADN). Se purific el ADN y se analiz mediante
una centrifugacin en gradiente de cloruro de cesio, en donde hay ms densidad en el fondo
del tuboque en la parte media del mismo.
En la primera generacin (figura 2.b) se obtuvo una nica banda de ADN con densidad
intermedia. En la segunda generacin (figura 2.c) se obtuvieron dos bandas, una con
densidad ligera y otra con densidad intermedia o hbrida. En la tercera generacin se
obtuvieron dos bandas, una ligera (con una abundancia del 75 %) y otra intermedia (con el
25 % restante).

La banda intermedia o hbrida representa una molcula de ADN que contiene una cadena
pesada (original) y otra ligera (recin sintetizada). Las cadenas ligeras representan una
molcula de ADN en la que las dos cadenas han sido sintetizadas (no existan an cuando las
clulas se pusieron en presencia de nitrgeno-15).
El hecho de que cada vez haya ms molculas ligeras y se mantenga el nmero de molculas
intermedias demuestra que la replicacin del ADN es semiconservadora. Si fuera
conservadora, aparecera siempre una banda pesada y el resto ligeras (figuras 1.a, 1.b, 1.c) .
Si fuera dispersante slo apareceran bandas hbridas de densidad intermedia en todas las
generaciones.1

Secuencial y bidireccional desde puntos fijos[editar]

Los orgenes de replicacin son los puntos fijos a partir de los cuales se lleva cabo la
replicacin, que avanza de forma secuencial formando estructuras con forma de horquilla. Por
otro lado, la replicacin se lleva a cabo bidireccionalmente, es decir, a partir de cada origen se
sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos.

El origen de replicacin[editar]
La cantidad de ADN que se puede sintetizar a partir de un nico origen de replicacin se
denomina replicn o unidad funcional de replicacin. El genoma bacteriano es un replicn
nico circular. En organismos eucariticos, la replicacin del ADN se inicia en mltiples
orgenes a la vez (hay uno cada 20 kb aproximadamente), es decir, hay varios replicones.2

En las clulas eucariotas hay varios replicones.

Experimento de Cairns.

Los experimentos realizados por Cairns (1963) con bacterias Escherichia coli permitieron
determinar la existencia de ese punto fijo u origen de replicacin a partir del cual el genoma
empezaba a replicarse. Los experimentos consistan en mantener un cultivo de E.
coli creciendo en un medio que contena timidina tritiada (timina marcada con tritio), de forma
que el ADN quedara marcado radiactivamente pudiendo efectuarse una autorradiografa. A
continuacin se observaba almicroscopio. Los resultados indicaban que la replicacin en E.
coli se iniciaba en un punto concreto (OriC).3

Secuencialidad[editar]
Sueoka y Yoshikawa (1963) realizaron estudios genticos de complementacin
de mutaciones que permitieron determinar que desde los orgenes la replicacin avanza de
forma secuencial. Trabajaron con Bacillus subtilis porque era posible obtener cultivos
sincronizados de forma que todas las clulas del cultivo estuvieran en la misma fase del ciclo
celular. El mtodo consista en la conjugacin bacteriana de cepas silvestres con cepas
mutantes incapaces de sintetizar determinadosaminocidos. Conociendo la localizacin de
los genes que codifican las protenas implicadas en la sntesis de los diferentes aminocidos
en el cromosoma bacteriano, y haciendo crecer las bacterias receptoras en un "medio mnimo"
(donde slo pudiesen crecer las que hubieran recibido alguno de estos genes), al extraer ADN
a diferentes tiempos se observ que, tras la ltima extraccin apareca con mayor frecuencia
el gen implicado en la sntesis de uno de los aminocidos (el correspondiente a la "posicin
1"), que el gen adyacente implicado en la sntesis de otro aminocido ("posicin 2"). De la
misma forma, el gen que ocupaba la "posicin 3" apareca con menor frecuencia que el que
ocupaba la "posicin 2", y as sucesivamente.
Como los primeros genes en replicarse en la bacteria donadora seran los primeros en
transferirse, el experimento permiti demostrar, a partir de las frecuencias relativas de los
diferentes genes en las bacterias receptoras, que la replicacin sigue un orden (es
secuencial).

La replicacin avanza en forma de horquilla[editar]

Debido a que en la clula ambas cadenas de la doble hlice de ADN se duplican al mismo
tiempo, stas deben separarse para que cada una de ellas sirva de molde para la sntesis de
una nueva cadena. Por eso, la replicacin avanza con una estructura en forma
de horquilla formndose una burbuja u ojo de replicacin (tambin llamada estructura
cuando el ADN es circular debido a la similaridad entre la letra griega y la forma que adopta el
cromosoma bacteriano en estados intermedios de replicacin, no obstante pudiendo aparecer
estructuras alternativas),3 que avanza en direccin a la regin de ADN no duplicado dejando
atrs los dos moldes de ADN de cadena simple donde se est produciendo la replicacin. 2

Bidireccionalidad[editar]
El movimiento de la horquilla es bidireccional en la mayora de los casos, es decir, a partir de
un punto se sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos. Esto ocurre en la mayora de los
organismos, pero se dan excepciones en algunos procariontes debido a que los mecanismos

de replicacin que tienen lugar dependen de la propia estructura de su material hereditario (si
el ADN es circular, lineal, bicatenario o monocatenario).3 As, en casos particulares como
el ADN mitocondrial, algunos plsmidos y algunos genomas monocatenarios
de fagos pequeos, la replicacin se da unidireccionalmente pudiendo haber uno o dos
orgenes de replicacin.

Distincin entre la replicacin unidireccional y la bidireccional mediante el recuento de copias degenes

marcadores. O es el origen de replicacin y A, B, C, D, E son genes marcadores.

En la mayora de los casos la replicacin es bidireccional.

No obstante, la replicacin se puede considerar, de forma general, bidireccional.

La evidencia experimental del crecimiento bidireccional de la hebra de ADN viene dada por
una tcnica basada en el marcaje radiactivo del ADN usando timidina marcada con tritio.
Primero se aade timidina sin marcar y luego marcada con tritio; siguiendo el rastro de tritio se
observa hacia dnde se ha replicado la molcula de ADN.3 Tambin se puede, mediante el
recuento de copias de genes marcadores, determinar si la replicacin es unidireccional o
bidireccional. Otras tcnicas se basan en medir la distancia desde los ojos de replicacin
hasta los extremos de un ADN lineal (o circular convertido en lineal mediante enzimas de
restriccin).

Semidiscontinua[editar]

La replicacin es semidiscontnua.

La replicacin siempre se produce en sentido 5' 3', siendo el extremo 3'-OH libre el punto a
partir del cual se produce la elongacin del ADN. Esto plantea un problema, y es que las
cadenas tienen que crecer simultneamente a pesar de que son antiparalelas, es decir, que
cada cadena tiene el extremo 5' enfrentado con el extremo 3' de la otra cadena. Por ello, una
de las cadenas debera ser sintetizada en direccin 3' 5'.
Este problema lo resolvieron los cientficos japoneses Reiji Okazaki y Tsuneko Okazaki en la
dcada de 1960, al descubrir que una de las nuevas cadenas de ADN se sintetiza en forma de
trozos cortos que, en su honor, se denominan fragmentos de Okazaki. Su longitud suele variar
entre 1000 y 2000 nucletidos en las bacterias y entre 100 y 400 nucletidos eneucariontes.
La cadena que se sintetiza en el mismo sentido que avanza la horquilla de replicacin se
denomina hebra adelantada (en ingls, leading strand, que a veces se traduce por lder o
conductora) y se sintetiza de forma continua por la ADN polimerasa, mientras que la que se
sintetiza en sentido contrario al avance se denomina hebra rezagada o retrasada (en
ingls, lagging strand), cuya sntesis se realiza de forma discontinua teniendo que esperar a
que la horquilla de replicacin avance para disponer de una cierta longitud de ADN molde. 2

ADN Polimerasas[editar]
Artculo principal: ADN polimerasa

Este artculo o seccin necesita referencias que aparezcan en

una publicacin acreditada, como revistas especializadas, monografas,
prensa diaria o pginas de Internet fidedignas. Este aviso fue puesto el 14
de julio de 2009.
Puedes aadirlas o avisar al autor principal del artculo en su pgina de discusin
pegando: {{subst:Aviso referencias|Replicacin de ADN}} ~~~~

Estructura en 3D de un ADN polimerasa.

La ADN polimerasa es la enzima que cataliza la sntesis de la nueva cadena de ADN a partir
de desoxirribonucletidos y de la molculade ADN plantilla o molde que es la que ser
replicada. La enzima copia la cadena de nucletidos de forma complementaria
(A por T, Cpor G) para dar a cada clula hija una copia del ADN durante la replicacin.

Modo de operacin[editar]
En cada horquilla de replicacin, la ADN polimerasa y otras enzimas sintetizan dos nuevas
cadenas de ADN que son complementarias respecto a las 2 cadenas originales. Durante este
proceso, la ADN polimerasa reconoce una base nucleotdica no apareada de la cadena
original y la combina con un nucletido libre que tiene la base complementaria correcta.
Luego, la ADN polimerasa cataliza la formacin de nuevos enlaces covalentes que ligan el
fosfato del nucletido libre entrante con el azcar del nucletido previamente agregado en la
cadena hija en crecimiento. De esta forma, la ADN polimerasa sintetiza el esqueleto de
azcar-fosfato de la cadena hija.

Funcin correctora exonucleasa 3' 5' de lasADN polimerasas.

Las ADN polimerasas tambin realizan otras funciones durante el proceso de replicacin.
Adems de participar en la elongacin, desempean una funcin correctora y reparadora
gracias a su actividad exonucleasa 3', que les confiere la capacidad de degradar el ADN
partiendo de un extremo de ste. Es importante que existan estos mecanismos de correccin
ya que de lo contrario los errores producidos durante la copia del ADN daran lugar
a mutaciones.

Proceso general[editar]

La helicasa rompe los puentes de hidrgeno de la doble hlice permitiendo el avance

de la horquilla de replicacin.

La topoisomerasa impide que el ADN se enrede debido al superenrollamiento

producido por la separacin de la doble hlice.

Las protenas SSB se unen a la hebra discontnua de ADN, impidiendo que sta se
una consigo misma.

La ADN polimerasa sintetiza la cadena complementaria de forma continua en la hebra

adelantada y de forma discontnua en la hebra rezagada.

La ARN primasa sintetiza el cebador de ARN necesario para la sntesis de la cadena

complementaria a la cadena rezagada.

La ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.

El proceso se puede dividir en 3 fases: iniciacin, elongacin y terminacin.

El cebador: son pequeas unidades de ARN que se unen a los fragmentos para que la
ADN polimerasa reconozca donde debe unirse.

Los cebadores los quita la pol. I y coloca bases a la cadena en crecimiento por la ligasa.

Iniciacin[editar]
Mediante consumo de ATP en direccin a la horquilla de replicacin, es decir, en direccin 5'
3' en la hebra rezagada y 3' 5' en la hebra adelantada,la helicasa acta rompiendo
los puentes de hidrgeno que mantienen unida la doble hlice.3 El siguiente conjunto de
protenas reclutadas son las denominadas protenas SSBnota 1 encargadas de la estabilizacin
del ADN monocatenario generado por la accin de las helicasas, impidiendo as que el ADN
se renaturalice o forme de nuevo la doble hlice, de manera que pueda servir de molde. Estas
protenas se unen de forma cooperativa, por lo que su unin al DNA conforme avanza la
helicasa es rpida. Por otro lado, conforme las helicasas van avanzando se van
generando superenrollamientos en la doble cadena de ADN por delante de la horquilla y si
stos no fueran eliminados, llegado a un punto el replisoma ya no podra seguir avanzando.
Las topoisomerasas son las enzimas encargadas de eliminar los superenrollamientos
cortando una o las dos cadenas de ADN y pasndolas a travs de la rotura realizada, sellando
a continuacin la brecha.2

Elongacin[editar]

Enzimas que participan en la replicacin de E. coli: helicasa, protenas SSB,topoisomerasa, ARN

primasa, HoloenzimaADN Pol III.

En el siguiente paso, la holoenzima ADN Pol III cataliza la sntesis de las nuevas cadenas
aadiendo nucletidos sobre el molde. Esta sntesis se da bidireccionalmente desde cada
origen, con dos horquillas de replicacin que avanzan en sentido opuesto. Cuando el avance

de dos horquillas adyacentes las lleva a encontrarse, es decir, cuando dos burbujas se tocan,
se fusionan, y cuando todas se han fusionado todo el cromosoma ha quedado replicado.
Puesto que la holoenzima ADN Pol III necesita de un extremo 3'-OH libre, es necesario que
una ARN primasa catalice la formacin de un fragmento corto especfico
de ARN llamado cebador, que determinar el punto por donde la ADN polimerasa comienza a
aadir nucletidos. As, durante la sntesis, en cada horquilla de replicacin se van formando
dos copias nuevas a partir del cebador sintetizado en cada una de las dos hebras de ADN que
se separaron en la fase de iniciacin, pero debido a la unidireccionalidad de la
actividad polimerasa de la ADN Pol III, que slo es capaz de sintetizar en sentido 5 3', la
replicacin slo puede ser continua en la hebra adelantada; en la hebra rezagada es
discontinua, dando lugar a los fragmentos de Okazaki.
La mitad del dmero de la holoenzima ADN Pol III sintetiza la hebra adelantada y la otra mitad
la hebra rezagada.3 La elongacion de la hebra rezagada ocurre por medio del modelo del
trombn.

Hebra rezagada: sntesis decebadores, unin de fragmentos de Okazaki y eliminacin de los cebadores

Enzimas que participan en la eliminacin decebadores y unin de losfragmentos de Okazaki.

Elcebador de ARN est pintado en azul y el ADN que lo reemplaza en naranja.

En la hebra rezagada, cuando la ADN Pol III hace contacto con el extremo de otrofragmento
de Okazaki contiguo, el cebador de ARN de ste es eliminado y los dos fragmentos de
Okazaki de ADN recin sintetizado son unidos. Una vez se han juntado todos se completa
la doble hlice de ADN. La eliminacin de cebadores tambin se da en la hebra conductora,
de sntesis continua, pero debido a que en sta hay un solo cebador es un proceso que slo
tiene lugar una vez, mientras que en la hebra rezagada se dar tantas veces como fragmentos
de Okazaki haya.
En la eliminacin del cebador (tambin denominado iniciador o primer) intervienen dos
enzimas: por un lado la ADN Pol I, que va eliminando el ARN con su actividad exonucleasa 5'
3' y simultneamente rellenando con ADN mediante su actividad polimerasa 5' 3'
(proceso denominado nick-traslation). Al final queda rotura (o "mella") entre el extremo 3'-OH
libre y el fosfato 5' de la cadena sintetizada; por ltimo, la ADN ligasa sella esa rotura
catalizando la reaccin de condensacin entre el grupo fosfato y el OH de
la desoxirribosa del nucletido contiguo, completando el enlace fosfodister; para ello, es
preciso hidrolizar una molcula de ATP.2
Nota: diversos autores difieren en los enzimas implicados en esta etapa. Para algunos no es
la propia ADN Pol I la que rellena el hueco tras eliminar el primer, sino que lo hace la ADN Pol
III (la misma que polimeriza el resto de la cadena). Del mismo modo, algunos autores siguen
empleando el trmino ribonucleasa o (RNasa) para referirse a la ADN Pol I en esta etapa, ya
que hasta hace poco se desconoca que la propia ADN Pol I tena la capacidad exonucleasa 5'
3, y se pensaba que esto lo realizaba otro enzima, que reciba este nombre genrico.

Terminacin (de los genomas lineales)[editar]

El final de la replicacin se produce cuando la ADN polimerasa III se encuentra con una
secuencia de terminacin. Se produce entonces el desacople de todo el replisoma y la
finalizacin de la replicacin.

Vase tambin[editar]

Ciclo celular

Mitosis

Punto de control

Dogma central de la biologa molecular

Notas[editar]
1.

Volver arriba Protenas SSB siglas de su nombre en ingls single-stranded DNA

binding proteins, protenas ligantes de ADN monocatenario

Referencias[editar]
1.

Volver arriba Watson, J. D.; Baker, T. A.; Bell, S. P.; Gann, A.; Levine, M. et Losick, R
(2006). 2. Los cidos nucleicos transmiten informacin gentica. Biologa Molecular del Gen
(5. ed.). Madrid: Mdica Panamericana. 84-7903-505-6.

2.

Saltar a:a b c d e Watson, J. D.; Baker, T. A.; Bell, S. P.; Gann, A.; Levine, M. et Losick,
R (2006). 8. La duplicacin del DNA. Biologa Molecular del Gen (5 Ed.). Madrid: Mdica
Panamericana. 84-7903-505-6.
Saltar a:a b c d e f Csar Benito Jimnez, Profesor Titular de Gentica, Departamento

3.
de Gen