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Pneumocystis jiroveci (carinii) (3F6)

Mouse Monoclonal Antibody

Identificacin del Producto


N. de ref. Descripcin
44765
Pneumocystis jirovecci (carini)
0,1 M (3F6)
44766
Pneumocystis jirovecci (carini) 1
M (3F6)
44373
Pneumocystis jirovecci (carini)
RTU M (3F6)

Definiciones De Los Smbolos


P

listo para usar

concentrado

ascitis

suero

sobrenadante

DIL
DOC#
DIS

rango de dilucin del concentrado


documento nmero
distribuido por

Uso Previsto
Este anticuerpo est destinado para uso
diagnstico in vitro (IVD).
Anticuerpo Pneumocystis jiroveci (carinii) est
previsto para que laboratorios cualificados
identifiquen, mediante microscopia ptica,
la presencia de antgenos asociados en
cortes de tejidos embebidos en parafina y
fijados con formol utilizando mtodos de
pruebas IHC (inmunohistoqumica). El uso
de este anticuerpo est indicado, despus
de un diagnstico diferencial clnico de
enfermedades, como ayuda en la identificacin
de Pneumocystis jioveci dentro del contexto
de paneles de anticuerpos, el historial clnico
del paciente y otras pruebas de diagnstico
evaluadas por un patlogo cualificado.

jiroveci (carinii) reacciona con un eptope en


este organismo que es resistente a la formalina,
cido picrico, parafina, alcohol y xilol. No se han
encontrado reacciones cruzadas contra otros
hongos o parsitos.

Principios Y Procedimientos
El anticuerpo primario indicado puede
utilizarse como anticuerpo primario para la
tincin inmunohistoqumica de cortes de tejido
fijado con formol y embebido en parafina. En
general, la tincin inmunohistoqumica junto
con el sistema de deteccin con estreptavidinabiotina permite la visualizacin de antgenos
a travs de la aplicacin secuencial de un
anticuerpo especfico (anticuerpo primario) al
antgeno, un anticuerpo secundario (anticuerpo
de unin) al anticuerpo primario, un complejo
enzimtico y un sustrato cromognico con
etapas de lavado intermedias. Alternativamente
se puede utilizar un sistema de deteccin
polimrico sin biotina. La activacin enzimtica
del cromgeno da lugar a un producto de
reaccin visible en el sitio del antgeno. La
muestra puede entonces contrateirse y
aplicarse un cubreportaobjetos. Los resultados
se interpretan utilizando un microscopio
ptico y ayuda en el diagnstico diferencial de
los procesos patofisiolgicos que pueden estar
asociados o no a un antgeno en particular.
Los productos prediludos estn diluido
ptimamente para utilizarse con una amplia
variedad de kits de deteccin que ofrecen
otros fabricantes.

Materiales Y Mtodos
Vea la etiqueta del producto para informacin
especfica sobre el lote acerca de lo siguiente:
1. Concentracin de
inmunoglobulina

anticuerpos

de

2. Detalles de la fuente

Resumen Y Explicacin

Reactivos Suministrados

Pneumocystis jiroveci (carinii) es un hongo


que puede ser detectado en tejidos humanos
(tpicamente en los pulmones de pacientes
inmunocomprometidos) en la fase de
trofozoito. El anticuerpo anti-Pneumocystis

Prediludo El producto de anticuerpo primario


indicado contiene reactivo listo para usar.

DIS A.Menarini Diagnostics S.r.l.


Via Sette Santi, 3
50131 Firenze
Italy
DOC# MEN21921000
ES Rev. 0,0

Cell Marque Corporation


6600 Sierra College Blvd
Rocklin
California 95677
USA
EMERGO EUROPE
Molenstraat 15, 2513 BH
The Hague
NL

Pneumocystis jiroveci (carinii) (3F6)


Mouse Monoclonal Antibody

El rango de concentracin de inmunoglobulina prediluida para este


producto es 0,17-0,32 g/ml.

19. Microscopio ptico (40-400x)

Conservacin Y Manipulacin

Concentrado El producto de anticuerpo primario indicado contiene


reactivo concentrado.

Almacenar a 2-8C. No congelar.

Los formatos prediluido y concentrado de este anticuerpo estn diluidos


en Amortiguador Tris, pH 7,3-7,7, con un 1% de BSA y <0,1% de azida de
sodio.

Para garantizar la dispensacin adecuada del reactivo y la estabilidad


del anticuerpo, tras cada utilizacin se debe volver a poner el tapn y
almacenar el frasco inmediatamente en la nevera, en posicin vertical.

El rango de concentracin de inmunoglobulina concentrada para este


producto es 6,8-12,8 g/ml.

Todos los reactivos de anticuerpo tienen una fecha de caducidad. El


reactivo es estable hasta la fecha indicada en la etiqueta siempre que
se almacene correctamente. No usar el reactivo despus de la fecha de
caducidad para el mtodo de almacenamiento descrito.

El rango de dilucin til recomendado para el producto concentrado es de


1:10-1:25 y se puede encontrar en la etiqueta del producto.

No hay signos definitivos que indiquen la inestabilidad de este producto,


por lo que los controles positivos y negativos deben analizarse
simultneamente con muestras desconocidas. Pngase en contacto con
el servicio de atencin al cliente de A.Menarini Diagnostics si encuentra
algn indicio sospechoso de inestabilidad del reactivo.

Isotipo: IgM/k

Reconstitucin, mezcla, dilucin y titulacin


El anticuerpo prediludo est listo para usar y optimizado para la tincin. No
se requiere su reconstitucin, mezcla, dilucin ni titulacin. El anticuerpo
concentrado est optimizado para diluirlo en el rango de dilucin.

Extraccin Y Preparacin De La Muestra Para Su Anlisis


Cuando se utiliza el procedimiento habitual, los tejidos fijados en formol
en tampn neutro y embebidos en parafina resultan adecuados para
el uso con este anticuerpo primario. El fijador de tejido recomendado
es formalina tamponada neutral 10%. Pueden tener lugar resultados
variables como consecuencia de una fijacin prolongada o procesos
especiales tales como la descalcificacin en la preparacin de la mdula
sea.

El usuario deber comprobar la dilucin prctica del producto concentrado.


Las diferencias en el procesamiento del tejido y en los procedimientos
tcnicos en el laboratorio pueden producir una variabilidad significativa en
los resultados y requerir consecuentemente el uso regular de controles.
(Consulte la seccin Procedimientos de control de calidad)

Materiales Y Reactivos Necesarios No Suministrados

Cada seccin debe cortarse con el grosor apropiado (aproximadamente


3 m) y colocarse en un portaobjetos de vidrio con carga positiva. Los
portaobjetos que contienen el corte de tejido pueden secarse durante al
menos 2 horas (pero no ms de 24 horas) en un horno a una temperatura
de 58-60 C 5 C.

Los siguientes reactivos y materiales pueden ser necesarios para la tincin,


pero no se incluyen con el anticuerpo primario:
1.

Tejido de control positivo y negativo

2. Portaobjetos para microscopio con carga positiva


3. Horno de secado capaz de mantener una temperatura de 58-60C
5C

Advertencias Y Precauciones

4. Cubetas o baos de tincin

1. Adopte las precauciones adecuadas cuando se manipulen los


reactivos. Usar guantes y batas de laboratorio desechables cuando se
manipulen materiales potencialmente carcingenos o txicos (como
xileno).

5. Cronmetro
6. Xileno o sustituto de xileno
7.

Alcohol reactivo o etanol

8.

Agua desionizada o destilada

9. Olla de presin elctrica para el paso del tratamiento previo del


tejido

2. Evite el contacto de los reactivos con los ojos y las membranas


mucosas. Si se produce el contacto con reas sensibles, lvese con
agua abundante.

10. Sistema de deteccin y cromgeno

3.

Las muestras del paciente y todos los materiales en contacto con


ellas deben tratarse como si fuesen materiales potencialmente
infecciosos y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca
pipetear con la boca.

4.

Evitar la contaminacin microbiana de los reactivos, ya que podran


producirse resultados incorrectos.

5.

El usuario debe validar los tiempos y temperaturas de incubacin.

6.

Los reactivos prediluidos listos para usar estn diluidos ptimamente


por lo que una dilucin adicional podra producir la prdida de tincin
del antgeno.

11. Soluciones de lavado


12. Hematoxilina u otra contratincin
13. Diluyentes de anticuerpo
14. Bloque de perxido para usar con HRP
15. Bloque de avidina-biotina
16. Reactivo de control negativo
17. Medio de montaje
18. Cubreobjetos

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MEN Template #0.2

Pneumocystis jiroveci (carinii) (3F6)


Mouse Monoclonal Antibody
7.

Los reactivos concentrados pueden diluirse ptimamente en base


a la determinacin del usuario. El usuario deber validar igualmente
tanto la compatibilidad como el efecto en la estabilidad de cualquier
disolvente utilizado que no est recomendado especficamente en
este documento.

de control positivo y negativo. Los tejidos de control deben ser muestras


frescas de autopsia, biopsia o ciruga preparadas o fijadas con la mayor
brevedad con un proceso idntico al de los cortes en estudio. El uso de
un corte de tejido fijado o procesado de forma diferente a la muestra en
estudio servir para el control de todos los reactivos y pasos del mtodo
excepto la fijacin y el procesamiento del tejido.

8. Este producto no se clasifica como sustancia peligrosa cuando se


usa segn las instrucciones. El reactivo tiene como conservante
menos de un 0,1% de azida de sodio, y no cumple los criterios
del reglamento europeo de Registro, evaluacin, autorizacin y
restriccin de sustancias qumicas (REACH) de sustancia peligrosa a
la concentracin indicada.
9.

Un tejido con una tincin positiva dbil es ms adecuado para un control


de calidad ptimo y para detectar niveles pequeos de degradacin del
reactivo. El control de tejido positivo para el anticuerpo primario indicado
puede incluir lo siguiente:

El usuario debe validar cualquier condicin de almacenamiento que


no sea una de las especificadas en el prospecto.

Control de tejido positivo

10. El disolvente puede incluir albmina de suero bovino y el


sobrenadante puede contener suero bovino. Los productos que
contienen suero fetal bovino y los productos que contienen albmina
de suero bovino se compran a los proveedores comerciales. Los
certificados de origen de la fuente animal utilizada en estos productos
obran en el archivo de Cell Marque. Los certificados aseguran que las
fuentes bovinas provienen de pases con riesgo mnimo de BSE y
relacionan como fuentes de bovinos EE. UU. y Canad.

El mismo tejido utilizado para el control de tejido positivo se puede utilizar


en el control de tejido negativo. La variedad de tipos de clulas presentes
en la mayora de los cortes de tejidos ofrece sitios de control negativo
internos, pero esto debe verificarlo el usuario. Los componentes que no
se tien deben demostrar la ausencia de tincin especfica y proporcionar
una indicacin de tincin de fondo no especfica. Si se produce una
tincin especfica en los sitios de control de tejido negativo, los resultados
obtenidos con las muestras del paciente deben considerarse no vlidas.

Procedimiento Detallado
Protocolos de tincin recomendados para el anticuerpo primario indicado:
Tincin manual
1. Desparafinacin, rehidratacin y recuperacin del eptopo; el
mtodo preferido es el uso de las tcnicas de recuperacin del
eptopo inducida por el calor (HIER). El mtodo preferido permite
la desparafinacin, rehidratacin y recuperacin del eptopo
simultneas. Al terminar, enjuague con 5 cambios de agua destilada
o desionizada.

3.

Aplique el anticuerpo e incube durante 10 - 30 minutos; enjuague.

Discrepancias Inexplicables
Las discrepancias inexplicables de los controles se deben comunicar
inmediatamente al servicio de atencin al cliente de A.Menarini
Diagnostics. Si los resultados del control de calidad no cumplen las
especificaciones, los resultados del paciente no son vlidos. Vase la
seccin Resolucin de problemas de este prospecto. Identifique y corrija el
problema; a continuacin, repita todo el procedimiento con las muestras
del paciente.

4. Para el sistema de deteccin de 2 pasos del polmero aplique el


amplificador segn las instrucciones del fabricante

Reactivo De Control Negativo

5. Aplique el reactivo de deteccin durante el nmero de minutos


recomendado por el fabricante, enjuague.

Se debe utilizar un reactivo de control negativo para cada muestra para


ayudar a interpretar los resultados. Para evaluar una tincin no especfica se
utiliza un reactivo de control negativo en lugar del anticuerpo primario. Se
deber tratar el portaobjetos con el reactivo de control negativo haciendo
coincidir las especies huspedes del anticuerpo primario e idneamente
con la misma concentracin de IgG. El periodo de incubacin para el
reactivo de control negativo deber ser igual que el periodo de incubacin
del anticuerpo primario.

6. Aplique una cantidad abundante de cromgeno e incube durante


1-10 minutos; enjuague.
7.

Deshidrate y coloque el cubreobjetos.

Procedimientos De Control De Calidad


Control de tejido positivo
Cada vez que se realice el procedimiento de tincin, debe procesarse
un control positivo del tejido. Este tejido puede contener clulas o
componentes del tejido de tincin positiva y negativa y servir como tejido

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MEN Template #0.2

Membranosa

Control De Tejido Negativo

Instrucciones De Uso

Si utiliza el sistema de deteccin HRP, coloque los portaobjetos en


un bloque de perxido durante 10 minutos; enjuague. Si utiliza un
sistema de deteccin AP, omita este paso.

Visualizacin

Tejido infectado por P. jirovecii

Los controles de tejido positivos conocidos solo se deben usar para


monitorizar el comportamiento correcto de los tejidos procesados y los
reactivos de la prueba, y no como ayuda para establecer un diagnstico
especfico de las muestras del paciente. Si los controles positivos del
tejido no muestran una tincin positiva apropiada, los resultados de las
muestras en estudio se deben considerar no vlidos.

11. Como con cualquier producto proveniente de fuentes biolgicas,


debern emplearse procedimientos de manipulacin apropiados.

2.

Tejido

Pneumocystis jiroveci (carinii) (3F6)


Mouse Monoclonal Antibody
Interpretacin De Los Resultados

1. Este reactivo es de exclusivo uso profesional, ya que la


inmunohistoqumica es un proceso diagnstico de varias etapas que
requiere una formacin especializada en la seleccin de los reactivos,
tejidos, fijacin y procesamiento apropiados; la preparacin del
portaobjetos de inmunohistoqumica y la interpretacin de los
resultados de la tincin.

El procedimiento de inmunotincin causa la precipitacin de un


producto de reaccin coloreado en los sitios del antgeno localizados
por el anticuerpo primario. Consulte en el prospecto correspondiente
del sistema de deteccin las reacciones de color esperadas. Un patlogo
cualificado experimentado en procedimientos de inmunohistoqumica
debe evaluar los controles de tejido positivos y negativos antes de
interpretar los resultados.

2.

Para uso exclusivo de laboratorio.

3.

Para diagnstico in vitro.

4. La tincin de los tejidos depende de la manipulacin y el


procesamiento de los mismos antes de la tincin. Una fijacin,
congelacin, descongelacin, lavado, secado, calentado o corte
inadecuados o la contaminacin con otros tejidos o lquidos puede
producir artefactos, bloqueo del anticuerpo o resultados falsos
negativos. Los resultados inconsistentes pueden ser consecuencia
de las variaciones en los mtodos de fijacin y embebido, as como
de irregularidades inherentes dentro del tejido.

Control De Tejido Positivo


El control de tejido positivo teido debe examinarse primero para
determinar que todos los reactivos funcionan adecuadamente. La
presencia de un producto de reaccin con el color adecuado dentro
de las clulas diana es indicativa de una reactividad positiva. Consulte
en el prospecto del sistema de deteccin utilizado las reacciones de
color esperadas. Segn sea la duracin de la incubacin y la potencia
de la hematoxilina empleada, la contratincin dar como resultado
una coloracin azul de plida a oscura de los ncleos celulares. Una
contratincin excesiva o incompleta puede comprometer la interpretacin
adecuada de los resultados. Si los controles de tejidos positivos no
muestran una tincin positiva apropiada, los resultados de las muestras
en estudio se deben considerar no vlidos.

5. Una contratincin excesiva o incompleta puede comprometer la


interpretacin adecuada de los resultados.
6.

Control De Tejido Negativo


El control de tejido negativo debe examinarse despus del control de
tejido positivo para verificar la marcacin especfica del antgeno diana por
el anticuerpo primario. La ausencia de tincin especfica en el control de
tejido negativo confirma la ausencia de reactividad cruzada del anticuerpo
con las clulas o los componentes celulares. Si se produce una tincin
especfica en el control de tejido negativo, los resultados obtenidos con
la muestra del paciente se consideran no vlidos. La tincin no especfica,
si la hay, tendr un aspecto difuso. Tambin se puede observar una ligera
tincin especfica espordica del tejido conjuntivo en cortes de tejidos que
no estn fijados ptimamente. Para la interpretacin de los resultados
de la tincin deben usarse clulas intactas. Las clulas necrticas o
degeneradas muestran una tincin no especfica.

7. Los anticuerpos y reactivos listos para usar se ofrecen en una


dilucin ptima para usarse como se indica. Cualquier desviacin
de los procedimientos recomendados del mtodo puede invalidar
los resultados esperados. Se deben utilizar y documentar los
controles apropiados. Los usuarios deben asumir en cualquier caso la
responsabilidad de la interpretacin de los resultados del paciente.
8.

Los productos se entregan concentrados para que el usuario pueda


diluirlos despus de forma ptima para usarlos segn determine
empleando siempre unas tcnicas de validacin adecuadas. Los
usuarios deben validar el uso de cualquier disolvente que no se
recomiende en este documento. Una vez que el anticuerpo primario
haya sido validado como adecuado para usar, cualquier desviacin
de los procedimientos de prueba recomendados puede invalidar
los resultados esperados. Se deben utilizar y documentar los
controles apropiados. Los usuarios deben asumir en cualquier caso la
responsabilidad de la interpretacin de los resultados del paciente.

9.

Este producto no est diseado para utilizarlo en citometra de flujo.

Tejido Del Paciente


Las muestras del paciente se deben examinar al final. La intensidad de
la tincin positiva se debe valorar en el contexto de cualquier tincin
de fondo del control de reactivo negativo. Como en cualquier prueba
de inmunohistoqumica, un resultado negativo significa que el antgeno
en cuestin no se ha detectado, no que el antgeno est ausente de las
clulas o del tejido analizado. Un panel de anticuerpos puede ayudar a
identificar reacciones negativas falsas (consulte la seccin Sumario de
resultados esperados). La morfologa de cada muestra del tejido tambin
debe examinarse utilizando un corte con tincin de hematoxilina y eosina
al interpretar cualquier resultado de inmunohistoqumica. Un patlogo
cualificado debe interpretar los resultados morfolgicos del paciente y sus
datos clnicos pertinentes.

10. Los reactivos pueden mostrar reacciones inesperadas en tejidos


no estudiados previamente. No puede excluirse completamente
la posibilidad de reacciones inesperadas, incluso en grupos de
tejidos analizados, debido a la variabilidad biolgica de la expresin
del antgeno en neoplasmas u otros tejidos patolgicos. Pngase
en contacto con el servicio de atencin al cliente de A.Menarini
Diagnostics ante cualquier sospecha de reaccin inesperada
documentada.

Limitaciones

11. Los tejidos de personas infectadas con el virus de la hepatitis B y


que contengan antgeno de superficie (HBsAg) pueden mostrar una
tincin no especfica con peroxidasa de rbano.

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MEN Template #0.2

La interpretacin clnica de una tincin positiva o de su ausencia debe


evaluarse en el contexto de la historia clnica, la morfologa, otros
criterios histopatolgicos, as como otras pruebas diagnsticas. Este
anticuerpo est diseado para utilizarlo en un panel de anticuerpos
si fuera pertinente. Es responsabilidad de un patlogo cualificado
familiarizarse con los anticuerpos, reactivos, paneles de diagnstico y
mtodos usados para obtener una preparacin con tincin. La tincin
se debe realizar en un laboratorio certificado con la supervisin de
un anatomopatlogo responsable de la revisin de los portaobjetos
teidos y de la verificacin de la idoneidad de los controles negativos
y positivos.

Pneumocystis jiroveci (carinii) (3F6)


Mouse Monoclonal Antibody
12. Cuando se utilizan en pasos de bloqueo, los sueros normales
procedentes del mismo origen animal que los antisueros secundarios
pueden provocar resultados de falsos negativos o falsos positivos
debido al efecto de los autoanticuerpos o anticuerpos naturales.

Estudio Normal (seguido)

Tejido

13. Pueden verse resultados de falsos positivos debido a la unin de


protenas o productos de reaccin del sustrato por mecanismos no
inmunolgicos. Tambin pueden estar causados por la actividad de la
pseudoperoxidasa (eritrocitos), actividad de la peroxidasa endgena
(citocromo C) o biotina endgena (ejemplo: hgado, cerebro, mama,
rin) dependiendo del tipo de tcnica de inmunotincin empleada.
14. Como en cualquier prueba de inmunohistoqumica, un resultado
negativo significa que el antgeno no se ha detectado, no que el
antgeno est ausente de las clulas o del tejido analizado.

Limitaciones Especficas
1. Los productos de anticuerpo prediluidos estn optimizados como
productos listos para usar. Debido a la posibilidad de variaciones en
la fijacin y procesado del tejido, puede ser necesario aumentar o
reducir el tiempo de incubacin del anticuerpo primario en muestras
individuales.
2. El anticuerpo, en combinacin con sistemas de deteccin y sus
accesorios, detecta los antgenos que sobreviven al proceso habitual
de fijacin con formol, procesado y corte del tejido. Los usuarios que
se desven de los procedimientos de prueba recomendados son
responsables, como lo seran en cualquier caso, de la interpretacin y
validacin de los resultados del paciente.

Glndula salival

Vescula biliar

Riones

Vejiga

Prstata

tero

Trompas de Falopio

Ureter

Crvix

Msculos del equeleto

Msculo liso

Piel

Nervios perifricos

Mesotelio

Grasa

Placenta

Estudio De La Enfermedad Del Tejido

Tejido

Consulte las siguientes tablas de reactividad:

Estudio Normal
Total de
Casos
casos
Positivos probados Notas

Cerebro

Crtex adrenal

Ovarios

Pncreas

Paratiroides

Pituitaria

Testculos

Tiroides

Pecho

Bazo

Amgdalas

Timo

Mdula sea

Pulmones

Corazn

Esfago

Estmago

Intestino delgado

Colon

Total de
Casos
casos
Positivos probados Notas

Carcinoma ductal invasivo de


mama

23

Adenocarcinoma de colon

20

Tejido infectado por


Pneumocystis jirovecii (carinii)

Resolucin De Problemas

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Hgado

Este anticuerpo tine tejidos normales como esta indicado en la literatura.

Sumario De Resultados Esperados

Tejido

Total de
Casos
casos
Positivos probados Notas

1.

Si el control positivo muestra una tincin ms dbil de la esperada,


deben analizarse otros controles positivos realizados en la misma
tincin para determinar si se debe al anticuerpo primario o a uno de
los reactivos secundarios comunes.

2.

Si el control positivo da negativo, se deben analizar otros controles


positivos usados en la misma ejecucin para determinar si se debe al
anticuerpo primario o a uno de los reactivos secundarios comunes.
Los tejidos pueden haberse recogido, fijado o desparafinado de
manera inadecuada. Deber seguirse el procedimiento adecuado
para la recogida, la conservacin y la fijacin.

3.

Si se produce una tincin de fondo excesiva, pueden haber niveles


altos de biotina endgena. Se deber incluir una etapa de bloqueo
con biotina a no ser que se est utilizando un sistema de deteccin
sin biotina, en cuyo caso ninguna biotina presente sera un factor que
contribuyera a la tincin de fondo.

Pneumocystis jiroveci (carinii) (3F6)


Mouse Monoclonal Antibody
4. Si no se ha eliminado toda la parafina deber repetirse el
procedimiento de desparafinacin.
5.

Si los cortes de tejido lavan el portaobjetos, deben comprobarse los


mismos para garantizar que tienen carga positiva. Otras posibilidades
que podran afectar adversamente a la adhesin del tejido incluyen
un secado insuficiente del corte de tejido en el portaobjetos antes de
la tincin o fijacin en formol que no fuera neutralizado con tampn
apropiadamente. El grosor del tejido tambin puede ser un factor
causante.

Consulte las medidas correctoras en la seccin Procedimiento detallado o


pngase en contacto con el servicio de atencin al cliente de A.Menarini
Diagnostics.

Bibliografa
1
2
3
4

Silverberg SG et al. Principles and Practice of Surgical Pathology


and Cytopathology, 3rd edition. 1997; p. 182 185.
Linder E et al. J Immunol Methods 1987;98:57-62.
Elvin KM et L Br Med J 1988; 297:381-4
Radio SJ et al. Modern Pathol 1990;3:462-9

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