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Mtodos de cuantificacin del

Fitoplancton, Ventajas y Desventajas

Liliana Paesky

Corrientes 26 y 27 de Setiembre de 2013

REMOCIN DEL FITOPLANCTON Y SUS


METABOLITOS
RESULTA MS DIFICULTOSA QUE PARTICULAS INERTES,
AFECTANDO LA DECANTACIN
DECANTACIN.
AUMENTO DEL CONSUMO DE REACTIVOS
TAPONAMIENTO DE LOS FILTROS Y DISMINUCIN DE LA
CARRERA DE LOS MISMOS
OLORES Y SABORES DESAGRADABLES

Presencia de algas en agua de consumo


Provoca:
Deterioro de la calidad
Aparicin de olores y sabores
Consumo del cloro residual
Favorece el desarrollo de bacterias

Estimar la poblacin presente en una muestra de


agua que est lo ms cercana posible al
verdadero tamao de la poblacin
p

Verdadero valor Desconocido

Estadstica Evala la probabilidad de que el valor


medido caiga dentro de cierto rango alrededor del
Verdadero Valor

Anlisis de fitoplancton
Distintas etapas
1- Concentracin
2- Identificacin
3- Recuento
4- Lmites de recuento
5- Clculo y expresin de los resultados
6 Aseguramiento de calidad
6-

CONCENTRACIN
Sedimentacin
Filtracin
Centrifugacin
g

SEDIMENTACIN

(El mtodo mas eficiente)

P b t o Cmara
Probeta
C
d
de sedimentacin
di
t i
Ventajas:
V
t j El fitoplancton
fit l t no sufre
f deformaciones
d f
i
y no
se rompe, se observa todo el fiplancton (nano y pico
p
plancton)
)
Desventajas: Los tiempos requeridos son largos.
Ej: 10 cm columna de agua en probeta de 500 mL,
mL
con aprox 200 mL de muestra, 5 das de
sedimentacin

FILTRACIN
Filtrado en red y lavado

Semicuantitativo

Filtrado en membrana y transparentado

Cuantitativo

FILTRACIN POR MEMBRANA


Ventajas: Rapidez en la concentracin
Desventajas:
Dificultades en la identificacin del pico y nanoplancton
No no se puede realizar el recuento con muestras con
elevada turbiedad

CENTRIFUGACIN
(1000 g durante 20 min)

Ventajas: Velocidad de sedimentacin


Desventajas: Daa los organismos frgiles
No es un mtodo recomendado si se desea obtener
un resultado
lt d cuantitativo.
tit ti

IDENTIFICACION
El Nivel Taxonmico debe establecerse previamente
y estar de acuerdo a:
9Disponibilidad
Disponibilidad de personal capacitado
9Propsito del anlisis
9Recursos econmicos
9Tiempo
p disponible
p

IDENTIFICACIN ENTRE PORTA Y CUBREOBJETOS

Uso de las claves dicotmicas

Les Algues deau

douce
Pierre Bourrelly
IInternet: www.cyanodb.cz
db
Jiri Komarek

Recuento
Un microscopio directo
Ocular que contenga una cuadrcula de Whipple

Cuadrcula de Whipple
Es un cuadrado que nos delimita una superficie de 1
mm2, con un aumento 100X.
Este cuadrado esta subdivido en 100 cuadritos de 100
m de lado y 10000 m2 de superficie cada uno.
El cuadrito central est a su vez dividido en 25
cuadritos mas pequeos de 20 m de lado y de 400 m2
d superficie
de
fi i
1000 m

Se debe verificar la medida de la cuadrcula


con un micrmetro de platino.
platino
No todas las cuadrculas miden 1 mm2

Campo y Transecta
Un campo esta
delimitado por la
cuadrcula de Whipple
Una tira por el ancho de
la misma y el dimetro
de la membrana o el
largo de la cmara de
Sedgwick-Rafter

RECUENTO
Como vamos a contar?
Campos: 10 o ms unidades algales del gnero
dominante
Tiras o transectas: Menos de 10 unidades
algales del gnero dominante en un campo

Diversidad Morfolgica

Diversidad Morfolgica

UNIDADES DE RECUENTO
Unicelulares o Cenobiales: una clula o un cenobio es un
individuo.
individuo
Ej: Ceratium, Scenedesmus
Coloniales palmeloides: contar como un individuo a la
parte de la colonia que ocupe un cuadrito de 10000 m2
Ej: Microcystis,
Microcystis Merismopedia
Coloniales filamentosas: contar como unidad aquellos que
ocupen un lado
l d d
de cada
d cuadrito
d it d
de 100 m
Ej: Oscillatoria - Dolichospermun

Lmite de recuento
Cuantas unidades algales contar?
Asumiendo que la distribucin de organismos es al
azar, la poblacin se ajusta a la distribucin de
Poisson, podemos calcular cuantos organismos
contar, con un nivel error aceptable para un lmite
d confianza
de
fi
dado.
d d

Error de recuento
Debe establecerse previamente
Indica cuantas unidades algales deben ser contadas para
un lmite de confianza dado
Para el 95%:
Error del recuento (%)

2
X 100

=
N

Recuento de 100 unidades = 20%

Recuento de 400 unidades = 10%

TIEMPO
NO SE JUSTIFICA

Cl l y expresin
Clculo
i d
de llos resultados
lt d
Algas/ L / mL

Clulas / L / mL

USS/ L / mL

Clulas/L / mL
A
Algas
Unicelulares:
i
C
Cada
alga es una unidad
i
Algas Cenobiales: Contar los cenobios como
unidad y multiplicar por el N
N de clulas que
poseen

Clulas/L / mL
Algas Coloniales
Filamentosas:
Contar el N
N de clulas de al menos 30 segmentos
de 100 m. Calcular el promedio y multiplicar a las
unidades contadas
Palmeloides:
Contar el N de clulas de al menos 30 cuadrados de
10000 m2 de superficie. Calcular el promedio y
multiplicar a las unidades contadas

USS/L / mL
El factor de superficie
p
se obtiene midiendo:
La superficie del organismo de acuerdo a su
similitud morfolgica
g
que p
q
presente con un
cuerpo geomtrico.
Medir al menos 30 organismos
g
del mismo
gnero.
Calcular el p
promedio y dividir p
por 400
m2
Multiplicar el factor obtenido por las unidades
contadas

Cryptomonas
1.000.000 Clulas/L
1.000.000 USS/L

Ceratium
1 000 000 Clulas/L
1.000.000
20.000.000 USS/L

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD

ANALISTAS ENTRENADOS

EQUIPAMIENTO ADECUADO

DOCUMENTACIN DE LOS MTODOS


ANALTICOS

CONTROL ANALTICO INTERNO

CONTROL ANALTICO

INTERNO
PRECISIN:
Recuento de replicados entre
mismo analista y distinto analista de una
misma muestra
SESGO: Diferencia
SESGO
Dif
i entre
t un resultado
lt d obtenido
bt id y
un valor de referencia aceptado, que puede ser el
valor asignado de un ensayo interlaboratorio

CONCLUSIONES
La eleccin del mtodo depender:
Calidad del agua
Objetivo del ensayo
Tiempo en la entrega de los resultados

MUCHAS GRACIAS!!!