FACULTAD DE CIENCIAS

FARMACUTICAS Y BIOQUMICA
BIOQUIMICA 2
PRCTICA N5
TEMA:

Determinacin de Glucosa por Mtodo Enzimtico

ALUMNO:
BENAVIDES BERMUDEZ, JESSICA

DOCENTE:

Q.F Jack Caldern.

2015-II

PRACTICA N 5

Determinacin de glucosa por mtodo Enzimtico.

I-INTRODUCCION
La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se
obtiene fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena
principalmente en el hgado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento
de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se
mantengan y el almacenamiento en el hgado sea adecuado, se precisa la ayuda
de la insulina, sustancia producida por el pncreas.
La glucosa es un azcar que es utilizado por los tejidos como forma de energa al
combinarlo con el oxgeno de la respiracin. Cuando comemos el azcar en la
sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una
hormona reguladora que es la insulina producida por el pncreas (islotes
pancreticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos
y sea utilizada en forma de glucgeno, aminocidos, y cidos grasos. Cuando la
glucosa en sangre est muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se
secreta otra hormona llamada glucagn que hace lo contrario y mantiene los
niveles de glucosa en sangre. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se
acumula en sangre, y si esta situacin se mantiene, da lugar a una serie de
complicaciones en distintos rganos. Esta es la razn principal por la que se
produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y
alteraciones que tambin la provocan.
El tejido ms sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en
concentraciones muy bajas o muy altas aparecen sntomas de confusin mental e
inconsciencia.
El mantenimiento de la glucemia, o concentracin plasmtica de glucosa, en los
organismos superiores es fundamental para el funcionamiento de todos los
rganos, al ser la glucosa un metabolito energtico principal.
La ingestin de glucosa o sustancias que la produzcan (almidn, fructosa,
galactosa, protenas, pero no grasas) va seguida, en las personas sanas, por un
aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina la puesta en marcha del
mecanismo regulador: aumento de la utilizacin de glucosa (por gluclisis, entre

otras), aceleracin de la glucogenognesis y disminucin de la glucogenlisis;

todo ello ocurre principalmente mediante la secrecin de insulina, una hormona
pancretica de tipo polipeptdico. En el caso de que la produccin de insulina est
disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las clulas, lo cual ocasiona
niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia); as ocurre en las personas
que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo 1".
El diagnstico de la diabetes dependiente de insulina es sencillo y se basa en
antecedentes,

sntomas

clnicos

comprobacin

de

una

hiperglucemia

significativa. Las determinaciones de glucemia basal permiten el diagnstico de la

diabetes, pero constituyen valores puntuales y aislados en el tiempo que no
reflejan los niveles medios de glucemia ni la duracin de la misma. Por lo tanto, es
necesario disponer de pruebas que indiquen el grado del control metablico de la
enfermedad a corto y medio plazo. Estas pruebas estn basadas en el fenmeno
de unin de la glucosa a diversas protenas. Esta glucosilacin tiene lugar por una
reaccin no enzimtica y afecta tanto a protenas de vida media corta (albmina,
hemoglobina, etc.) como de vida media larga (colgeno, mielina, etc.). La
intensidad de la glucosilacin depende de varios factores, siendo los ms
importantes los niveles medios de glucemia, la duracin de la hiperglucemia, la
vida media de las protenas y la concentracin de stas. Como consecuencia, la
medida de la glucosilacin proteica constituye un buen marcador bioqumico del
grado de compensacin del enfermo diabtico.

II-FUNDAMENTO TEORICO
Glucosa
Es un glcido o carbohidrato, ms precisamente un monosacrido, la
estructura ms sencilla dentro de los azcares simples, presente en forma libre en las
frutas y la miel. Entre los carbohidratos de absorcin rpida, la glucosa es la que se
absorbe ms rpidamente.

La glucosa es una fuente importante de energa para la mayora de las clulas del
cuerpo, incluidas las del cerebro. Los carbohidratos que se encuentran en las frutas,
los cereales, el pan, la pasta y el arroz se transforman rpidamente en glucosa en el
cuerpo, lo que eleva el nivel de dicho azcar en la sangre.
Las hormonas producidas en el cuerpo llamadas insulina y glucagn ayudan a
controlar los niveles de azcar en la sangre.

Caractersticas

La glucosa, libre o combinada, es el compuesto orgnico ms abundante de la

naturaleza. Es la fuente primaria de sntesis de energa de las clulas, mediante su
oxidacin catablica, y es el componente principal de polmeros de importancia
estructural como la celulosa y de polmeros de almacenamiento energtico como el
almidn y el glucgeno.
A partir de su estructura lineal, la D-glucosa sufre una ciclacin hacia su forma
hemiacetlica para dar sus formas furano y pirano (D-glucofuranosa y F-glucopiranosa)
que a su vez presentan anmeros alfa y beta. Estos anmeros no presentan
diferencias de composicin estructural, pero si diferentes caractersticas fsicas y
qumicas.
La glucosa es uno de los tres monosacridos dietticos, junto con fructosa y galactosa,
que se absorben directamente al torrente sanguneo durante la digestin. Las clulas lo
utilizan como fuente primaria de energa y es un intermediario metablico. La glucosa
es uno de los principales productos de la fotosntesis y combustible para la respiracin
celular.
Todas las frutas naturales tienen cierta cantidad de glucosa (a menudo con fructosa),
que puede extraerse y concentrarse para preparar un azcar alternativo. Sin embargo,

a escala industrial tanto el jarabe de glucosa (disolucin de glucosa) como la dextrosa

(glucosa en polvo) se obtienen a partir de la hidrlisis enzimtica de almidn de
cereales (generalmente trigo o maz).

Biosntesis
Los organismos fotoauttrofos, como las plantas, sintetizan la glucosa en la
fotosntesis a partir de compuestos inorgnicos como agua y dixido de
carbono, segn la reaccin:

Los seres hetertrofos, como los animales, son incapaces de realizar este
proceso y toman la glucosa de otros seres vivos o la sintetizan a partir de
otros compuestos orgnicos. Puede obtenerse glucosa a partir de otros
azcares, como fructosa o galactosa. Otra posibilidad es la sntesis de glucosa
a partir de molculas no glucdicas, proceso conocido como gluconeognesis.
Hay diversas molculas precursoras, como el lactato, el oxalacetato y el
glicerol.
Tambin existen ciertas bacterias anaerobias que utilizan la glucosa para
generar dixido de carbono y metano segn esta reaccin:

Forma en que se realiza el examen:

Se

necesita

una

muestra

de

sangre.

Esto

se

realizar

antes

del

procedimiento de la glucosa a travs de la venopuncin o flebotoma.

Preparacin para el examen:

Despus de no haber comida nada (en ayunas) durante 7-8 horas.
No ingerir ningn tipo de frmacos durante 72 horas.

Lo que se siente durante el examen:

Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten
un dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o
sensacin de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensacin
pulstil.

Razones por las que se realiza el examen:

El mdico puede solicitar este examen si uno tiene signos de diabetes. Sin

embargo, otros exmenes (prueba de tolerancia a la glucosa y examen de

glucemia en ayunas) son mejores para diagnosticar la diabetes.
El examen de glucemia tambin se utiliza para monitorear a pacientes que
padezcan diabetes. Tambin se puede hacer si usted presenta:
Un cambio en el comportamiento
Episodios de desmayo
Convulsiones por primera vez

Por qu se hace esta prueba?

Por lo general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la
diabetes mellitus.

Recomendaciones para el anlisis de glucosa?

La forma ms fcil de detectar la diabetes es medir la cantidad de azcar en la
sangre (glucosa) antes de que el paciente coma o beba algo por la maana. En la
mayora de los casos, el paciente deber ayunar durante la noche anterior, no
comer ni beber nada ms que agua despus de la cena y por la maana antes de
la extraccin de sangre.

MTODO ENZIMATICO
Significara Clnica.
La patologa ms comn relacionada con el metabolismo de
los hidratos de carbono es la diabetes mellitus. El diagnstico precoz y el control de
los pacientes diabticos, tienen por objeto evitar la cetoacidosis y las
complicaciones de los sntomas resultantes de la hiperglicemia, mediante el
tratamiento adecuado. Dado que existen mltiples factores causales de hiper o

hipoglicemia, debe considerarse en cada caso la condicin fisiolgica y/o patologa

en cada paciente en cuestin.
Fundamento Del mtodo.
La glucosa oxidasa (GOD) oxida a la glucosa en cido
glucnico y forma el perxido hidrgeno. En presencia de peroxidasa (POD) el
peroxido hidrgeno reacciona con el fenol y 4-aminofenazona y produce un
complejo coloreado, cuya intensidad de color es directamente proporcional a la
concentracin de glucosa en la muestra.
Glucosa +O2 + H2O

GOD

2 H2O2 + 4-AF + fenol

POD

cido glucnico + H2O2

Quinoneimina coloreada + 4

H2O
Abreviaturas:
GOD = Glucosa oxidasa
POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona.

Composicin del Reactivo

Ingredientes activos

Concentracin

Glucosa oxidasa

> 15000 U/L

Peroxidasa

> 1000 U/L

4-Aminoanlipirina

0.3 mM

Fenol

0.5Mm

Buffer Fosfato
Estabilizadores no reactivos y relleno
Azida de sodio 0.02%
Ph (7.3+0.15)
-

III-OBJETIVOS
Capacitar al alumno para que conozca, maneje y determine el valor de la glucosa

en sangre, utilizando el anlisis objetivo para la deduccin de un resultado real.

Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relacin con
diversas patologas.
IV-MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensayo
Beacker
Gradilla
micropipetas de 2.0 mL.
Micropipeta de 20L.
Puntas para micropipeta.
Reactivo de Glucosa Enzimtica.

EQUIPOS:
- Centrifuga.
- Espectrofotmetro
V-PARTE EXPERIMENTAL
1-

Obtener la muestra clnica.

La muestra debe recolectarse en
ayuno excepto por el agua, durante ocho horas cuando menos antes de
la prueba. La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapn rojo
para suero el cual no contiene anticoagulante, o de color lila el cual
contiene EDTA anticoagulante para obtener plasma.

Nota:
-

Los

uso corriente como

anticoagulantes
la

EDTA,

heparina o fluoruro
no
afectan los resultados.
- La hemlisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.
- La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.

de

oxalato,

b) Si la identificacin es inadecuada.
c) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
d) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis
2-

permisible.
La muestra se centrifugo
ambiente para

a 3000 rpm durante 10min y temperatura

separar el suero y plasma. La glucosa en suero o plasma

es estable al menos 3 das a 2- 8C.

3-

Se

dej

unos

por

minutos

reactivo

el

temperatura ambiente.
4- Rotular, limpiar y secar con papel tis los tres tubos.

5-

Preparar

las

soluciones

siguiente cuadro:
BLANCO

ESTANDAR

MUESTRA
PROBLEMA

Reactivo

2000ul

2000ul

2000ul

Incubar los tubos por 5 minutos y luego agregar

Estndar
Muestra problema

20ul
-

20ul

6- Se mezclo e incubo todos los tubos a 37C por 5 minutos.

segn

el

7-

Leer

cada

tubo, en absorbancia de 505 nm llevando el

equipo a cero con el blanco de reactivo.

OBSERVACIONES:

VALORES NORMALES GLUCOSA: 60120mg / dl

RESULTADOS:

Absorbancia de la muestra.. 0.050

Absorbancia del estndar 0.040
[Glu]= ABS MP
* [ Estndar]
Abs Estndar
[Glu]= 0.050 * 100 = 125mg/dl
0.040
Como se puede observar el paciente tiene 125mg /dl de glucosa, una
cifra superior al valor normal de glucosa (120mg /dl).

SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES

SI LE HICIERON UN EXAMEN DE GLUCEMIA EN AYUNAS:
Un nivel de 100 a 125 mg/dL significa que usted tiene una alteracin de la
glucosa en ayunas, un tipo de prediabetes. Esto incrementa el riesgo para
la diabetes tipo 2.
Un nivel de 126 mg/dL o mayor casi siempre significa que usted tiene
diabetes.
Los niveles aleatorios de glucosa en la sangre superiores a los
normales pueden ser un signo de diabetes. En alguien que tenga diabetes,
puede significar que la enfermedad no est bien controlada. El mdico
probablemente ordenar una glucemia en ayunas o un examen de
tolerancia a la glucosa, dependiendo del resultado del examen aleatorio.
OTROS PROBLEMAS MDICOS TAMBIN PUEDEN PROVOCAR NIVELES DE
GLUCOSA EN LA SANGRE SUPERIORES A LO NORMAL, COMO:
Hipertiroidismo
Cncer pancretico
Pancreatitis
Tumores raros, entre ellos feocromocitoma, acromegalia, sndrome de
Cushing o glucagonoma

LOS NIVELES DE GLUCOSA EN LA SANGRE INFERIORES A LO NORMAL

(HIPOGLUCEMIA) PUEDEN DEBERSE A:
Hipopituitarismo (un trastorno de la hipfisis)
Hipotiroidismo
Insulinoma (muy poco comn)
Muy poco alimento
Demasiada insulina u otros medicamentos para la diabetes

CONCLUSIONES.

La prueba est por arriba de los niveles normales (70-120 mg/dl)

mostrando en el donante una hiperglucemia (125 mg/dl), aunque en
situaciones de estrs intenso los niveles de glucosa en la sangre pueden
aumentar temporalmente .Ya que el donante fue en ayunas, no ingiri
medicamentos ni alcohol antes de la prueba.

Con esta prueba, se puede observar la facilidad con la que se puede

diagnosticar un problema en la regulacin de la glicemia y lo importante
que resulta en la clnica en especial para pacientes con Diabetes Mellitus
para llevar un control ya que es una enfermedad incurable solo es
controlable a travs de sus niveles de glucosa sangunea.
El diagnostico temprano de esta enfermedad es de suma importancia para
evitar problemas crnicos y efectos secundarios.

BIBLIOGRAFIA

http://es.slideshare.net/ROYMAYCOL/guia-de-practica-de-bioquimica-i?
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http://es.slideshare.net/PauloGranda10/determinacin-de-glucosa-ensangre?related=2
http://es.slideshare.net/OswaldoAngeles/manual-bioqumica-clnica-unam?
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